LaboratoriodeFactoresqueinfluyenenlaactividadenzimtica.

Viernes13demayo
BenjaminAguilaIgnacioGodoy
Enzimas,Temperatura,Velocidaddereaccin,Concentracinenzimtica

Resumen

Enelprcticoseestudienquinfluyelaconcentracindelaenzimaylatemperaturaenla
velocidaddereaccindeunaenzima(invertasa),enlascualesenlaconcentracinde
enzimahubounavariacindeun232%yenelcasodelatemperaturaa30y70Chubo
unavariacindeun36%,assedemostrcomoafectanestasvariablesalasenzimas

Introduccin

Lasenzimassonprotenasglobularesydegrantamao,estassonbiocatalizadores,esdecir,
compuestosdeorigenbiolgicoqueaceleranreaccionesqumicasenlasclulas(Koolman
et.Al2004),ademssonmuyespecializadasyaquetrabajanconsustratosmuyespecficos
yfuncionanbajocondicionesespecficasdepHytemperatura(Lehningeret.Al2006).
Enunaconcentracinbajadesustratoyseleagregaunacantidadparecidadeenzimasse
empiezaaproduceunequilibrioconstantedeES(enzimasustrato)yenzimaslibres,pero
cuandoseleagregaunexcesodesustratoperosinaumentarlacantidaddeenzimasstasse
saturan,formandosolocomplejosES(Lehningeret.Al2006).
Latemperaturaesunfactorqueinfluyenlaactividaddelaenzimtica,puedefavoreceren
lavelocidaddereaccinhastaciertopunto,laformaenquelohaceesqueatemperatura
mayorlossustratoschocanmsfrecuentementeconlossitiosactivosyaquesemuevencon
mayorrapidez,peroalexcederciertatemperaturaseproducelarupturadepuentesde
hidrgenos,enlacesinicosyotrasinteraccionesmolecularesdbilesprovocandola
desnaturalizacindelaenzima,generalmentetrabajanaunatemperaturamximade35
40C(Campbellet.Al2007)
EnelprcticousaremosunreactivollamadoDNS(35Dinitrosalicilato)quesefijaalos
azcaresreductoresyproduceunaabsorbanciade540nmloquenospermiteobtener
concentracinluegodecrearunacurvadecalibracineinterpolarnuestrosdatos.
Objetivos
Detectarcmoafectalaconcentracindeenzimaenlaactividadenzimtica
Detectarcmoafectalavariacindetemperaturaenlaactividadenzimtica

Reactivos
Solucindesacarosa0,45M(sustrato)
Solucinglucosafructosa0,01M.
Reactivo3,5dinitrosalicilato.

Tampnacetato0,05M,pH=4,7.
Extractoenzimticodefructofuranosidasa:

Procedimientoexperimental
Seprepar:
8Tubosdeensayoconlossiguientescompuestosymedidas:
- 0,5mldeacetato(0.05M,pH4,7)
- H2O(1,5;1,45;1,25;1;0,75;0,5;0mldeaguadeltubo1al8
- Enzima(0;0,005;0,25;0,5;0,75;1;1,25mldeltubo1al8
2Tubosdeensayoigualesaltubo#6
4Tubosdeensayoparalacurvadecalibracin
- GlucosaFructosa0,001M(0;0,5;1;1,5mldeltubo1al4)
- 0,5mlAcetato0,05Mdeltubo1al4
- H20(2;1,5;1;0,5mldeltubo1al4)

Sedejoreposarpor3minlos14tubosdeensayo,los10primerostubosseles
agrego0,5mldesacarosa0,5Mcomenzadosdesdeconunintervalode5sydedejo
reposarpor10min.
Lostubosdecalibracinselesagrego1mldeDNSsedejaronpor5min.

