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MANUAL DE PRCTICAS

LABORATORIO DE INMUNOLOGIA
Ciclo 2011 B
PROFESOR: DRA. MARY FAFUTIS MORRIS
INSTRUCTOR: EDUARDO NAVARRETE

Propiedad Intelectual de la Academia de Inmunologa


Registro ISBN en trmite

AUTORES

Alvarado Navarro Anabell


Daneri Navarro Adrian
Del Toro Arreola Alicia
Del Toro Arreola Susana
Fafutis Morris Mary
Garca Iglesias Trinidad
Gonzlez Ramella Oscar
Guilln Vargas Cecilia M.
Ramrez Dueas Ma. Guadalupe
Snchez Hernndez Pedro Ernesto

ii

REGLAMENTO INTERNO DEL LABORATORIO DE


INMUNOLOGIA

1.- Acudir puntualmente el da y la hora sealada al laboratorio el da


de la prctica.
2.- Realizar lectura previa de la prctica correspondiente
3.- Llevar siempre su Manual de Prcticas
4.- Usar bata blanca durante la realizacin de la prctica.
5.- .Disciplina en el laboratorio.
6.- Traer su material que se especifica en cada prctica (en caso de no
hacerlo se suspender la prctica correspondiente).
7.- No fumar
8.- No consumir alimentos en el laboratorio.
9.- Seguir las instrucciones de los asesores de prcticas sobre el
manejo y la ubicacin de contenedores para los diferentes desechos:
a) Punzocortantes (botes rgidos)
b) Material biolgico y exudados (bolsa amarilla)
c) Material contaminado con residuos biolgicos (bolsa roja)
d) Basura comn (bolsa transparente)
10.- Dejar su lugar de trabajo LIMPIO
11.- Salir en orden del laboratorio de prcticas
12.- Usar bata blanca para entrar al BIOTERIO

iii

INDICE

AUTORES ........................................................................................................................... ii
REGLAMENTO INTERNO DEL LABORATORIO DE INMUNOLOGIA ....................... iii
INDICE ................................................................................................................................ iv
ORGANOS Y CELULAS DEL SISTEMA INMUNE ..........................................................1
(MODELO MURINO)1
INFLAMACIN.....................................................................................................................7
REACCION ANTIGENO-ANTICUERPO ........................................................................ 14
COMPATIBILIDAD SANGUINEA ..................................................................................... 20
INMUNOLOGA DEL CNCER ........................................................................................ 25
HIPERSENSIBILIDAD RETARDADA .............................................................................. 32
TRASPLANTE .................................................................................................................... 38
EVALUACIN .................................................................................................................... 45

iv

ORGANOS Y CELULAS DEL SISTEMA INMUNE


(MODELO MURINO)

INTRODUCCIN
El sistema Inmunolgico lo constituyen las clulas y molculas responsables de emitir
una respuesta inmune.
Este sistema incluye a los rganos linfoides y a los elementos de la circulacin
sangunea y linftica que llevan a cabo una respuesta colectiva y coordinada contra una
sustancia extraa conocida como antgeno como son los virus, bacterias, hongos,
alergenos entre otros (1).
rganos linfoides. En los mamferos los rganos linfoides estn representados por el
timo, la medula sea, el bazo, las amgdalas, los ganglios linfticos, el apndice
ileocecal y las placas de Peyer. En aves existe un rgano adicional llamado Bolsa de
Fabricio .
Los rganos linfoides se clasifican en dos grandes grupos: los primarios o centrales
(medula sea, timo y bolsa de Fabricio) es en los rganos linfoides primarios donde los
linfocitos expresan los primeros receptores antignicos y donde completan su madurez
funcional, los secundarios o perifricos (bazo, amgdalas, ganglios linfticos, apndice,
ileocecal y las placas de Peyer), aqu se inicia y desarrolla la respuesta de los linfocitos
ante antgenos extraos. Existe adems tejido linfoide que no se encuentra limitado por
una cpsula de tejido conectivo. Este es el tejido linfoide polidisperso que se encuentra
asociado a las mucosas (MALT), principalmente en la regin subepitelial en el tejido
linfoide encapsulado y en menor grado en el polidisperso, las clulas linfoides se
encuentran contenidas por el tejido de sostn formado por las clulas y fibras
reticulares(1,4).
En los rganos linfoides primarios o centrales, las clulas del tejido linfoide terminan su
proceso

de

diferenciacin

y/o

maduracin

que las hace

inmunolgicamente

competentes. En los rganos linfoides secundarios o perifricos, las clulas del tejido
linfoide hacen contacto con el antgeno, proliferan en respuesta al estmulo antignico, y

producen los efectores solubles de la respuesta inmune celular (citocinas) y de la


respuesta inmune humoral (anticuerpos).
Clulas del sistema inmunolgico: Todas las clulas del sistema inmunolgico se
desarrollan a partir de clulas pluripotenciales presentes en medula sea. La
diferenciacin de los glbulos blancos o leucocitos es a travs de dos vas principales:
La lnea linfoide que produce linfocitos T, linfocitos B y clulas NK (asesinas naturales o
natural killer), y la lnea mieloide que da lugar a los leucocitos polimorfonucleares (PMN)
neutrofilos, basofilos y eosinofilos, a las clulas cebadas, a los monocitos y macrfagos
del sistema inmunolgico; as como los eritrocitos y las plaquetas de sistema
hematolgico.
Existe una poblacin heterognea de leucocitos que tienen un papel fundamental en la
induccin de una respuesta inmune, denominada de manera general como clulas
presentadoras de antgeno, en la que se encuentran las clulas dendrticas, los
macrfacos y los linfocitos B.
Las clulas presentadoras de antgeno se derivan de medula sea, muy probablemente
de las mismas clulas pluripotenciales que las clulas linfoides y mieloides, aunque no
se ha definido con precisin cual es su clula hematopoyetica progenitora.
Linfocitos. Aunque morfolgicamente todos los linfocitos son parecidos en realidad
estas clulas constituyen una poblacin heterognea. Para empezar existen dos tipos
fundamentales de linfocitos: los linfocitos T, cuya diferenciacin y maduracin se
completa en el timo, y los linfocitos B que terminan su diferenciacin y maduracin en
la medula sea (o en la bolsa de Fabricio en las aves). Dentro de los linfocitos T se
distinguen dos subpoblaciones, los linfocitos T cooperadores (Th), y los linfocitos T
citotxicos (Tc) cuya funcin es destruir clulas blanco infectadas. Ms aun, en la
actualidad se reconocen al menos dos variedades de linfocitos T cooperadores, los
linfocitos Th1 y los linfocitos Th2. Mientras que los primeros se consideran responsables
de la respuesta inmune celular, los segundos se involucran ms con la respuesta
humoral o mediada por anticuerpos (1,2,4)
Los linfocitos Th2, a travs de los factores solubles que producen, estimulan la
proliferacin de los linfocitos B, su transformacin en clulas plasmticas y su
capacidad de sntesis de anticuerpos.

