CENTRO DE CINCIAS AGRRIAS E BIOLGICAS - CCAB

DEPARTAMENTO DE CINCIAS BIOLGICAS DCBI

CURSO DE LICENCIATURA PLENA E BACHARELADO EM CINCIAS
BIOLGICAS
DISCIPLINA: MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA - CIB0383
AULA PRTICA 9 Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos

(ANTIBIOGRAMA)
Antibiogramas so bioensaios conduzidos in vitro que visam testar a sensibilidade
de bactrias aos antimicrobianos. A proposta primria deste teste guiar o clnico na
escolha do agente apropriado para a terapia. Os testes de rotina fornecem dados
acumulados, que so informaes sobre os agentes para uso emprico. Alm disso, estes
testes so utilizados para avaliar in vitro a atividade de novos agentes, e auxiliar no
mapeamento da emergncia de bactrias resistentes. A suscetibilidade antimicrobiana pode
ser reportada qualitativamente como sensvel, intermedirio ou resistente; ou
quantitativamente em termos de MIC (minimun inhibitory concentration) ou MBC
(minimun bactericidal concentration).
1- Teste Quantitativo da sensibilidade aos antimicrobianos: Mtodo de diluio:
consiste em preparar sucessivas diluies dos antibiticos em meio slido ou lquido e em
seguida semear a bactria em estudo. Aps incubao determina-se MIC e/ou MBC.
2- Mtodo de difuso de Bawer e Kirk (modificado pela FDA): um teste
qualitativo, no qual discos de papel impregnados com o antibitico so colocados na
superfcie do gar uniformemente semeado com o micro-organismo. A droga se difunde no
gar e produz inibio do agente sensvel, formando um halo de inibio que deve ser
medido e comparado com tabelas padronizadas. Para a garantia desta tcnica, alguns fatores
so essenciais:
Meio de Cultura: normalmente utilizado o meio Muller-Hinton, que se caracteriza
por ser um meio enriquecedor e com ausncia de substncias antagnicas.
Cultura Bacteriana: o teste deve ser realizado com cultura pura de bactrias, devendo-se
realizar a colorao de Gram. A densidade do inculo deve corresponder a turbidez 0,5 na
escala padro de turbidez (Escala de Mac-Farland).
Tcnica:
Para cumprir os objetivos desta aula ser utilizado o mtodo de difuso:
1. Sature um swab de algodo com a suspenso bacteriana. Remova o excesso de
umidade girando o swab contra a parede do tubo.

2. Semeie a suspenso sobre a superfcie estril de uma placa

contendo gar Mller-Hinton, utilizando sucessivamente trs direes
para obter um inculo uniformemente espalhado sobre toda a
superfcie do gar.

3. Distribua cinco discos de antibitico, sendo cada um de um antimicrobiano

diferente, sobre a superfcie do gar inoculado, seguindo o esquema abaixo.
Deixe uma distncia de aproximadamente 1 cm entre a borda da placa e o
disco.
4. Pressione
levemente os discos para que no se desprendam durante a incubao.
5. Incube as placas por 24 horas a 37C.
Anlise dos Resultados
Atravs da anlise dos resultados poderemos classificar os microrganismos testados em:
resistente, intermedirio, moderadamente sensvel, e sensvel, dependendo da
formao ou no de halo inibitrio e tambm de seu dimetro.

Halo de inibio

No caso de formao de um halo inibitrio, este deve ter seu dimetro medido, e a
medida encontrada deve ser comparada com tabelas padronizadas (ver Tabela). De modo
geral, estas tabelas determinam medidas de dimetro, e dessa forma a medida encontrada
em cada caso pode ento ser enquadrada em uma das quatro categorias supracitadas.
Exemplo de Tabela de Halos de Sensibilidade
AntimicroBiano

Cdigo

[g]

Bacitracina
Cefotaxima
Gentamicina
Tetraciclina
Vancomicina

BAC
CTX
GEN
TET
VAN

10
30
10
30
30

Halos de Inibio (mm)

Moderadamen
Resistente Intermedirio
Sensvel
te sensvel
(mm)
(mm)
(mm)
(mm)
<8
9 a 12
> 13
< 14
15 a 22
> 23
< 12
13 a 14
> 15
< 14
15 a 18
> 19
<9
10 a 11
> 12

EXEMPLO: Se para um determinado micro-organismo, utilizando-se o antimicrobiano

Gentamicina, foi medido o dimetro de um halo de inibio e constatou-se que este era de
16 mm, tal microrganismo deve ser classificado como sensvel para a Gentamicina.
Entretanto se o dimetro do halo fosse de 13 mm o micro-organismo seria classificado
como intermedirio a Gentamicina. No caso de no formao de um halo de inibio, o
micro-organismo seria considerado resistente.

Relatrio aula prtica 9

Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos (ANTIBIOGRAMA)

Objetivo:
Testar a sensibilidade de bactrias agentes antimicrobianos.

Material utilizado:
2 placas de meio de cultura contendo gar Mller-Hinton;
swabs de algodo;
discos de papel filtro com antibiticos (tetraciclina, neomicina, cloranfenicol,
ampicilina, cido nalidxico);
suspenso de micro-organismos (E. Coli, S. Aureus).

