Professional Documents
Culture Documents
LABORATORIO DE INMUNOLOGIA
Ciclo 2011 B
PROFESOR: DRA. MARY FAFUTIS MORRIS
INSTRUCTOR: EDUARDO NAVARRETE
AUTORES
ii
iii
INDICE
AUTORES ........................................................................................................................... ii
REGLAMENTO INTERNO DEL LABORATORIO DE INMUNOLOGIA ....................... iii
INDICE ................................................................................................................................ iv
ORGANOS Y CELULAS DEL SISTEMA INMUNE ..........................................................1
(MODELO MURINO)1
INFLAMACIN.....................................................................................................................7
REACCION ANTIGENO-ANTICUERPO ........................................................................ 14
COMPATIBILIDAD SANGUINEA ..................................................................................... 20
INMUNOLOGA DEL CNCER ........................................................................................ 25
HIPERSENSIBILIDAD RETARDADA .............................................................................. 32
TRASPLANTE .................................................................................................................... 38
EVALUACIN .................................................................................................................... 45
iv
INTRODUCCIN
El sistema Inmunolgico lo constituyen las clulas y molculas responsables de emitir
una respuesta inmune.
Este sistema incluye a los rganos linfoides y a los elementos de la circulacin
sangunea y linftica que llevan a cabo una respuesta colectiva y coordinada contra una
sustancia extraa conocida como antgeno como son los virus, bacterias, hongos,
alergenos entre otros (1).
rganos linfoides. En los mamferos los rganos linfoides estn representados por el
timo, la medula sea, el bazo, las amgdalas, los ganglios linfticos, el apndice
ileocecal y las placas de Peyer. En aves existe un rgano adicional llamado Bolsa de
Fabricio .
Los rganos linfoides se clasifican en dos grandes grupos: los primarios o centrales
(medula sea, timo y bolsa de Fabricio) es en los rganos linfoides primarios donde los
linfocitos expresan los primeros receptores antignicos y donde completan su madurez
funcional, los secundarios o perifricos (bazo, amgdalas, ganglios linfticos, apndice,
ileocecal y las placas de Peyer), aqu se inicia y desarrolla la respuesta de los linfocitos
ante antgenos extraos. Existe adems tejido linfoide que no se encuentra limitado por
una cpsula de tejido conectivo. Este es el tejido linfoide polidisperso que se encuentra
asociado a las mucosas (MALT), principalmente en la regin subepitelial en el tejido
linfoide encapsulado y en menor grado en el polidisperso, las clulas linfoides se
encuentran contenidas por el tejido de sostn formado por las clulas y fibras
reticulares(1,4).
En los rganos linfoides primarios o centrales, las clulas del tejido linfoide terminan su
proceso
de
diferenciacin
y/o
maduracin
inmunolgicamente
competentes. En los rganos linfoides secundarios o perifricos, las clulas del tejido
linfoide hacen contacto con el antgeno, proliferan en respuesta al estmulo antignico, y
Bibliografa
1.- Abul K.Abbas Cellular and Molecular Immunology, Fourth Edition, pags. 17-35, Saunders.
2.- Charles A. Janaway Immunobiology, Fifth Edition, pags. Garland
3.- Fisiologa de Guyton
4.- Manual del curso Terico-Prctico de Inmunologa, pags. 31-37, Mexico, D.F. 2001
Objetivo de la prctica
El alumno deber ser capaz de localizar e identificar los rganos ms aparentes del
sistema inmunolgico (bazo y timo) e identificar las clulas de origen linfoide.
MATERIAL Y PROCEDIMIENTOS
Material que proporcionara el laboratorio
Material Biolgico
Ratones Balb-C
Reactivos
Materiales
Pipetas Pasteur
Solucin salina
Cajas de petri
PBS
Bulbos de succin
Alcohol
Portaobjetos
Azul de tripano
Cubreobjetos
Lquido de Turk
Charola de diseccin
Mtodos y procedimientos
Se limpiar la superficie rasurada del animal con una torunda empapada con
alcohol.
Observar los rganos protegidos por la cavidad torcica, localizar la posicin del
timo (este se encuentra en el mediastino, descansando sobre la parte apical del
corazn, en la regin anterior de los grandes vasos).
Una vez extrado el bazo depositarlo en la caja de Petri, que contiene 3 ml con
PBS, este se homogenizar con la ayuda de dos agujas de jeringa.
