INTRODUCCION

El cultivo de microorganismos es una actividad que requiere del conocimiento

de tcnicas de siembra o inoculacin y de aislamiento para transferirlos de un
medio a otro, o mantener su crecimiento y actividad. Es indispensable para
realizar diversos estudios morfolgicos, de identificacin, bioqumicos, de
patogenicidad y ecolgicos, entre otros. Existen diferentes tcnicas de siembra:
por suspensin de la muestra en medios lquidos; extensin de diluciones de un
cultivo en superficie de medios en caja de Petri; por estra en caja de Petri y
tubos con medios solidificados en forma inclinada; por piquete o picadura en
tubos con medios slidos o semislidos. Con la aplicacin de cada tcnica se
obtiene informacin de importancia para el estudio bsico o aplicado de los
microorganismos de inters. En la naturaleza, los microorganismos
generalmente se encuentran en poblaciones, formando parte de comunidades
de gran complejidad, por lo que uno de los objetivos de estudio ms
importantes en microbiologa es aislarlos. El aislamiento de bacterias a partir
de muestras naturales se realiza, en la mayora de los casos, mediante la
tcnica de estra cruzada para producir colonias aisladas en cultivos slidos y
as, obtener un cultivo puro o axnico, tambin conocido como cepa, que
contiene un solo tipo de microorganismo con la misma composicin gentica.
Cuando la tcnica por estra se aplica para aislar un microorganismo de inters
a partir de mezclas donde se encuentra en pequeas cantidades,
generalmente se obtendrn las bacterias dominantes. En este caso, se utilizan
medios selectivos o de enriquecimiento, los que contienen nutrientes
especiales, antibiticos, altas concentraciones de sales y/o condiciones de pH,
luz o temperatura que incrementarn la poblacin del microorganismo de
inters y se facilitar su aislamiento. Si se agregan a los medios de cultivo
otros componentes como: sangre, colorantes, indicadores, es posible distinguir
entre especies bacterianas por la forma en que metabolizan los sustratos y que
se manifiesta por cambios en la apariencia del pH del medio de cultivo. Estos
medios se conocen como medios diferenciales y son de gran utilidad para la
caracterizacin e identificacin de especies bacterianas.

MARCO TEORICO.
MUELLER HINTON AGAR.
HISTORIA.
Mueller y Hinton tomaron como punto de partida de susestudios el medio
complejo de Gordon y Hine con el fin de encontrar un medio capaz de resistir el

autoclavado. El pri-mer paso fue sustituir la harina de guisante por el almidn,que a su

vez protega el medio de las toxinas que pudieranestar presentes. Despus sustituyeron
la peptona de carnepor la de casena hidrolizada, que por ser ms fragmentadafavoreca
ms los crecimientos. Finalmente ha sido recono-cido como el ms indicado para
los ensayos de sensibilidada antibiticos y sulfamidas por el procedimiento de los
dis-cos. El Caldo MUELLER-HINTON es el ms utilizado en ladeterminacin de
la concentracin mnima inhibitoria(CMI) por la tcnica de diluciones
seriadas.
Fundamento
En la preparacin de este medio es fundamental que lasconcentraciones
de timina, timidina y cido 4-aminobenzoi-co, sean lo suficiente bajas para no
inhibir la actividad anti-bacteriana de antibiticos y sulfamidas. Las dos
primerasinhiben los antibiticos y el ltimo las sulfamidas. El ensayode sensibilidad de
un microorganismo frente a un antibiti-co se puede realizar sobre placas de agar MuellerHintonpor procedimientos de difusin, por diluciones seriadas opor tcnicas
turbidimtricas en el Caldo Mueller-Hinton. Enlas tcnicas de difusin se mide
el halo de inhibicin del cre-cimiento confluente alrededor del depsito de
antibitico(discos, torrecillas, etc.). El dimetro del crculo de inhibicines inversamente
proporcional a la concentracin mnimainhibitoria (CMI) del agente
antibacteriano.
Frmula (por litro) del Caldo
Almidn......................................................1,5g
Infusin de Carne (a partir de
3 0 0 g ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 , 0 g Peptona de
Casena Hidrolizada......................................17,5g
pH final:.7 , 4 0 , 2
Frmula (por litro) del Agar
Almidn......................................................1,5g I n f u s i n d e C a r n e
( a p a r t i r d e 3 0 0 g ) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 , 0 g Peptona de Casena
Hidrolizada...............................................17,5g
Agar......................................................................17,0g
pH final:7 , 4 0 , 2
Preparacin
Suspender 38 g (Agar) 21 g (Caldo) en 1 l de agua des-tilada;
calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1 m i n u t o . D i s t r i b u i r
y e s t e r i l i z a r a 1 2 1 C d u r a n t e 1 5 m i n u - tos. Si se desea aadir
sangre, dejar enfriar hasta 45C yaadir aspticamente sangre estril
desfibrinada; la mez-cla con sangre debe chocolatearse calentando a
80Cdurante 10 minutos, si se desea obtener desarrollo deNeisseria.
N o s o b r e c a l e n t a r. S i s e p r e c i s a r e f u n d i r e l m e d i o , c a l e n t a r e l m e n o r
tiempo posible.
Modo de empleo

El antibiograma debe ser efectuado sobre cultivos puros.En las tcnicas de

difusin se inoculan las placas de Agarpara que formen un confluente. Los
discos u otros conte-nedores del antibitico deben apoyarse sobre el medio demanera
que queden adheridos a l. Incubar a la temperatu-ra ptima del microorganismo
durante 24 horas.

BIBLI
OGRAFIA: