Trabalho apresentado em evento cientfico

Avaliao da citotoxicidade de compostos sintticos

como potenciais frmacos contra Dengue vrus
SANTOS, M. dos1; ANDRADE, A. C. dos S. P.1; ALEIXO, A.A1; ALVES, R.J.2, BRETAS, A. C.
O. 2; ANDRADE, S. F. 2 FERREIRA, J. M. S1.

RESUMO

A Dengue uma das mais importantes arboviroses causada pelo Dengue

virus, e causa problemas de sade pblica mundial. transmitida aos seres
humanos por picadas de fmeas infectadas do mosquito Aedes aegypti e
Aedes albopictus. Atualmente, cerca de 50 milhes de pessoas so infectadas
anualmente. Diante disso, a busca de agentes antivirais contra o Dengue
vrus de extrema importncia, uma vez que no existem agentes antivirais
ou vacinas tetravalentes para o tratamento da doena. Sendo assim, o
objetivo deste trabalho avaliar a citotoxicidade de compostos tetrazlicos
como potenciais frmacos antiviras. Uma serie de dez compostos foram
submetidos aos testes de citotoxicidade pelo mtodo do MTT. Os compostos
foram diludos em srie partindo da concentrao de 0,130 mol/mL. Os
compostos CAMCN e CAPOM foram no txicos, se mostrando promissores
agentes antivirais.
Palavras-chave: Dengue vrus, citotoxicidade, compostos sintticos.

INTRODUO

A dengue causada por um arbovrus, membro da famlia Flaviviridae,

cujo genoma constitudo de RNA fita simples com polaridade positiva. O
Dengue virus (DENV) classificado em quatro sorotipos (DENV-1, 2, 3 e 4)
que so gentica e antigenicamente distintos, porm epidemiologicamente
similares. So transmitidos aos seres humanos por picadas de fmeas
infectadas do mosquito Aedes aegypti e Aedes albopictus. A infeco com

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DENV produz um amplo espectro de doenas clnicas desde infeces

silenciosas, como uma sndrome febril ligeiramente aguda, auto-limitada,
conhecida como febre do dengue (DF), ou a doena hemorrgica grave e
muitas vezes fatal (FHD)1,2.
Segundo dados da OMS nos ltimos 50 anos, a incidncia aumentou
30 vezes com o aumento da expanso geogrfica para novos pases. Estimase que 50 milhes de infeces por dengue ocorram anualmente e cerca
de 2,5 bilhes de pessoas vivem em pases endmicos. O Brasil j notificou
cerca de 60% dos 900 mil casos de dengue nas Amricas, destacando o
impacto dessa doena em territrio nacional e a importncia do Brasil no
cenrio mundial da doena3,4.
Atualmente, no existem agentes antivirais ou vacinas tetravalentes
para o tratamento e preveno da doena, que consiste em hidratao oral
e alvio dos sintomas. Por isto, vrios tipos de agentes antivirais contra o
DENV tem sido pesquisados, incluindo inibidores da replicao viral, da
traduo de protenas virais e liberao viral. Dentre ensaios preliminares
para pesquisar uma potencial atividade antiviral, destaca-se os testes de
citotoxicidade, pois um agente antiviral eficaz deve ser mais txico ao vrus
do que para as clulas. Sendo assim, o objetivo deste trabalho avaliar a
citotoxicidade de compostos tetrazlicos, que podero ser utilizados como
potenciais frmacos antivirais frente ao DENV 5.
MATERIAL E MTODOS

Dez compostos tretrazlicos, CAMCN, CAPOM, CAFEN, CAMNF,

CMMC, CAPNF, CAMME, CAMOM, CAOCL, CAOME, oriundos da Quimioteca
da Faculdade de Farmcia da UFMG, foram submetidos avaliao da
citotoxicidade pelo mtodo do MTT (3 (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-brometo
difenil tetrazlio, Sigma-Aldrich). Os compostos foram diludos em
Dimetilsulfxido (DMSO) 20%, partindo da concentrao inicial de 0,130
mol/mL. A linhagem de clulas Vero foram crescidas em Meio Mnimo
Essencial Dulbecco (DMEM) (Cultilab, Brasil), com 2% de Soro Fetal Bovino

ISSN: 2316-5200
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(SFB) e antibiticos (Cultilab, Brasil), e glutamina (Cultilab,Brasil), a 37 C,

com 5% de atmosfera de CO2. Culturas com monocamadas confluentes em
placas de 96 poos foram expostas a diferentes concentraes, diludas
em srie, dos compostos, em triplicata. Aps 72 horas de incubao, 20
uL (2mg/ml) de MTT diludo em soluo salina fosfatada (PBS), foram
adicionados a cada poo e a placa foi incubada a 37 C durante 3 horas.
Posteriormente, o meio foi removido e 130L de DMSO foram adicionados
e, aps incubao a 37 C durante 10 minutos, a absorbncia foi medida a
540 nm em espectrofotmetro (P onda XS2, Biotec, EUA) para determinar
a concentrao que matou 50% das clulas (CC50). A citotoxicidade foi
calculada por comparao com o controle (tratados com DMSO a 0,1%). Os
dados foram analisados pelo GrapPad Prism 5.0, utilizando o teste de Tukey
para a avaliao da citotoxicidade. Para as anlises, foi estabelecido o nvel
de significncia de 5 %.

Trabalho apresentado em evento cientfico

Tabela 1: Avaliao da citotoxicidade de dez compostos tetrazlicos e anlise de CC50.

Composto
CAMCN
CAPOM
CAFEN
CAMNF
CMMC
CAPNF
CAMME
CAMOM
CAOCL
CAOME

CC50 (mol/ml)
0,1305 1,1
0,1168 1,1
0,0795 1,3
0,0726 1,2
0,0655 1,2
0,0654 2,4
0,0317 1,4
0,0374 0,6
0,0249 3,8
0,0231 3,5

Figura 1:Comparao da porcentagem de sobrevivncia das clulas quando submetidas a

diferentes concentraes dos compostos CAMCN e CAPOM.

RESULTADOS E DISCUSSO

As porcentagens de clulas viveis para cada concentrao dos

compostos testados foram analisadas atravs de CC50. Analisando a tabela
1, os compostos CAMCN e CAPOM foram considerados no txicos, sendo
que a concentrao inicial de anlise no causou a morte celular de 50%
das clulas. Ao realizar a comparao da porcentagem de sobrevivncia
das clulas controle com as clulas tratadas com os compostos atravs
do teste de Tukey (Figura 1), foi possvel verificar que o composto CAMCN
no apresentou diferenas significativas na taxa de sobrevivncia das
clulas , em relao ao controle de clulas, enquanto o composto CAPOM
apresentou diferenas nas concentraes de 0,130 mol/mL e 0,008 mol/
mL. Estes dados revelam que ambos os compostos so promissores para a
realizao dos ensaios antivirais.

CONCLUSES

A avaliao da segurana de novos compostos um dos parmetros

de grande importncia no desenvolvimento de novos frmacos. Os testes
de toxicidade celular fornecem as primeiras informaes sobre resposta
biolgica dos compostos em clulas de mamferos, sendo que a grande
maioria de molculas so descartadas logo de incio, devido sua

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citotoxicidade. Os resultados encontrados neste trabalho revelam que os

compostos CAMCN e CAPOM so no txicos e devem ser considerados
para futuros testes de ensaios anti-dengue.
REFERNCIAS
(1)

(2)

(3)

(4)

(5)

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