UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHO

Bioengenharia

Profa. Dra. Glria Bandeira

 Introduo
Microbiologia o estudo dos microrganismos, um grande
grupo de seres vivos capazes de existirem como clulas
nicas ou em agrupamentos em que cada clula um
indivduo (Barbosa e Torres, 1998).
Os micrbios so minsculos seres vivos, individualmente
muitos pequenos para serem vistos a olho nu. O grupo
inclui bactrias, fungos (bolores e leveduras), protozorios
e algas microscpicas. Tambm inclui vrus, os quais so
entidades acelulares, muitas vezes considerados como
sendo o limite entre os seres vivos e no-vivos (Tortora,
Funke e Case, 2000).

 Cada clula microbiana independente quanto a

seus processos vitais de obteno de energia,
crescimento e reproduo.
Com exceo dos vrus, todos os microrganismos
apresentam estrutura celular.
Por falta de estrutura celular os vrus so incapazes
de nutrio, metabolismo e crescimento; para sua
multiplicao utilizam e dependem de clulas vivas.

 A maioria dos microrganismos fornece contribuies

cruciais para o bem estar dos habitantes do mundo, atravs
da manuteno do equilbrio entre os organismos vivos e os
compostos qumicos do nosso ambiente:
Os mos. marinhos e de gua doce constituem a base da
cadeia alimentar nos oceanos, nos lagos e nos rios;
Os mos. do solo auxiliam na degradao de detritos e na
incorporao do nitrognio da atmosfera em compostos
orgnicos, reciclando desse modo, elementos qumicos do
solo, da gua e do ar;
Certas bactrias e algas possuem um papel fundamental na
fotossntese um processo gerador de alimento e energia
que crucial para a vida na Terra;

 Os seres humanos e muitos outros animais dependem das

bactrias em seus intestinos para a digesto e a sntese das
muitas vitaminas de que seus corpos necessitam, incluindo
algumas vitaminas B, para o metabolismo, e vitamina K para
o sangue;
Os mos. tambm possuem muitas aplicaes comerciais. Eles
so utilizados na sntese de produtos qumicos, tais como
acetona, os cidos orgnicos, as enzimas, os lcoois e muitas
drogas;
Atravs da engenharia gentica, as bactrias e outros
micrbios podem produzir substncias teraputicas
importantes, tais como insulina, hormnio do crescimento
humano.
A indstria de alimentos tambm inclui os micrbios na
produo de vinagre, picles, bebidas alcolicas,
queijos, iogurtes e pes;

PRINCPIOS GERAIS DA MICROBIOLOGIA

DE ALIMENTOS

Trs reas
AUMENTAR:
o valor nutritivo;
propriedades organolpticas (cor, odor, flavour,
textura, etc.);
vida de prateleira dos alimentos.
CONTROLE DE DETERIORAO:
por reduo ou eliminao dos microrganismos;
para evitar a multiplicao dos microrganismos.
SEGURANA ALIMENTAR:
bactrias patognicas.

 CLASSIFICAO DOS MICRORGANISMOS PELA SUA

IMPORTNCIA PARA A MICROBIOLOGIA DE
ALIMENTOS

Microrganismos teis industrialmente

Microrganismos deterioradores
Microrganismos patognicos

Fatores que afetam a multiplicao

de microrganismos em alimentos
Fatores intrnsecos
Atividade de gua (Aa)
Conceito
O valor absoluto de Aa fornece uma indicao segura
do teor de gua livre do alimento, sendo esta a nica
forma de gua passvel de utilizao por parte dos
microrganismos
Numericamente a Aa varia de 0 a 1

VALORES DE AA EM ALGUNS TIPOS DE ALIMENTOS

Valores de Aa

Tipos de alimentos

> 0,98

Car nes e pescados frescos, leite e outras bebidas,

frut as e hortalias fr escas, hortalias em salmour a
enlatadas e frut as em calda enlatadas.
Leite evaporado, concentrados de t omate, car nes e
pescados curados, sucos de frut as, queijos, po e
embut idos.
Leite condensado, salame, queijos duros, pr odutos
de confeit aria, mar meladas.
Geleias, far inhas, fr utas secas, caramelo, goiabada,
coco seco r alado, pescado muito salgado e extrato de
car ne.
Doces, chocolate, mel, macarres, batat as fr itas,
ver dur as desidr atadas ovos e leite em p.