Resultados
Dibujos
Conclusiones
INFLAMACIN
INTRODUCCION
La inflamacin es una reaccin compleja del sistema inmune innato en los tejidos
vascularizados, tradicionalmente se ha definido como calor, dolor, rubor y tumor lo cual
refleja los efectos de citocinas sobre los vasos sanguneos locales. Se caracteriza por
vasodilatacin, aumento de la permeabilidad de los capilares, acumulacin de lquidos
en los espacios intersticiales, migracin de granulocitos y monocitos en el sitio de
infeccin, exposicin a toxinas o incluso simplemente frente a lesiones fsicas. La
dilatacin e incremento de permeabilidad vascular durante la inflamacin conducen al
aumento de flujo sanguneo y la prdida de lquido lo cual influye en el calor,
enrojecimiento e hinchazn. La migracin de clulas al tejido y sus acciones locales
tienen que ver con el dolor.
Las clulas del sistema inmune innato desempean un papel especfico en la respuesta
a los microorganismos, algunas de estas clulas en especial los macrfagos y las
clulas NK, secretan citocinas que activan a los macrfagos y estimulan la inflamacin,
el reclutamiento de leucocitos al sitio de la infeccin y su activacin permiten la
eliminacin del agente infeccioso.
Los neutrfilos y los macrfagos reconocen los microorganismos por medio de diversos
receptores que actan estimulando la migracin de las clulas al sitio de la infeccin,
promoviendo la fagocitosis y estimulando la produccin de sustancias microbicidas que
destruyen las bacterias.
En general los neutrfilos migran con mayor rapidez que los macrfagos, son las
primeras clulas que aparecen en los focos de inflamacin aguda debida a los procesos
infecciosos. Durante varios das son el tipo de clula predominante. A partir del primer
da comienzan a acudir a la zona inflamada fagocitos mononucleares y algunos
linfocitos. Por ltimo llegan las clulas T CD8+ y algunas clulas B.
Las respuestas inmunitarias adaptativas locales pueden estimular la inflamacin.
Aunque stas tienen una funcin protectora en el control de las infecciones y la
de la
estimulacin de citocinas y est mediado por los receptores leucocitarios y por los
ligandos endoteliales de estos receptores. Las citocinas de mayor importancia en esta
reaccin son el TNF y las quimiocinas, que producen los macrfagos, las clulas
endoteliales y otras clulas en respuesta a la infeccin. El TNF estimula a las clulas
endoteliales para que expresen secuencialmente diferentes molculas que median la
fijacin de diversos tipos de leucocitos. Transcurridas una o dos horas de la exposicin
al TNF, las clulas endoteliales expresan selectina E, que inicia la unin de los
neutrfilos y de otros leucocitos a las vnulas en los sitios de inflamacin.
En presencia de flujo sanguneo, los leucocitos laxamente adheridos son impulsados de
tal manera que se desplazan (rodamiento) a lo largo de la superficie endotelial. La
molcula de adhesin vascular 1 (V-CAM), el ligando de la integrina (VLA-4), la
molcula de adhesin intercelular (ICAM-1), y los ligandos de integrinas LFA-1 y Mac-1
aparecen en el endotelio 6-12 horas despus de la exposicin del TNF. Las integrinas
median la fijacin estable de los leucocitos (monocitos y clulas T) al endotelio seguida
de su migracin a travs de los espacios interendoteliales al tejido extravascular.
Las quimiocinas tambin participan en el reclutamiento de los leucocitos al sitio de
inflamacin, son sintetizadas por macrfagos, clulas T estimuladas por antgeno y
clulas endoteliales estimuladas por TNF e IL-1. Las qumiocinas aumentan la afinidad
de las integrinas leucocitarias por sus ligandos, lo que estabiliza la fijacin de los
leucocitos al endotelio y promueve la subsiguiente extravasacin. Una vez que los
leucocitos penetran a los tejidos, las quimiocinas estimulan la migracin dirigida o
quimiotaxis de las clulas hacia un gradiente de concentracin de citocinas creciente.
Bibliografa:
1.- Schaible, U.E., Collins, H.L., Kaufmann, S.H.E. Confrontation between intracelular bacteria
and the immune system. Advances in Immunology 71: 267-377, 1999.
2.- Luster, A.D. Chemokines-Chemotactic Cytokines that mediate inflammation. New England J.
med. 338(7): 436-445, 1998.
