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UNVERSIDAD PARTICULAR DE CHICLAYO

FACULTAD DE MEDICINA
ASIGNATURA DE MICROBIOLOGIA
GUIA DE PRACTICA PRACTICA N 10: DETERMINACIN DE ANTIESTREPTOLISINAS O

I.

INTRODUCCIN
El ttulo de Antiestreptolisina O, es un examen de sangre para la

medicin de los anticuerpos anti Streptococcus

betahemolticos del tipo A. Esta bacteria produce una enzima llamada estreptolisina O, que puede destruir los hemates y el
cuerpo reacciona contra ella produciendo anticuerpos especficos antiestreptolisina O. La medicin de estos anticuerpos es
lo que refleja el anlisis de antiestreptolisinas O, ASO ASLO.
Este examen se solicita o realiza cuando se sospecha o se tiene sntomas de una infeccin previa por estreptococos del
grupo A.
El anticuerpo antiestreptolisina O se encuentra presente en casi todas las personas en ttulos bajos, debido a que las
infecciones estreptoccicas son comunes. Sin embargo, la presencia de ttulos altos de antiestreptolisinas O ASLO,
indican una infeccin reciente por la bacteria Estreptococo betahemolticos del tipo A,
como amigdalitis, glomerulonefritis, escarlatina, sepsis puerperal, erisipela.
La elevacin de ASLO aparece a la semana de la infeccin por el estreptococo, los valores ms elevados se dan en la
tercera semana de la infeccin y es cuando pueden aparecer las enfermedades secundarias a esta infeccin
(glomerulonefritis, una fiebre reumtica, una endocarditis bacteriana o una escarlatina) pero no son especficos de ninguna
de ellas.
El ASLO pueden mantenerse elevado a los 6 meses en el 30% de los casos.

II. COMPETENCIAS:
1

Observar e identificar la respuesta inmunolgica del husped hacia los Streptococcus

FUNDAMENTO:
Los anticuerpos antiestreptolisinas O se detectan en suero por su reaccin con la estreptolisina O adsorbida sobre
soporte inerte de latex.
Los anticuerpos antiestreptolisina reaccionan con la estreptolisina produciendo una aglutinacin visible macroscpicamente.

MATERIAL Y PROCEDIMIENTOS:
1. Reactivo de latex: suspensin de partculas de latex recubiertas con estreptolisinas O
2. Como muestra suero del paciente a examinar
3. Placa de vidrio
4. goteros
5. Tubos
6. Cronmetro
7. palillos mezcladores

PROCEDIMIENTO:
-

Poner una gota de reactivo de latex (50 ul) en la superficie delimitada de la placa

1 gota de muestra (50 ul)

Mezclar con palillo descartable (uno para cada muestra) hasta obtener una suspensin uniforme

balancear suavemente la placa y observar el resultado dentro de los 2 minutos

En caso de positividad, hacer diluciones 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 1:20 y ensayar cada dilucin segn el diagnstico
Cualitativo

RESULTADOS:
Niveles normales de antiestreptolisinas O (ASLO)

en adultos

Menores de 160 Unidades/ml

en nios menores de 2 aos

Menores de 50 Unidades/ml

en nios entre 2 y 4 aos

Menores de 160 Unidades/ml

en nios entre 4 y 12 aos

Entre 160 y 300 Unidades/ml

Un examen positivo significa que el paciente recientemente tuvo una infeccin por estreptococos, incluso si no
tuvo ningn sntoma. El examen ASO puede seguir siendo positivo (lo que algunas veces se llama detectable)
durante 2 a 4 meses despus de que el paciente result infectado por primera vez.

