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UNIVERSIDAD NACIONAL TECNOLGICA DE LIMA SUR

(UNTELS)
Oficina Central de Investigacin, Transferencia e Innovacin

PROYECTO DE INVESTIGACIN

Aplicacin del bioensayo de germinacin de Lactuca Sativa y

Raphanus Sativus para la evaluacin de calidad de agua del curso
inferior del rio Lurn
-

LNEA DE INVESTIGACIN:

Biologa Vegetal

SUB LNEA DE INVESTIGACIN: Otros (Bioensayos)

ESTUDIANTE COORDINADOR:

Gutirrez Grados, Kelvin Laurents

-

MIEMBROS:

Hoyos Trujillo, Michelle

Pea Guzmn, Gabriela Juana
Zenteno Cruces, Anais Alessandra
-

DOCENTE ASESOR: Adauto Medina, Willy Andrs.

Villa El Salvador, 2016

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I.

GENERALIDADES
1.1. Ttulo del Proyecto
Aplicacin de bioensayos para la evaluacin de calidad de agua del curso inferior
del rio Lurn utilizando semillas de Lactuca sativa y Raphanus sativus.
1.2. Resumen del Proyecto
En la actualidad las aguas del curso inferior del ro Lurn estn en constante
contaminacin ya sea por vertimiento de aguas residuales, desechos industriales,
urbanos o agrcolas; esto trae consigo problemas para los agricultores aledaos ya que
utilizan estas aguas para sus regados. El objetivo de este trabajo es evaluar el
desarrollo y crecimiento de semillas de Lactuca sativa y Raphanus sativus mediante
la prueba de bioensayo de germinacin para determinar la calidad del agua del curso
inferior del Ro Lurn. Los bioensayos de germinacin se realizaran en cajas Petri con
papel filtro en la base, estas sern humedecidas con 3 ml de las muestras de agua que
se encontraran debidamente diluidas para las 12 rplicas. Se colocaran 20 semillas por
caja para su germinacin, distribuyndolas equitativamente y se conservara a una
temperatura de 22C 2C durante 120 horas. Posteriormente se pasara a la
recoleccin de datos para la estimacin del porcentaje de germinacin y elongacin
para ser comparadas con las diversas concentraciones a las cuales fueron expuestas.
1.3. Tipo de investigacin
-

Investigacin experimental y evaluativa

1.4. Carrera Profesional

-

Ingeniera Ambiental

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1.5. Miembros del semillero de investigacin
-

Gutirrez Grados, Kelvin

Hoyos Trujillo, Michelle

Pea Guzmn, Gabriela

Zenteno Cruces, Anais

1.6. Docente asesor

-

Adauto Medina, Willy Andrs

1.7. Duracin del proyecto

II.

7 meses (Julio 2016 Marzo 2017)

PROBLEMA DE INVESTIGACIN
2.1. Planteamiento del problema
La presencia de metales pesados en un lago, laguna, ro, quebrada, cuenca o
cualquier cuerpo de agua pueden tener 2 orgenes, puede ser de origen natural, los
suelos sobre los que estn estos cuerpos de agua geolgicamente tienen presencia de
metales pesados tales como Cd, Ag, Se, Sn, Ni, Cr, Cu, B, Zn, Hg, Ba, Pb, Mn, As y
Al en forma de sedimentos superficiales o por alguna actividad antropognica casi en
su mayora de carcter minero extractivo.
Las consecuencias de estos metales pesados, residuos urbano y/o agrcolas no solo
es que alteran el ecosistema donde son vertidos sino tambin alteran la calidad del agua,
aguas que se expanden por todo el cauce del rio hasta llegar a la desembocadura y a lo
largo de su recorrido los pobladores utilizan esas aguas para realizar actividades
econmicas como la agricultura as como el caso del rio Lurn que desde hace varios

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aos el mismo alimenta los canales de regados de las chacras aledaas en sus diversos
tramos, la agricultura en el distrito de Lurn es una actividad econmica de la cual viven
diversas familias, las que no tienen idea de la calidad de agua con la que riegan
hectreas y hectreas de cultivo, ni siquiera saben en qu forma afecta la calidad de las
aguas que se encuentran en el agua del rio al desarrollo y crecimiento de su cultivo.
La problemtica de esta zona es que gran parte de la comunidad no est enterada de
los productos que consumen, casi en su totalidad sabe que los productos son regados
con las aguas del rio sin previo tratamiento pero en una menor cantidad saben que las
aguas con las que riegan estn contaminadas de con cualquier tipo de producto qumico.
Por ese motivo a modo de poner en alerta a la poblacin se llevara a cabo un bioensayo
para determinar cmo la calidad del agua del rio Lurn afecta al crecimiento y desarrollo
de dos semillas que son Lactuca Sativa (lechuga comn) y Raphanus Sativus (rabanito),
productos muy consumidas en el Per. Y como estas afectan a la poblacin que la
consume.
2.2. Formulacin del problema
En qu medida el bioensayo de germinacin de las semillas Lactuca Sativa (lechuga
comn) y Raphanus Sativus (rabanito) determinar la calidad de agua del curso inferior
del ro Lurn.
2.2.1. Problema general
Qu tan eficiente es la prueba de bioensayo de dos semillas que son Lactuca sativa
(lechuga comn) y Raphanus sativus (rabanito) para la determinacin de la calidad del
agua, curso inferior, del ro Lurn?

