4.

Explique los principios de cada una de las pruebas bioqumicas realizadas

a) Principio de la prueba bioqumica de la tincin de

Gramm

A causa del tamao imperceptible de las bacterias por la falta

de contraste que hay entre estos organismos usualmente
transparentes y el medio que les rodea. existe gran dificultad
para observarlos con el microscopio ptico, en su estado
natural; esto hizo que se crearan mtodos para poder apreciar
mejor a los microorganismos, y poder distinguir muchas
caractersticas estructurales que no son fciles de apreciar;
siendo la utilizacin de colorantes el medio ms simple de
aumentar
el
contraste.
La tincin de Gram es una tcnica de coloracin de contraste
o diferencial, que se desarroll en 1844 y se utiliza en
microbiologa para la observacin de bacterias, las cuales, con
base en la reaccin que tengan las paredes de los
microorganismos a los colorantes usados con esta tcnica, se
les califica en grampositivos y gramnegativos; considerndose
bacterias Gram positivas a las bacterias que se aprecian en
color violeta y en color rosa bacterias a las Gram negativas,
otra ventaja es que se puede efectuar una percepcin
primordial a las diferencias entre bacterias, por su morfologa
(Cocos Bacilos y Espirilos). (1)

b) Prueba de la catalaza
La catalasa es un enzima presente en la mayora de los
microorganismos que poseen citocromos; el enzima
descompone perxido de hidrgeno desprendiendo oxgeno.
Se considera una reaccin positiva cuando se observa
desprendimiento de burbujas de gas (oxgeno). (3)
c) Fermentacin de la glucosa
Glucosa Nitrato Agar.
Medio
desarrollado
por
Casellas,
para
estudiar
simultneamente la reaccin de oxidacin o fermentacin de
glucosa y la reduccin de nitratos a nitritos, por bacilos Gram
negativos de fcil desarrollo. Esta prueba es til para
diferenciar
especies
bacterianas.
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de carne
aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano. El cloruro de
sodio mantiene el balance osmtico, la glucosa es la fuente de
energa y el azul de bromotimol es el indicador de pH. El
nitrato de potasio es el sustrato de la enzima nitrato
reductasa. El contenido de agar, otorga la propiedad de ser un
medio semislido, que permite determinar la movilidad y la
distribucin de los productos cidos sobre la superficie o en el
medio
de
cultivo.
Algunas bacterias pueden fermentar anaerbicamente la
glucosa, otras la oxidan y algunas pueden metabolizarla por
ambos mtodos, mientras que otras son incapaces de usarla.
Asimismo, las bacterias muestran diferencias en los ciclos
utilizados para esos procesos finales. Estas diferencias ayudan
a
la
identificacin
bacteriana.
La hidrlisis de la glucosa acidifica el medio, haciendo virar el
azul
de
bromotimol
de
verde
a
amarillo.

Si este viraje ocurre solo en la parte superior del tubo, indica

oxidacin de la glucosa; si todo el medio vira al amarillo, hay
reaccin fermentativa, y si no vira o adquiere un color
azulado, se presume que el grmen no utiliza glucosa.
En este medio, adems, puede detectarse la movilidad
observando si el crecimiento se aleja de la lnea de puncin,
enturbiando
el
medio.
La reduccin del nitrato a nitrito o gas nitrgeno por medio de
la enzima nitrato reductasa, es un proceso de oxidacin por el
cual el nitrato proporciona oxgeno para ser usado como
aceptor de electrones. El nitrito presente en el medio puede
detectarse con el reactivo de Griess A (B15-501-61) y Griess B
(B15-502-61) Britania, dando un compuesto diazoico
coloreado.
Si se observan burbujas en el medio, stas son de gas
nitrgeno, ya que el nitrito intermediario inhibe las
decarboxilaciones. (4)

