Molculas frente a la morfologa de la evolucin aviar: El caso de la "pelecaniform" aves.

RESUMEN: El Pelecaniformes tradicionales aviar Orden se compone de las aves con los cuatro
dedos de los pies conectados por una red. Este \ "totipalmate \" se encuentra en condicin de ca.
66 especies de vida: 8 pelcanos (Pelecanus), 9 piqueros y alcatraces (Sula, Papasula, Morus), ca.
37 cormoranes (Phalacrocorax), 4 anhingas o dardos (Anhinga), 5 fragatas (Fregata), y tres aves
tropicales (Faetn). Varios caracteres adicionales son compartidos por estos gneros, y su
monofilia ha asumido desde el comienzo de la nomenclatura zoolgica moderna. La mayora de los
ornitlogos clasificar a estos gneros como una orden, a pesar de aves tropicales han sido
considerados como relacionados con los charranes, fragatas y los allegados de los petreles y los
albatros. ADN-ADN hibridacin de datos indicaron que los pelcanos son los ms estrechamente
relacionados con la shoebill (Bakniceps rex), una cigea como ave que vive en los pantanos de
frica central, los piqueros, alcatraces, cormoranes y anhingas forman un grupo estrechamente
relacionado ; la rabijuncos no estn estrechamente relacionados con los taxones otros, y la fragata
estn ms cerca de los pinginos, colimbos, petreles, pardelas y los albatros (Procellarloidea). La
mayora de estos resultados han sido corroborados por secuencias de ADN de los 12s y 16s rRNA
genes mitocondriales, y son otro ejemplo de la incongruencia entre las clasificaciones derivadas de
las caractersticas morfolgicas frente gentica.
Hasta hace poco, los caracteres morfolgicos han sido el principal, y prcticamente la nica fuente
de evidencia para la organizacin de las especies en categoras ms amplias en la construccin de
las clasificaciones. La Orden Pelecaniformes tradicionales (pelcanos, cormoranes, anhingas y
dardos, pjaros bobos y alcatraces, fragatas y aves tropicales) ha sido definido por el pie
totipalmate, en la que el dedo gordo se dirige hacia adelante y conectados por una red de dgitos II,
adems de la redes entre los dgitos II y III, y entre III y IV. En otras aves con patas palmeadas slo
los dedos de los pies delante de tres (los dgitos II, III, IV) estn conectados por redes, y el hallux
es libre o est ausente, ningn ave tiene cinco dedos. De las aves tropicales de todos los
totipalmate pero tienen una bolsa gular obvio, la bolsa de la \ fragata 's gular es inflable y se utiliza
en la pantalla, por lo tanto diferentes a las de las otras especies. La combinacin de los pies y la
bolsa gular totipalmate ha parecido tan poco probable que evolucionar ms de una vez que la
monofilia del grupo ha sido ampliamente aceptada desde Linneo (1) los coloc en el Pelecanus
gneros (pelcanos, cormoranes, piqueros, anhingas y fragatas) y Faetn (aves tropicales).