INTERPRETACION:
-

Suspensin homognea: Negativo

Aglutinacin que aparece dentro de los 2 minutos: Positivo 1 a 4 (+)

Ttulo: inversa a la mxima dilucin en la que se produce aglutinacin visible macroscpicamente


El nivel aproximado de antiestreptolisinas O es calculado por la formula
siguiente:
ASO UI/ml = Ttulo x sensibilidad de la reaccin (200 UI/ml)
Ejm: la muestra presenta un ttulo de 1:2., el nvel de ASO es de 2 x
200 = 400 UI/ml.
Los valores normales son menores a 200 UI/ml

METODO CUANTITATIVO

Suero

NaCl 0.9%

Ag

Ttulo

Procedimiento
Realizar 1ra dilucion:

100 ul

100 ul

1 gota + 1 gota

1/2

De la 1ra. dilucin suero-NaCl tomar: 100 ul +

100 ul

1 gota + 1 gota

1/4

De la 2da. dilucin suero-NaCl tomar: 100 ul +

100 ul

1 gota + 1 gota

1/8

De la 3ra. Dilucin suero-NaCl tomar: 100 ul

100 ul

1 gota + 1 gota

1/16

De la 4ta. dilucin suero-NaCl tomar: 100 ul +

100 ul

1 gota + 1 gota

1/32

De la 5ta dilucin suero-NaCl tomar: 100 ul +

100 ul

1 gota + 1gota

1/64

Poner 1 gota de cada dilucin en la placa

Aadir a cada una de esas muestras una gota de antgeno.

Observar la formacin de grumos y reportar hasta el ttulo donde reaccione

Se reporta reactivo hasta el ttulo donde hay reaccin


CUESTIONARIO:

Un ttulo elevado de antiestreptolisinas Significa enfermedad lejana, actual o reciente?

Fundamento
Puede utilizarse la antiestreptolisina O (ASLO) para diagnosticar una infeccin de garganta?
Siempre que se diagnostica una infeccin estreptoccica debe solicitarse ASLO?

ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

PRCTICA N 11:
I.

GENERO LACTOBACILLUS: L. acidophillus (B. de doderrlein),

INTRODUCCIN
Los Lactobacillus sp. son bacilos Gram positivos anaerobios facultativos, denominados as debido a que la mayora de
sus miembros convierte la lactosa y otros monosacridos en cido lctico. Normalmente son benignas e incluso necesarias,
forman parte de la flora normal, estn presentes en el tracto gastrointestinal, colonizan la vagina constituyndose en el
principal componente de la flora bacteriana normal (Bacilos de Dderlein).
El bacilo de Dderlein acta en la defensa del husped, principalmente mediante dos mecanismos. Uno de ellos consiste
en la transformacin de glucgeno producido por las clulas del epitelio de la mucosa de la vagina a cido lctico por
fermentacin lctica, lo cual le confiere un pH variable en los diferentes ciclos de la vida de la mujer. De tal forma se puede
observar cmo la funcin depuradora de la vagina est disminuida en la infancia y en la vejez. Sin embargo, en la edad frtil
aumenta con la actividad hormonal cclica estrgeno-gestgeno. El pH vaginal en esta etapa es cido, lo que le confiere
una accin bactericida, excepto para el propio bacilo de Dderlein gracias a su resistencia a la acidez.
El segundo mecanismo es la transformacin de oxgeno en H 2O2, el cual dificulta la reproduccin de bacterias carentes de
la enzima catalasa y provoca un efecto negativo a Gardnerella vaginalis y Neisseria gonorrhoeae, entre otros.
Si por alguna razn existiere una disminucin o aumento excesivo de bacilos de Dderlein, se producira una alteracin en
el ecosistema vaginal. La riqueza de las clulas epiteliales de la mucosa vaginal, la produccin del glucgeno y su
liberacin por la citlisis se deben al equilibrio entre estrgeno y progestgeno. Con una baja produccin hormonal existe
poco desarrollo epitelial, poco glucgeno, ausencia de citlisis, ausencia de bacilos de Dderlein y elevado pH, lo cual
favorece la aparicin de infecciones. En el caso contrario, ante una presencia exagerada de bacilos de Dderlein, baja
excesivamente el pH, lo cual facilita la instauracin de hongos

II.

COMPETENCIAS

Observar e identificar las bacterias que pertenecen al gnero Lactobacillus

III. MATERIALES Y MTODOS


MATERIALES
De las muestras y su procedencia: L. acidophillus puede ser aislado de vagina, contenido intestinal de lactantes muy
tiernos, de leche y otros productos.
Examen directo: Bacilos Gram positivos, inmviles, no esporulados, rectos, de 1 a 3 micras de longitud y de 0.6 a 1
micra de ancho.
Aislamiento: el medio indicado para su aislamiento. Es el ideado por Mickle y Breed, y modificado por Kulp y white.
PROCEDIMIENTO

Obtener muestras de secrecin vaginal. Tomar no menos de 5 muestras y realizar una coloracin de Gram.