Bibliografa
1.- Abul K.Abbas Cellular and Molecular Immunology, Fourth Edition, pags. 17-35, Saunders.
2.- Charles A. Janaway Immunobiology, Fifth Edition, pags. Garland
3.- Fisiologa de Guyton
4.- Manual del curso Terico-Prctico de Inmunologa, pags. 31-37, Mexico, D.F. 2001

Principio bsico del mtodo


La respuesta inmune ante cualquier patgeno depende de los mecanismos efectores de
las clulas del sistema inmune, por lo tanto es importante conocer la estructura y
localizacin de los rganos generadores de estas clulas.

Objetivo de la prctica
El alumno deber ser capaz de localizar e identificar los rganos ms aparentes del
sistema inmunolgico (bazo y timo) e identificar las clulas de origen linfoide.

MATERIAL Y PROCEDIMIENTOS
Material que proporcionara el laboratorio

Material Biolgico
Ratones Balb-C
Reactivos

Materiales

Cloroformo o ter etlico

Pipetas Pasteur

Solucin salina

Cajas de petri

PBS

Bulbos de succin

Alcohol

Portaobjetos

Azul de tripano

Cubreobjetos

Lquido de Turk

Charola de diseccin

Material que deber traer el alumno


Estuche de diseccin
Navajas de rasurar
Gasas
2 jeringas de 5 ml.

Mtodos y procedimientos

Se sacrificar al ratn con cloroformo, y se colocar boca arriba sobre la charola


de diseccin y se fijarn sus extremidades con cinta adhesiva.

Se rasurar el abdomen de ratn con un bistur o navaja de rasurar.

Se limpiar la superficie rasurada del animal con una torunda empapada con
alcohol.

Se har una incisin longitudinal en la piel del animal, posteriormente se cortara


la membrana que recubre la cavidad peritoneal.

Se descubrir la cavidad torcica cortando la pared anterior de la misma


(incluyendo las costillas), cuidar de no daar los rganos internos.

Observar los rganos protegidos por la cavidad torcica, localizar la posicin del
timo (este se encuentra en el mediastino, descansando sobre la parte apical del
corazn, en la regin anterior de los grandes vasos).

Localizar el bazo en la cavidad peritoneal y proceder a su extirpacin, separar el


rgano cuidadosamente del tejido conectivo que lo fija al estmago y al intestino
delgado.

Una vez extrado el bazo depositarlo en la caja de Petri, que contiene 3 ml con
PBS, este se homogenizar con la ayuda de dos agujas de jeringa.

Con pipetas pasteur se colocar el homogeneizado en tubos de ensaye de 10 ml


y se centrifugar a 1500 RPM por 10 minutos a T.A (temperatura ambiente).

Una vez obtenido la poblacin celular se proceder a observar viabilidad con


20l solucin de azul de tripano al 3%

Para conteo y viabilidad se utilizar una (cmara de Neubauer) y una solucin de


liquido de Turk.

Resultados

Dibujos

Conclusiones

INFLAMACIN
INTRODUCCION

La inflamacin es una reaccin compleja del sistema inmune innato en los tejidos
vascularizados, tradicionalmente se ha definido como calor, dolor, rubor y tumor lo cual
refleja los efectos de citocinas sobre los vasos sanguneos locales. Se caracteriza por
vasodilatacin, aumento de la permeabilidad de los capilares, acumulacin de lquidos
en los espacios intersticiales, migracin de granulocitos y monocitos en el sitio de
infeccin, exposicin a toxinas o incluso simplemente frente a lesiones fsicas. La
dilatacin e incremento de permeabilidad vascular durante la inflamacin conducen al
aumento de flujo sanguneo y la prdida de lquido lo cual influye en el calor,
enrojecimiento e hinchazn. La migracin de clulas al tejido y sus acciones locales
tienen que ver con el dolor.
Las clulas del sistema inmune innato desempean un papel especfico en la respuesta
a los microorganismos, algunas de estas clulas en especial los macrfagos y las
clulas NK, secretan citocinas que activan a los macrfagos y estimulan la inflamacin,
el reclutamiento de leucocitos al sitio de la infeccin y su activacin permiten la
eliminacin del agente infeccioso.
Los neutrfilos y los macrfagos reconocen los microorganismos por medio de diversos
receptores que actan estimulando la migracin de las clulas al sitio de la infeccin,
promoviendo la fagocitosis y estimulando la produccin de sustancias microbicidas que
destruyen las bacterias.
En general los neutrfilos migran con mayor rapidez que los macrfagos, son las
primeras clulas que aparecen en los focos de inflamacin aguda debida a los procesos
infecciosos. Durante varios das son el tipo de clula predominante. A partir del primer
da comienzan a acudir a la zona inflamada fagocitos mononucleares y algunos
linfocitos. Por ltimo llegan las clulas T CD8+ y algunas clulas B.
Las respuestas inmunitarias adaptativas locales pueden estimular la inflamacin.
Aunque stas tienen una funcin protectora en el control de las infecciones y la

potenciacin de la reparacin tisular, tambin pueden causar lesin tisular y


enfermedad.
La evolucin de una reaccin inflamatoria aguda depende de la posibilidad de eliminar
el antgeno o el agente infeccioso. Cuando esto no es posible, la reaccin inflamatoria
evoluciona hacia la cronicidad. En estos casos escasean los neutrfilos pero se
acumulan grandes cantidades de clulas T CD4+ y fagocitos mononucleares. Las
reacciones frente a las enfermedades parasitarias suelen ir acompaadas de una
acumulacin de eosinfilos.
El proceso de migracin leucocitaria a los sitios de infeccin depende

de la

estimulacin de citocinas y est mediado por los receptores leucocitarios y por los
ligandos endoteliales de estos receptores. Las citocinas de mayor importancia en esta
reaccin son el TNF y las quimiocinas, que producen los macrfagos, las clulas
endoteliales y otras clulas en respuesta a la infeccin. El TNF estimula a las clulas
endoteliales para que expresen secuencialmente diferentes molculas que median la
fijacin de diversos tipos de leucocitos. Transcurridas una o dos horas de la exposicin
al TNF, las clulas endoteliales expresan selectina E, que inicia la unin de los
neutrfilos y de otros leucocitos a las vnulas en los sitios de inflamacin.
En presencia de flujo sanguneo, los leucocitos laxamente adheridos son impulsados de
tal manera que se desplazan (rodamiento) a lo largo de la superficie endotelial. La
molcula de adhesin vascular 1 (V-CAM), el ligando de la integrina (VLA-4), la
molcula de adhesin intercelular (ICAM-1), y los ligandos de integrinas LFA-1 y Mac-1
aparecen en el endotelio 6-12 horas despus de la exposicin del TNF. Las integrinas
median la fijacin estable de los leucocitos (monocitos y clulas T) al endotelio seguida
de su migracin a travs de los espacios interendoteliales al tejido extravascular.
Las quimiocinas tambin participan en el reclutamiento de los leucocitos al sitio de
inflamacin, son sintetizadas por macrfagos, clulas T estimuladas por antgeno y
clulas endoteliales estimuladas por TNF e IL-1. Las qumiocinas aumentan la afinidad
de las integrinas leucocitarias por sus ligandos, lo que estabiliza la fijacin de los
leucocitos al endotelio y promueve la subsiguiente extravasacin. Una vez que los
leucocitos penetran a los tejidos, las quimiocinas estimulan la migracin dirigida o
quimiotaxis de las clulas hacia un gradiente de concentracin de citocinas creciente.

