CULTIVO MICROBIOLGICO

INTRODUCCIN
Un cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones fsicas,
qumicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. En
general, podemos distinguir cultivos lquidos y slidos en funcin de las caractersticas
del medio y cultivos discontinuos y continuos en funcin de la disponibilidad de
nutrientes en el medio.
OBJETIVOS
Comparar los principales mtodos de cultivo utilizados para los diferentes tipos de
microorganismos.
Conocer los principales mtodos de cultivo utilizados para los diferentes tipos de
microorganismos.
MARCO TEORICO
Diferentes mtodos de siembra
- Sembrar: es el acto de colocar el material bacteriolgico en el medio de cultivo
para promover su crecimiento y desarrollo, y subsiguiente multiplicacin. El resultado
de una siembra se llama: Cultivo
Las siembras pueden ser:
- Primarias: cuando el material es inoculado en los medios por primera vez
- Secundarias: cuando el material a inocular procede de una siembra primaria
Mtodos Generales:
1) Siembra por dilucin:
Se toma el tubo de ensayo con medio lquido, como el caldo simple. Se toma el material
a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada con el material bacteriolgico,
se agita, con movimientos moderados.
Medio de cultivo: lquido
Instrumento: asa
Finalidad: poner la bacteria en suspensin
Diluciones sucesivas

Consiste en diluir una muestra hasta conseguir muy pocas clulas que, tras inocularse en
un medio de cultivo, generen colonias aisladas.
2) Siembra por estras en superficie:
Se siembra el material en la superficie del agar inclinado en un tubo de ensayo, all se
extiende por toda la superficie con el asa bacteriolgica, previamente esterilizada y
cargada con el material a sembrar, haciendo estras no muy amplias, pero tampoco muy
estrechas.
Se
inicia
por
la
parte
ms profunda de la
superficie inclinada y se termina la estra en la parte ms cerca de la boca del tubo.
Medio de cultivo: agar base inclinado
Instrumento: asa o aguja bacteriolgica
3) Siembra por estra por agotamiento:
Con ste procedimiento se puede conseguir una buena separacin de las colonias y
aislarlas fcilmente. Para ello se funde el medio de cultivo, se vuelca en caja de Petri y
se deja solidificar. Con el asa previamente esterilizada se toma material de un cultivo
heterogneo y se descarga sobre la superficie del medio formando estras. Esto puede
realizarse de varias formas:
a- Al comienzo se coloca el inoculo, luego se contina con las estras. Cuando se
quiere obtener colonias muy separadas se puede utilizar dos o tres placas de
Petri, para lo cual se repite la operacin sin tomar con el asa nuevo material.
b- Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez depositado el
material en el primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj, se hace una
estra luego en el segundo, tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el
asa; en el ltimo cuadrante aparecern las colonias aisladas
c- El inculo se extiende sobre una pequea zona de la placa, prxima al borde, se
esteriliza el asa y se traza otra estra a partir del depsito y as
sucesivamente. Medio de cultivo: solido en placa de Petri.
Instrumento: Asa
Finalidad: Obtener colonias aisladas
4) Por picadura o puncin
Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y se lo introduce en el tubo,
con medio semislido. Introducir la aguja hasta el fondo, formando un canal de
puncin, trayecto por el cual la retiraremos luego. Este mtodo se utiliza para estudiar la
movilidad de las bacterias.
Medio de cultivo: semislido
Instrumento: aguja bacteriolgica

Finalidad: estudiar la movilidad de las bacterias

5) Siembra en TSI: (Por picadura y estras en superficie)
El TSI (Triple Sugar Iron) es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro
y un indicador que es el rojo fenol. En este medio sembraremos por picadura y estras
en superficie, como ya conocemos, para estudiar los cambios que ocurrirn en superficie
y profundidad. A lo largo del canal se desarrollan los microorganismos, y segn lo
hagan en la parte superior o inferior del tubo, estarn indicando su comportamiento
frente a los azucares, los cambios indican lo siguiente:
Crecimiento microbiano en medio lquido. Si la bacteria crece en un medio lquido, en
la mayora de los casos las clulas que se producen en cada divisin continan su vida
independientemente formndose una suspensin de clulas libres. En un cultivo
discontinuo de bacterias en medio lquido, se pueden diferenciar cuatro fases en la
evolucin de los parmetros que miden el crecimiento microbiano:
1.- Fase lag o de adaptacin durante que los microorganismos adaptan su metabolismo a
las nuevas condiciones ambientales (abundancia de nutrientes y condiciones de
cultivo) para iniciar la fase de crecimiento exponencial.
2.- Fase exponencial o logartmica: en ella la velocidad de crecimiento es mxima y el
tiempo de generacin es mnimo. Durante esta fase las bacterias consumen a velocidad
mxima los nutrientes del medio. La evolucin del nmero de clulas durante esta fase
se explica con modelos matemticos.
3.- Fase estacionaria: en ella no se incrementa el nmero de bacterias (ni la masa u otros
parmetros del cultivo). Las clulas en fase estacionaria desarrollan un metabolismo
diferente al de la fase exponencial y durante ella se produce una acumulacin y
liberacin de metabolitos secundarios que pueden tener importancia industrial. Los
microorganismos entran en fase estacionaria porque se agota algn nutriente esencial
del medio o porque los productos de desecho que han liberado durante la fase
exponencial hacen que el medio sea inhspito para el crecimiento microbiano. La fase
estacionaria tiene gran importancia porque probablemente represente con mayor
fidelidad el estado metablico real de los microorganismos en los ambientes naturales.
4.- Fase de muerte: se produce una reduccin del nmero de bacterias viables del
cultivo.
Crecimiento microbiano en medio slido
Las fases, parmetros y cintica de crecimiento discutidas para el caso de los cultivos
lquidos se presentan tambin en cultivos slidos. La cintica de crecimiento, en este
caso, se puede estudiar siguiendo la evolucin del nmero de clulas viables por unidad
de superficie o por unidad de masa. Cuando una clula aislada e inmvil comienza a
crecer sobre un substrato slido, el resultado del crecimiento al cabo del tiempo es una
colonia. Por consiguiente, se denomina unidad formadora de colonia (UFC) a una clula

bacteriana viva y aislada que si se encuentra en condiciones de substrato y ambientales

adecuadas da lugar a la produccin de una colonia en un breve lapso de tiempo. Si el
nmero inicial de bacterias por unidad de superficie es muy alto, la confluencia de las
colonias da lugar a lo que se llama un csped cuando se realizan los cultivos en placas
de laboratorio. En el caso de microorganismos mviles (deslizantes) o en el de los
hongos filamentosos que tienen un crecimiento trfico no se producen colonias aisladas
sino formaciones ms difusas o miceliares.