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EN HEMATOLOGA
AUTOMATIZACION
Mecanizar todo o la mayora de los
pasos manuales en un proceso o en
todo el procedimiento
Es una solucin que combina varios procesos en un solo
sistema eficiente que elimina el riesgo de error asociado a la
operatividad humana. Las tareas intensivas en trabajo :
etiquetado, manejo, preparacin y almacenamiento de las
muestras, que se realizan utilizando numeroso personal, cada
uno de los cuales pueden introducir errores u otros
problemas, pueden ser fcilmente automatizables 1
JAMES,David Selecting appropiate automation for the lab IDVT Sep. 2007
PROCESO
Es un conjunto de actividades
que utiliza recursos para
transformar elementos de
entrada en bienes o servicios
capaces de satisfacer las
expectativas de distintas partes
interesadas: clientes externos,
clientes internos, accionistas,
comunidad, etctera.
PROCESO
PRINCIPALES RECURSOS
MANO DE OBRA: Protagonista de todo
proceso, por lo tanto sus actividades y
aptitudes influyen directamente en los
resultados o salidas del proceso.
MTODOS: Polticas, procedimientos,
normas e instrucciones que se emplean para
ejecutar un determinado trabajo.
MAQUINARIA O EQUIPO: Viene a ser el
elemento que complementa el esfuerzo del
personal en la agregacin de valor. Su
adecuada calibracin, correcto
mantenimiento y oportuno reemplazo
definirn apropiados niveles de precisin y
exactitud.
PROCESO
PRINCIPALES RECURSOS
MATERIALES O SUMINISTROS:
Entradas que sern
transformadas por un proceso
(materiales, partes en proceso y
la informacin).
MEDIO AMBIENTE: Condiciones
en las cuales se desarrolla un
trabajo: espacio, ventilacin,
seguridad, iluminacin, etctera.
MEDIOS DE CONTROL:
Instrumentos o recursos utilizados
para evaluar el cumplimiento de
los requisitos establecidos.
TOMA DE
MUESTRA
TRANSPORTE
DE LA
MUESTRA
RECEPCION
POR EL
LABORATORIO
MUESTRA PARA
ANALISIS
CONTROL DE
CALIDAD
ANALISIS
PREPARACION
DE LA
MUESTRA
EVALUACION DE
LOS RESULTADOS
EMISION
DE RESULTADOS
MANTENIMIENTO
Y/O REPARACION
DEL ANALIZADOR
FASE
PREANALITICA
MUESTRA PARA
ALMACENAMIENTO
FASE
ANALITICA
FASE
POSTANALITICA
PORQU AUTOMATIZAR?
Reducir costos operativos
Obtener mayor eficiencia
Aumentar la productividad
Competir en un ambiente globalizado
Sobrevivir en el mercado
QU BUSCAN LOS
LABORATORIOS HOY?
Mejor productividad y mejor calidad
Flujo de muestras mas rpido y eficiente
Reduccin de costos
AUTOMATIZACIN
VENTAJAS
Incremento del nmero de pruebas realizado por
una persona en un perodo de tiempo
Minimiza las variaciones en los resultados
Minimiza errores de la parte manual (e.g.
pipeteo)
Usa menos muestra y reactivo por cada prueba
AUTOMATIZACIN
LIMITACIONES
Metodologa vara con el tipo de instrumento
Costo del equipo, mantenimiento, CC
Personal debe conocer operatividad y
cuidados de rutina
OBTENCIN DE LA MUESTRA
Sangre total con anticoagulante EDTA K2 (K3)en
tubo al vaco
ELEMENTOS CELULARES
PRINCIPIOS BSICOS
Impedancia electrnica
Radiofrecuencia
Dispersin ptica
IMPEDANCIA ELECTRNICA
(PRINCIPIO COULTER)
Electrodo interno
Vaco regulado
Cubeta
de conteo
Electrodo
externo
1 pulso =
Micro orificio
1 partcula
Flujo del diluyente
DISCRIMINACION DE PULSOS
Seal clulas grandes
a = Ruido Elctrico
c
b = Discriminador bajo
c = Separacin de
clulas grandes y
pequeas
b
a
Seal clulas
pequeas
HISTOGRAMAS
Pilas: Clulas son
agrupadas con similar tamao
de pulso.