Estas interacciones determinan la entrada y acumulacin de los leucocitos en el sitio


extravascular de infeccin.

Velocidad de Sedimentacin globular (VSG)


En el laboratorio la VSG es utilizada para la deteccin de problemas inflamatorios
crnicos y agudos como reumatismo, tuberculosis, artritis reumatoide, endocarditis
bacteriana subaguda, enfermedades neoplsicas y degenerativas
La velocidad sedimentacin globular tambin conocida como prueba de Westergren,
depende de la diferencia de gravedad especfica entre los hemates y el plasma, es
decir los eritrocitos sedimentan en la sangre debido a que su densidad es mayor que la
del plasma. La relacin de sta con el tiempo es utilizada como ndice de la presencia
de problemas inflamatorios.
La prueba se fundamenta en que la sedimentacin de los eritrocitos es retardada por la
albmina plasmtica, en la mayora de las infecciones agudas tiende a disminuir
ligeramente, mientras que las globulinas alfa y el fibringeno aumentan, esta
combinacin permite que se incremente la VSG.

Bibliografa:
1.- Schaible, U.E., Collins, H.L., Kaufmann, S.H.E. Confrontation between intracelular bacteria
and the immune system. Advances in Immunology 71: 267-377, 1999.
2.- Luster, A.D. Chemokines-Chemotactic Cytokines that mediate inflammation. New England J.
med. 338(7): 436-445, 1998.
3.- Janeway, C.A., Travers, P., Walport, M., Capra, J.D. Immunobiology. Fourth Edition. Chapter
1: Basic Concepts in Immunology. 1-33, 1999.
4.- Abbas, A.K., Lichtman, A.H., Pober, J.S. Cellular and Molecular Immunology. Fourth Edition.
Chapter 12:

, 2000.

5.- Roitt, I., Brostoff, J., Male, D. Inmunologa. Quinta Edicin. Captulo 5: Migracin celular e
inflamacin. 62-68, 2000.

Objetivo de la prctica

El alumno identificar las clulas del sistema inmune en respuesta a una lesin
inflamatoria y a su vez conocer el efecto inflamatorio sobre el ndice de sedimentacin
globular.

MATERIAL Y PROCEDIMIENTOS

Material que proporcionar el laboratorio


Reactivos

Materiales

Colorante Wrigth-Giemsa

Cubre-objetos

Alcohol

Portaobjetos

Agua destilada

Cajas de petri
Aplicadores de madera
Tubos con anticoagulante EDTA
Tubos Wintrobe
Pipetas Pasteur

Material que deber traer el alumno


1 paquetito de algodn
Cinta microporo

Mtodos y procedimientos.
Primera Parte.
La primera parte consistir en evaluar la respuesta inflamatorio mediante:

10

A. El parmetro de Velocidad de sedimentacin globular (VSG) en sangre perifrica


con anticoagulante EDTA.
B. Inflamacin local

A) Velocidad de sedimentacin globular

Se extraer sangre perifrica en un tubo con anticoagulante EDTA de una


persona del equipo.

La sangre se colocar en un tubo wintrobe con una pipeta pasteur.

El tubo wintrobe se colocar verticalmente durante 1hr y se registra el nivel de


sedimentacin.

Se reporta la VSG en mm/hr.

B) Inflamacin local.

Se seleccionar a una persona por equipo y con un portaobjeto o bistur estril


se har una lesin de raspado en el antebrazo previamente desinfectado con
una torunda con alcohol.

Se colocar un cubre objetos sobre la lesin y se fijar con una cinta adhesiva
microporo.

El cubre objetos ser cambiado a las 2, 6, 12, 24 y 48 hrs marcando cada uno de
ellos.

Los cubreobjetos se debern guardar cuidadosamente y marcar adecuadamente


la hora que corresponde a cada uno de ellos.

Segunda Parte.
La segunda parte consistir en teir los cubreobjetos producto de la inflamacin local
con el colorante Wrigth- Geimsa.
TINCIN DE WRIGHT-GIEMSA

Se coloca los cubre objetos sobre un abatelenguas .

11

El abatelenguas se colocar sobre una caja de petri.

Se agrega con una pipeta Pasteur colorante de wright hasta cubrir


completamente el cubre objetos.

Dejar reposar durante 15 minutos cuidando que no se seque el colorante.

Eliminar el colorante.

Agregar con una pipeta Pasteur el colorante.

Dejar reposar durante 15 minutos.

Agregar unas gotas de agua destilada sobre el cubre objetos, cuidando que el
colorante no se derrame.

Dejar reposar durante 15 min.

Lavar generosamente con agua corriente y dejar secar.

Observar al microscopio.

Se identificar las diferentes lneas celulares reclutadas en el sitio de la lesin a los


diferentes tiempos en el microscopio con el objetivo de 10X y 40X.

12

Resultados

Dibujos

Conclusiones

13

REACCION ANTIGENO-ANTICUERPO

INTRODUCCION
Los anticuerpos son protenas que se producen por los linfocititos B en respuesta a la
presencia de un cuerpo extrao (virus, bacterias, hongos, alergenos etc) que
comnmente se denomina antgeno.
Los anticuerpos se pueden encontrar de dos maneras en forma soluble en el torrente
sanguneo y fluidos corporales o bien formando parte integral en la membranas
celulares.
Los anticuerpos tambin llamadas inmunoglobulinas se clasifican en diferentes
grupos y subgrupos como son IgG, IgM, IgA, IgE e IgD algunos de estos se clasifican
en subgrupos.
Una de las caractersticas mas importantes de los anticuerpos esta ntimamente
relacionada con:
a) Especificidad. Por lo general los Ac tienen una gran especificidad de reaccin con
determinado Ag. Variaciones mnimas en la constitucin del Ag van a inducir produccin
de Ac diferentes.
Durante el proceso de respuesta inmune la especificidad de este tipo de reaccin va
aumentando gradualmente. En una primera etapa un Ag va a desencadenar la
produccin de IgM, que puede tener una afinidad incompleta por el Ag. Pero a medida
que progresa la reaccin inmune se inicia la sntesis de IgG que suele ser mucho ms
especfica contra el Ag. En consecuencia, puede darse que en una respuesta inmune
primaria se produzcan Ac de la clase de IgM que puedan reaccionar con diferentes Ag
siempre y cuando la diferencia en las molculas o en la secuencia de aminocidos no
sea muy grande, a medida que progresa la respuesta inmunitaria, el Ac de la clase IgG
es ms exquisito y va a reconocer en forma muy estricta los diferentes Ag.
b) Afinidad. Es la fuerza de atraccin entre sus estructura complementarias que llevan
a unirlas entre s, sin uniones covalentes.
La configuracin de la molcula de Ac y la posicin del eptope en la molcula
inmunognica puede modificar el grado de afinidad. Es un concepto que suele