Tambin comparten la ubicacin de la glndula de la sal-excretando dentro de la rbita en lugar de
en una ranura supraorbital, y carecen de un parche de incubacin, que est presente en todas las
otras aves marinas y aves acuticas. Sin embargo, varan en la musculatura plvica, arreglo de la
arteria cartida, y varios otros caracteres anatmicos. Las similitudes abogan por monofilia, las
diferencias plantean la posibilidad de polifilia. El pie palmeado aviar con dos bandas entre los tres
dedos del pie delantero se ha convertido en grupos con distintos orgenes, por ejemplo, patos,
gaviotas, flamencos, y los albatros. La condicin podra totipalmate, que se produce en menor
nmero de especies, tambin tienen mltiples orgenes? Sibley y Ahlquist (2) revisin de la
literatura desde 1758 hasta 1990. Ha habido muchos estudios morfolgicos de la pelecaniforms;
los de Lanham (3), Saiff (4), y Cracraft (5) se encuentran entre las ms recientes. Lanham (3)
reconoce su diversidad, pero lleg a la conclusin de que las aves totipalmate formar un orden
natural. Asign a Faetn y Fregata a subrdenes por separado, los otros gneros de la Pelecani
suborden, y sugiri que los parientes ms cercanos de la pelecaniforms son los procellariiforms
(pardelas, petreles y albatros). Saiff (4) estudiaron la regin del odo medio de la pelecaniforms y
de las garzas y cigeas. Lleg a la conclusin de que el shoebill (Balaeniceps rex) (Fig. 1), que
vive en los pantanos de frica central, est ms estrechamente relacionada con la pelecaniforms
que a las garzas y cigeas, y que se asemeja a la Faetn procellariiforms pero est bastante lejos

de ellos . Cracraft (5) llev a cabo una \ "... el anlisis filogentico para evaluar la monofilia de la
Pelecaniformes y para determinar las relaciones interfamiliares de la orden. \" Se analizaron 52
caracteres con \ "cladstica numrica \" los mtodos y la conclusin de que \ "Pelecaniform
monofilia fue altamente corroborada, con 12 sinapomorfias postulado que apoya la hiptesis.
Sibley y Ahlquist (2) compar los genomas de especies representativas de pelecaniforms y otros
grupos importantes de aves que viven con la tcnica de hibridacin ADN-ADN. La mayor parte de
los resultados de acuerdo con las clasificaciones basadas en caracteres morfolgicos, pero varios
no estaban de acuerdo (Fig. 2 Bajo). Entre las salidas ms sorprendente fue la evidencia de que
los pelcanos estn ms estrechamente relacionados con la shoebill (Fig. 1) que a las aves
totipalmate otros. Sin embargo, esta no fue la primera sugerencia de una relacin estrecha entre
los pelcanos y los shoebill. Adems el estudio de Saiff (4), se ha sealado, Cottam (8) hizo un
estudio osteolgico de la shoebill, garzas, cigeas, y pelecaniforms y concluy que el shoebill \
"podra ocupar una familia monotpica de la Orden Pelecaniformes, posiblemente cerca de la
Pelecanidae. \ Lowenstein "JM, a partir de comparaciones de radioinmunoensayo de las protenas,
la conclusin de que Pelecanus no est estrechamente relacionada con los taxones totipalmate
otros. Lowenstein estaba tan sorprendido por sus resultados que se supone que el material que
han sido degradados y no publicar sus datos, pero no dio permiso Sibley y Ahlquist para hacerlo.
ibley y Ahlquist (ref. 2, pp 502 a 503) lleg a la conclusin de que \ "Este grupo puede presentar las
preguntas ms complejas y controvertidas de la filogenia aviar. Es posible que el pie totipalmate,
la falta de un parche de incubacin, la sal intraorbitario glndula, y otros caracteres comunes o han
evolucionado ms de una vez o son caracteres primitivos que se han perdido en los otros linajes de
la Ciconiides?. Esta explicacin ser rechazada por la mayora de morflogos improbable, pero
debe ser considerada como una hiptesis alternativa a la Evolucin: Las coberturas y Sibley
monofilia de las aves totipalmate. Instamos a que la posibilidad de polifilia ser probado por estudios
independientes de ambas molculas y morfologa. Sea cual sea la respuesta correcta puede ser,
ser instructivo. "En este trabajo se presentan los resultados de las comparaciones entre las
secuencias de ADN mitocondrial de los rRNA 12S y 16S ARNr Genest de 16 taxa aviar, incluyendo
los gneros totipalmate. Estos resultados proporcionan evidencia adicional que la Orden
Pelecaniformes tradicional es polifiltico.
