ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE RECURSOS NATURALES

ESCUELA DE INGENIERA AGRONMICA
CARRERA AGRONOMA

PRACTICA DE MICROBIOLOGIA
PRCTICA No 1: MICROORGANISMOS DEL SUELO: IDENTIFICACION Y
RECUENTO DE COLONIAS
1. DATOS GENERALES:
NOMBRES:

CODIGO(S):

Flix Pinta

2345

Daniel Daz

2348

GRUPO No.: 6

FECHA DE REALIZACIN:
20/ 05 /2016

FECHA DE ENTREGA:
25/06 /2016

RIOBAMBA - ECUADOR

MICROORGANISMOS DEL SUELO

Identificacin y recuento de colonias
1. OBJETIVOS
2.1 Objetivo general
Identificar y registrar la cantidad de bacterias, hongos y actinomicetos que tiene cada
medio de cultivo.
2.2 Objetivos especficos
Determinar las ufc/g de cada una de las muestras del suelo.
Explicar lo observado al momento de aislar los microorganismos y al momento del conteo.
2. EQUIPOS Y MATERIALES
Reactivos:
Agar papa dextrosa agar (PDA)

19,5 g

500 ml H2O d

Agar nutritivo (AN)

11,5 g

500 ml H2O d

Agar avena (AA)

7,5 g + 5 g de avena

500 ml H2O d

Cloranfenicol (1 cpsula de 500 mg)

Nystatin
Equipos:
Autoclave

Estufa

Shaker

Balanza
Cmara de flujo
laminar

Incubadora
Pipetas automtica de
1ml y 100 l

pH meter
Rastrillos estriles

Materiales:
a. 10 muestras compuestas de suelos procedentes de 10 agro ecosistemas
b. 10 blancos de dilucin de 90 ml estriles.
c. 30 blancos de dilucin estriles de 9 ml.
d. Cajas petri con PDA (19,5 g + cloranfenicol (1 cpsula de 500 mg) en 500
ml de H2O destilada) (M1)
e. Cajas petri con agar nutritivo (11,5 g ) + Nystatin (aadir despus de la
esterilizacin (M2)
f. Cajas petri con agar-avena con pH5
g. Asa de transferencia
h. Rastrillos estriles
i. Marcador permanente
j. Masking
k. Alcohol industrial

l.
m.
n.
o.

Papel toalla
Guantes de manejo
Papel celofn
Esptulas

3. METODOLOGA
Para el aislamiento de microorganismos del suelo se aplicar el mtodo de
dilucin.
a. Pese 10 g de suelo de cada uno de los agro ecosistemas y aada a un
blanco de 90 ml de agua destilada estril (dilucin 1/10 o 10 -1).
b. Agite durante 20 minutos en un agitador rotatorio o shaker.
c. Transfiera 1 ml de la dilucin 1/10 o 10 -1 a blancos de dilucin de 9 ml para
obtener diluciones 1/102, 1/103 y 1/104 )
d. Coloque 100 l de la diluciones 1/104 en las cajas petri con los medios
slidos (PDA, AN y AA).
e. Con ayuda de un dispersor o rastrillo estril distribuya uniformemente el
material en cada una de las cajas petri con los respectivos medios de
cultivo.
f. Incube las cajas a 28oC, hasta que aparezcan colonias visibles.
g. Determine el porcentaje de humedad en cada muestra de suelo, para ello,
utilice la siguiente frmula.
% de Humedad

PSH PSC
PSH

100

PSH = peso del suelo hmedo (gramos)

PSC = peso del suelo seco (gramos)
h. Cuente el nmero de colonias de hongos, bacterias y actinomicetos
presentes en la dilucin 104 (entre 30 y 300 colonias).
i. Calcule el nmero de bacterias, actinomicetos y hongos por gramos de
suelo, de la siguiente manera:
No de microbios/g SH = No de colonias x factor de dilucin
No de microbios /g SC = No de microbios /g SH cantidad de SC/g de SH.