< 0,98 a 0,93

< 0,93 a 0,85

< 0,85 a 0,60

< 0,60
Fonte: Christian, 1980

VALORES M NIM OS DE Aa PERM IT IDO A M ULT IPLICAO

M ICROBIANA
Grupo microbiano

Aa mnima

Maioria das bactrias

Maioria das leveduras
Maioria dos bolores
Bactrias halfilas
Bolores xerotolerantes
Bol. xerfilos e leveduras osmfilas

0,91-0,88
0,88
0,80
0,75
0,71
0,62-0,60

Fonte: Farkas,1997

V ALORES M NIM OS DE Aa PARA M ULT IPLICAO DE

PAT GENOS
Microrganismos
Aa mnima
Aeromonas hydrophila
Bacillus cereus
Campylobacter jejuni
Clostridium perfringens
Escherichia coli 0157:H7
Salmonella spp
Staphylococcus aureus
Multiplicao
Produo de enterotoxina (alimentos)
Vibrio parahaemolyticus
Yersinia enterocolitica

0,97
0,92-0,95
0,97-0,98
0,95-0,97
0,95
0,94-0,95
0,83-0,90
0,93-0,95
0,93-0,95
0,95-0,97

pH
Conceito
O pH mede a concentrao de H+ de um alimento ou soluo

pH = -log. [H+]

VALOR DE pH APROXIMADO DE ALGUNS ALIMENTOS

Alimentos/ pH aproximado
Carnes
Frangos
Presunto
Salsichas Frankfurt
Bovina ( moda)

pH
5,4-6,2
5,9-6,1
5,7-6,2
5,2-6,2

Pescados
Atum
Peixe fresco (maioria)
Salmo

pH
5,2-6,1
6,6-6,8
6,1-6,3

Fonte:Jay,1992 e ICMSF,1980.

FAIXAS DE pH DE MULTIPLICAO DOS MICRORGANISMOS

pH > 4,5

Bactrias
patognicas
Bactrias
esporuladas
Bactrias
lcticas
Bactrias
acticas
Bolores
Leveduras

4,0 < pH < 4,5

pH < 4,0

Alguns
Bactrias lcticas
esporulados
Bactrias lcticas Bactrias acticas
Bactrias
acticas
Bolores
Leveduras

Bolores
Leveduras

Potencial de xido-reduo (O/R, Eh)

Conceito
Potencial de xido-reduo de um substrato pode ser
definido como sendo a facilidade de um determinado
substrato perder ou ganhar eltrons

Oxidao

Cu + + e -

Cu
Reduo

Oxidao

Cu + O2
Reduo

2CuO

Fatores extrnsecos
Temperatura

CLASSIFICAO DOS MICRO RGA NISMOS EM

RELA O TEMP ER AT URA
Temperatura ( C)
mnima
tima

Grupo

mxima

termfilos

40-45

55-75

60-90

mesfilos

5 - 15

30-45

35-47

psicrfilos

-5 -+5

12-15

15-20

psicrotrficos

-5 -+5

25-30

30-35

Fonte: ICMSF, 1980.

Umidade relativa
Presen a de gases no meio
Dixido de carbono (C O2)
Aplicao: conservao de alime ntos (frutas, carnes,
pescado, etc)

 Nutrientes
Fonte de energia(acar, lcool e aminocidos,
carboidratos complexos, gorduras);
Fonte de nitrognio (aminocidos, peptdios e
protenas);
Vitaminas;

Minerais.

Teoria dos obstculos

Conceito
Interaes entre os fatores intrnsecos e extrnsecos para
impedir a multiplicao de microrganismos
deterioradores e patognicos, melhorando a estabilidade
e a qualidade de alimento, tornando-os mais estveis,
de prolongada vida-de-prateleira, e seguros
sade dos consumidores.

Reproduo e curva de crescimento

bacteriano

 Esporos

Gram
BACTRIAS
GRAM-POSITIVAS

BACTRIAS
GRAM-NEGATIVAS

Clulas fixadas
lmina

Corante principal cristal

violeta
Cora em prpura

Cora em prpura

Mordente:
soluo de iodo
Permanece prpura

Permanece prpura

Descorar com:
lcool ou acetona

Permanece prpura

Contratingir com
Safranina
Permanece prpura

Cora em vermelho

 CONTROLE MICROBIANO
Importncia do controle microbiano:
Prevenir a transmisso de doenas e infeco;

Prevenir a contaminao ou crescimento de mos. nocivos;

Prevenir a deteriorao e dano de materiais por
microrganismos.
Os micrbios podem ser removidos, inibidos ou
mortos.