14

confundirse con la especificidad. No obstante, el concepto de afinidad tiene ms


relacin con la presencia de las fuerzas que pueden acarrear la unin Ag-Ac por
mecanismos no covalentes y que en parte dependen de la flexibilidad de la molcula
del Ac para reaccionar ntimamente con el Ag.
c) Diversidad. La diversidad de Ac. Esta ntimamente relacionada con la constante
interaccin con el Ag. Por lo que se considera que existe una gama de anticuerpos de
memoria en base a la cantidad de interaccin con el Ag.
Estas caractersticas importantes de los anticuerpos han permitido involucrar en una
gran variedad de disciplinas, como en el caso de la inmunohematologa.
Uno de los aspectos ms importantes de la inmunohematologa es el estudio y
cuantificacin de los llamados grupos sanguneos eritrocitarios, que son componentes
antignicos presentes en la superficie de los hemates, ya que estn relacionados
directamente con la teraputica transfusional y la prevencin de accidentes hemolticos
graves.
En 1900 Karl Landstainer descubri que los hemates de individuos normales podan
aglutinar en presencia de suero de otros individuos tambin normales y desde 1901, los
antgenos del sistema ABO han permitido realizar con seguridad transfusiones
sanguneas, en la actualidad continua siendo el sistema ms importante de este campo.
El conocimiento de los grupos sanguneos es tambin importante en la gentica; como
aplicacin se tiene en las pruebas de paternidad la cual fue utilizada por primera vez de
manera legal en Alemania en 1924, pero tambin se le ha utilizado en la identificacin
de individuos en la medicina forense, hasta antes de usar al ADN como material
gentico para este fin.
Los grupos sanguneos (A, B, AB y O) son antgenos presentes en la superficie de los
eritrocitos. Su estructura qumica consiste en carbohidratos de protenas y glicolpidos.
El sistema ABO se identifico en el brazo largo del cromosoma 9. Los genes A y B
codifican

las

glicosiltransferasas,

trasfieren

N-acetil-galactosa

galactosa,

respectivamente al mismo sustrato, el antgeno H. El gen O es inactivo, por lo que


queda sin modificacin.
En la actualidad se ha atribuido tambin gran importancia al estudio de los
componentes antignicos de membrana de otras clulas sanguneas como los

15

leucocitos y las plaquetas. Dentro de los sistemas antignicos no eritrocitarios de mayor


inters actual destaca el Sistema HLA (Human Leuckocyte Series A)
El sistema Rh se identific por primera vez en 1940, por Landstainer y Wiener,
inyectando hemates del Macacus rhesus a conejos y cobayos, se aisl un anticuerpo
que aglutinaba con el suero anti-rhesus en un 85% de las sangres humanas (Rh
positivos) y al 15% restante se les llamo Rh negativos. Los anticuerpos del sistema RH
son por lo general inmunes, es decir, no existen en los individuos que carecen al
antgeno correspondiente, a no ser que haya habido una sensibilizacin previa.

Bibliografa
1.- Janeway, C.A., Travers, P., Walport, M., Capra, J.D. Immunobiology. 5 th Edition. Chapter 1:
Basic Concepts in Immunology. 1-33, 2001.
2.- Abbas, A.K., Lichtman, A.H., Pober, J.S. Cellular and Molecular Immunology. Fourth Edition.
Chapter 12:

, 2000.

3.- Lung-Chin Yu, Yuh-Ching Twu. Molecular genetics analisis for the B3 allele. Blood 2002 1004; 1490-1492
4.- Franz F Wagner, Bright Lewing The DNA Allele Cluster of the rHD gene Blood 2002 100:
305-311
5.- Juan Luis Vives. Manual de tcnicas de laboratorio en hematologa. Editores S. 1988
Barcelona Espaa.

Principio bsico del mtodo


La reaccin antgeno anticuerpo permite identificar la especificidad, la variabilidad y la
diversidad de la respuesta inmune.
En esta practica se pretende demostrar que la presencia de la interaccin antgeno
anticuerpo es necesaria para evaluar el tipo de sangre mediante el uso de anticuerpos
especficos en el sistema AOB e identificar el Rh de diferentes personas, para evaluar la
compatibilidad sangunea.

16

Objetivo de la prctica
El alumno observar la reaccin antgeno-anticuerpo mediante aglutinacin eritrocitaria
en respuesta a anticuerpos contra grupos sanguneos.

MATERIAL Y PROCEDIMIENTOS
Material que proporcionara el laboratorio
Reactivos

Materiales

Anticuerpos Anti-A

Lanceta

nticuerpos Anti-B

Aplicadores de madera

Anticuerpos Anti-D

Portaobjetos

Alcohol

Material que deber traer el alumno


Gasas
Paquetito de algodn

METODOS Y PROCEDIMIENTOS

Se desinfectar el dedo pulgar de la mano derecha con alcohol para proceder a


puncionar con una lanceta del dedo.

Se Tomarn 3 gotas de sangre capilar y se colocaran por separado en los porta


objetos.

Se adicionar una gota de cada uno de los reactivos a cada gota de sangre
respectivamente .

Se homogeneizar con un aplicador de madera.


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El portaobjetos se agitar con movimientos circulares durante un minuto.

Se observar la presencia o ausencia de aglutinacin.