fl
RADIOFRECUENCIA
Conductividad (RF) proporcional
a la densidad interior de la clula
(grnulos y ncleo)
( impedance)
DISPERSIN PTICA
Desva la luz
Cel. en solucin corren a travs de una
celda de cuarzo
Enfoque hidrodinmico (lquido
envolvente, flujo laminar)
Enfoque del lser
Anlisis por computadora de los grupos
(citogramas)
ABBOTT - MAPSS
(MULTI ANGLE POLARIZED SCATTER
SEPARATION)
Lser ARGON
Granulaciones PMT1
Eosinfilos
90 ,Depolarizado
90, Polarizado
PMT2
Complejidad
del citoplasma
7
0
VLVULA DE
SEGMENTACIN
Parte sup.
(fija)
Parte Int.
(movible)
Parte Inf.
(fija)
Pipeta
VLVULA DE
SEGMENTACIN
Parte sup.
(fija)
Parte Int.
(movible)
Parte Inf.
(fija)
Pipeta
VLVULA DE
SEGMENTACIN
Parte sup.
(fija)
Parte Int.
(movible)
Parte Inf.
(fija)
Pipeta
SEPARACIN DE LA
MUESTRA
12l (WBC)
6 l (Hb)
4 l (RBC)
DILUCIN - RBC
Cmara de mezcla
4 l (RBC)
6 l (HGB)
12l (WBC)
Bomba de HGB
Bomba del Diluyente
2,0 ml
Cellpack
Mixing- 40 l
Chamber
1:500
Stromatolyser-3WP
Sample Rotor Valve
(SRV)
Sulfolyser
RBC Channel
1:25.000
Cellpack
MixingChamber
1:500
1,0 ml
Stromatolyser-3WP
0,5 ml
Sulfolyser
6 l
WBC Channel
1:250
Cellpack
MixingChamber
1:500
Stromatolyser-3WP
Sample Rotor Valve
(SRV)
3 l
1,0 ml
Sulfolyser
0,5 ml
Hgb Photometer
1:500
HISTOGRAMA WBC
Clulas clasificadas
como: Neutrofilos,
Linfocitos y Mixtas
(M, E y B)
LD
T1
T2
UD
Clulas mixtas
(Monos, Eos y
Basos)
Altura relativa
Discriminadores
posicionados en el
pico y valle para
separar las clulas
Clulas grandes
(neutrfilos)
Clulas pequeas
(linfocitos)
MEDICIN DE LA HEMOGLOBINA
RBC son lisados (amonio cuaternario, ferricianuro, etc.), permite la
liberacin de Hb
CianMetHb
Una parte de la dilucin de los WBC pasa a una cubeta
espectrofotomtrica para la medicin a 540 nm
Existen otros mtodos libres de cianuro, donde ocurre lsis de los
RBCs seguido de la formacin de un complejo imidazol-hemoglobina
que posee un pico de absorcin a 540 nm.
Foto-detector
C. de
medicin
Filtro
FUENTES DE ERROR
Aglutininas fras:
Bajos contajes de RBC y altos MCV pueden ser causados
por las aglutininas de los hemates. Si estn presentes,
tambin el hematocrito y los MCHCs pueden ser tambin
incorrectos.
Pueden presentarse en la mononucleosis infecciosas y en las
infecciones por mycoplasma (neumona).
Si se observan RBC aglutinados en el frotis de sangre
perifricas, calentar la muestra a 37C, mezclarla y analizarla
mientras est caliente.
Plaquetas gigantes:
Se aproximan al tamao de un hemate.
Pueden causar que la cola derecha del
histograma permanezca elevada y pueda
verse a la izquierda del histograma de los
RBC.
RBC Nucleados:
Estos pueden interferir con los WBC en
algunos instrumentos y ser contados como
leucocitos(linfocitos)
HISTOGRAMA RBC
Histograma normal de 36- 360 fl
HISTOGRAMA PLAQUETAS
Histograma normal de 2-20 fl.