d) PRUEBA DE LA COAGULASA
La coagulasa es una enzima proteica con actividad semejante
a
la
protrombina, capaz de transformar el fibringeno en fibrina,
provocando
la
formacin de un cogulo visible en un sistema analtico
adecuado.
Se
cree
que la coagulasa funciona in vivo, produciendo una barrera en
el
sitio
de
infeccin estafilocccica. En el laboratorio, la prueba de
coagulasa
se
utiliza
ms comnmente para diferenciar al Staphylococcus aureus
(coagulasa
positivo) de otros Staphylococcus.
Principio bioqumico
La coagulasa se halla presente en dos formas, libre y fija,
cada
una
de
las cuales posee diferentes propiedades que requieren el uso

de
tcnicas
de
determinacin diferentes:
Coagulasa fija (prueba en portaobjetos): la coagulasa fija est
unida
a
la
pared celular bacteriana. Los hilos de fibrina formados entre
las
clulas
suspendidas en plasma (que contiene fibringeno) provocan
su
aglutinacin,
indicada por la presencia de agregados visibles en el
portaobjetos.
Coagulasa libre (prueba en tubo): la coagulasa libre es una
enzima
extracelular que se halla presente en los filtrados de cultivos.
Cuando
una
suspensin de bacterias productoras de coagulasa se mezcla
en
partes
iguales con plasma en un tubo de ensayo, se forma un
cogulo visible como consecuencia de la utilizacin de los
factores
de
coagulacin
del
plasma
de
manera similar a cuando se aade trombina. (2)

5. INVESTIGUE Y ARGUMENTE UNA SECUENCIA DE PRUEBAS

PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE TRES BACTERIAS
QUE SEAN:

a) Bacilos Gram positivos

1. PRUEBA DE LA CATALASA
Separar Flia
RESULTADO.- Catalasa +_____Micrococacceae
Catalasa - _____Gneros Streptococus y
enterococcus
2. PRUEBA DE LA COAGULASA
Separa S. aureus que posee coagulasa
RESULTADO.- Coagulasa +____S. aureus

Coagulasa -____S. saprophytyicus

S. epidermis
3. PRUEBA DE LA DESOXIRRIBONUCLEASA. DNAasa
Permite diferencias S. aureus que posee ADNasa de
las otras especies
RESULTADO.- La formacin de un halo transparente
alrededor de la siembra indica la presencia de DNAasa
4. SUSCEPTIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA
Separa la S. saprophyticus que es resisten a la
novobiocina
RESULTADO.- Un halo de inhibicin mayor de 16
mm.
Corresponde
a
otros
staphilocoscos
coagulasa negativos.
IDENTIFICACIN DE COCOS GRAMM NEGATIVOS
1. PRUEBA AGAR Mc CONKEY
Permite distinguir entre bacterias que hidrolizan la
lactosa y los que no lo hacen
RESULTADO.- Las que la hidrolizan____Dan un color rojo
Las colonias lactosas (-) Permanecen
incoloras.
2. PRUEBA AGAR SANGRE
Medio de cultivo enriquecido con la acicin de sangre.
Las hemolisinas son enzimas que lisan los hemates
RESULTADO.- Las bacterias qioue presentan estas
enzimas presentan un halo transpparente alrededor de
las lisis de los hemates.
3. PRUEBA DE LA GALACTOSIDASARESULTADO.- La formacin de un halo transparente
alrededor de l
4. SUSCEPTIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA
Separa la S. saprophyticus que es resisten a la
novobiocina
RESULTADO.- Un halo de inhibicin mayor de 16

mm.
Corresponde
coagulasa negativos.

otros

staphilocoscos

BIBLIOGRAFA

1. http://www.revistaciencias.com/publicaciones/EElpZEVkykPMncqxmd.php

2. http://es.scribd.com/doc/17103317/Pruebas-bioquimicas

3. http://www.galeon.com/lactobacilo/micro.htm
4. http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/gluconitragar.htm

5. http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/grampositivosaerobios.pdf

6. http://edicion-micro.usal.es/web/identificacion/AyudaPruebas.html