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2.2.2. Problemas especficos
P1: Qu cantidad afecta la germinacin de la Lactuca sativa (lechuga comn) y
Raphanus sativus (rabanitos) al ser regado con agua del rio Lurn en comparacin
con un regado de agua que cumpla los estndares de calidad de agua?
P2: En qu medida se ver afectado el crecimiento radicular del cotiledn e
hipocotilo de la Lactuca sativa (lechuga comn) y Raphanus sativus (rabanitos) al
ser regado con agua del rio Lurn en comparacin con un regado de agua a diferentes
concentraciones porcentuales?
P3: Qu eficiente ser la utilizacin del bioensayo para determinar la calidad del
agua del curso inferior, del ro Lurn?
2.3. Objetivos de la investigacin
2.3.1. Objetivo general
Evaluar el desarrollo y crecimiento de semillas de Lactuca sativa y Raphanus
sativus mediante la prueba de bioensayo para determinar la calidad del agua del
curso inferior del Ro Lurn.
2.3.2. Objetivos especficos
O1: Evaluar y medir el crecimiento de las radculas, cotiledn e hipocotilo de la
Lactuca sativa y Raphanus sativus mediante una prueba de bioensayo utilizando
agua del curso inferior del rio Lurn.
O2: Evaluar el porcentaje de germinacin de Lactuca sativa y Raphanus sativus a
diferentes concentraciones de agua del rio Lurn diluida en agua destilada.

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O3: Comparar los datos obtenidos de las muestras de las diferentes especies de
semillas a concentraciones diferentes de agua del Ro Lurn en el curso medio e
inferior.
2.4. Importancia y justificacin de la investigacin
Los bioensayos de calidad de agua con las semillas Lactuca sativa y Raphanus
sativus frente a soluciones con aguas contaminada nos permite evaluar los efectos
fitotxicos que estos causarn en la germinacin de las semillas y posterior
desarrollo de las plntulas. Estos efectos podrn ser generalizados ya que son en gran
medida representativos para la gran mayora de semillas, es decir, la informacin
generada a partir de esta prueba de toxicidad nos proporcionar datos acerca del
posible efecto de los contaminantes en las comunidades vegetales cercanas a las
mrgenes de cuerpos de agua contaminada. Esto es de gran importancia ya que estos
cuerpos de agua son extrados para el riego agrcola y viene a ser materia prima para
la poblacin aledaa al Ro Lurn (curso inferior del distrito de Lurn), porque tienen
a la agricultura como principal actividad econmica. Este estudio dar informacin
probada para el posterior tratamiento de estas aguas o tomar medidas que sean
necesarias para que los pobladores agricultores brinden productos de calidad al
mercado nacional.
2.5. Alcance de la investigacin
Este proyecto abarcar a la Poblacin del curso inferior (Lurn) para tener un
conocimiento del efecto txico de la calidad de agua para sus sembros y adems
determinar las medidas de prevencin o de contingencia.

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El estudio tambin proveer a la Universidad Nacional Tecnolgica de Lima Sur
tener una primera base de datos para posibles investigaciones futuras enfocada a las
variables utilizadas en este estudio.
2.6. Hiptesis
2.6.1. Hiptesis general
Mediante el bioensayo las semillas de Lactuca sativa y Raphanus sativus
mostraran un resultado desfavorable al crecimiento y desarrollo de las mismas al
utilizarse las aguas del rio Lurn (curso inferior, ubicado en el distrito de Lurn).
2.6.2. Hiptesis especficas
H1: El crecimiento de las radculas, cotiledn e hipocotilo de la Lactuca sativa y
Raphanus sativus se ven alteradas en diferentes magnitudes al ser humedecido con
distintas concentraciones con el agua del rio Lurn mediante la realizacin del
bioensayo.
H2: El porcentaje de germinacin ser directamente proporcional a la concentracin
de pureza de la muestra en cada especie.
H3: Las semillas de Lactuca sativa germinaran en menor cantidad y las medidas del
cotiledn e hipocotilo tendrn un menor coeficiente de correlacin que las del
Raphanus sativus.
2.7.Variables
2.7.1. Variable dependiente (X)
-

Aguas del ro Lurn, curso inferior

2.7.2. Variables independientes (Yi)

-

Semillas de Lactuca sativa.

Semilla de Raphanus sativus.

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2.8. Indicadores
Tabla 1. Indicadores dependientes e independientes del proyecto.

Dimensin Indicadores

V.D

Calidad de
Agua

Lactuca
Sativa
V.I
Raphanus
Sativus

III.

pH
DBO
OD
Turbidez
Color
Conductividad
Elctrica
Crecimiento
radicular
C. Cotiledn
C. Hipocolito
Germinacin
Crecimiento
radicular
C. Cotiledn
C. Hipocolito
Germinacin

Medicin
-

Peachimetro
Conductmetro
Oxmetro
Turbidmetro
Colormetro
Conductmetro

- Papel milimetrado o
regla

- Papel milimetrado o
regla

MARCO TERICO
3.1.Antecedentes del estudio
3.1.1. A nivel internacional
Un primer trabajo corresponde a Lallana , Billard, Elizalde, & Lallana, (2007)
con el ttulo: Bioensayo de germinacin de Lactuca sativa: determinacin de
calidad de agua en represas para riego. Con motivo de publicacin en la Revista
de la Universidad Nacional de Cuyo (UNCuyo) en la provincia de Entre RosArgentina , la cual busco determinar la calidad del agua de 19 represas para riego
del centro norte de Entre Ros (Argentina) mediante bioensayos con semillas de
Lactuca sativa , para el cual se extrajo una muestra de agua a 30cm de profundidad
en el centro de las represas y ya en el laboratorio se colocaron semillas de Lactuca

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sativa en una placa Petri con papel filtro humedecido con la muestra obtenida
durante 120 horas. Llegando a la conclusin de que las aguas de las represas
analizadas en los bioensayos con Lactuca sativa presentaron altos valores de ndice
de germinacin (96,07 y 97,9%), lo cual indicara que no son fitotxico y resultan
de buena calidad para ser utilizadas con fines de riego.
De igual forma

Sanchez & Sanchez, (2009) en su tesis con ttulo:

