ELETROFORESE

Reviso Elaborada Pelos Alunos:

Ademir Da Silva : 4207004
Adolfo Torres:
4206884
Caroline Cury:
4207026
Helena de Andrade :4207087
Renata Lopes:
4207149
Michelle Martins: 4207177

Luciana Vidal:4207153
Kelly Fraso:4207143
Beatriz Oliveira:4207076
Talita Gonalves:4206738
Marcela Arajo:4207009

O QUE ?

eletroforese uma tcnica que consiste na migrao de molculas

ionizadas, de acordo com suas cargas eltricas e pesos moleculares
em campo eltrico. Molculas com carga negativa migram para o plo
positivo (ando) e molculas com carga positiva migram para o plo
negativo (catdo). Para substncias anfteras(ex: protenas),capazes
de adquirirem carga positiva ou negativa em funo do pH,
indispensvel manter constante o pH do meio durante a eletroforese,
pelo uso de solues-tampo.

ESQUEMA SIMPLIFICADO DO PROCESSO

TIPOS DE ELETROFORESE: EM GEL

uma tcnica de separao de molculas onde as partculas que so

carregadas negativamente pelo detergente dodecil sulfato de sdio
(SDS), com exceo do DNA, que j possui carter de ction, migram
em um determinado gel durante a aplicao de uma diferena de
potencial em direo a um eletrodo positivo, sendo que este criado
por uma corrente eltrica, e posteriormente so aplicadas sobre o
gel.Os principais tipo de gis usados so a agarose e a
poliacrilamida

EM GEL DE AGAROSE
A

agarose um polissacardeo composto por gar e pectina. O gel

uma mistura do p de gar com a soluo tampo. Em seguida, colocase brometo de Etidium, que tem afinidade com o DNA e revela sobre a
presena de UV( ultra violeta)os cidos nucleicos.
Quando a mistura esfriar o gel estar duro, interessante colocar o
pente no gel durante o endurecimento, o pente cria poos que so
utilizados para a colocao das amostras. Podemos ver esse processo
como uma corrida, os as menores partculas se movem mais rpido.

EM GEL DE POLIACRILAMIDA
A

poliacrilamida uma mistura de dois polmeros, acrilamida e

bisacrilamida.
Basta adicionar os dois polmeros nas concentraes desejadas em um
suporte de vidro e na presena de um catalisador. Esse gel muito
txico e difcil de ser preparado, sendo o gel de agarose mais utilizvel.
Existem dois tipos de gel de poliacrilamida:
Desnaturante: Separa e purifica fitas simples de DNA, e convenciona.
Desnaturante pois polimerizado pela uria.
No Desnaturante: Separa e purifica fitas duplas de DNA.

ETAPAS DA ELETROFORESE EM GEL

Preparao do gel
Aplicao das amostras
Eletroforese
Colorao
Anlise dos resultados

Eletroforese
horizontal:
agarose

x
Eleforese
vertical:
poliacrilamida

Eletroforese capilar
A eletroforese capilar uma tcnica analtica de separao em que os componentes de uma
mistura de ons ou molculas. So separados de acordo com sua habilidade de migrar em
resposta um campo eltrico aplicado, atravs de um meio condutor que usualmente um
tampo aquoso.
A separao dos analitos ocorre enquanto os componentes da amostra migram sob efeito
de um campo eltrico atravs de um tubo capilar preenchido com uma soluo de um
eletrlito.
O capilar liga os dois reservatrios entre os quais se aplicam uma diferena de potencial.
A deteco do componentes geralmente feita prxima extremidade oposta de injeo da
amostra e a anlise registrada em um eletroferograma, um grfico de intensidade de sinal
em funo do tempo.

Eletroforese capilar em gel

A CE em gel utiliza matrizes gelatinosas como meio de separao e
uma poderosa tcnica para separao de macromolculas como
protenas e molculas de DNA.A CE em gl permite a anlise de
molculas em baseadas em seu tamanho , em que a separao
feita em gis fsicos ou qumicos ou em solues polimricas, nos
quais o tamanho molecular e concentrao determinam a
seletividade por efeitos de peneiramento. Esta tcnica possui
vantagens quanto sua rapidez , alto poder de resoluo, menor
tempo de anlise e possibilidade de automao quando comparada
analises tradicionais como as de em gel de poliacrilamida ou a
cromatografia por excluso de tamanho.

Eletroforese de fronteira mvel

Na eletroforese por fronteira mvel, uma quantidade razovel da
amostra e colocada em um tubo, preenchido com uma soluo
tampo. Apos a aplicao do campo eltrico, os componentes da
amostra migram em determinada direo com uma velocidade
caracterstica que depende da mobilidade do componente. A
separao completa nunca e atingida, pois apenas os
componentes de maior mobilidade podem ser parcialmente
purificados, enquanto que as bandas dos outros componentes
sofrem diversos graus de sobreposio

A eletroforese capilar de zona (CZE)

A eletroforese de zona em soluo livre a tcnica mais
utilizada e tem essa denominao devido ao fato de que o
capilar e os reservatrios conte do os eletrodos so cheios
com um tampo( denominado eletrlito carreador) o qual
conduz a corrente eltrica e fornece a capacidade
tamponada. A amostra, contendo uma mistura inica,
introduzida no capilar como uma banda de pequena
espessura. Sob a influncia do campo eltrico as espcies
inicas da amostra e do tampo migram para o eletrodo
correspondente, isto , cations em direo ao catdo e
ando em direo ao anodo.

Isactoforese
Em isatocoforese, a amostra e inserida entre solucoes, o eletrolito
lider e o eletrolito terminador. Ambos, cations e anions podem ser
determinados por esse modo, entretanto em misturas distintas. o
eletrolito lider deve conter um cation cuja mobilidade e maior que a
mobilidade de qualquer componente cationico da amostra. Por outro
lado, o eletrolito terminador deve conter o cation de menor
mobilidade. Quando o campo eletrico e estabelecido, gradientes
diferentes de potencial evolvem cada banda, de tal forma que todos
os cations migram com velocidade constante e unica. Em regies
onde cations de menor mobilidade estao presentes, o campo eletrico e
mais intenso. Entretanto, estes solutos movem-se com a mesma
velocidade que os solutos de maior mobilidade, estes ultimos
submetidos a campo eletrico mais fraco. Consequentemente, as
velocidades das bandas individuais sao auto-normalizadas

Bibliografia :
A tcnica de eletroforese: importncia e aplicaes em anlises genticas (documento do acervo de pesquisa da
EMBRAPA, por Sandra Watusi Brammer1).
Estudos de reconhecimento biomolecular por eletroforese capilar, por Sandro Hildebrando
A tcnica de eletroforese para anlise de DNA e proteinas, por DR Francisco Prosdcimo
Determinao simultnea de nions por eletroforese capilar: caractersticas e aplicaes, por Rosana Colomba r*,
Marina F. M. Tavares e Srgio Massaro
Aplicaes da eletroforese capilar na anlise de bi marcador alfa 1 glicoprotena cida, no controle de qualidade do
bi frmaco interferem alfa 2ae na avaliao de estabilidade enantiosseletiva do frmaco israpidina, por Fernando
Armani aguiar.