 Esterilizao: processo de destruio de todas as formas de

vida microscpica.
Desinfetante: um agente, normalmente qumico, que mata
as formas vegetativas, mas no necessariamente, as formas
esporuladas.

Antissptico: uma substncia que previne o crescimento

ou ao de mos., pela destruio dos mesmos ou pela
inibio de seu crescimento ou atividade.
Saneador: um agente que reduz a populao microbiana
at nveis considerveis, de acordo com as exigncias da
sade pblica. Normalmente um agente qumico que mata
99,9% das clulas vegetativas.

 Germicida (microbicida): um agente que mata as formas

vegetativas, mas no, necessariamente, as formas
esporuladas dos germes.
Bactericida: um agente que mata as bactrias. De modo
similar, os termos fungicida, viricida e esporocida se
referem a agentes que matam os fungos, vrus e esporos,
respectivamente.
Bacteriosttico: uma condio na qual se previne o
crescimento de bactrias.
Agente antimicrobiano: aquele que interfere com o
crescimento ou atividade dos micrbios.

CONDIES QUE INFLUENCIAM A AO ANTIMICROBIANA

Temperatura: o aumento da temperatura, quando usado
em combinao como uma substncia qumica, apressa a
destruio dos microrganismos.
Tipo de microrganismo: os esporos bacterianos so mais
resistentes que qualquer outro organismo vivo em sua
capacidade de sobreviver sob condies fisicas ou
qumicas adversas.
Estado fisiolgico das clulas: clulas jovens,
metabolicamente ativas so mais facilmente destrudas
que as clulas velhas ou em latncia.

 Condies ambientais: as propriedades fsicas e qumicas

do meio ou das substncias que sustentam os
microrganismos, tm profunda influncia sobre o ritmo,
assim como sobre a eficcia da destruio microbiana.

Tamanho da populao microbiana: populaes maiores

levam mais tempo para morrer do que populaes
menores;
Intensidade ou concentrao do agente microbicida:
quanto menor a intensidade ou concentrao, mais tempo
leva para destruir uma populao microbiana;
Tempo de exposio ao agente microbicida: quanto maior
o tempo de exposio maior ser o nmero de clulas
mortas;

Matria orgnica + desinfetante pode resultar:

Combinao do desinfetante com a matria
orgnica, com formao de produto nomicrobicida;

Combinao do desinfetante com a matria

orgnica para formar um precipitado, o que afasta o
desinfetante de uma possvel combinao com os
microrganismos;
Acmulo de matria orgnica na superfcie da clula
microbiana, formando uma capa que impede o
contato com o desinfetante.

Modo de ao dos agentes antimicrobianos:

Leso da parede celular;
Alterao da permeabilidade celular;
Alterao das molculas de protenas e de cido nuclico;
Inibio da ao enzimtica;
Antimetabolitos.

Mecanismo de destruio das clulas microbianas:

Alterao do estado fsico do citoplasma;
inativao de enzimas;
rompimento da membrana ou parede celular.

As atividades metablicas de um organismo

so a soma de todas as reaes qumicas e,
sendo estas influenciadas pela temperatura,
conclui-se que os processos vitais so por
ela afetadas. Do mesmo modo, todos os
microrganismos so dependentes da gua, a
maior parte de sua massa constituda pela
gua e todas as suas atividades so
desenvolvidas em ambiente aquoso.

Agentes Fsicos
Altas temperaturas:
Calor mido (vapor dgua, gua fervente,
pasteurizao, esterilizao);

Calor seco (estufa, incinerao);

Baixas temperaturas: (refrigerao e congelao);
Radiaes ionizantes: (raios gama e raios X);

 Radiaes no ionizantes: radiaes UV;

Filtrao: memb. Filtrante;

Dessecao.

Calor mido
Causas da inativao trmica de bactrias pelo calor mido

Coagulao de protenas;
Inativao de enzimas;
Desorganizao dos lipdios celulares;
Desorganizao do aparelho gentico;
ruptura do DNA.