Determinacin de la concentracin de inhibicin media (ce50- 120) del bario,

hierro y manganeso mediante bioensayos de toxicidad acutica Sobre Semillas de
Lechuga (Lactuca Sativa L.) Con motivo de optar el ttulo profesional de Ingeniera
Ambiental y Sanitaria de la Universidad de la Salle en la ciudad de Bogot D.CColombia, donde quiso determinar la Concentracin de inhibicin Media (CE50120) producida por el Hierro (Fe), Bario (Ba) y el Manganeso (Mn) en la especie
de semillas de lechuga (Lactuca sativa L.), para la cual tomo una muestra de agua
de un vertimiento de una industria galvnica y determino la concentracin de Fe,
Ba y Mn para preparar soluciones a la misma concentracin en el laboratorio y
evaluar el efecto txico en las semillas de Lactuca sativa , de igual forma que en el
trabajo anterior se colocaron 20semillas por placa Petri con papel filtro humedecido
con las soluciones preparadas a diferentes concentraciones durante 120 horas,
llegando a la conclusin de que la sensibilidad determinada para la Lactuca sativa
L. con la exposicin del agente txico Sulfato de Zinc (ZnSO4), se estableci con
un valor de 13,781 mg/L, identificando que se encuentra dentro de los rangos
obtenidos por otros investigadores con este tipo de bioindicadores y este txico de
referencia como lo muestra la carta control; las diferencias con los valores obtenidos
y los tericos se deben al manejo de los qumicos en las pruebas realizadas.

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As mismo la Moscoso Calle, (2014) en su tesis con ttulo: Determinacin de
la toxicidad por Aluminio del efluente de la Planta Potabilizadora de El Cebollar
en el Ro Tomebamba, utilizando bioensayos ecotoxicolgicos. Con motivo de
optar por el ttulo de Magister en Toxicologa Industrial Y Ambiental provincia de
Cuenca-Ecuador, donde el principal objetivo del trabajo fue evaluar la toxicidad en
el efluente de la Planta de Potabilizacin de El Cebollar de la ciudad de Cuenca,
aguas arriba y abajo del vertido del efluente a diferentes niveles de concentracin,
en donde de similar forma a los trabajos anteriores siguieron los Protocolo OECD
208 Ensayo de toxicidad aguda con semillas de lechuga ( Lactuca Sativa L.) , tras
la experimentacin llego a la conclusin que en relacin al efecto del aluminio sobre
la elongacin de la raz para Lactuca Sativa, en los tres muestreos realizados, los
resultados demuestran la existencia de toxicidad en el efluente de la Planta de
Potabilizacin, evidenciados por la disminucin de la longitud del radical, a medida
que aumenta la concentracin del aluminio. No es as para Phaseolus vulgaris y Zea
mays, por lo que se les considera especies ms resistentes al efecto txico del
aluminio. Tras esta conclusin y todas las anteriores podemos darnos un modelo de
como pudiese ser los resultados de este proyecto en la etapa final del desarrollo.
3.1.2. A nivel nacional
Un primer trabajo nacional corresponde a Caceda Quiroz, (2005) quien realiz:
Aplicacin de bioensayos en la medicin de toxicidad por metales pesados en
fuentes superficiales de agua para consumo humano. En este trabajo se manejaron
teoras sobre bioensayos, fitotoxicidad, efecto de inhibicin de las races de la
Lactuca sativa a diferentes concentraciones y efecto de inhibicin de la
germinacin. Por su parte en la muestra estudiada se evalu el efecto txico
potencial de metales pesados de una muestra de agua del rio Santa. El propsito del

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trabajo fue poner en consideracin de los profesionales que trabajan en el control
de calidad la aplicacin de bioensayos que permitan evaluar el efecto txico
potencial de los contaminantes y sea considerado una prueba de alerta en los
programas de monitoreo en la calidad de las fuentes de agua. La tcnica utilizada
fue la de bioensayos y los materiales empleados fueron aguas del rio Santa y
semillas de Lactuca sativa en prioridad. Los resultados de la prctica comprobaron
la baja sensibilidad de estas semillas en presencia de aguas contaminadas mediante
la inhibicin de la germinacin de las races.
De igual forma paralelo al estudio mencionado Iannacone & Alvario, (2005)
realiza un estudio titulado: Efecto Ecotoxicolgico de tres Metales Pesados Sobre
el Crecimiento Radicular de Cuatro Plantas Vasculares donde el objetivo
principal abarca alrededor de Evaluar el efecto fitotxico del Cr6+, Hg2+ y Pb2+ en
forma de dicromato de potasio (K2Cr207), cloruro de mercurio (Cl2Hg) y acetato
de plomo ((CH3C00)2Pb), respectivamente, sobre el crecimiento radicular de
cuatro especies de plantas superiores terrestres: cebolla (Allium cepa L., Liliaceae),
betarraga (Beta vulgaris L., Chenopodiaceae), arroz (Oriza sativa L., Poaceae) y
rabanito (Raphanus sativus L., Brassicaceae) donde utilizan una muestra solucin
hidropnica con cada concentracin de metal pesado (Cr6+, Hg+2 o Pb+2) y para
ello se utilizaron un total de cinco semillas por envase, con ocho repeticiones. En
cada envase se colocaron dos trozos de papel absorbente, y se aadi 1 mL de la
solucin hidropnica con cada concentracin de metal pesado (Cr6+, Hg+2 o Pb+2)
por envase. La duracin de la prueba fue de 192 h (8 das). Los resultados obtenidos
en este estudio se concluyeron lo siguiente: Las semillas de B. vulgaris debido a su
mayor sensibilidad a la accin de los tres metales, podra usarse para el monitoreo
ecotoxicolgico de suelos contaminados por relaves mineros, para el Cr6+ se