3.- Janeway, C.A., Travers, P., Walport, M., Capra, J.D. Immunobiology. Fourth Edition. Chapter
1: Basic Concepts in Immunology. 1-33, 1999.
4.- Abbas, A.K., Lichtman, A.H., Pober, J.S. Cellular and Molecular Immunology. Fourth Edition.
Chapter 12:
, 2000.
5.- Roitt, I., Brostoff, J., Male, D. Inmunologa. Quinta Edicin. Captulo 5: Migracin celular e
inflamacin. 62-68, 2000.
Objetivo de la prctica
El alumno identificar las clulas del sistema inmune en respuesta a una lesin
inflamatoria y a su vez conocer el efecto inflamatorio sobre el ndice de sedimentacin
globular.
MATERIAL Y PROCEDIMIENTOS
Materiales
Colorante Wrigth-Giemsa
Cubre-objetos
Alcohol
Portaobjetos
Agua destilada
Cajas de petri
Aplicadores de madera
Tubos con anticoagulante EDTA
Tubos Wintrobe
Pipetas Pasteur
Mtodos y procedimientos.
Primera Parte.
La primera parte consistir en evaluar la respuesta inflamatorio mediante:
10
B) Inflamacin local.
Se colocar un cubre objetos sobre la lesin y se fijar con una cinta adhesiva
microporo.
El cubre objetos ser cambiado a las 2, 6, 12, 24 y 48 hrs marcando cada uno de
ellos.
Segunda Parte.
La segunda parte consistir en teir los cubreobjetos producto de la inflamacin local
con el colorante Wrigth- Geimsa.
TINCIN DE WRIGHT-GIEMSA
11
Eliminar el colorante.
Agregar unas gotas de agua destilada sobre el cubre objetos, cuidando que el
colorante no se derrame.
Observar al microscopio.
12
Resultados
Dibujos
Conclusiones
13
REACCION ANTIGENO-ANTICUERPO
INTRODUCCION
Los anticuerpos son protenas que se producen por los linfocititos B en respuesta a la
presencia de un cuerpo extrao (virus, bacterias, hongos, alergenos etc) que
comnmente se denomina antgeno.
Los anticuerpos se pueden encontrar de dos maneras en forma soluble en el torrente
sanguneo y fluidos corporales o bien formando parte integral en la membranas
celulares.
Los anticuerpos tambin llamadas inmunoglobulinas se clasifican en diferentes
grupos y subgrupos como son IgG, IgM, IgA, IgE e IgD algunos de estos se clasifican
en subgrupos.
Una de las caractersticas mas importantes de los anticuerpos esta ntimamente
relacionada con:
a) Especificidad. Por lo general los Ac tienen una gran especificidad de reaccin con
determinado Ag. Variaciones mnimas en la constitucin del Ag van a inducir produccin
de Ac diferentes.
Durante el proceso de respuesta inmune la especificidad de este tipo de reaccin va
aumentando gradualmente. En una primera etapa un Ag va a desencadenar la
produccin de IgM, que puede tener una afinidad incompleta por el Ag. Pero a medida
que progresa la reaccin inmune se inicia la sntesis de IgG que suele ser mucho ms
especfica contra el Ag. En consecuencia, puede darse que en una respuesta inmune
primaria se produzcan Ac de la clase de IgM que puedan reaccionar con diferentes Ag
siempre y cuando la diferencia en las molculas o en la secuencia de aminocidos no
sea muy grande, a medida que progresa la respuesta inmunitaria, el Ac de la clase IgG
es ms exquisito y va a reconocer en forma muy estricta los diferentes Ag.
b) Afinidad. Es la fuerza de atraccin entre sus estructura complementarias que llevan
a unirlas entre s, sin uniones covalentes.
La configuracin de la molcula de Ac y la posicin del eptope en la molcula
inmunognica puede modificar el grado de afinidad. Es un concepto que suele
14
las
glicosiltransferasas,
trasfieren
N-acetil-galactosa
galactosa,
15
Bibliografa
1.- Janeway, C.A., Travers, P., Walport, M., Capra, J.D. Immunobiology. 5 th Edition. Chapter 1:
Basic Concepts in Immunology. 1-33, 2001.
2.- Abbas, A.K., Lichtman, A.H., Pober, J.S. Cellular and Molecular Immunology. Fourth Edition.
Chapter 12:
, 2000.
