ATIVIDADE 1

Orlando Francisco de Jesus Neto

1. Como chefe de um programa estadual de triagem neonatal, voc solicitado a
avaliar um teste novo, para um distrbio bioqumico que fatal na infncia. A
deciso de adicionar este novo teste ao programa de triagem neonatal baseada em
qual dos seguintes fatores:
Resposta: d) H um tratamento efetivo para a doena se for diagnosticada bem cedo.

2. Quando um gene de uma doena, ainda no foi identificado, mas se dispe de uma
srie de famlias afetadas e indcios da regio cromossmica que provavelmente o
gene se localiza; qual o melhor mtodo para saber se a pessoa possui a chance de ter
herdado ou herdar (caso de anlise de material fetal) este gene? Quais so as
desvantagens dessa abordagem?
Resposta: O melhor mtodo para avaliar se a pessoa possui a chance de ser herdar ou
transmitir o gene de uma doena atravs de diagnstico pr-sintomtico, com o
desenvolvimento do diagnstico gentico por meio de anlise de ligao e deteco
direta de mutao, o diagnstico pr-sintomtico se tornou vivel para muitos distrbios
genticos, como o cncer de mama. A anlise de ligao e o diagnstico direto de
mutao foram usados para testes de diagnsticos dentro de famlias para diagnsticos
pr-natal de doenas genticas e triagem populacional, sendo esta segunda impraticvel
e recomendvel somente em pessoas em risco, geralmente devido ao diagnstico familiar
positivo.

3. Quais so as principais vantagens e desvantagens da anlise direta da mutao

por RFLPs?
Resposta: Comparados s isoenzimas, os marcadores RFLP possuem a vantagem de
cobrir todo o genoma do organismo estudado. Possuem expresso co-dominante, isto ,
em cada loco estudado possvel identificar gentipos hetero e homozigotos, gerando
mais informaes e permitindo uma anlise detalhada da ao gnica e da interao
entre os alelos. Ao contrrio das isoenzimas, o nmero de marcadores RFLP
praticamente ilimitado, e o nvel de polimorfismo allico em cada loco muito maior.
Outra caracterstica de marcadores de DNA em relao isoenzimas a alta
estabilidade do DNA, que pode ser extrado, conservado e reutilizado por longos
perodos de tempo. As membranas de hibridizao tambm podem ser conservadas e
reutilizadas por 15 ou mais vezes, o que assegura que o processo de obteno das mesmas
seja compensado por seu prolongado uso. Porm a tcnica de RFLP apresenta uma srie
de limitaes neste aspecto, uma vez que envolve vrios passos intensivos em mo de
obra. Outra limitao que se apresenta ao se iniciar um projeto a inexistncia de uma.
Frequentemente, ao se iniciar um projeto no h uma biblioteca de sondas disponvel,
esta, portanto, dever ser obtido em outro laboratrio, o que leva vrios meses. O uso de
RFLP requer um pessoal tcnico habilitado para a manipulao de DNA recombinante,
neste aspecto uma tcnica mais complexa do que a isoenzimas. Estes aspectos tm
tornado limitado o uso do RFLP. Um outro detalhe que apenas 5% das mutaes
causadoras de doena podem afetar stios de restrio conhecidos.

4. Qual a importncia dos marcadores polimrficos no genoma humano?

Resposta: Com o mapeamento dos marcadores polimrficos, localizar genes a partir de
estudos de ligaes tornou-se relativamente simples, facilitando a identificao de novos
genes e precisar caso ele esteja ligado a alguma doena gentica, pois h sempre um
caminho para descobrir a funo do gene.

5. O que fase de ligao?

Resposta: uma expresso que se refere ao fato de estarem os genes no mesmo
cromossomo (fase de acoplamento) ou em homlogos diferentes (fase de repulso). Em
famlias de trs geraes, a fase de ligao nos indivduos da segunda gerao pode ser
bvia pela simples inspeo do heredograma. A fase acoplada, a condio na qual os
dois alelos dominantes (ou recessivos) tem maior probabilidade de penetrar
simultaneamente em um gameta e fase de repulso, a condio na qual o alelo
dominante de um gene e o alelo recessivo de outro gene tem maior probabilidade de
penetrar simultaneamente em um gameta.