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observ el siguiente orden decreciente de ecotoxicidad: O. sativa > B. vulgaris > A.
cepa > R. sativus. Y qu para el Hg2+ se encontr la siguiente secuencia: B.
vulgaris > R. sativus ~ O. sativa > A. cepa.
Asimismo Nurea & Padilla, (2013) realizan Efecto ecotoxicolgico del plomo
sobre la germinacin y crecimiento radicular de Raphanus sativus y Beta Vulgaris
en condiciones de laboratorio donde tienen por objetivo determinar el efecto
ecotoxicolgico del plomo en el crecimiento radicular de estas especies y estimar
la concentracin del elemento qumico acumulado en su parte radicular y para
obtener ello, hacen uso de Agua destilada con Nitrato de Plomo Disuelto esta
prueba es realizada con 80 semillas las cuales fueron divididas en grupos de 20
unidades de cada especie y se mantuvieron durante quince das en placas Petri con
papel filtro humedecido con la dilucin de nitrato de plomo a diferentes
concentracin a una temperatura de 22C Materiales: placa Petri, papel filtro,
semillas de Raphanus sativus y Beta Vulgaris obteniendo como resultado que existe
un efecto toxicolgico del plomo en el crecimiento radicular e hipocotilo de R.
sativus y B. vulgaris y que a mayor concentracin de plomo, existe mayor efecto
en la longitud de radcula e hipocotilo en R. sativus y B. Vulgaris.
3.2.Bases tericas
3.2.1. Caracterizacin de las Aguas del Curso Inferior del ro Lurn
3.2.1.1.Rio Lurn:
La cuenca del ro Lurn est ubicada al Sur Este de la ciudad de Lima,
colindando por el Norte con la Cuenca del ro Rmac, por el Sur con la Cuenca
del ro mala y por el Oeste con el Ocano Pacfico. Tiene una superficie de
aproximadamente 1,720 km2, pasando por altitudes que vienen desde el nivel

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del mar hasta cumbres de 5,316 m.s.n.m. Polticamente se ubica en el
Departamento de Lima y ocupa parte de las Provincias de Lima y Huarochir.
La cuenca alta ubicada entre los 2,500 a 5,000 m.s.n.m., comprende los
Distritos de Santiago de Tuna, Tupicocha, San Damin, Langa, Lahuaytambo y
San Jos de los Chorillos as como tres comunidades que congregan a 20
caseros de la cuenca. Esta zona es sumamente montaosa y abarca el 82% del
territorio de la cuenca. La cuenca media est ubicada entre 500 a 2,500 m.s.n.m.
y comprende el Distrito de Antioqua y 15 comunidades campesinas. La parte
baja (de 0 a 500 m.s.n.m) comprende los Distritos de Cieneguilla, Pachacamac
y Lurn as como numerosos Centros Poblados, ubicados principalmente en la
margen derecha del ro Lurn. (Carmen Felipe y Morales, 2012)
3.2.1.2.Ubicacin:
La parte baja (de 0 a 500 m.s.n.m) comprende los Distritos de Cieneguilla,
Pachacamac y Lurn as como numerosos Centros Poblados, ubicados
principalmente en la margen derecha del ro Lurn. (Carmen Felipe y Morales,
2012)
3.2.1.3.Poblacin
Hasta el ao 2015 Lurn contaba con una poblacin de 85,132 habitantes.
(INEI, 2016)
3.2.1.4.Uso potencial agrcola
La superficie cultivada en el valle de Lurn se halla ocupada principalmente
de yuca, camote, frutales y otros cultivos con una extensin de riego de 4815Ha
que hacen un consumo anual de 62 226 000 m3.
3.2.2. Contaminantes en el rio Lurn
3.2.2.1.Metales pesados

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Metales pesados son aquellos elementos cuya densidad es al menos cinco
veces mayor que la del agua. Desde el punto de vista qumico, los metales
pesados estn constituidos por elementos de transicin y post-transicin
incluyendo algunos metaloides como el arsnico y selenio. Tienen aplicacin
directa en numerosos procesos de produccin de bienes y servicios. Los ms
importantes son: Arsnico (As), Cadmio (Cd), Cobalto (Co), Cromo (Cr), Cobre
(Cu), Mercurio (Hg), Nquel (Ni), Plomo (Pb), Estao (Sn) y Cinc (Zn).
La peligrosidad de los metales pesados reside en que no pueden ser
degradados (ni qumica, ni biolgicamente) y, adems, tienden a bioacumularse
y a biomagnificarse (que significa que se acumulan en los organismos vivos
alcanzando concentraciones mayores que la que alcanzan en los alimentos o
medioambiente, y que estas concentraciones aumentan a medida que
ascendemos en la cadena trfica), provocando efectos txicos de muy diverso
carcter.
3.2.2.2.Contaminante
Cualquier sustancia qumica que no pertenece a la naturaleza del suelo y cuya
concentracin excede la del nivel de fondo, susceptible de causar efectos
nocivos para la salud de las personas o el ambiente. (Minam)
3.2.2.3.Producto Qumico
Producto resultante de una reaccin o alguna otra operacin o proceso
qumico, por ejemplo, Abonos y fertilizantes, plaguicidas, productos
fitosanitarios, detergentes, mezclas peligrosas, sustancias radiactivas, etc. Este
concento engloba a varios grupos y entre ellos a una sustancia qumica, mezcla
qumica y sustancia peligrosa. (Infonorma, 2010).