3.- Lung-Chin Yu, Yuh-Ching Twu. Molecular genetics analisis for the B3 allele. Blood 2002 1004; 1490-1492
4.- Franz F Wagner, Bright Lewing The DNA Allele Cluster of the rHD gene Blood 2002 100:
305-311
5.- Juan Luis Vives. Manual de tcnicas de laboratorio en hematologa. Editores S. 1988
Barcelona Espaa.
16
Objetivo de la prctica
El alumno observar la reaccin antgeno-anticuerpo mediante aglutinacin eritrocitaria
en respuesta a anticuerpos contra grupos sanguneos.
MATERIAL Y PROCEDIMIENTOS
Material que proporcionara el laboratorio
Reactivos
Materiales
Anticuerpos Anti-A
Lanceta
nticuerpos Anti-B
Aplicadores de madera
Anticuerpos Anti-D
Portaobjetos
Alcohol
METODOS Y PROCEDIMIENTOS
Se adicionar una gota de cada uno de los reactivos a cada gota de sangre
respectivamente .
Suero anti-B
Grupo Sanguneo
AB
18
Resultados
Dibujos
Conclusiones
19
COMPATIBILIDAD SANGUINEA
INTRODUCCIN
Las pruebas de compatibilidad son fundamentales para garantizar la ausencia de
anticuerpos sricos del paciente capaces de reaccionar con los antgenos de los
glbulos rojos transfundidos. En trminos generales, la prueba cruzada consiste de una
serie de procedimientos llevados a cabo antes de la transfusin para determinar la
seleccin apropiada de la sangre para un paciente y para detectar cualquier anticuerpo
irregular en el suero del receptor, que reduzca los efectos adversos de los eritrocitos
despus de una transfusin.
Para determinar la compatibilidad sangunea, existen 2 pruebas: a) La prueba mayor, la
cual involucra los eritrocitos del donador con el suero del receptor y b) la prueba menor,
que involucra los eritrocitos del receptor con el suero del donador. Los estndares de la
Asociacin Americana de Bancos de Sangre de la FDA, indican que las pruebas
pretransfucionales incluyan en la prueba mayor un mtodo que demuestre aglutinacin,
sensibilizacin y hemlisis por anticuerpos, siendo la prueba de eleccin la
antoglobulina. La prueba de antiglobulina indirecta o comunmente llamada Prueba de
Coombs, es un mtodo de aglutinacin en tubo en el cual el suero antiglobulnico
demuestra la combinacin de los anticuerpos incapaces de provocar aglutinacin
directa, con los receptores eritrocitarios correspondientes; esta prueba consiste de tres
pasos: sensibilizacin e incubacin, lavado y agregado del reactivo antiglobulnico. En
la sensibilizacin se incuba el suero y los eritrocitos a 37C, si se utilizan eritrocitos
suspendidos en solucin salina, la incubacin es de 45 60 minutos, pero si se utiliza
solucin salina de baja potencia inica se reduce a 15 minutos porque la fijacin de los
anticuerpos a la clula se acelera. El lavado es fundamental porque debe eliminar todo
vestigio de suero de los glbulos rojos, el pH de la solucin salina debe ser de 6.5-7.5,
en el caso contrario, el lavado podra remover los anticuerpos que recubren a los
eritrocitos. Los reactivos antiglobulnicos deben usarse de acuerdo a las instrucciones
20
del fabricante. La prueba de antiglobulina directa se realiza para saber si los glbulos
rojos del paciente se recubren de anticuerpos in vivo. Este fenmeno es inusual y tiene
lugar en la anemia hemoltica autoinmune, las reacciones transfusionales hemolticas y
la enfermedad hemoltica del recin nacido, en esta prueba los eritrocitos no se incuban
con suero, sino que se lavan y mezclan con reactivos antiglobulnicos, es decir se
evala de forma directa.
Existen otras pruebas como la de albmina, la cual no es tan sensible como la prueba
de antiglobulina indirecta. No obstante cuando es difcil obtener antiglobulina o cuando
se emplean ciertos reactivos anti-D, puede utilizarse. La adicin de albmina bovina a la
prueba favorece las condiciones para la deteccin de anticuerpos anti-Rh y de otros
anticuerpos contra antgenos de eritrocitos, la albmina incrementa la constante
dielctrica del medio y es importante para detectar la mayora de los anticuerpos IgG.
BIBLIOGRAFA:
1.-Mary Lovise Turgeon. Immunology and Serology in Laboratory Medicin. Editorial Mosby,
segunda edicin. Mxico; 1996.