6. Em uma doena como a fibrose cstica, causada por mais de 1.200 mutaes no
gene CFTR, localizado em 7q31, com 190 kb de DNA; qual a desvantagem da anlise
direta da mutao pelo mtodo ASO?
Resposta: Qualquer alterao na sequncia do gene pode ser identificada por esse
sistema, desde que esta alterao j tenha sido descrita. Ou seja, como ela pode ter 1200
mutaes pode ser bastante trabalhoso compar-las com outras descries existentes.
7. O primeiro exon para o gene selvagem da globina cortado duas vezes pela
enzima de restrio DdeI (CTNAG, onde N igual a qualquer nucleotdeo),
produzindo dois fragmentos de 175 e 201 pb. A mutao causando a anemia
. Abaixo so dados os diagramas de trs famlias que se submeteram a
amniocentese e comparados os RFLPs do gene da globina dos pais com o dos fetos.
Com base nos gentipos mostrados no diagrama diga em qual deles os pais so
ambos portadores (heterozigotos) e o feto afetado (homozigoto que porta os dois
genes mutados).

Resposta: Famlia C.

8. Estude a famlia mostrada no heredograma da Figura abaixo. O indivduo II-1

possui fenilocetonria (PKU), um distrbio autossmico recessivo. Um RFLP de
dois alelos intimamente ligados ao loco (locus) da PKU foi testado para cada
membro da famlia, e a Figura mostra os gentipos de cada indivduo. Os alelos
marcadores tm 5 kb e 3 kb de tamanho. Com base nos gentipos do marcador
ligado, o indivduo II-4 pode ser: afetado, um portador heterozigoto ou um
homozigoto normal?

Resposta: Ser afetado.

9. Estude a famlia mostrada no heredograma abaixo. Os trs indivduos afetados,

na gerao II e o pai I1, possuem a neurofibromatose tipo 1 (NF1), uma condio
autossmica dominante. Um sistema de microssatlites com quatro alelos
intimamente ligados ao lcus NF1 foi tipado para cada membro da famlia. Com
base nos gentipos mostrados na Figura abaixo, o indivduo II-4 vai desenvolver
NF1?

Diagrama da famlia mostrada no heredograma para o locus marcador do gene NF1

Resposta: O gene da doena NF1 est no mesmo cromossomo que o alelo 1 no pai
afetado. Assim, o indivduo II-4, que herdou o alelo 2 de seu pai, no deve ser afetado.

10. Uma famlia, pai, me e filho com sndrome de Down; estudada por RFLPs do
cromossomo 21. Um destes RFLPs tem alelos de 7, 6, 5 e 4 kb. Abaixo mostrado o
resultado do diagrama de Southern. Voc pode dizer em qual genitor ocorreu a no
disjuno? Pode dizer em qual estgio da meiose?

Resposta: No disjuno de origem paterna. Casos de trissomia do 21 de origem paterna

resultam da no disjuno na meiose I ou na meiose II.

11. Descobriu-se que o lcus da doena de Huntington (HD) est proximamente

ligado a um polimorfismo de DNA no cromossomo 4. No mesmo estudo, entretanto,
a ligao foi excluda entre HD e o lcus para o polimorfismo do grupo sangneo
MNSs, que tambm est mapeado no cromossomo 4. Qual a explicao para isso?
Resposta: os loci HD e MNSs esto mapeados distantes no cromossomo 4 e, assim sendo,
no esto ligados. Sua distncia favorece crossing-over.

12. O heredograma abaixo mostra uma famlia com um distrbio de herana

autossmica dominante. Cada membro foi tipado com um marcador de
microssatlite com quatro alelos, como mostrado no auto-radiograma
correspondente. Determine a fase de ligao para o distrbio e o lcus marcador no
homem afetado II1. Com base na meiose que produziu a prole na gerao II, qual a
freqncia de recombinao para o marcador e o lcus da doena?