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Todo elemento o compuesto qumico, por s solo o mezclado, tal que se
presenta en estado natural o es producido, utilizado o vertido, incluido el vertido
como residuo, en una actividad laboral, se haya elaborado o no de modo
intencional y se haya comercializado o no. (Publicaciones Vrtice S.L., 2011)
3.2.3. Calidad de agua
3.2.3.1.Cuerpos de agua
La Directiva marco de agua (DMA) de la Unin Europea (Parlamento
Europeo, 2000), es un documento que establece un marco comunitario de
actuacin para la proteccin de las aguas superficiales continentales, las aguas
de transicin, las aguas costeras y las aguas subterrneas, cuyos objetivos
apuntan a la prevencin del deterioro de las aguas, mejoramiento del estado de
los ecosistemas acuticos y de las necesidades de agua de los ecosistemas
terrestres y humedales, que promueva el desarrollo sostenible del agua,
protegiendo y mejorando el medio acutico de las fuentes de contaminacin de
todo tipo, de garantas de la reduccin progresiva de la contaminacin del agua
subterrnea, y contribuya a mitigar los efectos de sequas e inundaciones
(Parlamento Europeo, 2000).
Para la MDA define por masa de agua a un tramo de ro -con caractersticas
ecolgicas ms o menos homogneas-, un lago, o un acufero. Tambin existen
las masas de agua muy modificadas y las artificiales. En todas las masas
definidas, los Organismos de cuenca deben diagnosticar peridicamente su
estado.
Los tipos de cuerpos de aguas encontramos: Arroyos, bahas, estanque,
humedales, presas, ocanos, ros, etc.

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3.2.3.2. Calidad de Agua
La calidad de agua est definida por el ECA del agua donde se indican
valores que resultan adecuados para el consumo humano y para todo uso
domstico habitual (Organizacin Panamericana de la Salud, 1988), como
tambin para el Riego de Vegetales y Bebida de Animales (ECA para Agua,
categora 3).
3.2.3.3.Calidad del Agua cruda
El agua absolutamente pura no se encuentra en estado natural, conteniendo
sustancias tanto en solucin como en suspensin, dependiendo de sus orgenes
as como de las caractersticas del medio en que se encuentra. Las caractersticas
de las aguas superficiales difieren de cuenca en cuenca y son totalmente
diferentes de las caractersticas de las aguas subterrneas.
Para obviar este problema se sealan calidades de agua cruda con lmites de
contaminantes o constituyentes, de acuerdo a sus facilidades de remocin con
tratamiento muy simple, normal o especial. La calidad del agua cruda est
definida en base a las caractersticas fsicas, qumicas y bacteriolgicas. (Prez,
1979)
3.2.4. Bioensayo
3.2.4.1.Bioensayo de germinacin
Es una prueba esttica donde se mide la respuesta de un organismo vivo ante
una sustancia, es decir, nos ayudar a determinar el efecto de los txicos en el
crecimiento radicular y el desarrollo de la semilla a diferentes concentraciones
de los compuestos txicos.
Las pruebas de toxicidad en semillas nos proporcionan datos para cuantificar
el efecto txico y la contaminacin en las comunidades vegetales que se

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encuentran cercanas a los mrgenes de cuerpo de agua contaminados. (Castillo,
2004)
3.2.4.2.Ventajas del bioensayo de germinacin
La ventaja de la prctica de los bioensayos es que por bajo costo econmico
se puede determinar como la calidad del agua o las concentraciones de ciertos
txicos pueden afectar o inhibir el desarrollo o germinacin de diversos cultivos
a travs de la medida del cotiledn, hipocotilo y el porcentaje de germinacin.
3.2.4.3.Germinacin
La germinacin es un proceso que consiste en la absorcin de agua, la
reactivacin del metabolismo y la iniciacin del crecimiento del embrin de una
semilla. (Bidwell, 1990). La germinacin puede ser clasificada en dos tipos: i)
la fanerocotilar en donde los cotiledones emergen de la semilla y ii) criptocotilar
en la cual los cotiledones no emergen de la semilla, sin embargo esta
clasificacin no indica si los cotiledones llegan a emerger o sobresalir por
encima de la superficie del suelo. (Zeballos, 2003)
3.2.4.4.Cotiledn
Hoja u hojas modificadas del embrin o plntula que contienen las reservas
alimenticias almacenadas en la semilla. Estas son formadas en el primer ndulo
o en el extremo superior del hipocotilo. (Bonner, 2006)
3.2.4.5. Hipocotilo
La parte del eje embrinico que est entre los cotiledones y la radcula. En
las plntulas el tallo juvenil est entre los cotiledones y el sistema radical.
(Bonner, 2006)

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3.2.5. Plantas involucradas
3.2.5.1.Lactuca Sativa (Lechuga)
Es una planta anual de la familia de las compuestas. Es adaptable a distintos
climas, la temperatura media ptima para la lechuga oscila entre los 15 a los
20 C. La lechuga (Lactuca Sativa) es muy sensible a los excesos de humedad.
No soporta la sequa gracias a su bajo desarrollo de su sistema radicular. (Japn,
1977)
La Lechuga es una especie bioindicadora para el desarrollo de pruebas de
Toxicidad en los diferentes protocolos de aplicacin en ecotoxicologa por su
sensibilidad a compuestos txicos. (OECD, 2003)
Sus principales caractersticas son los tallos, hojas verdes prolongadas
redonda y crujiente que forma un cogollo compacto. Se van haciendo variedades
ms resistentes que pueden cultivarse en lugares de clima frio o templado.
Dentro de su taxonoma se identifican:
-

Raz: Es la primera de las partes embrionarias que se desarrolla durante

la germinacin de la semilla; se distingue primero con una porcin poco

diferenciada la radcula, con una cubierta en su punta la coleorhiza, esto forma
la raz en su parte inicial.
-

Hojas: rgano de las plantas especializado en la fotosntesis que crece

en las ramas o el tallo, generalmente de color verde, ligera, plana y delgada, y

que puede tener diversas formas dependiendo de la especie.
-

Tallo: Este tiene una formacin cilndrica y ramificada de poca longitud

debido a la parte gentica de la especie.

