Professional Documents
Culture Documents
DEGRADACIN
Prctica 2.
DE CONTAMINANTES: CINTICA
DE CRECIMIENTO Y DEGRADACIN
Introduccin
Los fenoles son compuestos aromticos que se caracterizan por tener uno o varios grupos
hidroxilo unidos directamente al anillo aromtico. Por lo general, se nombran como derivados
del miembro ms sencillo de la familia, el fenol. La dbil acidez del grupo fenlico ha
determinado que estas sustancias sean agrupadas qumicamente junto a los cidos
carboxlicos y a los taninos, conformando as el grupo de los cidos orgnicos. Las
concentraciones naturales de compuestos fenlicos son usualmente inferiores a 1 g/l y los
ms habituales son los fenoles, cresoles y los cidos sirngico, vainllico y p-hidroxibenzoico.
Procedencia de fenoles en el ambiente
La presencia de fenoles en el medio ambiente es consecuencia tanto de acciones naturales
como del aporte antropognico, fundamentalmente, de carcter industrial. Desde el punto de
vista de la contaminacin, es de sumo inters la presencia de estos compuestos en aguas y
sedimentos, por lo que es necesario prestar inters al origen, migracin y distribucin de los
fenoles en los distintos tipos de efluentes acuosos.
Principales fuentes de emisin
Las principales fuentes de contaminacin de estos compuestos se producen en la industria
farmacutica, concretamente durante el proceso de fabricacin del cido acetilsaliclico
(aspirina), y en la produccin de resinas fenlicas. Es utilizado tambin en la manufactura del
nylon y otras fibras sintticas; como desinfectante para matar bacterias y hongos; y como
antisptico para combatir los problemas de acn.
Estas sustancias se encuentran presentes en las aguas superficiales, como resultado de la
contaminacin ambiental y de los procesos naturales de descomposicin de la materia
orgnica.
La mayora de los compuestos fenlicos que se pueden encontrar en aguas residuales son de
origen industrial. Son utilizados en industrias de cuero y textiles, coqueras, refineras de
petrleo, destileras de alquitrn, sntesis y formulacin de pesticidas, fbricas de pasta de
papel, plantas de tratamiento de maderas, fbricas de colorantes, etc.
Por ejemplo, el fenol y sus derivados ms simples se utilizan principalmente en la fabricacin
de polmeros sintticos y plsticos entre los que se encuentran la baquelita y polmeros
similares. Algunos fenoles se utilizan como plaguicidas por su accin herbicida, fungicida e
insecticida, lo que provoca su difusin en el medio ambiente a travs de las actividades
agrcolas y su entrada en la cadena alimenticia.
Efectos en el medio ambiente
Respecto de su incidencia con el medio ambiente, es una sustancia nociva para los
organismos acuticos, provocndoles efectos adversos de distinta magnitud en funcin de la
concentracin a la que se encuentren expuestos. Esta sustancia est clasificada como
Compuesto Orgnico Voltil (VOC) y puede contribuir potencialmente a la formacin de ozono
troposfrico, daino para los cultivos, la fauna y el hombre.
La toxicidad de los fenoles vara con la posicin y el nmero de sustituyentes en el ncleo
aromtico. La toxicidad es mayor para los sustituyentes halogenados, siendo los yodofenoles y
Objetivos
Objetivo General
Observar, describir y analizar la degradacin de fenoles en cultivo en lote con un consorcio
microbiano especializado.
Objetivos Especficos
Evaluar la degradacin de un contaminante orgnico como el fenol realizando ensayos a
diferentes concentraciones (50, 100, 200 y 500 mg/L).
Analizar la cintica de crecimiento bacteriano y obtener los parmetros de velocidad de
crecimiento y consumo de sustrato.
Discutir el uso de microorganismo degradadores de fenol.
Materiales y Equipo
Materiales
Matraces Erlenmeyer de 250 ml para
cada concentracin y control
Tubos eppendorf para toma de
muestra de la cintica
Filtros millipore con membrana de 0.22
um
Soluciones
Sol. Stock de Fenol 100 mg/ml
Sales para medio Basal
Equipo
Incubadora con agitacin
Centrfuga
Espectrofotmetro
Celdas plsticas
Celdas de cuarzo
Metodologa
A c tiv a r e l
in o c u lo
(u sa n d o
m e d io 1 0 X y
5X)
In o c u la r
m e d io c o n
10% del
c o n s o rc io
m ic ro b ia n o
A g re g a r 1 2 5
m l d e l m e d io
d e c u ltiv o
e s te ril a l
m a tra z
To m a r
m u e s tra s (la s
p rim e ra s
c o n c e n tra c io
nes deben
to m a r
m u e s tra s
c a d a 4 h o ra s
e l p rim e r d a )
D e te rm in a r e l
consum o de
s u s tra to p o r
e s p e c tro fo to m
e tria
Resultados
Grfica 1. Cintica de crecimiento para diferentes concentraciones de fenol
1.2
1
0.8
0.6
Absorbancia
50 mg/l
100 mg/l
200 mg/l
500 mg/l
0.4
0.2
0
20
40
60
Tiempo (horas)
La
mx
Ks
son
0.01728
1
h
28.9654
mg
l
respectivamente
200 mg/l
500 mg/l
80
60
40
20
0
0
10
20
30
40
50
60
70
Tiempo(horas)
ANALISIS DE RESULTADOS
La degradacin del fenol a nivel bitico, esta mediada principalmente por organismos capaces
de utilizar este compuesto como fuente de C y energa.