Interpretacin de los resultados:


Suero anti-A

Suero anti-B

Grupo Sanguneo

AB

18

Resultados

Dibujos

Conclusiones

19

COMPATIBILIDAD SANGUINEA
INTRODUCCIN
Las pruebas de compatibilidad son fundamentales para garantizar la ausencia de
anticuerpos sricos del paciente capaces de reaccionar con los antgenos de los
glbulos rojos transfundidos. En trminos generales, la prueba cruzada consiste de una
serie de procedimientos llevados a cabo antes de la transfusin para determinar la
seleccin apropiada de la sangre para un paciente y para detectar cualquier anticuerpo
irregular en el suero del receptor, que reduzca los efectos adversos de los eritrocitos
despus de una transfusin.
Para determinar la compatibilidad sangunea, existen 2 pruebas: a) La prueba mayor, la
cual involucra los eritrocitos del donador con el suero del receptor y b) la prueba menor,
que involucra los eritrocitos del receptor con el suero del donador. Los estndares de la
Asociacin Americana de Bancos de Sangre de la FDA, indican que las pruebas
pretransfucionales incluyan en la prueba mayor un mtodo que demuestre aglutinacin,
sensibilizacin y hemlisis por anticuerpos, siendo la prueba de eleccin la
antoglobulina. La prueba de antiglobulina indirecta o comunmente llamada Prueba de
Coombs, es un mtodo de aglutinacin en tubo en el cual el suero antiglobulnico
demuestra la combinacin de los anticuerpos incapaces de provocar aglutinacin
directa, con los receptores eritrocitarios correspondientes; esta prueba consiste de tres
pasos: sensibilizacin e incubacin, lavado y agregado del reactivo antiglobulnico. En
la sensibilizacin se incuba el suero y los eritrocitos a 37C, si se utilizan eritrocitos
suspendidos en solucin salina, la incubacin es de 45 60 minutos, pero si se utiliza
solucin salina de baja potencia inica se reduce a 15 minutos porque la fijacin de los
anticuerpos a la clula se acelera. El lavado es fundamental porque debe eliminar todo
vestigio de suero de los glbulos rojos, el pH de la solucin salina debe ser de 6.5-7.5,
en el caso contrario, el lavado podra remover los anticuerpos que recubren a los
eritrocitos. Los reactivos antiglobulnicos deben usarse de acuerdo a las instrucciones

20

del fabricante. La prueba de antiglobulina directa se realiza para saber si los glbulos
rojos del paciente se recubren de anticuerpos in vivo. Este fenmeno es inusual y tiene
lugar en la anemia hemoltica autoinmune, las reacciones transfusionales hemolticas y
la enfermedad hemoltica del recin nacido, en esta prueba los eritrocitos no se incuban
con suero, sino que se lavan y mezclan con reactivos antiglobulnicos, es decir se
evala de forma directa.
Existen otras pruebas como la de albmina, la cual no es tan sensible como la prueba
de antiglobulina indirecta. No obstante cuando es difcil obtener antiglobulina o cuando
se emplean ciertos reactivos anti-D, puede utilizarse. La adicin de albmina bovina a la
prueba favorece las condiciones para la deteccin de anticuerpos anti-Rh y de otros
anticuerpos contra antgenos de eritrocitos, la albmina incrementa la constante
dielctrica del medio y es importante para detectar la mayora de los anticuerpos IgG.

BIBLIOGRAFA:

1.-Mary Lovise Turgeon. Immunology and Serology in Laboratory Medicin. Editorial Mosby,
segunda edicin. Mxico; 1996.
2.- Noel R. Rose. Manual of Clinical Laboratory Immunology. ASM PRESS, quinta edicin.
Washington, USA; 1997.
3.- Neville J. Bryant. An Introduction to Immunohematology. W.B. Saunders Company, segunda
edicin. USA; 1982.

Principio bsico del mtodo:


La tcnica se realiza a travs de una reaccin de aglutinacin, la cual se fundamenta en
la expresin visible de la agregacin resultante por la unin de antgenos presentes en
la superficie de los eritrocitos y anticuerpos circulantes en el suero del donante o del
receptor.

21

Objetivo de la prctica.
El alumno determinar por medio de pruebas cruzadas mayor y menor, la
compatibilidad o la incompatibilidad sangunea, mediante la reaccin de aglutinacin.

MATERIAL Y PROCEDIMIENTOS
Material que proporcionar el laboratorio

Reactivos

Material

Solucin salina fisiolgica

Tubos de ensaye.

Suero de Coombs

Pipeta Pasteur.

Material que deber traer el alumno

Material biolgico
Sangre perifrica extrada de alumnos voluntarios.

Material
Jeringa desechable de 5 mL.

MTODOS Y PROCEDIMIENTOS:

Prueba cruzada mayor

Depositar en un tubo una gota de eritrocitos del donador diluidos al 5%.

Depositar al mismo tubo, 2 gotas de suero del receptor.

Agitar cuidadosamente.

Incubar 15 minutos a temperatura ambiente.

Centrifugar y leer (si existe aglutinacin es incompatible).

22

Prueba cruzada menor

Depositar en un tubo una gota de eritrocitos del receptor diluidos al 5%.

Depositar al mismo tubo, 2 gotas de suero del donador.

Agitar cuidadosamente.

Incubar 15 minutos a temperatura ambiente.

Centrifugar y leer (si existe aglutinacin es incompatible).

23

Resultados

Dibujos

Conclusiones

24

INMUNOLOGA DEL CNCER


INTRODUCCIN
La inmunologa del cncer estudia el reconocimiento y la respuesta inmune contra las
clulas cancerosas. Su estudio abarca desde el entendimiento de la inmunobiologa de
los tumores hasta su aplicacin en oncologa con fines preventivos (vacunas),
herramienta de diagnstico y tratamiento (inmunoterapia).

Segn cifras de la Organizacin Mundial de la Salud (OMS), se estima que 20 millones


de personas en el mundo tienen cncer en el 2002. La misma OMS proyecta que en el
2020 habr 15 millones de casos nuevos de cncer por ao (1). En nuestro pas, el
cncer ocupa la segunda causa de muerte general (2).

El cncer, en realidad es un grupo de ms de 100 enfermedades diferentes,


caracterizadas por una serie de cambios en el genoma de las clulas. La oncognesis
es un proceso de etapas mltiples que implica la activacin de oncogenes y la prdida
de la funcin de genes supresores. Podramos decir que los rasgos distintivos del
cncer son: a) autosuficiencia en seales de crecimiento, b) insensibilidad a la seales
de regulacin del crecimiento, c) escape de los mecanismos de apoptosis, d) replicacin
sin lmite, e) promocin de angiognesis, f) invasin y metstasis y g) evasin del
sistema inmune (3).

La inmunologa del cncer se basa en la existencia de antgenos y molculas tumorales


que permiten su reconocimiento por el sistema inmune. Este reconocimiento puede ser
en forma especfica por linfocitos T y anticuerpos o por medio de componentes de la
inmunidad innata por ejemplo: clulas dendrtica, macrfagos y clulas asesinas
naturales. Lo anterior permite clasificar a los antgenos tumorales segn el tipo de
respuesta que evocan: a) respuesta humoral (anticuerpos), b) generacin de clulas
CD4+ y c) clulas CD8+ (citotxicas). Algunos de los antgenos reconocidos por

25

anticuerpos se usan para monitorear el curso del tumor, sin embargo, los antgenos
reconocidos por linfocitos T parecen ms relevantes en el rechazo de los tumores.
Tomando como referencia la avidez de los linfocitos T por sus antgenos estos se
clasifican en cuatro grupos. El primer grupo incluye a los antgenos presentes
solamente en un tumor especfico de un paciente (mutaciones somticas). El segundo a
antgenos especficos de tumor, pero que se identifican en diferentes individuos
(ejemplo antgenos virales). Por su parte los antgenos del grupo tres, comprende a
productos de genes normales con una distribucin restringida en los tejidos. Finalmente
el cuarto grupo abarca antgenos compartidos en los tejidos, lo cual implica un
reconocimiento autoreactivo (4).

