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PRCTICA 4
INTRODUCCIN
La centrifugacin es un mtodo por el cual se pueden separar slidos de lquidos de diferente densidad por
medio de una fuerza giratoria. La fuerza centrfuga es provista por una mquina llamada centrifugadora, la cual
imprime a la mezcla un movimiento de rotacin que origina una fuerza que produce la sedimentacin de los
slidos o de las partculas de mayor densidad.
Los componentes ms densos de la mezcla se desplazan fuera del eje de rotacin de la centrfuga, mientras que
los componentes menos densos de la mezcla se desplazan hacia el eje de rotacin. De esta manera los qumicos y
bilogos pueden aumentar la fuerza de gravedad efectiva en un tubo de ensayo para producir una
precipitacin del sedimento en la base del tubo de ensayo de manera ms rpida y completa.
OBJETIVO DE LA PRCTICA.
Manejar la centrifuga de acuerdo con sus especificaciones tcnicas para la separacin de
mezclas en un anlisis determinado.
GENERALIDADES
Funcin de la centrifugacin.
El objetivo de la centrifugacin es separar slidos insolubles (de partculas muy pequeas difciles de
sedimentar) de un lquido. Para ello, se aplica un fuerte campo centrfugo, con lo cual las partculas tendern
a desplazarse a travs del medio en el que se encuentren con la aceleracin = velocidad angular x radio
Tipos de centrifugacin
Centrifugacin diferencial: Se basa en la diferencia en la densidad de las molculas. Esta
diferencia debe ser grande para que sea
observada al centrifugar. Las partculas que
posean
densidades
similares
sedimentarn
componentes en la
mezcla (por
PRCTICA 4
las
partculas
en
la
ultracentrifugacin,
el
ms
comn
de
ellos
mediante
Tipos de centrifugacin
Centrifugacin diferencial: Se basa en la diferencia en la densidad de las molculas. Esta diferencia
debe ser grande para que sea observada al centrifugar. Las partculas que posean densidades
similares a la del medio sedimentarn juntas. Este mtodo es inespecfico, por lo que se usa como
centrifugacin preparativa para separar componentes en la mezcla (por ejemplo, para separar
mitocondrias de ncleos y membrana)pero no es til para separar molculas.
Centrifugacin isopcnica: Partculas con el mismo coeficiente de sedimentacin se separan al usar
medios de diferente densidad. Se usa para la separacin de ADN con mucha frecuencia.
TIPOS DE CENTRIFUGA
Hay diferentes tipos de centrfugas segn el rango de velocidades de giro:
Centrfugas de baja velocidad, de sobremesa o clnicas. De pequeo tamao y sin refrigeracin.
Alcanzan una velocidad mxima de 5000 rpm. Son tiles para la separacin de partculas grandes
como clulas o precipitados de sales insolubles.
Las centrfugas micrfugas son una variante de las anteriores que permiten llegar a velocidades de
ms de 10.000 rpm, Los volmenes de trabajo son muy pequeos. Son tiles en el campo de la
biologa molecular.
Centrfugas de alta velocidad. Alcanzan velocidades de entre 18.000 y 25.000 rpm. Son refrigeradas
y algunas tienen sistema de vaco para evitar el calentamiento del rotor a causa del rozamiento con
el aire. Son tiles en la separacin de fracciones celulares, pero insuficientes para la separacin de
ribosomas, virus o macromolculas en general.
Ultracentrfugas. Superan las 50.000 rpm, por lo que tienen sistemas auxiliares de refrigeracin i
de alto vaco. Hay ultracentrfugas analticas que permiten la obtencin de datos precisos de
propiedades de sedimentacin (coeficientes de sedimentacin, pesos moleculares), y preparativas,
tiles para aislar partculas de bajo coeficiente de sedimentacin (microsomas, virus,
macromolculas).
Centrifugacin diferencial
Es el proceso que tiene como resultado la obtencin de un sobrenadante y un material sedimentado.
Centrifugacin mediante un gradiente de densidades:
Este tipo de centrifugacin es un proceso mediante el cual las partculas se distribuyen en fracciones
de diferentes densidades de un fluido lquido. El mtodo es un poco ms elaborado que la
PRCTICA 4
PRCTICA 4
Centrifugadora
Una centrifugadora es una mquina que pone en rotacin una muestra para por fuerza centrfuga
acelerar la decantacin o la sedimentacin de sus componentes o fases (generalmente una slida y
una lquida), segn su densidad. Existen diversos tipos, comnmente para objetivos especficos.
Aplicaciones
Una aplicacin tpica consiste en acelerar el
proceso de sedimentacin, dividiendo el plasma
sanguneo y el suero sanguneoen un proceso
de anlisis de sangre.
Tambin se utiliza para determinar
el hematocrito mediante una toma de muestra capilar.
En este caso la mquina utilizada se
denomina Microcentrfuga.
Es muy usada en laboratorios de control de calidad y en fbricas que elaboran zumos a base
de ctricos, para controlar el nivel de pulpa fina, mediante separacin del zumo exprimido.
Otra aplicacin ocurre en la elaboracin de aceite de oliva. En ella, una vez molidas y batidas
las aceitunas, se introducen en una centrifugadora horizontal, en la cual el aceite, que es la
fraccin menos pesada, se aparta del resto de componentes delfruto: agua, hueso, pulpa, etctera.
Una aplicacin importante es la separacin del uranio 235 del uranio 238.
