Reao em Cadeia da

Polimerase
Por Dbora Carvalho Meldau
A Reao em Cadeia da Polimerase (que em ingls Polymerase
Chain Reaction PCR) definida como uma tcnica de amplificao
de cido desoxirribonucleico (DNA) sem utilizar organismos vivos.
Este processo foi descrito primeiramente por Kary Mullis, no ano de
1983, sendo que somente dez anos depois foi lhe concedido o Prmio
Nobel da Qumica pelo seu trabalho. No ano de 1989, a Hoffman La
Roche & Perkin-Elmer Corporation patenteou esta tcnica.
Atualmente, o PCR utilizado em laboratrios de investigao mdica
e biolgica objetivando diferentes tarefas, como a identificao de
doenas hereditrias, a construo de rvores filogenticas, a
clonagem de genes, teste de paternidade, deteco de organismos
causadores de infeces, concepo de organismos transgnicos,
entre outras.
Para a realizao deste procedimento, o primeiro passo extrair o
material gentico da clula ou do local a ser estudado com cuidado
para que o mesmo no seja danificado e nem sofra contaminao.
Habitualmente, o material coletado o DNA; todavia, pode-se utilizar
o RNA em uma RT-PCR que consiste em um desdobramento do PCR e
apresenta outras aplicaes.
Aps a extrao do material, juntamente a este adicionada uma
mistura, tambm chamada de pr-mix, na qual esto presentes os
dNTPs

(desoxirribonucleotdeos

nitrogenadas

ligadas

com

trifosfato),
um

sendo
trs

estas
fosfato,

bases
os

denominados primers (tambm conhecidos por oligonucleotdeos ou

iniciadores) e a enzima DNA polimerase em uma soluo tampo.
Este material vai para um aparelho conhecido como termociclador,

aquecendo

esfriando

material

ali

contido

em

ciclos

de

temperatura pr-estabelecidos.
Primeiramente, o tudo aquecido a uma temperatura entre 90 a
96C para que ocorra a desnaturao do DNA (separao das fitas).
Por conseguinte, a temperatura do termociclador cai (50 a 60C)
para que haja a hibridizao ou anelamento. Neste ponto do
procedimento,

osprimers se

ligam

com

especificidade

suas

seqncias complementares do DNA. Subseqentemente, h uma

elevao da temperatura a aproximadamente 72C para que ocorra a
sntese pela polimerase (extenso de uma nova molcula). Em
seguida, um novo ciclo iniciado, sendo que normalmente so
realizados de 25 a 40 ciclos para cada reao, apresentado taxa de
replicao exponencial.
A anlise do resultado feita por um meio da eletroforese em gel de
agarose ou de poliacrilamida, sendo interpretada por um profissional
treinado.
Certos problemas tcnicos podem interferir no resultado do PCR,
como

contaminao

do

material

por

substncias

que

conhecidamente inibem a reao, como o caso da hemoglobina,

bem como a contaminao por um material gentico que no est
sendo estudado. Deste modo, para reduzir as chances de erro, os
profissionais que manuseiam as amostras devem adotar certas
medidas, como o uso de luvas, tubos descartveis, dentre outras.
Fontes:
http://pt.wikipedia.org/wiki/Rea
%C3%A7%C3%A3o_em_cadeia_da_polimerase
http://educacao.genesisdbm.com.br/educacao_pcr.shtml
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