En forma breve podemos decir que las clulas cancerosas pueden se reconocidas y
destruidas por anticuerpos (activacin del complemento o citotoxicidad celular mediada
por anticuerpos), linfocitos CD8+, linfocitos TCD4+, clulas NK y otros componentes de
la inmunidad innata . Sin embargo, los tumores burlan estas respuestas a travs de los
mecanismos de evasin. Estos mecanismos incluyen alteraciones en el procesamiento
antignico, defectos en la co-estimulacin y la actividad de molculas supresoras, entre
otros muchos mecanismos de evasin (5).

Uno de los retos de la inmunologa del cncer implica vencer o contrarestar los
mecanismos de evasin, al tiempo que se estimula o transfiere formas eficientes de
respuesta inmune contra las clulas tumorales. La inmunoterapia del cncer contempla
diferentes herramientas que incluye el uso de antgenos (lisado de tumor, protenas
tumorales, pptidos sisntticos y ADN), clulas activadas (dendrticas, clulas
citotxicas T y NK), anticuerpos y citocinas conjugadas o modificadas y el empleo de
herramientas de terapia gnica (6).
El ao 2020 no est tan lejanos de nuestras vidas y de la nuestros hijos, esperemos
que para entonces la inmunologa del cncer participe en el control del cncer.

26

Bibliografa
1.- National Cancer Control Programmes. World Health Organization 2002.2.- Direccin de
Planeacin, Secretara de Salud, Mxico. 2002.
3.- Hanahan D, Weinmerg RA: The Hallmark of cancer. Cell. 2000; 100: 57-70.
4.- Gilboa E: The makings of a tumor rejection antigen. Immunity. 1999; 11: 263-270.
5.- Yee C: Modulating T-cell immunity to tumours: new strategies for monitoring T-cell
responses. Nature Reviews Cancer. 2002; 2:409-419.
6.- Daneri-Navarro A., Del Toro-Arreola A., Garca-Velazco J.C., Del Toro- Arreola S., OrbachArbouys S., Bravo-Cuellar A.: L-5178-Y Lymphoma associated immunosuppression in Balb/c
mice. Biomed and Pharmacother, 1995; 49: 39-44.

27

Principio bsico del mtodo


El modelo de ratones con linfoma murino L-5178-Y representa un buen modelo de
supresin de la respuesta inmune celular, a travs de diferentes mecanismos de
evasin inmunolgica. En este caso por la accin supresora de una glucoprotena,
presente en el lquido de ascitis y plasma de estos ratones.

La inmunosupresin se hace patente a travs de la prueba del dinitro-fluoro-benceno


(DNFB). Se trata de una reaccin de hipersensibilidad retardada que refleja lo que
sucede en la respuesta inmune celular contra microorganismos. Al sensibilizar a los
ratones con DNFB, ste funciona como un hapteno en unin a protenas de la dermis.
Este complejo es reconocido por las clulas de Langerhans que lo procesan y
presentan a linfocitos T en los ganglios ms cercanos. Una vez que se activan los
linfocitos TH1 y reconocen al complejo en la dermis, a travs de la aplicacin de las
dosis reveladora de DNFB, producen IFN-g e IL-17. Esto estimula la produccin de IL-1,
TNF-a, IL-6, GM-CSF y diferentes quimiocinas por parte de keratinocitos de la
epidermis y clulas inflamatorias. Las citocinas y quimiocinas promueven la respuesta
inflamatoria de esta reaccin de hipersensibilidad, la llegada de monocitos que se
convierten en macrfagos y la atraccin de ms linfocitos.

Objetivo de la prctica
Comprender los mecanismos que utilizan las clulas tumorales para evadir la respuesta
inmune, a travs de la supresin de la reaccin de hipersensibilidad retardada al DNFB
en un modelo de ratones con linfoma murino L-5178-Y.

28

MATERIAL Y PROCEDIMIENTOS

Material proporcionado por el laboratorio

Material biolgico.
Ratones cepa Balb/c
Linfoma L5178Y

Reactivos

Material

Solucin salina fisiolgica 0.9%

Torundas con alcohol

PBS (solucin salina de fosfatos)

Material que deber traer el alumno.

Jeringas de 1ml (para insulina)


Navajas para rasurar
Guantes de latex
Gasas

Mtodos y procedimientos.
a) Inoculacin del tumor.
-

Obtener un volumen aproximado de 0.5 ml de clulas tumorales de ratones


inoculados previamente en la regin peritoneal.

Rasurar la regin cervical derecha de 2 ratones

Marcar a los ratones para diferenciar al ratn experimental del ratn control

29

* Inocular 1 X106 en 200 ul en solucin Hanks de clulas tumorales en la regin


cervical (ratn experimental)
* Administrar 200 l de solucin de Hanks (al ratn control)

Transcurridos 8 das se realizar la prueba de hipersensibilidad retardada para


evaluar la respuesta inmune celular

Realizar un frotis de clulas tumorales

Teir con colorante de Wright

b) Prueba de hipersensibilidad retardad al DNFB


(Siguiente prctica)

30

Resultados

Dibujos

Conclusiones

31

HIPERSENSIBILIDAD RETARDADA
INTRODUCCIN
El reconocimiento y eliminacin de un agente infeccioso o algn otro antgeno extrao,
son el resultado biolgico de los mecanismos humorales y celulares de la respuesta
inmune. Sin embargo, la re-exposicin a un mismo antgeno en individuos previamente
sensibilizados, puede conducir a una respuesta exacerbada que resulta en dao tisular
o en una manifestacin sistmica. Las respuestas inmunes que resultan en dao tisular
u otros cambios fisiopatolgicos son llamadas reacciones de hipersensibilidad.

Coombs y Gell clasificaron las reacciones de hipersensibilidad en cuatro categoras:


Reacciones tipo I: (reaccin inmediata mediada por IgE)
Reacciones tipo II: (reaccin de citotoxicidad dependiente de anticuerpos)
Reacciones tipo III: (reaccin iniciada por complejos inmunes)
Reacciones tipo IV: (reaccin retardada mediada por clulas T)

Este ltimo tipo de reaccin, es denominado hipersensibilidad retardada y es importante


en la defensa del husped contra microorganismos intracelulares. En este tipo de
respuesta, los linfocitos T cooperadores y tambin linfocitos T citotxicos, reconocen
antgenos procesados que han sido previamente ingeridos por clulas fagocticas. La
hipersensibilidad retardada puede ser consecuencia de la exposicin a antgenos
microbianos o a la sensibilizacin por contacto con agentes ambientales o qumicos.