MATERIALES Y METODOS

Secuencias de ADN de fragmentos de dos genes mitocondriales (12S ARNr 16S y ARNr), por un
total de 1,7 kb de la secuencia alineada, se obtuvieron de cada uno de los siguientes 15 especies
de aves: buitre egipcio (Neophron percnopterus), Homed Grebe (Podiceps auritus), Red Pico
Tropicbird (Phaethon aethereus), bobo de patas azules (Sula nebouxii), bigu (Phalacrocorax
brasilianus), Negro Stork (Cico-'nia nigra), el cndor de California (Gymnogyps californianus),
cndor andino (Vultur gryphus), tijeretas (Fregata magnificens), shoebill (Balaeniceps rex), Brown
Pelican (Pelecanus occidentalis), de pinginos Adelia (Pygoscelis adeliae), Common Loon (Gavia
immer), Red-throated Loon (Gavia stellata), y Gran pardela (Puffinus gravis). Correspondientes
secuencias de un ave de corral (Gallus gallus;. No adhesin X52392) y cocodrilo americano
(Alligator mississippiensis;. Adhesin no L28074) se obtuvieron de las bases de datos para la
comparacin. Las regiones secuenciadas corresponden a los sitios de 1760-2128 (12S ARNr) y
desde 2797 hasta 3995 (ARNr 16S) en la secuencia publicada de la especie Gallus gallus (9).
Nombres en latn e Ingls de aves de ref. 10.
DNA fue amplificado (PCR) con el uso de cebos hechos a regiones conservadas entre los
vertebrados, y estos mismos cebadores fueron utilizados para la secuenciacin de
didesoxinucletidos de las dos vertientes complementarias. Los 10 primers (cinco pares) se
utilizaron 12L5/12H4, 16L2a/16H10, 16L9/16H3, 16L1/16H13 y 16L4/16H12 (11) y los que no se ha
descrito anteriormente se 16H12 (TTA GGG AGA GGA TTT CCT GAA CTG) y 16H13 (CCG GTC
CAG TGA ACT ATC ACG TA). El 12S rRNA resultados de parejas iniciadoras de un fragmento de
aproximadamente 400 pb que corresponde a la regin descrita en la ref. 12. Los cuatro pares de
cebadores 16S ARNr producen la superposicin de fragmentos que, whenjoined, corresponden
aproximadamente a 1,2 kb ofthat 1,6 kb del gen.

Doble hebra de ADN se amplific (Perlkn-Elmer Gene Amp PCR System 9600) en 25-30 ciclos
(940C durante 15 s, 50'C durante 15 s, 720C durante 45 s), y una sola cadena de ADN en 30-35
ciclos (55-600C la temperatura de recocido). El ADN de doble cadena se purific en gel y se utiliza
como plantilla para una sola cadena ampliaciones, con uno de los dos primeros como una
limitacin (1:100). Una sola cadena de ADN se filtr con 30-kDa de corte de los filtros (Millipore)
antes de la secuenciacin de ADN polimerasa Taq. Alineacin de la secuencia se realiz con ESEE
(13), y las dos regiones secuenciado se combinaron para todos los anlisis. Las secuencias
alineadas se analizaron con MEGA (14). Neighborjoining (15) analiza, excepto cuando se indique,
se llevaron a cabo con la Jukes-Cantor (16) a distancia, y la confianza estadstica de los nodos de
los rboles se infiere de la prueba de significacin de la diferencia entre la longitud de la rama y el
cero, expresado como el complemento de la probabilidad de probabilidad o de confianza (CP;. refs
14 y 17). Sitios que contienen lagunas y ambigedades que no se incluyeron en el anlisis a
distancia. Anlisis de parsimonia se realiz con MEGA y PAUP (7), y los sitios que contienen
lagunas y an4liguities fueron incluidos.
RESULTADOS

Todos los taxones. Secuencias combinadas de los dos genes mitocondriales totalizaron 1.699 sitios
alineados (12S rRNA, 388 pb; ARNr 16S, 1311 pb), incluyendo 832 variables y 516 sitios de
parsimonia. El anlisis filogentico de 16 taxones de aves (incluyendo gallus domesticus) con
Alligator como resultado la raz de un rbol (Fig. 3) que no es compatible con la monofilia deEl
"Pelecaniformes", pero est de acuerdo en muchos aspectos con las pruebas de hibridacin de
ADN. En particular, los grupos de pelcanos con el shoebill, no con el piquero y el cormorn, los
buitres del Nuevo Mundo estn ms cerca de las cigeas y pelcanos que a los buitres del Viejo
Mundo, y los somormujos estn ms cerca de la pardela de que el zambullidor. Un grupo que
contiene a los pinginos, cigeas, Evolucin: Las coberturas y Sibley.