Resposta: O homem afetado na gerao II herdou o alelo da doena e o alelo 1 do

marcador de seu pai afetado, e ele herdou um alelo normal e um alelo 2 do marcador da
me. Consequentemente, o alelo da doena deve estar no cromossomo que contm o alelo
marcador 1 neste homem (fase de ligao). Como ele se casou com uma mulher que
heterozigota para os alelos marcadores 3 e 4, esperamos observar o alelo 1 no filho
afetado sob a hiptese de ligao. O indivduo III-5 possui o gentipo 2,4 para o

marcador, mas afetado, e o indivduo III-7 possui o gentipo 1,3, mas normal. Ambos
representam recombinantes. Assim, existem duas recombinaes observadas em oito
meioses, dando uma taxa de recombinao de 2/8 ou 25%.

13. Considere o heredograma abaixo. Aqui um gene autossmico recessivo,

responsvel por um distrbio, est sendo transmitido. A condio de portador do
gene estabelecida com base em dosagem enzimtica. Cada membro da famlia foi
tipada para um polimorfismo de microssatlite de cinco alelos. Qual a frequncia de
recombinao entre o polimorfismo de microssatlite e o lcus do distrbio?
Observe que aqui se trata de um gene autossmico recessivo, portanto considere 10
meioses ao analisar a gerao III.

Resposta: Esses casamentos nos permitem estabelecer a fase de ligao em indivduos

II-1 e II-2, os genitores do indivduo na gerao III. O alelo da doena est no mesmo
cromossomo que o marcador 4 no indivduo II-1, e no mesmo cromossomo que o
marcador 5 no indivduo II-2. Sob a hiptese de ligao, poderamos prever que os filhos
que herdarem os marcadores 4 e 5 sero homozigotos para o alelo da doena e, assim,
afetados; filhos que herdarem ou o marcador 4 ou o 5 sero portadores heterozigotos, e
os filhos que no herdarem nem o marcador 4 nem o 5 sero homozigotos normais. Note
uma diferena importante entre os heredogramas autossmicos recessivos e os
dominantes na estimativa das frequncias de recombinao; aqui ambos genitores tm
um alelo causador da doena. Assim podemos avaliar todas as 10 meioses contribuintes
para a gerao III para recombinao entre a doena e os loci marcadores. Nenhuma
recombinao vista nos primeiros quatro filhos; entretanto o indivduo III-5
homozigoto normal, mas herdou o alelo 5 de sua me. Assim, uma recombinao em 10
meioses gera uma frequncia de 1/10 ou 10%.

14. O heredograma que se segue mostra um exemplo de diagnstico molecular na

sndrome de Wiskott-Aldrich (WA), uma imunodeficincia ligada ao X, usando-se um
polimorfismo de DNA ligado a uma distncia de mapa de aproximadamente 5cM entre
o lcus polimrfico e o gene da WA.
A) Qual a provvel fase de ligao na me portadora? Como voc determina isto? Voc
pode confirmar ou excluir que o feto portador da WA?
B) Na famlia descrita se descobriu que o av materno torna-se disponvel para o teste
de DNA e apresenta o alelo B no lcus ligado. Como, este achado, afeta sua determinao
da fase na me? O que voc conclui sobre o filho afetado? Que outros estudos devem ser

feitos para verificar isto? Que diagnstico voc faria com relao ao atual diagnstico
pr-natal?

15. Por que so utilizadas duas clulas do blastmero quando se quer saber da
possibilidade de um embrio portar um determinado gentipo?
Resposta: Utilizam-se duas clulas para evitar falha allica.

16. Determine de qual suspeito deve ser o DNA, da amostra encontrada na cena do
crime. Lembre-se que, hoje, este mtodo do fingerprinting no o melhor exame de
escolha para criminalstica forense.

Resposta: Miss Scarlett a dona do DNA encontrado na cena do crime.

17. Determine qual par gmeo monozigtico e qual no ; baseado no figerprinting

abaixo.

Resposta: B e C.