En el caso de la reaccin de hipersensibilidad por contacto, sta se puede inducir de


forma experimental aplicando haptenos como el dinitrofluorobenceno sobre la piel. La
secuencia de eventos que se desencadenan en esta reaccin, incluyen una fase de
sensibilizacin, donde un animal de laboratorio entra en contacto por primera vez con el
agente sensibilizante. El hapteno se une de forma covalente con protenas de la piel y
stas llegan a ser modificadas qumicamente; por consiguiente, pueden ser
presentadas por las clulas presentadoras de antgenos a los linfocitos T, que

32

reconocern a la protena modificada como algo extrao y van a montar una respuesta
especfica contra ellas; al final de la respuesta, algunos linfocitos se van a diferenciar
hacia clulas de memoria. S posteriormente, el animal es expuesto nuevamente al
agente con el que previamente se sensibiliz, una reaccin de hipersensibilidad
caracterizada por induracin y enrojecimiento del tejido daado, aparecer 24 a 48
horas despus del reto.

Bibliografa:
1.- Van Houwelingen AH., de Jager SCA., Kool M., van Heuven-Nolsen D., Kreneveld AD.,
Nijkamp FP. Hypersensitivity reactions in mouse airways after a single and a repeated hapten
challenge. Inflamm Res 2002; 51:63-68.
2.- Black CA. Hipersensibilidad retardada: teoras actuales con una perspectiva histrica.
Dermatology Online Journal; 5(1): 7.
3.- Abbas A., Litchman A., Pober J. Effector mechanism of cell-mediated immunity in: Cellular
and Molecular Immunology, Fourth Edition, Ed.Saunders, 2000.
4.- Dhabhar FS, Satoskar AR, Bluethmann H, David JR and McEwen BS. Stress-induced
enhancement of skin immune function: A role for gamma-interferon. PNAS 2000; 97 (6): 28462851.
5.-Dhabhar FS. Acute stress enhances while chronic stress suppresses skin immunity: The role
of stress hormones and leukocyte trafficking. Annals of the New York Academy of Sciences
2000; 917: 876-893.

Principio bsico del mtodo


Esta reaccin es a menudo usada en el laboratorio como una prueba para evaluar el
estado de la respuesta inmune celular.

33

Objetivo de la prctica
El alumno identificar las diferentes fases de una reaccin de hipersensibilidad
retardada.

MATERIAL Y PROCEDIMIENTOS
Material que proporcionar el laboratorio
Material biolgico
Ratones macho de la cepa BALB/c de ocho semanas de edad

Reactivos

Materiales

Dinitrofluorobenceno

Micrmetro de precisin

Acetona

Aplicador de plstico.

Aceite de oliva

Material que deber traer el alumno.


Jeringa de insulina
Guantes de ltex
Gasas
Hojas de rasurar

Mtodos y Procedimientos.

Se rasuraran a los ratones en la regin abdominal con una navaja de rasurar.

Se utilizarn dos ratones que estarn clasificados como experimental y control.


1. El ratn experimental se sensibilizarn con una dosis de 20 l de DNFB al
0.5% en una mezcla de acetona y aceite de oliva en proporcin 4:1 (v/v), en
la regin del abdomen previamente rasurada.

34

2. El ratn experimental se sensibilizara con 20 l solucin salina fisiolgica


al 0.9%.
A las 24 horas se aplicar un segundo reto adicionando nuevamente 20 l de
DNFB para el ratn experimental y al 20 l de solucin salina fisiolgica al 0.9%
al control.
Posteriormente a los 5 das se aplicar un tercer reto con 20 l de DNFB para el
ratn experimental y al control se adicionarn 20 l de solucin salina fisiolgica
al 0.9% en el abdomen, adems se deber aplicar en el pabelln auricular
derecho 10 l de DNFB a los ratones (control y experimental).
Despus del ltimo reto a las 48 hrs medir nuevamente con el micrmetro la
oreja derecha del ratn control y experimental para observar la reaccin de
hipersensibilidad.
Calcular el incremento en el grosor del pabelln auricular con respecto a la
lectura basal que previamente se haya realizado antes de dar el reto.

Esquema de trabajo
Hipersensibilidad retardada al dinitrofluorobenceno

1
a

Problema

1 sensib
DNFB
0.5%
(20 l)
a

Control

1 aplic
SSF 0.9%
0.5%
(20 l)

Medici
Medicin
n
Basal
basal
del
pabell
n

2
a

2 sensib
DNFB
0.5%
(20 l)
a

2 aplic
SSF 0.9%
0.5%
(20 l)

5
Reto con
DNFB
0.2%
(10 l)
Reto con
DNFB
0.2%
(10 l)

Medicin
Medici
Final
n final
del
.pabell
n

35

Resultados

Dibujos

Conclusiones

36

Cuestionario:

1. Cual es el fundamento de la reaccin de hipersensibilidad retardada al DNFB?


2. Qu cuidados se deben tener al utilizar el DNFB y que efectos puede producir
el mal uso de este?
3. Cules clulas del sistema inmune estn involucradas en este tipo de reaccin?
4. Aplicacin clnica de las reacciones de HSR?

37

TRASPLANTE
INTRODUCCIN

Se llama transplante a la transferencia de clulas, tejido u rganos vivos de un donante


a un receptor con la intencin de mantener la integridad funcional del material
transplantado en el receptor y suplir as un fracaso orgnico que en ocasiones de no
realizarse el transplante puede provocar la muerte. Es una reposicin de piezas cuyo
mayor problema reside en la disponibilidad de material para ser transplantado y el xito
depende fundamentalmente de la aceptacin por parte del receptor del tejido
implantado.

Esta sustitucin con fines curativos de un rgano que presenta una disfuncin
irreversible por otro procedente de un cadver o de un donante vivo ha sido uno de los
avances ms importantes de la medicina en la segunda mitad del siglo XX. Sin embargo
el xito del transplante como teraputica ha creado un nuevo problema: la demanda de
rganos para transplante es muy superior a la disponibilidad actual.

Los trasplantes, como casi todo, pueden clasificarse siguiendo diferentes criterios,
siendo los ms frecuentes: la naturaleza del material trasplantado, la naturaleza del
donante y el lugar en el que se implanta el trasplante

Segn la naturaleza del material trasplantado


Trasplante de rganos (rin, hgado, pulmones, pncreas, cmea, corazn, hueso,
tubo digestivo, etc.). Precisan intervenciones quirrgicas complejas ya que se tienen
que reestablecer todas las conexiones propias del rgano sustituido. Con frecuencia
estos trasplantes son combinados, corazn y pulmn, pncreas y rin, etc.

