6.

METODOLOGIA
6.1 MATERIAL DE ANALISIS.
6.1.1 Material Vegetal.
Se emplea cascarilla de las semillas de cacao (Theobroma cacao L.) secas y
tostadas (mezcla de diferentes especies de cacao) suministradas por una
o

Industria o agricultores. Las muestras se llevan conservar en nevera a 4 C.

6.1.2 Molienda.
Se realiza la molienda de la cascarilla en un molino de cuchillas el polvo

obtenido se conserva en bolsas a 4 C, para su posterior anlisis.

6.2 PRETRATAMIENTO DE LA CASCARILLA DE CACAO.
6.2.1 Extraccin de compuestos polares de la cascarilla de cacao.
A 50g de cascarilla de cacao se adicioara 500mL etanol al 95% y se
centrifugara durante 30 minutos a 1000rpm con una relacin muestra solvente
de 1:10.
6.2.2 Extraccin de Lpidos.
Se lleva a cabo un desengrase de la cascarilla de
6.3 CARACTERIZACIN FSICO-QUMICA DE LA CASCARILLA DE
CACAO.
6.3.1 Obtencin de fibra soluble (FS) y fibra insoluble (FI)
Se pesara 1g de la muestra de la cascarilla molida, en una balanza analtica
con una precisin de 0.0001, se lleva a un beaker de 250mL, se adiciona una
solucin buffer de fosfato 0.08M, pH 6.02en relacin muestra: buffer de 1: 50. A
esta solucin se le adiciona 100L de -Amilasade Bacillus licheniformis, de
(50mg/mL). Se cubre con papel aluminio y se lleva a un bao mara durante
o

15min a una temperatura de 95 C. Se retira del bao y se deja enfriar a

temperatura ambiente. Se mide el pH, se ajusta pH entre 7.5 y 7.6 con solucin
de NaOH 0.2685 N, se adiciona 100L de Proteasa de Bacillus licheniformis de
(50mg/mL), preparada con solucin buffer de fosfato 0.08M, pH 6.02; se cubre
el vaso de precipitado con papel aluminio, se lleva a bao mara durante 30 min
con agitacin constante y a 60C. despus de este tiempo se retira del bao, se
dejara enfriar a temperatura ambiente. Se mide el pH y se ajusta entre 4-4.5
usando una solucin de HCL 0.3486 N, se adicion 100L de Amiloglucosidasa
de Aspergillus niger, de (50mg/mL). Se cubre con papel aluminio, se lleva a un

bao mara durante 30 min con agitacin a 60C. se retira del bao dejndose
enfriar a temperatura ambiente
6.3.1.1 Separacin de la Fibra Insoluble (FI) y la Fibra Soluble
(FS) 6.3.1.1.1 Fibra Insoluble (FI)
El hidrolizado obtenido de dejo enfriar a temperatura ambiente y se filtra al
vacio sobre un papel filtro, se realiza dos lavados de 10mL de agua destilada
o
cada uno, el filtrado se seca en una estufa a 105 C por 24h. Posteriormente se
divide el filtrado seca, en dos porciones, para posterior anlisis de cenizas y
protenas
6.3.1.1.2 Fibra Soluble (FS)
Al sobrenadante de filtracin, se le adiciona 200mL de etanol al 95%, (ver
figura 28), y se deja reposar durante 24h. Luego se filtra al vacio sobre un
papel filtro, al filtrado se les realiza tres lavados con 20mL etanol al 78%, dos
lavados con 10mL de etanol al 95% y dos lavados con 10mL acetona. Se seca
o
en la estufa a 105 C durante 24h para posteriores anlisis de cenizas y
protenas.
6.4 PROPIEDADES FUNCIONALES DE LA FIBRA DIETARIA
6.4.1 Capacidad de retencin de agua
En un tubo de centrifuga se pesara 0.4g de fibra, se adiciona 5mL de buffer de
fosfato 0.08M, pH 6.1, se agita por 10min manualmente, se deja en reposo
durante 24 h, y pasado este tiempo se centrifuga en una centrifuga a
3000rpm) por 10min, se retira el sobrenadante y se pes el sedimenta.
6.4.2 Capacidad de retencin de aceite (CRAc)
En un tubo de centrfuga, se pesara 0.4g de fibra, se adiciona 5mL aceite de
soya comercial, se agita manualmente durante 10 minutos, se deja en reposo
durante 24h a temperatura ambiente, despus se centrifuga a 3000rpm por
10min, se retir el sobrenadante y se pesa el residuo.
6.4.3 Capacidad de hinchamiento (CH)
0.4g de fibra se le mide el volumen que ocupa en una probeta de 10 mL, luego
se le adiciona 5mL de buffer de fosfato 0.08M, pH 6.1, se agita y dej en
reposo por 24h a temperatura ambiente posteriormente, se mide el volumen
final de la muestra.