4. MARCO TERICO
Los medios de cultivo en microbiologa

Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es

observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es
el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han
preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes. (Davis, Dulbecco, Eisen
and Ginsberg. 1990)
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y
presin de oxgeno adecuado, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad.
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. (Davis,
Dulbecco, Eisen and Ginsberg. 1990).
BACTERIA
Las bacterias son microorganismos procariotas que presentan un tamao de unos
pocos micrmetros (por lo general entre 0,5 y 5 m de longitud) y diversas formas
incluyendo filamentos, esferas (cocos), barras (bacilos), sacacorchos (vibrios) y
hlices (espirilos). Las bacterias son clulas procariotas, por lo que a diferencia de
las clulas eucariotas (de animales, plantas, hongos, etc.), no tienen el ncleo
definido ni presentan, en general, orgnulos membranosos internos. Generalmente
poseen una pared celular y sta se compone de peptidoglicano. Muchas bacterias
disponen de flagelos o de otros sistemas de desplazamiento y son mviles. Del
estudio de las bacterias se encarga la bacteriologa, una rama de la microbiologa.
La presencia frecuente de pared de peptidoglicano junto con su composicin en
lpidos de membrana son la principal diferencia que presentan frente a las
arqueas, el otro importante grupo de microorganismos procariotas (Jimnez, D.
et/al. 2001).
Conteo bacteriano
El conteo bacteriano seala la magnitud de la poblacin total bacteriana. En ese
sentido se puede determinar por diversas tcnicas que se basan en algunos de los
siguientes tipos de medida: cuenta celular (directamente al microscopio o
mediante un contador electrnico de partculas o indirectamente con la cuenta de
colonias), masa celular (en forma directa pesando el contenido celular del
nitrgeno o indirectamente por turbidimetra, proporcional al nmero de clulas) y
actividad celular (indirectamente relacionando el grado de actividad bioqumica al
tamao de la poblacin bacteriana) (Tortora, Gerard J. 2004).
Conteo en caja de Petri

Mtodo ms usado para contar bacterias. Se prepara un caldo de cultivo, el cual

posteriormente se vierte en las placas de petri. Dependiendo del tipo de sembrado,
puede que la muestra se encuentre incorporada en el agar (Pour method) o puede
que la muestra se disperse sobre el agar gelificado (Spread method). Es de
suponerse que cada clula o grupo de clulas presentes en la muestra se
reproducir en sus mltiples alrededores para producir "colonias de clulas"
separada en el agar. Cada colonia es llamada unidad formadora de colonias
(UFC). Es importante considerar un nmero limitado de colonias pues de no ser
as, stas pueden sobre poblarse y dificultar el conteo de las mismas (rango
sugerido de acuerdo a FDA 25-250 colonias). El conteo se facilita utilizando un
contador de colonias. Este mtodo es deseable porque arroja el total de clulas
viables (slo clulas vivas); en contraste con el conteo microscpico y el conteo de
peso seco. Una desventaja radica en el tiempo que requiere para producir las
colonias, ya que se necesitan como mnimo 24 horas o ms. Por otra parte, no es
cien por ciento fiable porque generalmente las colonias crecen unidas en cadenas
o en grupos (Pommerville, Jeffrey C. 2010).
HONGOS
Los hongos no son plantas ni animales, aunque se parezcan en algunas de sus
caractersticas tanto a las unas como a los otros. A las plantas, por ser organismos
sedentarios que se encuentran fijos a un sustrato y, mientras estn vivos, no cesan
de crecer. A los animales, pues, aunque las clulas de los hongos poseen pared
como las de las plantas, las paredes celulares fngicas son ricas en quitina, la
misma sustancia que hace duro el esqueleto externo de los insectos (Herrera, T.
1998).
En realidad, los organismos que conocemos como hongos tienen diferentes
orgenes en el rbol de la vida, razn por la cual se distribuyen en tres distintos
reinos. La mayora, los ms familiares y reconocibles, conforman el reino de los
hongos verdaderos (Fungi o Eumycota). Otros se ubican en el mismo reino de las
amebas, el llamado Protozoa, como es el caso de los hongos mucilaginosos; y
otros ms, entre los que se cuentan ciertos mohos acuticos que parasitan peces,
comparten un tercer reino, el denominado Chromista, con las diatomeas, esas
particulares algas microscpicas de curiosa simetra (Pelczar, Michael J. 1982).
Los hongos parsitos, que viven sobre o dentro de otros seres vivos, obtienen su
alimento de stos y llegan a producir enfermedad en su hospedero. Los hongos
simbiontes que se asocian de manera mutualista con otros organismos constituyen
alianzas vivas de beneficio mutuo como por ejemplo los lquenes (asociacin de
hongo y alga) y las micorrizas (asociacin de hongo y raz de una planta),
simbiosis estas de gran importancia en la naturaleza en procesos de colonizacin
de hbitats y de circulacin de nutrientes (Herrera, T. 1998).
ACTINOMICETOS