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-

Semillas: Es la pepita cuyo nombre es espermatofitas las cuales estn

provistas con todo el material gentico que debe emplear el desarrollo de una
planta. (Dscn., 2010)
3.2.5.2. Raphanus Sativus (Rabanito)
Es una planta oriunda del Asia, se cultiva todo el ao y crece en zonas
tropicales y subtropicales. Se cultiva todo el ao y se consume generalmente el
hipoclito. Tiene como componente mayoritario al agua (95 % agua), los
minerales ms abundantes es el potasio y el iodo. (Bailn, y otros, 2007)
El rabanito es una especie bioindicadora, nombrado en la lista de la Gua 208
de la OECD (Organizacin para la Cooperacin y el Desarrollo Econmico)
para el desarrollo de pruebas de Toxicidad en los diferentes protocolos de
aplicacin en ecotoxicologa por su sensibilidad a compuestos txicos. (OECD,
2003)
3.3.Marco normativo:
3.3.1. Estndares de Calidad Ambiental (ECA)
Fijan los valores mximos permitidos de contaminantes en el ambiente. El
propsito es garantizar la conservacin de la calidad ambiental mediante el uso de
instrumentos de gestin ambiental sofisticados y de evaluacin detallada para su
posterior control de emisiones de agentes contaminantes. Se tienen ECA para agua,
suelo, aire, ruido y radiaciones no ionizantes. (Minam)
El ECA para agua establece el nivel de concentracin o el grado de elementos,
sustancias o parmetros fsicos, qumicos y biolgicos presentes en el agua, en su
condicin de cuerpo receptor y componente bsico de los ecosistemas acuticos,
que no representa riesgo significativo para la salud de las personas ni ara el
ambiente. (MINAM, 2008).

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Para determinar los Estndares de Calidad Ambiental (ECA) para aguas de uso
agrcola en cultivos de tallo bajo dentro de nuestro pas, debemos revisar a la
legislacin ambiental nacional vigente y especfico donde se citan estos parmetros
que deben cumplir estos cuerpos de agua.
Las principales normas ambientales que regulan la legislacin en la parte de
proteccin de los recursos naturales (manejo de aguas) y la adecuada
implementacin.
Tabla 2. Legislacin Ambiental vigente en el Per
NORMAS
Constitucin
poltica del
Per de 1993

DESCRIPCIN

Establece que toda persona tiene derecho a gozar de un ambiente equilibrado

y adecuado al desarrollo de su vida; sealando en su artculo 67.
Establece que toda persona tiene el derecho irrenunciable a vivir en un

Ley General
del Ambiente
(Ley N 28611
de 2005)

ambiente saludable, equilibrado y adecuado para el pleno desarrollo de la

vida, y el deber de contribuir a una efectiva gestin ambiental y de proteger
el ambiente, as como sus componentes, asegurando particularmente la salud
de las personas en forma individual y colectiva, la conservacin de la
diversidad biolgica, el aprovechamiento sostenible de los recursos naturales
y el desarrollo sostenible del pas.

Reglamento de
la Ley de

El reglamento de la Ley de Recursos Hdricos tiene por objeto regular el uso

Recursos

y gestin de los recursos hdricos teniendo un aprovechamiento sostenible, la

Hdricos (Ley

conservacin, la proteccin de la calidad y el incremento de la disponibilidad

N 29338 de

de los recursos hdricos.

2010)
Estndares de
Calidad
Ambiental

El objetivo es de establecer los niveles de concentracin o el grado de

para Agua

elementos, sustancias o parmetros fsicos, qumicos y biolgicos presentes

(Decreto

en el agua que no representan dao significativo para la salud humana ni los

Supremo N
0152015/MINAM)

ecosistemas.

21
IV.

METODOLOGA
4.1.Tipo y nivel de investigacin
4.1.1. Tipo de investigacin
Por el tipo de la investigacin, el presente estudio rene las condiciones
metodolgicas de una investigacin experimental y evaluativa, debido a que se
analizar el efecto que genera la calidad de agua del rio Lurn en las semillas de
Lactuca sativa y Raphanus sativus.
4.1.2. Nivel de investigacin
De acuerdo a la naturaleza del estudio de investigacin, rene por su nivel las
caractersticas de un estudio integrativo y correlacionado.
4.2. Lnea de investigacin
-

Biologa vegetal

4.2.1. Sub lnea de investigacin.

-

7) Otras (Bioensayos)

4.3. Descripcin del mbito de la investigacin

El ro Lurn, con un largo de 108,57 kilmetros, es un ro ubicado en el
Departamento de Lima, Per. Se origina en los glaciares y lagunas de los Andes
occidentales y es conocido como el ro Chalilla hasta su confluencia con el riachuelo
Taqua a partir de donde recibe su nombre comn. La zona donde se extraer la
muestra para la investigacin ser en el curso inferior, ubicado en el distrito de Lurn
con una poblacin de 85 132 habitantes, que pertenece al conocido valle verde de Lima
a 53 msnm cerca al punto -1213'45.86"S - 7652'45.09"O.

22
4.4. Diseo de investigacin
Primero se plante el problema y en base a ello se parti a determinar los objetivos
generales y especficos, seguidos de las hiptesis generales y especificas segn cada
caso. Sin antes determinar cada variable que se usaran en esta investigacin, para poder
pasar a realizar una matriz de antecedentes con el motivo de darnos una antesala de
cules podran ser los resultados del trabajo y pasar a la realizacin del marco terico
con motivo de tener una slida base cientfica.
Una vez definida la estructura del proyecto y como se trata de una investigacin
evaluativa necesitamos realizar un experimento, para el cual se seguirn los siguientes
pasos:

23
Para la muestra:

Figura 1. Diagrama general para el tratamiento de las muestras durante los bioensayos. Gabriela Castillo
Morales (2004). Ensayos toxicolgicos y mtodos de evaluacin de calidad de agua-Instituto Mexicano de
Tecnologas del Agua.