2.- Noel R. Rose. Manual of Clinical Laboratory Immunology. ASM PRESS, quinta edicin.
Washington, USA; 1997.
3.- Neville J. Bryant. An Introduction to Immunohematology. W.B. Saunders Company, segunda
edicin. USA; 1982.
21
Objetivo de la prctica.
El alumno determinar por medio de pruebas cruzadas mayor y menor, la
compatibilidad o la incompatibilidad sangunea, mediante la reaccin de aglutinacin.
MATERIAL Y PROCEDIMIENTOS
Material que proporcionar el laboratorio
Reactivos
Material
Tubos de ensaye.
Suero de Coombs
Pipeta Pasteur.
Material biolgico
Sangre perifrica extrada de alumnos voluntarios.
Material
Jeringa desechable de 5 mL.
MTODOS Y PROCEDIMIENTOS:
Agitar cuidadosamente.
22
Agitar cuidadosamente.
23
Resultados
Dibujos
Conclusiones
24
25
anticuerpos se usan para monitorear el curso del tumor, sin embargo, los antgenos
reconocidos por linfocitos T parecen ms relevantes en el rechazo de los tumores.
Tomando como referencia la avidez de los linfocitos T por sus antgenos estos se
clasifican en cuatro grupos. El primer grupo incluye a los antgenos presentes
solamente en un tumor especfico de un paciente (mutaciones somticas). El segundo a
antgenos especficos de tumor, pero que se identifican en diferentes individuos
(ejemplo antgenos virales). Por su parte los antgenos del grupo tres, comprende a
productos de genes normales con una distribucin restringida en los tejidos. Finalmente
el cuarto grupo abarca antgenos compartidos en los tejidos, lo cual implica un
reconocimiento autoreactivo (4).
En forma breve podemos decir que las clulas cancerosas pueden se reconocidas y
destruidas por anticuerpos (activacin del complemento o citotoxicidad celular mediada
por anticuerpos), linfocitos CD8+, linfocitos TCD4+, clulas NK y otros componentes de
la inmunidad innata . Sin embargo, los tumores burlan estas respuestas a travs de los
mecanismos de evasin. Estos mecanismos incluyen alteraciones en el procesamiento
antignico, defectos en la co-estimulacin y la actividad de molculas supresoras, entre
otros muchos mecanismos de evasin (5).
Uno de los retos de la inmunologa del cncer implica vencer o contrarestar los
mecanismos de evasin, al tiempo que se estimula o transfiere formas eficientes de
respuesta inmune contra las clulas tumorales. La inmunoterapia del cncer contempla
diferentes herramientas que incluye el uso de antgenos (lisado de tumor, protenas
tumorales, pptidos sisntticos y ADN), clulas activadas (dendrticas, clulas
citotxicas T y NK), anticuerpos y citocinas conjugadas o modificadas y el empleo de
herramientas de terapia gnica (6).
El ao 2020 no est tan lejanos de nuestras vidas y de la nuestros hijos, esperemos
que para entonces la inmunologa del cncer participe en el control del cncer.
26
Bibliografa
1.- National Cancer Control Programmes. World Health Organization 2002.2.- Direccin de
Planeacin, Secretara de Salud, Mxico. 2002.
3.- Hanahan D, Weinmerg RA: The Hallmark of cancer. Cell. 2000; 100: 57-70.
4.- Gilboa E: The makings of a tumor rejection antigen. Immunity. 1999; 11: 263-270.
5.- Yee C: Modulating T-cell immunity to tumours: new strategies for monitoring T-cell
responses. Nature Reviews Cancer. 2002; 2:409-419.
6.- Daneri-Navarro A., Del Toro-Arreola A., Garca-Velazco J.C., Del Toro- Arreola S., OrbachArbouys S., Bravo-Cuellar A.: L-5178-Y Lymphoma associated immunosuppression in Balb/c
mice. Biomed and Pharmacother, 1995; 49: 39-44.
27
Objetivo de la prctica
Comprender los mecanismos que utilizan las clulas tumorales para evadir la respuesta
inmune, a travs de la supresin de la reaccin de hipersensibilidad retardada al DNFB
en un modelo de ratones con linfoma murino L-5178-Y.
28
MATERIAL Y PROCEDIMIENTOS
Material biolgico.
Ratones cepa Balb/c
Linfoma L5178Y
Reactivos
Material
Mtodos y procedimientos.
a) Inoculacin del tumor.