Los actinomicetos son numerosos y estn ampliamente distribuidos no solamente

en el suelo, desde su superficie hasta grandes profundidades, sino en abonos,
cieno de los ros y fondo de los lagos. En general prefieren los medios alcalinos y
son predominantemente saprfitos aunque se conocen patgenos de plantas,
animales domsticos e incluso humanos. Las tcnicas empleadas para su
investigacin ecolgica son mltiples y muestran que el nmero de formas viables
no difiere mucho de unas a otras, de lo que se infiere que pueden servirse de
nutrientes muy variados. El tipo de suelo, el contenido en materia orgnica y el pH
modifican la poblacin cuantitativamente. En zonas templadas, existen de 100.000
a 100 millones por gramo, siempre que el pH no baje de 5, estas cifras bajan
mucho en turbas cidas, tundra y suelos encharcados. En reas alcalinas y secas
su abundancia es espectacular, pasando del 10-50 %, normal, al 95 % de la flora
total. En general prefieren zonas templadas de pastos y hierbas, luego terrenos
cultivados y finalmente vrgenes. Abundan ms en suelos con materia orgnica y
abonados con ella. Al utilizar abonos amoniacales, que dan lugar a cido ntrico,
se elimina viabilidad a los actinomicetos, mientras que la adicin de cal la
incrementa. Si la humedad pasa a constituir el 85-100 % de la capacidad del
suelo, los actinomicetos apenas aparecen debido a la falta de oxgeno; por el otro
extremo soportan sequas y son encontrados en zonas desrticas. Su temperatura
ptima reside entre 28-37 C y sus estaciones anuales ms favorables son la
primavera y el otoo. Se encuentran en el horizonte A, pero por efecto del arrastre
de los conidios por el agua, se encuentran tambin a grandes profundidades y en
mayores proporciones con respecto a las bacterias. En el horizonte C se obtienen
aun de 100 a 100.000 colonias por gramo (Pontn, J., et/al. 2002).
La importancia de sus fermentaciones con formacin de antibiticos ha obligado a
dar un gran paso encaminado al mejor conocimiento de su fisiologa, pero su papel
en el suelo es an muy poco conocido. Son poco competitivos en la adquisicin de
sustancias
nutritivas,
fundamentalmente
cidos
orgnicos,
azcares,
polisacridos, lpidos, protenas e hidrocarburos alifticos. La celulosa es atacada
muy lentamente y lo mismo el almidn, inulina y quitina, cuya hidrlisis es
especialmente caracterstica de los actinomicetos. Existen algunos
oligocarboflicos por desarrollarse en medios deficientes en carbono (Moura, A. B.,
& Da Silva Romeiro, R. 2000).

5. RESULTADOS
Podemos observar que en el primer da de conteo de microorganismos se observ
un cantidad un poco alta de microorganismos, a diferencia del segundo conteo que
se lo realiz tiempo despus. Lo que podemos evidenciar en las siguientes tablas:
Conteo de microorganismos

AGAR AVENA
da 1
Bacterias

R2

total

37

37

120

120

Bacterias

46

mas 13

59

Actinomicetos

19

19

100

mas 1

101

Actinomicetos
R1

da 2

Hongos

Hongos

PDA
da 1
Bacterias

R1

total

116

mas 24

140

Actinomicetos

Hongos

160

mas 11

171

Actinomicetos

Hongos

Bacterias

R2

da 2

AN
da 1
R1

Bacterias

da 2

total

61

61

Actinomicetos

Hongos

Bacterias

R2

91

mas 31

122

Actinomicetos

Hongos

a. Dibuje una colonia de cada uno de los grupos de microorganismos que aisl y
caractercelos, DE ACUERDO a la siguiente tabla

BACTERIA
Elevacin plana, Borde entero, Forma un circulo adems se puede decir que las bacterias
presentan un brillo parecido a la cera, de in color amarillento.