24

Figura 2.Esquema general del procedimiento de prueba de toxicidad con semillas. Gabriela Castillo
Morales (2004). Ensayos toxicolgicos y mtodos de evaluacin de calidad de agua-Instituto Mexicano de
Tecnologas del Agua.

25
4.5.Poblacin y muestra
4.5.1. Poblacin
La poblacin del estudio consistir en una serie de semillas de las especies
Lactuca sativa y Raphanus sativus. Las cuales se obtendrn del Centro de Ventas
de la Universidad Nacional Agraria La Molina (UNALM).
4.5.2. Muestra
Las muestras sern 20 semillas de cada especie escogidas completamente al azar
para ser colocadas en las diferentes placas Petri para la experimentacin.
4.6.Tcnicas e instrumentos de recoleccin de datos
4.6.1. Tcnica para la toma de muestra segn Protocolo brindados por la
Autoridad Nacional del Agua (ANA)
a) Reconocimiento del entorno y ubicacin del punto de monitoreo
-

Describir las caractersticas del entorno al cuerpo de agua (observar

presencia de residuos, vegetacin acutica, actividades humanas,
presencia de animales y otros factores que modifican las caractersticas
naturales del medio ambiente).

Georreferenciar la ubicacin del punto de monitoreo, indicando el

sistema que corresponde.

Describir el punto de muestreo e Ingresar la informacin en el Registro

de Datos de Campo.

Tomar vistas fotogrficas del punto de monitoreo

Acondicionamiento:
-

Preparar los frascos de muestreo, segn la lista de parmetros a evaluar.

26
-

Colectar las muestras de agua y preservarlas de acuerdo al tipo de

parmetro, siguiendo las instrucciones generales de preservacin,
etiquetado, embalaje y transporte de muestras. Rotular los frascos,
usando plumn de tinta indeleble y cubrir la etiqueta con cinta adhesiva
transparente.

Colocar las muestras de agua preservadas y rotuladas, en un cooler con

refrigerante (ice pack), para asegurar su llegada al laboratorio en
condiciones de conservacin.

En el caso de frascos de vidrio, utilizar bolsas de poliburbujas, para

evitar roturas en el transporte.

b) Toma de muestras de agua, Preservacin y Etiquetado

Se recomienda que los frascos de muestreo no contengan preservantes
qumicos.
-

En cada punto, colocarse los guantes descartables, antes de iniciar la

toma de muestras de agua.

Tener cuidado al manipular los reactivos qumicos (H2SO4, HNO3,

HCl, NaOH, Acetato de cinc, lugol cido, etc.), por ser nocivos a la
salud.

Dejar un espacio de aprox. 1% de la capacidad del envase, para permitir

la expansin, adicin del preservante y homogenizacin de la muestra.

En el caso de muestras para anlisis de DBO5, llenar el frasco totalmente

evitando burbujas de aire. Evitar coger la muestra de agua, cogiendo
el frasco por la boca.

27
-

En ros y quebradas, evitar reas de turbulencia excesiva, considerando

las profundidades y el acceso con pendiente pronunciada.

Realizar la toma de muestras, en direccin opuesta al flujo del ro o

quebrada.

4.6.2. Tcnica para el bioensayo segn protocolo OECD Guideline For The
Testing Of Chemicals
-

Esterilizar las cajas Petri y las pinzas a utilizar.

Recortar el papel filtro del mismo dimetro de la caja Petri.

Colocar las semillas con pinzas de manera distribuida en la caja Petri.

Humedecer el papel filtro de manera uniforme con 3ml de muestra a

evaluar.

Conservar las placas Petri a una temperatura de 22C 2C de

preferencia durante 120 horas.

Medir el crecimiento del hipocotilo y el cotiledn de cada semilla con

papel milimetrado.

Realizar el informe de laboratorio.

4.6.3. Instrumentos para la toma de muestra segn Protocolo brindados por la

Autoridad Nacional del Agua (ANA)
- GPS
- Multiparmetro
- Cmara Fotogrfica
- Linterna de mano
- Correntmetro.

28
- Cronmetro
- Brazo telescpico
- Envase para muestreo
4.6.4. Instrumentos para el bioensayo segn protocolo OECD Guideline For The
Testing Of Chemicals
- Esterilizador
- Placas Petri
- Pinzas
- Pipeta
- Pipeteador
4.7.Validez y confiabilidad del instrumento
Para comprobar la validez y confiabilidad de los instrumentos con los que se medir
la calidad del agua se tomar un gran volumen de muestra para ser dividida en dos,
con una parte se harn los respectivos anlisis en el laboratorio de Qumica Ambiental
de la Universidad Nacional Tecnolgica de Lima Sur (UNTELS), as mismo al realizar
la prueba se tomaran al menos 3 medidas para disminuir el margen de error y la otra
muestra se llevar a un laboratorio acreditado por el Instituto Nacional de la Calidad
(INACAL) y se comprar los resultados para ver la confiabilidad de los instrumentos
del laboratorio de la UNTELS antes de realizar el anlisis definitivo.

29
4.8.Procesamiento de datos
Despus de haber realizado la parte experimental del proyecto de investigacin se
debe realizar el procesamiento de datos en la siguiente tabla, para proceder a la
extraccin de datos estadstico. (Formato 1).
Una vez lleno el Formato 1, se debe cumplir con los requerimientos de validez y
precisin de la prueba aplicada para eso requerimos ayuda de los anlisis estadsticos,
se recomienda la utilizacin de anlisis sencillos pero como la experimentacin ser
replicada al menos 6 veces para la obtencin de datos ms exactos es que se
recomienda la utilizacin de software para el anlisis de correlacin entre
concentraciones de agua del rio Lurn y crecimiento del cotiledn e hipocotilo de las
semillas de cada especie, as mismo tambin se puede utilizar el anlisis de covarianzas
en la tabla ANOVA para validar las hiptesis planteadas.