-
Marcar a los ratones para diferenciar al ratn experimental del ratn control
29
30
Resultados
Dibujos
Conclusiones
31
HIPERSENSIBILIDAD RETARDADA
INTRODUCCIN
El reconocimiento y eliminacin de un agente infeccioso o algn otro antgeno extrao,
son el resultado biolgico de los mecanismos humorales y celulares de la respuesta
inmune. Sin embargo, la re-exposicin a un mismo antgeno en individuos previamente
sensibilizados, puede conducir a una respuesta exacerbada que resulta en dao tisular
o en una manifestacin sistmica. Las respuestas inmunes que resultan en dao tisular
u otros cambios fisiopatolgicos son llamadas reacciones de hipersensibilidad.
32
reconocern a la protena modificada como algo extrao y van a montar una respuesta
especfica contra ellas; al final de la respuesta, algunos linfocitos se van a diferenciar
hacia clulas de memoria. S posteriormente, el animal es expuesto nuevamente al
agente con el que previamente se sensibiliz, una reaccin de hipersensibilidad
caracterizada por induracin y enrojecimiento del tejido daado, aparecer 24 a 48
horas despus del reto.
Bibliografa:
1.- Van Houwelingen AH., de Jager SCA., Kool M., van Heuven-Nolsen D., Kreneveld AD.,
Nijkamp FP. Hypersensitivity reactions in mouse airways after a single and a repeated hapten
challenge. Inflamm Res 2002; 51:63-68.
2.- Black CA. Hipersensibilidad retardada: teoras actuales con una perspectiva histrica.
Dermatology Online Journal; 5(1): 7.
3.- Abbas A., Litchman A., Pober J. Effector mechanism of cell-mediated immunity in: Cellular
and Molecular Immunology, Fourth Edition, Ed.Saunders, 2000.
4.- Dhabhar FS, Satoskar AR, Bluethmann H, David JR and McEwen BS. Stress-induced
enhancement of skin immune function: A role for gamma-interferon. PNAS 2000; 97 (6): 28462851.
5.-Dhabhar FS. Acute stress enhances while chronic stress suppresses skin immunity: The role
of stress hormones and leukocyte trafficking. Annals of the New York Academy of Sciences
2000; 917: 876-893.
33
Objetivo de la prctica
El alumno identificar las diferentes fases de una reaccin de hipersensibilidad
retardada.
MATERIAL Y PROCEDIMIENTOS
Material que proporcionar el laboratorio
Material biolgico
Ratones macho de la cepa BALB/c de ocho semanas de edad
Reactivos
Materiales
Dinitrofluorobenceno
Micrmetro de precisin
Acetona
Aplicador de plstico.
Aceite de oliva
Mtodos y Procedimientos.
34
Esquema de trabajo
Hipersensibilidad retardada al dinitrofluorobenceno
1
a
Problema
1 sensib
DNFB
0.5%
(20 l)
a
Control
1 aplic
SSF 0.9%
0.5%
(20 l)
Medici
Medicin
n
Basal
basal
del
pabell
n
2
a
2 sensib
DNFB
0.5%
(20 l)
a
2 aplic
SSF 0.9%
0.5%
(20 l)
5
Reto con
DNFB
0.2%
(10 l)
Reto con
DNFB
0.2%
(10 l)
Medicin
Medici
Final
n final
del
.pabell
n
35
Resultados
Dibujos
Conclusiones
36
Cuestionario:
37
TRASPLANTE
INTRODUCCIN
Esta sustitucin con fines curativos de un rgano que presenta una disfuncin
irreversible por otro procedente de un cadver o de un donante vivo ha sido uno de los
avances ms importantes de la medicina en la segunda mitad del siglo XX. Sin embargo
el xito del transplante como teraputica ha creado un nuevo problema: la demanda de
rganos para transplante es muy superior a la disponibilidad actual.