HONGO
Elevacin convexo, Borde ondulado Forma un irregular adems se puede decir que las
hongos no presentan brillo son opacos adems son de distintos colores.
Cuestionario

a. Cree que los medios utilizados fueron los ms adecuados para aislarlos
selectivamente? Por qu?
Los medios utilizados fueron muy acertados al momento de aislar bacteria el AA sirvi
para aislar hongos y bateras en las distintas muestras, el PDA sirvi para aislar de igual
manera hongos, el AN solo sirvi para aislar bacterias se logr un crecimiento abundante
pero sobre todo para contar las colonias en crecimiento y poder realizar cultivo puro.
b. Habr microorganismos que no se pudieron aislar? Por qu?
Los microorganismos que no se pudieron aislar posiblemente fueron patgenos ya que
estos son ms difciles de aislar porque su crecimiento es abundante y se prolifera
rpidamente y as su conteo es difcil y no se puede separar fcilmente para realizar un
cultivo puro.
c. Qu potencial agrcola cree que tienen los microorganismos aislados?
Las bacterias promotoras del crecimiento vegetal son capaces de adaptarse, colonizar y
persistir en la rizosfera de la planta, lo cual favorece su crecimiento y desarrollo, al igual
estas bacterias aisladas son utilizadas para combatir plagas enfermedades para fijar los
nutrientes en el suelo.
6. CONCLUSIONES
-

Tener un cultivo correctamente realizado es esencial para que los microorganismos se

puedan desarrollar en este medio, de esta manera el incubamiento sera exitoso y se
podr evidenciar una cantidad moderada de microorganismos y sus destacadas
cualidades.

7. BIBLIOGRAFA
Davis, Dulbecco, Eisen and Ginsberg. 1990. Microbiology. Fourth Edition. J. B.
Lippincott Company.
Tortora, Gerard J (2004). Microbiology An Introduction (8va edicin). Pearson
Prentice Hall.
Pelczar, Michael J. (1982). Microbiology (2da edicin). Mc Graw Hill.
Pommerville, Jeffrey C. (2010). Alcamos fundamentals of Microbiology (4ta edicin).
Jones and Bartlett Publishers.
Jimnez, D. R., Virgen, C. G., Tabares, F. S., & Olalde, P. V. (2001). Bacterias
promotoras del crecimiento de plantas: agro-biotecnologa. Avance y perspectiva, 20,
395-400.
Herrera, T. (1998). El reino de los hongos: micologa bsica y aplicada (No. 589.2
H565r). Mxico, MX: Universidad Nacional Autnoma de Mxico.
Pontn, J., Moragues, M. D., Gen, J., Guarro, J., & Quinds, G. (2002).Hongos y
actinomicetos alergnicos. Revista Iberoamericana de Micologa.
Moura, A. B., & Da Silva Romeiro, R. (2000). Actinomicetos pr-selecionados para
controle de Ralstonia solanacearum como promotores de crescimento do
tomateiro. Revista Ceres, 47, 613-626.
8. ANEXOS

Imagen 1. Preparacin del cultivo.

Imagen 2. Colocacin de las muetras

en los medios.

Imagen 3. Cultivo despus del tiempo

de incubacin.

Imagen 4. Se puede observar el

aparecimiento de colonias.

Imagen 5. Observamos si son

hongos, bacterias o actinomicetos.

Imagen 6. Nos ayudamos en base de

la contextura y coloracin.

Imagen 7. Empezamos con el conteo.

Imagen 9. En base al nmero de

colonias contadas tomar apuntes.

CALCULOS

Imagen 8. Con la ayuda de un

marcador marcamos el conteo

Imagen 10. Al terminar de contar

proceder a guardar las cajas Petri.

Materia orgnica

PE PM
Pm

Pm = peso del suelo

PE = peso de la estufa
PM= PESO DE LA MUFLA
materia Orgnica

9.5 8.5 =8.65

10

% de Humedad

PSH PSC
PSH

100

PSH = peso del suelo hmedo (gramos)

PSC = peso del suelo seco (gramos)

% de Humedad

10g 9.5g
10g

100= 85%

El suelo de la muerta es la Politcnica se extrajo de Horticultura del sembro de brcoli

cuando se realiz la cosecha del mismo.
TEXTURA DE LA ARENA
Posee partculas muy pequeas al frotar en los dedos es spera tiene un sonido como
estar frotndonos los dedos x sus partculas su color es medio gris no posee tantos
nutrientes.
ESTRUCTURA DE LA ARENA
Para la estructura se hizo el anlisis haciendo una volita con capacidad de humedad de
campo pero se desgrana todo no posee consistencia es muy frgil se rompe con facilidad
por estos medios se determina como una arena.
El pH del suelo sali su resultado 8,16 es bsico

ESQUEMA
SUEL
O

1 ml

1 ml

1 ml

10 g

100 l

90 ml SS 0.85%
10-1

9 ml SS
0.85%
10-2

9 ml SS
0.85%
10-3

9 ml SS
0.85%
10-4

3 (PDA)

X 3 (AN)

X 3

(AA)