Figura. 2. Hiptesis en conflicto de las relaciones filogenticas de "pelecaniform" las aves.
(Superior) mxima parsimonia de rboles basado en 52 caracteres morfolgicos, con valores de p
de arranque (6) sobre la base de 2.000 rplicas, PAUP (7) reanlisis de los datos en la tabla 1 de la
ref. 5, desordenada caracteres. (Baja) no ponderado par-grupo de mtodos de promedios
(UPGMA) de rboles sobre la base de la hibridacin de ADN (despus de ref. 2). Taxones
previamente colocados en el orden Pelecaniformes se indican (P). NO, Nuevo Mundo, OW, del
Viejo Mundo; AT50H, la diferencia de temperatura ( C) para los puntos medios deEl curvas de
fusin de ADN hbrido y nativas.
Nueva buitres del mundo, fragatas, pardelas, pelcanos, shoebill, somormujos y cuenta con el
apoyo (CP = 98%) y est de acuerdo con Sibley y Ahlquist (2), que los uni en el Ciconiida
Parvorder de la Orden Ciconiiformes. Por lo tanto, la evidencia de ADN indica que el total de estos
grupos de aves comparten un ancestro comn relativamente reciente, a pesar de su diversidad
morfolgica sugiere mayores diferencias filogenticas. Algunos de los resultados del anlisis de El
secuencia de ADN no est de acuerdo con la evidencia de hibridacin de ADN. Los cndores del
clster con la fragata (CP = 98%) ms que con la cigea. Una alianza entre Nueva buitres y
cigeas Mundial cuenta con el apoyo de la anatoma (18) y un anlisis de las secuencias de
citocromo b mitocondrial (19), aunque estos dos estudios no incluyeron comparaciones con una
fragata. Cndores y fragatas parece que tienen poco que ver entre s y no han sido sugeridos como
los parientes cercanos. Se requieren datos adicionales para aclarar esta inesperada alianza.
Figura. 3. Relaciones filogenticas de "pelecaniform" Las aves y los familiares inferirse a partir de
secuencias de ADN mitocondrial del rRNA 12S y los genes de ARNr 16S (1,7 kb). El rbol fue
construido por el mtodo de vecino a participar con Jukes-Cantor distancia (d), la probabilidad de
confianza (CP) se indican los valores en los nodos. Por comparacin con la figura. 2, nota que los
cndores son buitres del Nuevo Mundo y la pardela es un petrel.
Los grupos rabijunco (CP = 93%) Con Dos Pjaros totipalmate Otros (piquero y El cormorn),
aunque en El rbol de la hibridacin de Y (Fig. 2 Bajo) aparecio COMO EL taxn Ms Divergentes
de la "pelecaniforms". Una instancia de parte Menor de la Regin 16S ARNr (1,1 kb) s secuenci
(SBH, Resultados no publicados) en Otro totipalmate, El africano Darter (Anhinga rufa), y en la

ONU Anlisis restringido de la Regin en los taxones de Todos (no Mostrado ) s agrupan Con El
Grupo boobycormorant, COMO SE esperaba. La Prueba de hibridacin de Y y morfolgicas (Fig. 2)
also Ponen un piqueros los, cormoranes, y los Dardos (also Llamados anhingas) En Un Grupo
monofiltico. Una caracterstica notable de la filogenia de la secuencia del ADN (Fig. 3) es la corta
duracin de muchas ramas internas. Esto tambin es evidente en el rbol de la hibridacin de ADN
(Fig. 2 Bajo) y en un anlisis de secuencias de citocromo b (19), lo que sugiere que muchas de las
divergencias en este grupo se produjo durante un perodo relativamente corto de tiempo.