Observar la morfologa
Realizar observaciones de lminas montadas

100X

IV. RESULTADOS y DISCUCIN

V. CONCLUSIONES.

VI. CUESTIONARIO.
1.- Cul es la particularidad ms saltante que observa usted en estos grmenes?
2.- Qu significacin tiene la presencia de Lactobacillus en tracto intestinal y en vagina?

ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA


PRACTICA N 12: FAMILIA BACILLACEAE GENERO BACILLUS: B. anthracis
I.

INTRODUCCIN
El ntrax o carbunco, en su forma natural es una enfermedad de animales herbvoros domsticos o salvajes que expulsan
bacilos al desangrarse. Al exponerse al aire, las formas vegetativas esporulan y las esporas pueden mantenerse viables en
el suelo durante ao. Los seres humanos y los carnvoros son huspedes accidentales causando una zoonosis que afecta
tanto a humanos como a animales fue la primera enfermedad infecciosa en la que se demostr que una bacteria, Bacillus
anthracis, era el agente causal, El nombre de la especie, anthracis, proviene del griego anthrakis que significa "carbn", y
se refiere al carbunco cutneo, patologa ms comn producida por esta bacteria, en el cual se forma una gran lesin negra
en la piel. El carbunco; segn la va de infeccin se clasifica en tres tipos: carbunco cutneo, pulmonar y digestivo.
Las bacterias penetran a travs de heridas (carbunco cutneo), va oral (carbunco gastrointestinal) o por inhalacin
(carbunco inhalatorio), y ste ltimo es el ms grave. Una vez dentro del husped, las bacterias se difunden y se multiplican
en los ganglios linfticos hasta que alcanzan el torrente sanguneo
El Bacillus anthracis es una de las bacterias patgenas de mayor tamao, son bacilos gram positivo, aerobio, inmvil,
capsulado y presenta una endospora redondeada, central, que no deforma la clula y se forma slo en aerobiosis, no in
vivo. El proceso de esporulacin se realiza siempre fuera del animal infectado, en medios de cultivo forman cadenas largas
de extremos cncavos y algo hinchados, de aspecto comparado con una caa de pescar de bamb grueso.
La cpsula es producida por cepas virulentas de Bacillus anthracis y pueden observarse en frotis de animales inoculados o
incubados en anaerobiosis .

II.

COMPETENCIAS

Conocer los procedimientos de aislamiento e identificacin de las principales especies del gnero Bacillus sp.
Observa e identifica el comportamiento de las bacterias que pertenecen al gnero Bacillus

III. MATERIALES Y MTODOS


MATERIALES
De la muestra y su procedencia:
El B. anthracis puede ser aislado en caso de enfermedad humana, de lesiones cutneas, sangre (en septicemias) y
esputo.
En caso de animales muertos por la enfermedad el germen se puede aislar de sangre y vsceras.
Materiales
Tubos estriles.
Lminas portaobjetos nuevas, limpias y desengrasadas.

Placas con agar para anaerobios


Placas con agar sangre

Tubos con agar SIM.


Hisopos.
Asas

Mecheros

Gradillas
PROCEDIMIENTO
Examen directo:

Con las muestras obtenidas, realizar los extendidos y colorearlos con GRAM
Observar que el germen se presenta en el producto patolgico como un bacilo Gram positivo de 5 a 10 micras de
largo por 1 a 3 micras de ancho. Capsulado. No esporulado. Inmvil. Puede encontrarse elementos aislados o
dispuestos en cortas cadenas. Un elemento de inters son los extremos cortados en escuadra.

Esquema de la Prctica: Aislamiento:

Inocular la muestra en una placa con agar para microorganismos anaerobios y en placas con agar sangre, sembrar

por agotamiento e incubar por 18 horas a 35 C en atmsfera normal.