La reaccin global de degradacin es:
4 C 6 H 6 O+28 O2 24 C O2 +12 H 2 O
Para una concentracin de 50, 100 y 200 mg/L el comportamiento de biomasa se obtuvo de
manera similar, la fase exponencial se present a partir de las 25 hasta las 68.5 horas
aproximadamente, as como en la fase de adaptacin, donde se puede observar que en los
tres casos se adaptaron de manera semejante. Para el caso de la muestra de 500 mg/L, hubo
un mayor retardo, pues en la fase de adaptacin se prolong hasta 52 horas, as como en la
fase exponencial que se dio en 128.5 horas. Es evidente que el aumento de biomasa con el
consorcio utilizado se alarg conforme la concentracin de fenol fue aumentando.
La
mx
Ks
son
0.01728
1
h
28.9654
mg
l
respectivamente, Ks es la concentracin de
sustrato que soporta tasa mxima de crecimiento especfico, para soportar dicha tasa de
28.9654
mg
l
sustrato, en este
caso fenol.
Las bacterias pueden llevar a cabo el proceso de biodegradacin del fenol, en especial las
Gram negativas, siendo el gnero Pseudomonas sp. el ms reportado con esta capacidad ;
otros gneros de bacterias Gram negativas han sido reportados en la degradacin del fenol,
entre las que se encuentran Agrobacierium, Acinembacter, Burkholderia, Klebsiella, entre
otros; no obstante las bacterias Gram positivas tambin tienen la capacidad de degradar este
compuesto, como por ejemplo el gnero Rhodococcus. Sin embargo, independientemente del
tipo de bacteria, estas poseen gran actividad de monooxigenasas y dioxigenasas que permiten
degradar este compuesto.
La va metablica tpica para la degradacin de fenol se produce a travs de derivados de
catecol, antes de la desciclizacin a travs de una orto- o meta- oxidacin.
Conclusin
Se pudo observar como el fenol en diferentes concentraciones, es degradado por parte de
microorganismos, utilizndolo como nica fuente de carbono, la degradacin es evidenciada
con la reduccin de la concentracin de fenol, aunque este resultado no fue muy claro a una
concentracin inicial de 500mg/L iniciales de fenol. Se observ una adaptacin ms rpida y
un mayor crecimiento a la menor concentracin (50mg/l).
Bibliografa
Garca, Jose. (2007). Biodegradacin de fenol en un reactor discontinuo de alimentacin
secuenciada. (Tesis de pregrado). Universidad Autnoma del estado de Hidalgo.
Pachuca, Hidalgo.
Serra, Beatriz. (2002). Desarrollo de electrodos compsitos enzimticos para la deteccin y
determinacin de compuestos fenlicos (Tesis doctoral). Universidad Complutense de
Madrid. Madrid, Espaa.
PRTR Espaa. (2009). Ministerio de agricultura, alimentacin y medio ambiente. Gobierno de
Espaa. Recuperado de: http://www.prtr-es.es/Fenoles,15658,11,2007.html
Schie, Paula M. van & Young, Lily Y. (2000): Biodegradation of Phenol: Mechanisms and
Applications, Bioremediation Journal, 4:1, 1-18
Barrios-Martinez, A., Barbot, E., Marrot, B., Moulin, P., & Roche, N. (2006). Degradation of
synthetic phenol-containing wastewaters by MBR. Journal of Membrane Science, 281(1),
288-296.
El-Naas, M. H., Al-Muhtaseb, S. A., & Makhlouf, S. (2009). Biodegradation of phenol by
Pseudomonas putida immobilized in polyvinyl alcohol (PVA) gel. Journal of Hazardous
Materials, 164(2), 720-725.
Guerin, M. R. (1977). Energy sources of polycyclic aromatic hydrocarbons. Environment,
Chemistry and Metabolism, 1, 3-42.