Radiaciones rpidas requieren secuencias largas de ADN para resolver todos los nodos, por lo
tanto, aunque algunas de las preguntas son contestadas por estos datos, los sitios ms sern
necesarios para una resolucin completa de la filogenia. El uso de las correcciones otra distancia
(Kimura, Tajima-Nei, Tamura, Tamura-Nei, ey, parmetros y = 0.80, calculado a partir de los datos)
con el vecino a participar arrojado resultados casi idnticos, con slo reordenamiento de menor
importancia entre los nodos que muestra una pobre resolucin en fig. 3. Anlisis de parsimonia, sin
ponderacin y con 10 transiciones transversions ponderado x cada uno dio lugar a un nico
diferente ms parsimoniosa rbol. En ambos casos, el pelcano agrupado con la shoebill, los
buitres del Nuevo Mundo estaban ms cerca de las cigeas y pelcanos que a los buitres del Viejo
Mundo, y los somormujos estaban ms cerca de la pardela de que el zambullidor. El rbol de
parsimonia ponderado es casi idntica a la del rbol vecino a participar, salvo que el buitre del Viejo
Mundo (Neophron) conglomerados con las rabijunco y en regiones donde no est bien resuelto el
orden de ramificacin de la figura. 3. Las limitaciones estadsticas de anlisis de parsimonia
ponderado se han discutido en otra parte (20, 21).
Subconjuntos de Taxa. Filogentico de resolucin puede ser mayor cuando los subgrupos de
taxones analizados. En este caso, el conflicto entre la morfologa y las molculas de "pelecaniform"
las aves y sus familiares se pueden reducir a las preguntas que requieren slo pequeos
subgrupos de taxones. En cada subgrupo, los galliformes (Gallus) se incluy, el rbol tena sus
races con el cocodrilo, y cada uno de los taxones ciconiidian ocho analiz. Las afinidades de los
pelcanos se analizaron mediante la comparacin de slo el pelcano, el piquero, el cormorn, un
taxn y otros. La ms alta confianza estadstica (99%) para la agrupacin de los pelcanos con
algunos otro taxn se obtuvo con la shoebill (Fig. 4A). En otros subconjuntos, el pelcano agrupado
con el pingino (94%), Common Loon (94%), Red-throated Loon (86%), la pardela (86%), y la
cigea (74%). El pelcano era una taxonoma de la hermana con el grupo de armas-cormorn
cuando la fragata (86%), Cndor de los Andes (76%), o cndor de California (74%) se incluy. Una
alianza entre somormujos y zampullines a menudo se ha propuesto, pero Stolpe (22) encontr
diferencias significativas entre ellos en la musculatura de las extremidades posteriores y la
anatoma del esqueleto. Muchos ornitlogos aceptado la convergencia como la explicacin de las
similitudes entre estos dos grupos de aves buceadoras, pero Cracraft (23) desestim el trabajo
Stolpe como irrelevante y la conclusin de que somormujos y zampullines son parientes cercanos.
Sin embargo, una alianza somormujo lavanco-no es compatible con la hibridacin de ADN (Fig. 2).
Esta pregunta ha sido probado en el presente estudio incluyendo slo los dos colimbos, zampulln,
y otro taxn. En todos los casos, la alianza somormujo lavanco-se rompi y los somormujos
agrupado con el taxn aadido (Fig. 4B): pardela (98%), el pelcano (98%), cndor de California
(98%), la cigea (98%), Cndor de los Andes (97%), shoebill (96%), fragatas (93%), y el pingino
(86%).
La monofilia de las aves de presa diurnas (Falconiformes) se puso a prueba al incluir slo los
buitres del Viejo Mundo, los dos cndores, y un otro taxn. En todos los casos, el Falconiformes
resultaron ser polifiltico (Fig. 4C) y los cndores agrupado con el taxn aadido: shoebill (99% 6),
la pardela (99%), fragatas (99% o), colimbo (97% ), la cigea (96%), pinginos (94%), Redthroated Loon (79% o), y el pelcano (73%). Las correlaciones entre los mtodos. La tcnica de
hibridacin de ADN-ofDNA mide el grado de similitud de secuencia entre el genoma completo (2).