Los trasplantes, como casi todo, pueden clasificarse siguiendo diferentes criterios,
siendo los ms frecuentes: la naturaleza del material trasplantado, la naturaleza del
donante y el lugar en el que se implanta el trasplante
Transplante de piel
La piel es el rgano encargado de proporcionar la interfaz entre el cuerpo humano y el
medio ambiente, por lo que es un determinante esencial en la homeostasis del cuerpo;
controla los niveles de temperatura y el ndice de intercambio de fluidos con el exterior,
y proporciona un mecanismo de defensa esencial contra microorganismos invasores. El
alto nivel de especializacin de la piel destaca por la observacin de que prcticamente
todos los antgenos se encuentran en la piel, lo que hace del trasplante de piel una
prueba de histocompatibilidad in vivo muy rigurosa. La localizacin intralinftica del
39
La evolucin por das se ha observado como sigue: Los primeros das despus de
efectuado el trasplante no se observan grandes diferencias en la apariencia de los
aloinjertos y autoinjertos de piel. En las primera 24 hrs. Todos los injertos estan plidos,
en el segundo da desarrollan manchas de color rosado. Para el tercero o cuarto da se
vuelven de color rosado uniformes. Entre el quinto y sexto das en los autoinjertos
disminuye el eritema y el edema iniciales, hay regeneracin epidrmica y fusin gradual
40
del injerto con la piel del husped. En cambio, en los aloinjertos reaparece un alo de
eritema y edema entre el sexto y sptimo das cuya intensidad se incrementa durante
los siguientes das. Para el octavo y noveno das, su color cambia a rojo cereza
progresando a cianosis franca. En los aloinjertos hay escasa regeneracin epidrmica
y la unin con la piel circundante es mnima. Progresivamente se vuelven ms
edematosos y de color rosa. Los eventos de rechazo progresan rpidamente, se
presenta punteado trombotico seguido de hemorragia y escarificacin. El aloinjerto se
convierte en una escara negra que se esfcela, dejando una almohadilla drmica
residual cubierta por una capa translucida de epidermis husped, el cese del flujo
sangunea se acepta como punto final del rechazo del injerto. En contraste, los
autoinjertos gradualmente se cubren con epidermis nueva brillante que incrementa su
grosor progresivamente. Desde le tercero o cuarto da hay un gran numero de vasos de
calibre pequeo por los que fluye la sangre rpidamente, y para el vigsimo da
despus del trasplante, el patrn vascular del autoinjerto, es similar al de la piel
circundante.
Bibliografa
1. Hakim NS. Papalois VE. History of Organ and cell trasplantation. 2002. St. Marys
Hospital London.
2. Norman DJ, Turka LA, Primer on Trasplantation. 2001. American Society of
Trasplantation.
3. Tejani AH, Harmon WE, Fine RM Pediatric Solid Organ Trasplantation.2002.
Munksgaard.
4. Ginns GC, Cosimi AB, Morris TJ Trasplantation. 1999. Blackwell Science
5. Santiago-Delpin EA, Ruiz-Speare JO Trasplante de Organos. 1999
41
Objetivo de la prctica
El alumno identificar los efectos de un transplante de piel singnico, alognico y
autlogo en un modelo murino.
MATERIAL Y PROCEDIMIENTOS
Material que proporcionar el laboratorio
Material biolgico
Ratones de la cepa Balb-C, DBA.
Reactivos
Material
Cajas de Petri
Ketamina (anestsico)
Pipetas Pasteur
Solucin fisiolgica.
Bulbos de succin.
Mtodos y Procedimientos.
Ketamina va intra peritoneal (I. P), y se proceder a rasurar el dorso del ratn
42
Una vez delineada la piel se proceder a cortar con bistur o bien con tijeras
curvas pequeas.
La pie separada del dorso de los ratones se depositar en cajas de petri la cual
contiene 3 ml de solucin salina fisiolgica 0.9% (SSF) a temperatura ambiente
(TA) cuidando que en ningn momento se seque el fragmento de la piel y la zona
en donde fue retirada la piel.
Se fija con puntos de sutura de seda 3-0 cuidando que el tejido quede adherido a
la superficie del implante.
43
Resultados
Dibujos
Conclusiones
44
EVALUACIN
Nombre:
Cdigo:
Correo Electrnico:
Telfono: ____________________________________________
Carrera:
Horario:
FOTO
Profesor:
Profesor de laboratorio:
1
2
3
4
PRACTICAS
tica en el manejo de animales de
laboratorio.
rganos del Sistema Inmune
(modelo murino)
Inflamacin
Inflamacin
2. parte
Reaccin Antgeno- Anticuerpo
Pruebas cruzadas
Inmunidad de tumores
Hipersensibilidad Retardada
TOTAL
Transplante
1.parte
10 Transplante
2.parte
EVALUACIN
A.- ASISTENCIA
P.- PARTICIPACION
R.- REPORTE DE PRCTICA
45