A morte da clula exponencial.

Possveis pontos de ao do calor sobre as clulas: parede celular,
memb. citoplasmtica, os ribossomos, RNA, DNA e as protenas
estruturais e funcionais.

Calor mido
Vapor dgua sob presso permite:
Temperaturas elevadas;
Aquecimento rpido;
Maior penetrabilidade e grande umidade.
gua fervente:
Efetivo contra as clulas vegetativas

Pasteurizao:

62,8C/30min.

72,5C/15s

 Esterilizao do Equipamento
Esterilizao: Deve destruir e/ou inativar enzima(s) envolvida(s)
em processos vitais para o microrganismo.
Dificuldades: a heterogeneidade da populao microbiana;
possibilidade de existncia de mos. com capacidade de utilizar
outras rotas metablicas para vencer o bloqueio
estabelecido;
dificuldade do agente em atingir um alvo muito especfico

Mecanismo de Esterilizao
O mecanismo pelo qual conseguido varia conforme o
agente empregado;
Desnaturao de Protenas
Calor mido;
Alterao estrutural da molcula e perda da atividade
biolgica.
Populao Microbiana
Considerar as caractersticas dos mos. (cel. vegetativas ou
esporos) presentes no equipamento

Natureza do Equipamento a ser Esterilizado

Ideal: o nvel de contaminao, os tipos de mos.,

caractersticas fisiolgicas e a resistncia da populao
microbiana contaminante.
impossvel a obteno de todos esses dados.
comum fazer-se o clculo de esterilizao
considerando-se como se toda a
populao fosse constituda de
esporos.

Calor Seco
Ar Quente: Estufa: 180C/2h.
Oxidao da protena microbiana;
Resistncia: endurecimento da camada externa da clula
por meio da coagulao das protenas dificultando a
penetrao do calor;

Quesnel et al. (1967), a ao letal resulta da transmisso

de calor do material em contato com os microrganismos e
no do ar aquecido em volta das clulas.

Incinerao:
Efetivo contra as clulas vegetativas

Baixas Temperaturas

Cessa o metabolismo e o crescimento;

Bactrias e vrus : -20C e -70C;
-196C preservao.
No podem ser indicadas para a
desinfeco ou esterilizao.

Radiaes ionizantes: (raios gama e raios X)

so chamadas dessa forma porque possuem suficiente
energia para retirar eltrons de molculas, ionizando-as e
criam hidrognio livre, radicais hidroxila e alguns
perxidos.
Radiaes no ionizantes: radiaes UV
Centros cirrgicos,
Cmaras asspticas em ind. farmacutica;
Superfcie contaminada em ind. alimentos;
Tem pequena capacidade de penetrao;
2600-2700A
Filtrao: (materiais termossensveis)
Soro, enzimas, algumas vitaminas ou antibiticos;

memb. Filtrante (150m de espessura e

0,01 a 10m de dimetro).

Dessecao: causa uma parada na atividade

metablica da clula:
O tipo de microrganismo;
O material no qual os microrganismos so
dessecados;
A intensidade do processo de dessecao;
As condies fsicas as quais so expostos os
organismos dessecados (luz,temperatura,
umidade).
Os microrganismos dessecados continuam
viveis por muitos anos.

Esterilizao do Equipamento
Esterilizar um equipamento significa eliminar todas as
formas de vida de seu interior ou superfcie.
Em alguns processos biotecnolgicos industriais, a
eliminao
parcial
da
populao
microbiana
dos
equipamentos suficiente para garantir a qualidade que se
deseja no produto.
Exemplo: processos onde inibidores de crescimento so
produzidos e o teor do inibidor impede em maior ou menor
grau o crescimento de vrios microrganismos.

Inibidores de crescimento: fermentao alcolica,

produo de vinagre / cido actico, cido ltico, antibiticos,
biocidas, etc.

A esterilizao dos equipamentos realizada por:

1) Mtodos fsicos: calor seco, calor mido, radiao
ultravioleta, radiao com partculas ionizantes (gama) e
ultra-som;
2) Mtodos qumicos: limpeza do equipamento com lquidos
ou gases que matam ou danificam irreversivelmente sua
capacidade reprodutiva hipoclorito, fenis, formaldedo,
xido de etileno, oznio, dixido de enxofre, etc.