Observar que la colonia del B. anthracis es bastante grande y presenta bordes desflecados (Melena de len).
Inocular la muestra en un tubo con caldo TSA,
Anotar que el germen crece con suma facilidad y en forma precoz en los medios ms simples. A los 24 horas tanto en
medios lquidos como en medios slidos, puede encontrarse largas cadenas ya con elementos esporulados (espora

central, oval no deformante). Bacillus sp, sin embargo pierde la capsula con prontitud en medios de cultivo.
En medio liquido: Desarrollo sin turbidez con abundante sedimento, que en el fondo semeja un pedazo de algodn

sumergido
Inocular la muestra en medio SIM, sembrar por picadura e incubar por 18 horas a 35 C en atmsfera normal
En medio SIM sembrada por picadura, observar prolongaciones que toman a la lnea de puntura como eje; el conjunto
sume la apariencia de un pino invertido.

III. RESULTADOS y DISCUCIN


EN AGAR SANGRE: Las colonias aisladas de B. anthracis tienen un dimetro de 2 a 5 mm, son planas o
ligeramente convexas, redondas en forma irregular con los bordes ligeramente ondulados y tiene una apariencia de
vidrio pulido, Se observa la presencia de pequeas proyecciones en los bordes de las colonias, que se describe
como cabellera de meduza.
Las colonia de B. anthracis son no hemolticas mientras que las colonias de otros bacillus como B. cereus, B.
thuringiensis son B-hemoliticos.
COLORACION GRAM: B. anthracis es un bacilo gram positivo largo (1 1.5 X 3.5 um), con esporas ovales
centrales o subterminales. La esporas no se observan en muestras clnicas.

IV. CONCLUSIONES.
V. CUESTIONARIO.
a

Con qu grmenes puede ser confundido el B. anthracis?

Cules son las diferencias fundamentales?

Qu criterios permiten identificar con seguridad B. anthracis?

ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA


PRACTICA N 13: CONTENIDO TEMATICO PROCEDIMENTAL: GENERO CLOSTRIDIUM
I.

INTRODUCCIN
Clostridium tetani es un bacilo gram positivo,[] formador de esporas, y anaerobio. Se encuentra en la naturaleza como
esporas en el suelo o como parsito en tracto gastrointestinal de animales, es causante de intoxicacin grave en los
humanos, provoca la enfermedad del ttanos, generalizado: ttanos ceflico, ttanos de las heridas y ttanos neonatal.
Durante el crecimiento vegetativo del organismo, no sobrevive en presencia de oxgeno, es sensible al calor y posee un
flagelo que le provee motilidad. A medida que la bacteria madura, desarrolla una endospora terminal, que le da al
microorganismo su apariencia caracterstica como palillo de tambor.

II.

COMPETENCIAS

Conocer los procedimientos de aislamiento e identificacin de las principales especies del gnero Clostridium
Observa e identifica el comportamiento de las bacterias que pertenecen al gnero Clostridium

III. MATERIALES Y MTODOS


MATERIALES
De la muestra y su procedencia:
C. tetani puede aislarse en el ser humano, a partir de las lesiones infectadas por el germen.
El germen goza de ubicuidad y es fcil aislarlo de la tierra y del estircol.
Examen directo:
Los productos patolgicos contienen por lo general muy escasos grmenes.
Aislamiento:
Procedimientos, medios de cultivo y fundamentos:

Emplear medios o ambientes anaerbicos. La presencia de esporas, permite por otro lado calentar la muestra hasta
limites en que desaparecen las formas vegetativas y en general, los grmenes no esporulados.
Mtodo de Kitasato:

Calentar la muestra provista de cantidad suficiente de lquido a 80C de 5 a 10 minutos.

Sembrar en los medios especiales

Incubar a 37C.

Observar a parir de las 24 horas.

Tambin son empleado los medios lquidos a base de thioglicolato de sodio y los que, como el que llevan trocitos de
rganos o carne molida, que al consumir el oxgeno del medio, crean un ambiente de anaerobiosis.
Esquema de la prctica:
a Observar lminas coloreadas del germen esporulado.
b

Observar cultivos del germen en agar para anaerobios, Agar Sangre, Thioglicolato. Hacer coloraciones a partir
de dichos cultivos.

c Conocer las placas de Brewer y los frascos de anaerobiosis.

CUESTIONARIO
a Qu efecto producira la ingestin de un cultivo virulento de Cl. tetani?

Qu valor tendra un examen directo y en cultivo negativo para Cl. tetani, en un paciente con un cuadro clnico tpico de
ttanos?