Memoria de clculo
Tabla 1. Resultados obtenidos para la cintica de crecimiento a diferentes concentraciones de sustrato (fenol)
50 mg/l de fenol
Tiempo
(horas)
Absorbanc
ia
0
2
4
6.5
8
20
22
24
26
28
32
47
51.5
53
68.5
0
0.129
0.163
0.183
0.133
0.131
0.132
0.182
0.148
0.184
0.258
0.774
0.836
0.905
1.129
100 mg/l de
fenol
Tiemp
o
Absorban
(horas
cia
)
0
0
5
0.094
7.5
0.02
25
0.044
27
0.007
29
0.068
33
0.15
48
0.634
52.5
0.741
69
1.013
-
Tiempo
(horas)
Absorbanc
ia
Tiempo
(horas)
Absorban
cia
0
4
22
47
49
51
53
57
68
-
0
0.088
0.199
0.552
0.678
0.708
0.782
0.943
1.048
-
0
4.5
24.5
47.5
52
68.5
77.5
170.5
-
0
0.103
0.171
0.201
0.21
0.429
0.448
0.95
-
Fase log
1.1
f(x) =0.6
0.03x - 0.73
Absorbancia
R = 0.1
0.99
25 35 45
Tiempo (horas)
0.6
0.4
0.2
0
0
10
20
30
40
-0.2
Tiempo (horas)
50
60
70
Fase log
1
0.5
Absorbancia f(x) = 0.03x - 0.83
R = 1
0
25
35
45
Tiempo (horas)
0.6
0.4
0.2
0
0
10
20
30
40
-0.2
Tiempo (horas)
50
60
70
Fase log
1.05
f(x)
= 0.03x - 1.02
0.85
AbsorbanciaR = 0.98
0.65
45 50 55 60
Tiempo (horas)
0.6
0.4
0.2
0
0
10
20
30
40
-0.2
Tiempo (horas)
50
60
70
Fase log
0.9
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0
20
40
60
80
Tiempo (horas)
Modelo de Monod
Tabla 2. Velocidades de
Concentra
cin de
fenol
mg
s [ ]
l
50
100
200
500
80
[O.D./
h]
0.032
0.0305
0.0331
0.0052
1
S
75.188
70
60
50
0.02
0.01
0.00
5
0.00
2
34.602
0
40.485
29.154
5
75.187
9
1/
40
31.25
30
20
30.21
32.79
0.01
0.01
10
0
0
1/S
1
1
=57.862 mx =0.01728
mx
h
Ks
mg
=1428 K s =1428 0.01728=28.9654
mx
l
Degradacin de fenol
Concentraci
n de fenol
[mg/L]
0
50
100
200
500
0.02
Absorban
cia
0
2.7
4.65
9.3
23.9
0.02
0.03
400
300
200
100
0
0
10
15
20
25
Absorbancia
50 mg /l
Tiemp
Tiemp
o
Abosrba Concentra o
(hora
ncia
cin
(hora
s)
s)
0
2.028 42.2142
0
2
1.619 33.6211
5
4
1.281 26.5197 7.5
6.5 0.898 18.4729
9
8
1.358 28.1375 21
20 1.538 31.9193 23
22 1.614 33.5160 25
24 1.384 28.6837 27
26 1.419 29.4191 29
28 1.618 33.6001 33
32 1.378 28.5577 48
47 1.306 27.0450 52.5
51.5 1.017 20.9731 54
18.7250 57
53
0.91
56 0.763 15.6365 69
13.8927
68.5 0.68
--
100 mg/l
200 mg/l
500 mg/l
Tiemp
Tiemp
Abosrba Concentra o
Abosrba Concentr
o
Abosrba Concentra
ncia
cin
(hora
ncia
acin (horas
ncia
cin
s)
)
1.902
1.386
1.233
1.578
1.459
1.694
1.581
1.398
1.588
1.193
0.805
0.779
0.769
0.733
0.82
39.5669
28.7258
25.5112
32.7597
30.2595
35.1968
32.8227
28.9779
32.9698
24.6708
16.5190
15.9727
15.7626
15.0062
16.8341
--
--
0
4
22
24
47
49
51
53
57
68
-------
2.283
2.262
1.217
1.07
0.667
0.573
0.648
0.613
0.621
-------
47.5717
47.1305
25.1751
22.0866
13.6196
11.6446
13.2204
12.4850
12.6531
-------
0
0.178
4.5
0.33
24.5 0.198
47.5 0.298
52
0.923
53.5 0.346
56.5 0.305
68.5 0.3969
-----------------
33.4568
65.3920
37.6588
58.6688
189.9813
68.7536
60.1395
79.4477
---------