Tabla 3: Tabla ANOVA.

30
Tabla 4. Resultados de la prueba de toxicidad con Lactuca sativa y Raphanus sativus. Gabriela Castillo Morales (2004). Ensayos toxicolgicos y mtodos de evaluacin de
calidad de agua-Instituto Mexicano de Tecnologas del Agua.

31
V.

ASPECTOS ADMINISTRATIVOS
5.1.Recursos y presupuesto de la investigacin
a) Recursos humanos:
Estudiante coordinador:
-

Gutirrez Grados, Kelvin

Miembros:
-

Gutirrez Grados, Kelvin

Hoyos Trujillo, Michelle

Pea Guzmn, Gabriela

Zenteno Cruces, Anais

Docente asesor:
-

Adauto Medina, Willy Andrs

32
b) Presupuesto

DESCRIPCIN

Materiales de oficina
1. Papel bond
2. Papel Bulky
3. Fotocopias,
Impresiones y
espiralados
4. Lapiceros (azul,
negro y rojo)
5. Lpiz
6. Resaltadores
7. Engrapador
8. Perforador
9. Tijera
10. Hoja milimetrada

CANTIDAD

DESCRIPCION

1/2M
1M

P/U

10.00
20.00

VALOR
NETO

TOTAL

10.00
20.00

10.00
20.00

200.00

200.00

2 caja

6.00

12.00

12.00

1 caja
10
1
1
1
1
cuadernillo

7.00
2.0
5.00
5.00
2.00

7.00
20.00
5.00
5.00
2.00

7.00
20.00
5.00
5.00
2.00

5.00

5.00

5.00

5.00

180.00

180.00

5.00

20.00

20.00

2.50
8.00
10.00
20.00

12.50
8.00
10.00
20.00

12.50
16.00
10.00
20.00

20.00

20.00

160.00

20.00

20.00

160.00

137.00

137.00

137.00

6.00

14.00

14.00

1 caja

18.00

18.00

18.00

Materiales de Laboratorio
11. Placas Petri

36

12. Beaker

13. Papel filtro

14. Pinzas
15. Pipeta
16. Pipeteador
17. Semillas de Lactuta
Sativa
18. Semillas de
Raphanus Sativus
19. Cooler de 34.5 Lt

5
2
1
1

Materiales para muestro

20. Mascarillas cubre
boca paquete x 50
unid
21. Guantes quirrgicos
paquete x 50 unid

8
8

Cristal
Medida 100x15
Pirex
100ml
Metal
Vidrio
Paquete
certificado
Paquete
certificado

22. Frascos de muestreo

12

Vidrio y
plstico

5.00

60.00

60.00

23. Analisis de muestra

de agua en
laboratorio

6 parmetros

80.00

480.00

480.00

TOTAL

S/1501.50

33

c) Cronograma de Actividades de ejecucin del proyecto

Aplicacin de
bioensayos para la
evaluacin de calidad
de agua del curso
inferior del rio Lurn
utilizando semillas de
Lactuca cativa y
Raphanus sativus.
N.
SEMANAS
1.

2.

3.

4.
5.
6.
7.
8.
9.

Revisin
bibliogrfica
nacionales e
internacionales
Inicio de
ejecucin del
proyecto.
Inventario de
materiales con
los que se
cuentan en el
laboratorio
Compra de
materiales
faltantes
Compra de
semillas.
Recoleccin de
muestra de agua
Experimentacin
en el laboratorio
Entrega de
informe mensual
Entrega de
informe final

Leyenda de colores:

AOS
2016

2017
MESES

Jun.

Jul.

Ago.

Set

Oct

Nov

Dic

Ene

Feb

1234

1234

1234

1234

1234

1234

1234

1234

1234

xxxx

xxxx

xxxx

xxxx

xxxx

xxxx

xxxx

xxxx

x
x

x
x

x
x

x
x

x
x

x
x

x
x

x
x

x
x

Cc : Semana 1

Cc : Semana 2

Cc : Semana 3

Cc : Semana 4

34

VI.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Bailn, H., Castillo, I., Pablo , M., Topio, Y., Velsquez, M., & La Rosa , R. (EneJun de 2007). Respuestas Fisiolgicas de Raphanus sativus L. frente a tres
concentraciones

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Biologist,

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por metales pesados en fuentes superficiales de agua para el consumo
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Potable. Washington.
Prez,

J.

A.

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Tratamiento

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Sativa L.). Bogota.
Zeballos, P. y. (2003). Caracterizacin Morfolgica de plntula de "ua de gato"
Uncaria tomentosa (Willdernow ex Roemer & Schultes), D.C.Y. U.
guianensis (aublet) gmenil del Bosque Nacional Alexnder Von Humbolt.
Lima, Peru.

37

KELVIN LAURENTS GUTIRREZ GRADOS

DNI N 74923749
Coordinador y miembro | Estudiante de Ingeniera Ambiental

MICHELLE HOYOS TRUJILLO

DNI N 73689245
Miembro | Estudiante de Ingeniera Ambiental

..
GABRIELA JUANA PEA GUZMAN
DNI N 72146740
Miembro | Estudiante de Ingeniera Ambiental

..
ANAIS ALESSANDRA ZENTENOS CRUCES
DNI N 76519925
Miembro | Estudiante de Ingeniera Ambiental

WILLY ANDRS ADAUTO MEDINA

DNI N 09721579
DOCENTE ASESOR