Reatores bioqumicos e tubulaes so, geralmente,

esterilizados pela aplicao de calor mido (vapor saturado).

Equipamentos destinados ao processamento de produtos

de fermentao (bomba, filtros, centrfugas, misturadores,
separadores, colunas cromatogrficas, homogeneizadores,
etc.) so esterilizados preferencialmente por calor mido.
Material de laboratrio utilizado no processo
esterilizado por vapor mido (autoclave), seco (fornos) e por
radiao ultravioleta.
Embalagens so em geral esterilizadas por radiao
gama, calor mido ou por lavagem com produtos qumicos
apropriados.

Tabela - Principais termos tcnicos utilizados em processos de assepsia e

seus significados
TERMO

SIGNIFICADO

Esterilizao

Remoo de todas as formas de vida de um objeto ou material.

Desinfeco

Remoo ou destruio dos organismos vivos capazes de causar

danos ou infeces.

Desinfectante ou germicida

Agente qumico capaz de promover desinfeco.

Antissptico

Agente qumico aplicvel em pessoas ou animais, com capacidade de

eliminar microrganismos patognicos.

Assepsia

Remoo de microrganismos patognicos ou indesejados

Pasteurizao

Tratamento trmico (62C por 30 min, seguido de resfriamento brusco)

para reduo drstica no n de microrganismos.

Tindalizao

Processo de esterilizao capaz de eliminar esporos altamente

resistentes ao calor. Consiste em manter o material a 100C por vrios
minutos, resfri-lo a T ambiente e incub-lo por cerca de 24 h. O
procedimento repetido por vrias vezes. Durante a incubao os
esporos passam forma vegetativa, onde so susceptveis
destruio durante o aquecimento seguinte.

Biocidas

Agentes capazes de causar a morte de microrganismos.

Biostticos

Agentes capazes de impedir a reproduo de microrganismos, sem

necessariamente mat-los.

Modo de ao dos agentes esterilizantes

Os agentes esterilizantes podem induzir, por
diferentes mecanismos, a formao de substncias qumicas
letais no interior das clulas e/ou alteraes em molculas
essenciais para a manuteno e sobrevivncia celular,
levando morte do microrganismo.

A morte celular pode ser causada por uma ou mais

leses. Na clula viva normal existem inmeros alvos
possveis de leso celular, tais como:
Enzimas, responsveis pelos processos metablicos;

 Membrana citoplasmtica, que mantm a integridade do

contedo celular, controlando o transporte de substncias
entre a clula e seu meio externo, alm de ser tambm o local
de algumas reaes enzimticas;
Parede celular, que proporciona rigidez e resistncia
mecnica aos microrganismos e participa de alguns
processos fisiolgicos;
Dano gentico, responsvel pela codificao de alguma
enzima essencial.
Uma leso em qualquer um desses nveis pode
desencadear alteraes que levam a morte do
microrganismo.

Esterilizao por Agentes Fsicos

Os principais agentes fsicos esterilizantes so:
calor seco,
calor mido,
radiao ultravioleta e
radiao gama.
Cada um deles encontra aplicao em diferentes partes do
processo de assepsia.
Esterilizao por calor mido
O agente de uso mais freqente o calor mido, fornecido
por vapor de gua saturado. O calor obtido em caldeiras e
distribudo por dutos de ao galvanizado ou inoxidvel, isolados
termicamente. Pelas altas temperaturas e presses na caldeira o
vapor considerado estril.

Esterilizao de reatores vazios

Consiste em injetar vapor diretamente no seu interior
e promover a expulso do ar presente. Aps a sada do ar, o
reator fechado e injeta-se vapor at que a temperatura e
presso internas sejam adequadas, normalmente 121C e 1
atm.
Novas injees de vapor so realizadas para manter o
processo de esterilizao.
Terminada a esterilizao, a entrada de vapor
fechada e a entrada de ar estril aberta para que durante o
resfriamento no se crie vcuo, o que poderia gerar danos no
equipamento ou promover a entrada de ar externo
contaminado.

Agentes Qumicos
Nenhum agente qumico antimicrobiano nico
melhor ou ideal para qualquer ou todas as
finalidades.
Esterilizante: um composto qumico que
realiza uma esterilizao.
Desinfetante: substncia qumica que mata as
formas vegetativas mas no
necessariamente as esporuladas.