Bao termorregulador a 30C

A los 12 despus de su enfriamiento se

Alos10primerostubosselesagrego1mldeDNSen
les agrego 15 ml deSedepositaronpor5minenagua
H2O y se ley su
intervalosde5sysedejaronreposarpor
hirviendohastaesperarelcambio
absorbancia a 540 nm.
decolor

Tabladereactivos
Reactivo

Propiedades Fsicas

Propiedades Qumicas

Solucin de sacarosa 0,45

M

Apariencia
cristales blancos
Densidad
1587 kg/m3; 1.587 g/cm3
Masa molar
342,29754(6) g/mol
Punto de fusin
459 K
(186 C)

Acidez 12,62 pKa

Solubilidad en agua 203,9 g/100 ml
(293K)

Glucosa

Apariencia
Polvo blanco
Densidad
1540 kg/m3; 1,54 g/cm3
Masa molar
180,063388 g/mol
Punto de fusin
150 C
(423 K)

Momento dipolar

8,6827 D

Fructosa

Apariencia
cristales blancos
Densidad
1587 kg/m3; 1.587 g/cm3
Masa molar
180.16 g/mol g/mol
Punto de fusin
376,15 K
(103 C

Solubilidad en agua
20C

3.75 kg/l a

Reactivo 3,5dinitrosalicilato.

Color Amarillo Plido

Punto de fusin 170 C

Resultados
Curva de calibracin
Concentracin

Absorbancia

0,5

0,209

0,386

1,5

0,499

Resultados de la diferencia de Concentracin de azucares

reductores..
Absorbancia

Concentracin

Concentracin en m

0,009

0,91995221

919952,2103

0,04

1,105137395

1105137,395

0,1

1,463560335

1463560,335

0,15

1,762246117

1762246,117

0,225

2,210274791

2210274,791

0,247

2,341696535

2341696,535

0,367

3,058542413

3058542,413

Resultado de la diferencia de temperaturas.

30 grados

70 grados

Absorbancia

0,236

0,098

Producto (M)

2,27598566

1,4516129

Producto (uM)

2275985,66

1451612,9

vel. Reac. (um/min)

227598,566

145161,29

Q10=(20-30)

20609

Discusin

Enlatabladediferenciadeconcentracinsepuedeobservarunincrementodelosazucares
reductoresenun232%,loquenosreafirmaloquenospresentaLehninger2006,quenos
dicequealaumentarlacantidaddeenzimasutilizandounacantidadconstantedesustrato
seproducirunamayorconcentracindeproducto,ademsfavorecelatemperaturaalaque
seincubaronlosensayos,estafuede30Cqueestenelrangodelcualtrabajanlas
enzimasptimamente
Comosedijoenlaintroduccin,latemperaturapuedeserunfactornegativoounfactor
positivo en la accin enzimtica, para poder observar y cuantificar este proceso se
realizaronlasmedicionesenelespectrofotmetroyseobservoysecuantificoqueenlas
enzimasquetrabajarona30Cobtuvieronunadiferenciaenelproductodeun36%,la
diferenciapudohabersidomayorperohayquetomarencuentaquelas soluciones se
hicieron a temperatura ambiente y al aadir el sustrato fue cambiada de bao
termorreguladora30y70Crespectivamente,peronosedebedejardeladoque36%es
unbuenresultado,loquepodemosrespaldarnossegnloquenosdiceCampbell2007,que
lasenzimastienenunatemperaturaoptimadetrabajoa3540Cyaunatemperatura
mayorlasenzimassedesnaturalizan.

Conclusin
Sepudoobservarycalcularinsitulasvariablesquepuedenafectardeformapositivao
negativaalaactividadenzimtica,enestecasoestasvariablesfueronlaconcentracinde
sustrato,loquepudimosobservarycalcularfuequemientrasamayorconcentracinde

enzimasyunacantidadcontinuadesustratoseproduceunaumentosignificativodelos
azucaresreductores
Enelcasodelavariabletemperaturapodemossostenerqueaunatemperaturamuyelevada
a los 30 C (70 C en este caso) podemos afirmar que hubo una disminucin en la
concentracindelproductorencomparacinalasenzimasquetrabajarona30C.

Referencias.
Campbell,N.A.,Reece,J.B.,&Cwi,S.(2007).Biologia.Madrid:EditorialMdica
Panamencana.
Lehninger,A.L.,Nelson,D.L.,&Cox,M.M.(2005).Principiosdebioqumica.
Barcelona:Omega.
Koolman,J.,&Rhm,K.H.(2004).Bioqumica:Textoyatlas.BuenosAires:Ed.Mdica
Panamericana.