0-2 fL
Burbujas de aire
Polvo
Ruido elctrico
> 20 fL
Microcitos
Scishtocitos
Fragmentos WBC
Plaquetas gigantes
Aglutinacin
Canal WBC/Baso
Canal Diff
Baso
WBC
RBC ghost
Side scatter
Lymph
Fluorescence
Forward scatter
Mono
Neut + Baso
RBC ghost
Side scatter
Eo
FLUORESCENCIA
Canal DIFF
DISPERSIN LATERAL
(Estructura Celular Interna)
LINFOCITOS
MARCAJE DE CD4/CD8
BECKMAN COULTER
Principios de Medicin
Medicin directa:
RBC Impedancia
WBC - Impedancia, enfoque
hidrodinmico
Plaq. Impedancia (2-20 fl)
Hb Cianometamoglobina modificado
(525 nm)
MCV media del volumen de RBC
(histograma)
Medicin indirecta:
Hct, MCHC, y MCH (calculados)
RDW y MPV (CV de sus respectivos
histogramas)
WBC Diferencial
VCS volumen, conductividad,
dispersin
Reticulocitos
Coloracin Supravital (nuevo azul de
metileno)
VCS
SYSMEX
Principios de Medicin
Medicin directa:
RBC Impedancia, enfoque
hidrodinmico
WBC Impedancia, enfoque
hidrodinamico
Platelets Impedancia, enfoque
hidrodinamico
Hb SLS-Hb (555 nm)
(oxihemoglobina + sodio lauril sulfato)
Ht Deteccin de pulsos acumulativos
Medicin indirecta:
MCV, MCHC y MCH (calculados)
RDW y MPV(CV de sus respectivos
histogramas)
WBC Diferencial
Deteccin con DC/RF
Emplea lsis diferencial
Reticulocitos
Colorante Supravital (Aramina O)
Deteccin Fluorescente
ABBOTT
Principios de Medicin
Medicin directa:
RBC Impedancia
WBC Dispersin ptica (primaria),
Impedancia (secondaria)
Plaquetas Impedancia (2-30 fl)
Hb Cianomethemoglobina
modificada (540 nm)
MCV volumen medio de RBC
(histograma)
Medicin Indirecta:
Hct, MCHC y MCH (calculados)
RDW (valor relativo equivalente al CV)
WBC Diferencial
MAPSS
Reticulocitos
Coloracin proprietaria
Dispersin Multingulo
Deteccin Fluorescente
SIEMENS
Principios de Medicin
Medicin directa:
RBC Enfoque hjdrodinmico, lser de bajo
y alto ngulo
WBC - Enfoque hjdrodinmico, dispersin
ptica y absorpcin
Platequetas Enfoque hidrodinmico, lser
de ngulo bajo y alto(1-60 fL)
Hb Cianomethemoglobina modificada
(546 nm)
MCV volumen medio de RBC (histograma)
Medicin indirecta:
Ht, MCHC y MCH (calculados)
RDW y MPV (CV de sus respectivos
histogramas)
WBC Diferential
VCS volumen, conductividad, dispersin
Reticulocitos
Coloracin Supravital (Oxazina 750)
Dispersin ptica de bajo y alto ngulo
Sysmex XT-4100i
LH 780
Beckman Coulter
MANTENIMIENTO
Limpieza diaria
Conteo del lecturas de fondo
Chequeos electrnicos
Comparar los modos abierto y cerrado
(usando muestra normal)
Correr controles (dentro de lo lmites
especificados)
ASEGURAR FUNCIONAMIENTO
ADECUADO
1. Chequear los contenedores de reactivo:
Verificar cantidad suficiente
Verificar fecha de vencimiento
No deben visualizarse precipitados, ni
turbidez ni mostrar un color inusual
Conecciones adecuadas entre el
instrumento y los contendedores
ASEGURAR FUNCIONAMIENTO
ADECUADO
2. Chequear contenedor de desecho:
Capacidad suficiente
Conecciones adecuadas
3. Realizar inicio diario
4. Verificar que exista una aceptable:
Reproducibilidad
Arrastre
Resultados de control
AUTOMATIZACIN
EN HEMOSTASIA
HEMOSTASIA = BALANCE
plaquetas
Coagulacin
Fibrinlisis
Organismo
Trombosis
Hemorragia
FASES DE LA HEMOSTASIA
Hemostasia primaria
formacin de un trombo plaquetario
Fibrinlisis
rotura del coagulo de fibrina
CASCADA DE LA COAGULACIN
FXI
Factores procoagulantes
I
FXI
FXIIa
Factores anticoagulantes
FXIa
AT
FIX
FIXa
FIXa
FVIIIa
FX
FT
FVIIa
PCa
PS
FXa
FVa
TFPI
FII
TROMBINA
Fibringeno
Fibrina
OBTENCIN DE LA MUESTRA
Plasma con anticoagulante citrato trisdico
Na3C6H5O7 . 2H20 al 0.109 mol/L (3.2%)
Sangre venosa recolectada en un tubo
con citrato de sodio a una proporcin de 1:10
( 1 parte de citrato y 9 partes de sangre).