Metodologia:
1 Momento:
Procedimento:
Na primeira foram separadas as duas placas com meio de cultura gar Mller-Hinton.
Aps, foram pegos swabs de algodo e saturados em suspenso bacteriana, uma contendo
E. coli, e outra S. aureus. Esta suspenso foi espelhada uniformemente, uma em cada placa.
Aps este procedimento, foram distribudos cinco discos de antibiticos, um para cada
antibitico, sobre o meio de cultura.
Em seguida, as placas foram colocadas na estufa, em temperatura entre 25-37 para
incubar.
2 Momento:
Leitura e interpretao:
Na segunda aula as placas foram retiradas da estufa, e pode-se verificar a formao de halos
ao redor de alguns discos antimicrobianos.
Aps a verificao de halos foi realizada uma medio de dimetro dos mesmos.

No meio de cultura com E. coli, a Tetraciclina apresentou um halo de 20mm, a Ampicilina

um halo de 20mm e a Neomicina um halo de 10mm.No houve formao de halos para o
cido Nalidxico e para Tetraciclina. (Anexo I, figura 1)
No meio de cultura com S. aureus, o cido Nalidxico apresentou um halo de 12mm.
Quanto aos demais antibiticos, no houve formao de halos. (Anexo I, figura 2)

Resultados:
A bactria E. coli, apresentou resistncia quanto ao cido Nalidxico, Cloranfenicol e a
Neomicina, e sensibilidade quanto Tetraciclina e Ampicilina.
A bactria S. aureus, apresentou resistncia em relao a todos os antibiticos.

Anexo I: Imagens

Fig. 1
Formao de halos em meio de cultura com
E. coli.

Fig. 2
Formao de halo em meio de cultura comercialmente
S. aureus.

Anexo II: TABELA PADRO PARA INTERPRETAO DE HALOS DE INIBIO (*).

ANTIBACTERIANOS PARA ORGANISMOS GRAM-POSITIVOS E NEGATIVOS.
ZONA DE INIBIO EM mm
ANTIBACTERIA Smbolo
NO

Concentrao

Resistente

Intermedirio

Sensve
l

Amicacina

AM

30 mcg

14 ou menos

15 - 16

17 ou
mais

Ampicilina ao
testar
microrganismos
Gram-negativos e
Enterococos

AP

10 mcg

11 ou menos

12 - 13

14 ou
mais

Ampicilina ao
testar estafilococos
e microrganismos
sensveis a
penicilina

AP

10 mcg

20 ou menos

21 - 28

29 ou
mais

Ampicilina ao
testar Haemophilus
sp

AP

10 mcg

19 ou menos

20 ou
mais

Bacitracina

BC

10 unid.

8 ou menos

9 - 12

13 ou
mais

Carbenicilina ao
testar Proteus sp e
E. coli

CR

100 mcg

17 ou menos

18 - 22

23 ou
mais

Carbenicilina ao
testar P. aeruginosa

CR

100 mcg

13 ou menos

14 - 16

17 ou
mais

Cefoxitina

CT

30 mcg

14 ou menos

15 - 17

18 ou
mais

Cefalotina

CF

30 mcg

14 ou menos

15 - 17

18 ou

ZONA DE INIBIO EM mm
ANTIBACTERIA Smbolo
NO

Concentrao

Resistente

Intermedirio

Sensve
l
mais

Cloranfenicol

CO

30 mcg

12 ou menos

13 - 17

18 ou
mais

Clindamicina

CI

20 mcg

14 ou menos

15 - 16

17 ou
mais

Colistina

CL

10 mcg

8 ou menos

9 - 10

11 ou
mais

Eritromicina

EI

15 mcg

18 ou menos

14 - 17

18 ou
mais

Estreptomicina

ET

10 mcg

11 ou menos

12 - 14

15 ou
mais

Gentamicina

GN

10 mcg

12 ou menos

13 - 14

15 ou
mais

Kanamicina

KN

80 mcg

13 ou menos

14 - 17

18 ou
mais

Nalidixico, cido

NA

30 mcg

13 ou menos

14 - 18

19 ou
mais

Neomicina

NO

30 mcg

12 ou menos

13 - 16

17 ou
mais

Nitrofurantoina

NT

300 mcg

14 ou menos

15 - 16

17 ou
mais

Novobiocina

NV

30 mcg

17 ou menos

18 - 21

22 ou
mais

Oxacilina ao testar
estafilococos

OX

5 mcg

19 ou menos

20 - 22

23 ou

ZONA DE INIBIO EM mm
ANTIBACTERIA Smbolo
NO

Concentrao

Resistente

Intermedirio

Sensve
l
mais

Penicilina G ao
testar estafilococos

PN

10 unid.

20 ou menos

21 - 28

29 ou
mais

Penicilina G ao
testar outros
microrganismos

PN

10 unid.

11 ou menos

12 - 21

22 ou
mais

Polimixina

PL

300 unid.

8 ou menos

9 - 11

12 ou
mais

Sisomicina

SS

10 mcg

14 ou menos

15 - 17

18 ou
mais

Sulfonamidas

SF

300 mcg

12 ou menos

13 - 16

17 ou
mais

Sulfatrim(sulfamet
oxazol
Trimetoprim)

ST

25 mcg

10 ou menos

11 - 15

16 ou
mais

Tetraciclina

TT

30 mcg

14 ou menos

15 - 18

19 ou
mais

Tobramicina

TB

10 mcg

12 ou menos

13 - 14

15 ou
mais

Vancomicina

VC

30 mcg

9 ou menos

10 - 11

12 ou
mais

(*) ADAPTADO DO NCCLS.