 Caractersticas de um agente qumico ideal

Atividade antimicrobiana: deve ter amplo espectro,

isto , deve inibir ou matar muitos tipos diferentes
de mos.
Solubilidade: ser solvel em gua ou em outros
solventes (lcool) em quantidade necessria ao seu
uso efetivo.
Estabilidade: no deve haver perda significativa de
ao antimicrobiana durante
o seu armazenamento.

 Ausncia de toxicidade: no deve prejudicar o

homem ou os animais.
Homogeneidade: as preparaes devem ser
uniformes em sua composio de modo que os
componentes ativos estejam presentes em cada
aplicao.

Inibio mnima por material estranho: alguns

compostos qumicos antimicrobianos combinam-se
facilmente com protenas ou outros materiais
orgnicos encontrados no material que est sendo
tratado. Isto diminui a quantidade de substncias
qumica
disponvel para agir contra os mos.

 Ausncia de poderes corrosivos e tintoriais: os

compostos no devem corroer ou desfigurar metais nem
corar ou danificar os tecidos.
Poder desodorizante: o desinfetante ideal deve ser
inodoro ou apresentar odor agradvel.
Capacidade detergente: ser capaz de remover
mecanicamente os mos. da superfcie que est sendo
tratado.
Disponibilidade e baixo custo: ser facilmente empregado
e de baixo custo.

 Escolha do Agente Qumico Antimicrobiano

Natureza do material a ser tratado

Tipos de microrganismos (gram-positivos e
gram-negativos).
Condies ambientais (temperatura, pH,
tempo, concentrao e presena
de material orgnico).

Principais grupos de agentes qumicos

Fenol e compostos fenlicos

lcoois
Halognios
Metais pesados e seus compostos
Corantes
Detergentes
Compostos quaternrios de amnio
cidos e lcalis
Glutaraldedo
Esterilizantes qumicos gasosos (xido de
etileno, -propiolactona, formaldedo).

Fenol (cido carblico, cido fnico) e compostos

fenlicos
Desnaturam as protenas e causam danos a membrana
celular;.
Podem ser bactericida ou bacteriosttico;

Esporos bacterianos e vrus so mais resistentes;

Alguns compostos so altamente fungicida;
Sua ao inibida em pH alcalino e na presena de
material orgnico;

lcoois
lcool etlico (CH3CH2OH): concentraes de 50-70% efetivo
clulas vegetativas;

No agente esterilizante;
Sa agentes desnaturantes e solventes de lipdios (lesam a
membrana citoplasmtica);
Concentraes > 60% so ativas contra os vrus
lcool metlico menos efetivo que o etlico e altamente
venenoso.
lcoois proplico, amlico, butlico so mais germicidas
que o etlico.

Halognios (iodo)
Pouco solvel em gua e solvel em lcool;
Altamente germicida (bactrias, esporos, fungicida e vrus).
Cloro e Compostos Clorados
Hipoclorito: Ca(OCl)2 e NaOCl
Tratamento de gua, restaurantes, laticnios.
Cloraminas: so mais estveis que os hipocloritos;

So usados como desinfetantes, agentes de sanificao ou

antissptico
De maneira similar os hipocloritos e as
cloraminas sofrem hidrlise com a formao do
cido hipocloroso.

Cl2 + H2O HCl + HClO (c. hipocloroso)

HClO HCl + O

O O2 o agente oxidante leva os mos. a morte.

A destruio dos germes pelo cloro e pelos seus
derivados devida em parte a combinao do cloro
com protenas da memb. citoplasmtica e com as
enzimas.

Detergentes sintticos
No se precipitam em guas cidas e nem
alcalinas;
Classificam-se em detergentes aninicos (ionizam
com a propriedade detergente no nion) e
detergentes catinicos (ionizam com a propriedade
detergente no ction);

Os detergentes catinicos so mais

germicidas que os aninicos.

Compostos quaternrios de amnio

Poder bactericida elevado contra os germes gramnegativos;

Tem poder bacteriosttico, bactericida e fungicida;;

Sua ao inclui a inibio enzimtica, a desnaturao
protica e a leso da memb. citoplamtica com vazamento
dos constituintes celulares.

provvel que uma verdadeira associao do

mecanismos cause a inibio ou a morte
das clulas.