Tiempo de compresin no mayor a 60 seg. Un
tiempo mayor puede elevar los valores de
fibringeno.
ALMACENAMIENTO DE LAS
MUESTRAS
Las muestras deben mantenerse a temperatura
ambiente (18 25C). El almacenamiento en hielo
o en la nevera puede provocar la activacin de los
factores VII y XII.
Estabilidad de las muestras (18 25C) :
TP : 8 horas
APTT : 4 horas (terapia con heparina 2 horas)
Factores : 4 a 8 horas
CONGELAMIENTO DE LAS
MUESTRAS
Los plasmas libres de plaquetas se pueden
alicuotar y congelar.
El congelamiento se debe realizar tan pronto
como sea posible, de preferencia a 80C;
es suficiente a 20C si es por un perodo
corto ( 6 meses PT y APTT; 3 meses TT y
Factores).
Las muestras se deben descongelar a 37 C
por 15 minutos y slo una vez.
PRUEBAS DE LABORATORIO
RUTINA
ESPECIALES
PT
APTT
T. TROMBINA
FIBRINGENO
FACTORES
TROMBOSIS
LA AC. ANTICARDIOLIPINA
PROTENA C
PROTENA S
APC R
ANTITROMBINA
FIBRINLISIS
DMERO D
PLASMINGENO
TPA (Activ.Plasm.Tisular)
PAI 1 (Inhib.Act. Plasm.)
MTODOS DE DETECCIN
MTODO MANUAL
MTODO MECNICO
MTODO MECNICO
Mtodo KC Amelung
Billa de metal estacionaria
MTODO
FOTOMTRICO
MTODO
Coagulomtrico: formacin de fibrina
Fibringeno ----------------> Fibrina
TROMBINA
turbidimetra
ANLISIS CENTRFUGO
Pipeteo automtico de
muestra + reactivo.
Mezcla por centrifugacin
Nefelometra hasta 1200
lecturas por cada
determinacin (ej. TP)
Sistema Centrfugo
Rotor
Muestra
Reactivo
MTODO
Cromognico: incremento de color
ENZIMA
Color
Sustratos Cromognicos
Luz transmitida
180
Fuente de luz
405 nm
Cubeta de reaccin
Detector
MTODO
Inmunolgico: incremento de la turbidez
Plasma + reactivo de ltex--> aglutinacin
Reaccin del antgeno presente en el plasma
con anticuerpo (unido a las partculas de
ltex) especfico al analito a estudiar.
turbidimetra
Reaccin inmunolgica
Luz transmitida
180
Fuente de luz
671/405 nm
Cubeta de reaccin
Detector
INMUNOTURBIDIMETRIA
INMUNOENSAYO TURBIDIMTRICO
Partculas de Latex con
anticuerpo sensible al
Dmero-D
Dmero-D
Dmero-D +
CURVA DE REACCIN
INMUNOTURBIDIMTRICA
Turbidez
(mAbs)
Final
Delta
Inicial
Tiempo
Medida de la turbidez inicial y de la turbidez final
producida por la aglutinacin de las partculas de
latex
SIEMENS BCS XP
STA COMPACT
STA COMPACT
STA COMPACT
Fludrica
Botella de 1 L de solucin de
lavado/referencia con sensor nivel y
medicin de lquido en tiempo real.
2 dilutores de pistn para dispensado
y aspiracin de muestras/reactivos.
Conexiones
Stockyard
Hematologa
T- Line
Inlet
Destapador
Centrifuga
Outlet
MUCHAS GRACIAS !
jcaceres1@terra.com.pe
jcacerestorres@yahoo.com