Para cuantificar el grado de grasa o crema que contiene la leche. Las centrifugadoras utilizan
instrumentos denominadosbutirmetros, de los cuales existen diferentes tipos: para crema,
manteca, etctera.
donde es
la velocidad
Tipos de centrifugadoras
Los aparatos en los que se lleva a cabo la centrifugacin son las centrifugadoras:
Contienen dos componentes esenciales:
1. Motor
1. Rotor (donde se coloca la muestra por centrifugar). Existen dos tipos de rotores:
Fijos. Los tubos se alojan con un ngulo fijo con respecto al eje de giro. Se usan para
volmenes grandes.
Basculantes. Los tubos se hallan dentro de carcasas colgantes, unidas al rotor con un
eje. Se mueven cuando el mecanismo centrifugador gira. Se usan para volmenes
pequeos y para separar partculas de coeficiente de sedimentacin igual o casi igual. El
mecanismo centrifugador est colocado en el interior de una cmara acorazada, a unos
4 C. Si no existiera esta cmara, al comenzar la centrifugacin, debido al rozamiento
con el aire, se incrementara la temperatura de la muestra y podra desnaturalizarse.
En una centrifugadora, las masas de las muestras deben estar compensadas entre s. En caso
contrario podra saltar por los aires. Para que no ocurra esto, hoy casi todas estas mquinas se
detienen si las masas no estn compensadas.
Preparativas.
PRCTICA 4
NOMBRE
DESCRIPCIN.
Alcanzan unas 5 000 revoluciones por
minuto (rpm). Se produce una
sedimentacin rpida. Con
las microcentrifugadoras, que llegan a
De mesa.
De alta capacidad.
De alta velocidad.
Ultracentrifugadoras.
Microcentrfuga
Microcentrfuga es una mquina centrfuga especializada utilizada en el laboratorio clnico. sta
pone en rotacin una muestra ms pequea para separar por fuerza rotatoria sus componentes
o fases (generalmente una slida y una lquida), en funcin de su densidad. Esta es de uso para
los tubos capilares.
PRCTICA 4
El tubo capilar consiste en un tubo de plstico transparente cerrado por su extremo inferior con un
tapn. Perpendicularmente al tubo de plstico y en su parte inferior, se perfora y se introduce
un tubo de vidrio de pequeo dimetro, que hace de capilar a travs del cual se descarga la columna
de fluido viscoso. Una regla colocada en su parte exterior o marcas sobre el tubo permiten medir la
altura de la columna de fluido en funcin de tiempo.
PRCTICA 4
ACIDO CLORHIDRICO.
1 HUEVO
AGUA DESTILA
2 VASOS DE PRECIPITADO
11 TUBOS DE ENSAYE
1 GRADILLA
1 PIPETA
1 AGITADOR DE VIDRIO
1 PROBETA DE 25 ML
CENTRFUGA
GUANTES PROTECTORES.
PROCEDIMIENTO Y OBSERVACIONES.
Al igual que en prcticas anteriores, la realizacin de la presente lleva una relacin con los
conocimientos adquiridos en ejercicios y prcticas anteriores, pero el resultado ms grande que
se espera obtener es, conocer con cuales tipos de centrifugas se cuenta en el laboratorio, as
como cual es el proceso de funcionamiento de cada una de ellas, cuales son sus caractersticas y
que medidas de seguridad se deben de seguir para un uso correcto y as evitar cualquier tipo de
accidente.
LOS RESULTADOS OBTENIDOS FUERON LOS SIGUIENTES.
PRCTICA 4
previamente
seleccionado,
agitamos
Con ayuda de
Utilizamos dos tipos de centrifugas diferentes, una de ellas tena al menos 30 aos de antigedad y
la segunda era una centrifuga usada recientemente, algunas de las caractersticas de ambas eran las
siguientes:
TUBOS 1 Y 2
TUBOS 3 Y 4
TUBOS 5 Y 6
TUBOS 7 Y 8
TUBOS 9 Y 10
PRCTICA 4
Una de las cosas ms importantes que aprendimos durante el desarrollo de la presente prctica, fue
el conocer y aprender cuales son las partes internas y externas que forman una centrifuga, adems
de todo esto, algo extra que se aplico por primera vez fue el usar la campana de extraccin en la
manipulacin de cido clorhdrico, debido a que se encontraba muy concentrado y poda desprender
vapores muy txicos se conoci cuales son las medidas y precauciones que se deben de seguir para
la utilizacin de las dos centrifugas que se encuentran en el laboratorio, adems se comprob
mediante prcticas experimentales cuales son las fallas resultantes de una mala centrifugacin en
donde nos quedo claro el tema a travs de 4 tubos de ensaye ocasionado por el desnivel al que se
encontraba cada par de tubos, se considero que para que no se suscitara ningn accidente, los dos
tubos deberan de tener el mismo nivel de sustancia y la compuerta no se deba de abrir por ningn
motivo, cuando se introduca un solo tubo, forzosamente se debera de introducir otro que contenga
agua.
LOGRO
RASGO
PERSONAL
EQUIPO
GRUPO
RESPONSABILIDAD
100%
90%
89%
ACTITUD
100%
99%
87%
CALIDAD
100%
95%
85%
DESEMPEO
100
90%
88%
Harrison, Roger G., Todd, Paul, Rudge, Scott R., Petrides D.P. Bioseparations Science and
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Dishon, M., Weiss, G.H., Yphantis, D.A. Numerical Solutions of the Lamm Equation. I.
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Cole, J.L., Hansen, J.C. Analytical Ultracentrifugation as a Contemporary Biomolecular
PRCTICA 4: MANEJA LA
CENTRIFUGA DE ACUERDO AL
MANUAL DE OPERACIN.
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