Aunque las secuencias de ADN en el presente estudio examin slo una pequea parte (1,7 kb) de
los genomas de estas aves, es posible comparar las estimaciones cuantitativas de la divergencia
gentica producida por estos dos mtodos. Para la medida de la secuencia de ADN se utiliz la
distancia Kimura (transversiones slo, para evitar el sesgo de transicin), y para la hibridacin de
ADN de los valores AT50H fueron tomados de los promedios en la ref. 2, las cifras de 357 a 368.
Los dos mtodos estn altamente correlacionados (Fig. SA, r2 = 0,90; r2 = 0,72, cuando un

pequeo subconjunto de los valores pares AT5OH se utilizan). El conjunto de datos morfolgicos
de estas aves (tabla 1 de la ref. 5) se convirti en una matriz de pares de diferencias para
comparar con la divergencia morfolgica molecular. Como era de esperar por los resultados
filogenticos, la correlacin es pobre [con la secuencia de ADN, r2 = 0,01 (Fig. SB); con el ADN
hbrido r2 = 0,23. Ambos vecinos a participar en los anlisis de parsimonia y son capaces de dar
cuenta de algunas diferencias de tipo, por lo tanto, una pobre correlacin entre la distancia
morfolgica y molecular no indica necesariamente que sea o bien ofrecer un pobre (o diferente)
ofphylogeny estimacin. Sin embargo, en este caso, las estimaciones de la filogenia son diferentes
y hay un mejor acuerdo entre las dos tcnicas moleculares que entre bien y la morfologa.
DISCUSION

Los datos de secuencia de ADN de apoyo antes los resultados de hibridacin de ADN (2) que
indica que el pie totipalmate, la bolsa gular, y varios otros personajes morfolgicas de la Orden
Pelecaniformes tradicionales no son tiles para inferir la filogenia. En cambio, los pelcanos y
fragatas se encuentran a estar ms estrechamente relacionados con las aves con diversas
morfologas, como el shoebill, cndores, pinginos, cigeas, somormujos, y pardelas. Una Orden
Ciconiiformes ampliada, que combina ocho rdenes previamente reconocida, se propuso (2, 24)
para reflejar los resultados del estudio de hibridacin de ADN. Los datos de la secuencia del ADN
son los taxones que representan a siete de los ocho pedidos y apoyar este importante cambio en la
clasificacin ofbirds. Otros ejemplos que apoyan la clasificacin de Sibley et al. se observan en la
ref. 25. Dos enfoques, "evidencia total" y "congruencia taxonmica," se han propuesto para
resolver los conflictos entre las estimaciones moleculares y morfolgicos de la filogenia. Los
defensores del mtodo de evidencia total sugiere combinar todos los datos morfolgicos y
moleculares en un anlisis para producir una sola estimacin de la filogenia (26). Adems de los
problemas estadsticos que participan en la combinacin de datos de secuencias de ADN con los
caracteres morfolgicos, este mtodo adolece del hecho de que la respuesta es menos
determinado por la filogenia cierto que por el conjunto de datos con la mayora de los personajes, a
pesar de ponderacin personaje ha sugerido (27 ). Los defensores de la congruencia taxonmica
sugieren buscando entre las filogenias en conflicto en las regiones de acuerdo a un consenso (28).
Esto evita el problema del tamao, sino que tambin impone la ponderacin desigual de los
personajes y da lugar a una falta de resolucin en caso de desacuerdo grave. Algunos han
propuesto que combina elementos de ambos enfoques (29, 30). Cuando los datos moleculares
producen una filogenia robusta que entra en conflicto con la morfologa, se sugiere una tercera va:
reevaluar la evidencia morfolgica. En estos casos, es probable que los caracteres morfolgicos
presume que comparten derivados son compartidos-primitiva o convergentes. A diferencia de
morfologa, una considerable proporcin de la variacin de nucletidos es selectivamente neutro
(por ejemplo, sitios, sinnimos, pseudogenes, y no codificantes muchas y algunas regiones de
codificacin), de modo que la convergencia significativa en el nivel molecular es poco probable.
Convergencia morfolgica es amplio y bien documentado (por ejemplo, ver ref. 31), y deberamos
estar encantados de encontrar otros ejemplos interesantes.