Trasplante de tejidos (mdula sea, clulas endocrinas). El procedimiento es simple, se


inyectan las clulas suspendidas, a la espera de que stas se implanten en el lugar que
les corresponde.
38

Segn la naturaleza del donante


Autotrasplante o autoinjerto. Donante y receptor son el mismo individuo. Suelen ser
injertos de piel para reparar lesiones por quemaduras, u seos para estabilizar
fracturas. Trasplante singnico o isotrasplante. Donante y receptor son gemelos, es
decir, genticamente idnticos.

Alotrasplante u homotrasplante. Donante y receptor son individuos diferentes


genticamente pero de la misma especie.

Xenotrasplante o heterotrasplante. Donante y receptor pertenecen a especies distintas.


Estos se clasifican a su vez en: discordantes, cuando existen en el receptor anticuerpos
preformados contra la especie donante, o concordantes cuando estos anticuerpos no
existen.
Segn el lugar en el que se implanta el trasplante
Trasplante ortotpico. El trasplante se implanta en la zona anatmica que le es propia.
Trasplante heterotpico. La zona en la que se coloca el trasplante no es la que le
correspondera en una distribucin anatmica normal. Por ejemplo, la colocacin del
rin donante en la fosa ilaca del receptor.

Transplante de piel
La piel es el rgano encargado de proporcionar la interfaz entre el cuerpo humano y el
medio ambiente, por lo que es un determinante esencial en la homeostasis del cuerpo;
controla los niveles de temperatura y el ndice de intercambio de fluidos con el exterior,
y proporciona un mecanismo de defensa esencial contra microorganismos invasores. El
alto nivel de especializacin de la piel destaca por la observacin de que prcticamente
todos los antgenos se encuentran en la piel, lo que hace del trasplante de piel una
prueba de histocompatibilidad in vivo muy rigurosa. La localizacin intralinftica del

39

aloinjerto de piel, la naturaleza de su unin vascular con el husped, as como sus


propiedades antignicas tienen ventajas incomparables para el estudio de la reaccin a
homoinjertos. Son injertos de primera intencin, es decir su vasculatura se establece
por anastomosis directa termino-terminal en por lo menos algunos vasos del injerto con
vasos de lecho del injerto.

CRITERIOS PARA EL DIAGNOSTICO DE RECHAZO DE AUTOINJERTO DE PIEL


Los criterios para evaluar la respuesta del husped al trasplante son :
1. Intensidad del eritema y edema circundantes
2. Color y consistencia del injerto
3. Valoracin estro microscpica de la circulacin sangunea en los vasos
superficiales.
4. Presencia o ausencia de trombosis o hemorragia

Estas observaciones proporcionan las bases para el establecimiento de un criterio


especifico para el diagnostico de rechazo de injerto que incluyen :
1. Desarrollo de edema y eritema intensos alrededor del injerto
2. Color rojo oscuro o cianosis del injerto
3. Edema del injerto y opacificacin de su superficie
4. Interrrupcin del flujo sanguneo en todos los vasos del injerto
5. Presentacin de trombosis intravascular y hemorragia
6. La subsiguiente escarificacin y esfacelacin del injerto confirman el diagnostico
de rechazo.

La evolucin por das se ha observado como sigue: Los primeros das despus de
efectuado el trasplante no se observan grandes diferencias en la apariencia de los
aloinjertos y autoinjertos de piel. En las primera 24 hrs. Todos los injertos estan plidos,
en el segundo da desarrollan manchas de color rosado. Para el tercero o cuarto da se
vuelven de color rosado uniformes. Entre el quinto y sexto das en los autoinjertos
disminuye el eritema y el edema iniciales, hay regeneracin epidrmica y fusin gradual

40

del injerto con la piel del husped. En cambio, en los aloinjertos reaparece un alo de
eritema y edema entre el sexto y sptimo das cuya intensidad se incrementa durante
los siguientes das. Para el octavo y noveno das, su color cambia a rojo cereza
progresando a cianosis franca. En los aloinjertos hay escasa regeneracin epidrmica
y la unin con la piel circundante es mnima. Progresivamente se vuelven ms
edematosos y de color rosa. Los eventos de rechazo progresan rpidamente, se
presenta punteado trombotico seguido de hemorragia y escarificacin. El aloinjerto se
convierte en una escara negra que se esfcela, dejando una almohadilla drmica
residual cubierta por una capa translucida de epidermis husped, el cese del flujo
sangunea se acepta como punto final del rechazo del injerto. En contraste, los
autoinjertos gradualmente se cubren con epidermis nueva brillante que incrementa su
grosor progresivamente. Desde le tercero o cuarto da hay un gran numero de vasos de
calibre pequeo por los que fluye la sangre rpidamente, y para el vigsimo da
despus del trasplante, el patrn vascular del autoinjerto, es similar al de la piel
circundante.
Bibliografa
1. Hakim NS. Papalois VE. History of Organ and cell trasplantation. 2002. St. Marys
Hospital London.
2. Norman DJ, Turka LA, Primer on Trasplantation. 2001. American Society of
Trasplantation.
3. Tejani AH, Harmon WE, Fine RM Pediatric Solid Organ Trasplantation.2002.
Munksgaard.
4. Ginns GC, Cosimi AB, Morris TJ Trasplantation. 1999. Blackwell Science
5. Santiago-Delpin EA, Ruiz-Speare JO Trasplante de Organos. 1999

41

Objetivo de la prctica
El alumno identificar los efectos de un transplante de piel singnico, alognico y
autlogo en un modelo murino.

MATERIAL Y PROCEDIMIENTOS
Material que proporcionar el laboratorio

Material biolgico
Ratones de la cepa Balb-C, DBA.

Reactivos

Material

Rompum (relajante muscular)

Cajas de Petri

Ketamina (anestsico)

Pipetas Pasteur

Solucin fisiolgica.

Bulbos de succin.

Material que deber traer el alumno.


Estuche de diseccin.
Navajas de rasurar.
Hilo para sutura tres ceros 3-0
Gasas.
Guantes
Cubre-bocas

Mtodos y Procedimientos.

Se anestesiar a los ratones con 0.1 mL rompum (relajador muscular) va intra


peritoneal

(I. P), durante 5 min y posteriormente se inoculara 0.1 mL de

Ketamina va intra peritoneal (I. P), y se proceder a rasurar el dorso del ratn

42

con navaja de rasurar, se delinear la zona de la piel de los ratones procurando


que sea la misma dimensin tanto del receptor como del donador.

Una vez delineada la piel se proceder a cortar con bistur o bien con tijeras
curvas pequeas.

La pie separada del dorso de los ratones se depositar en cajas de petri la cual
contiene 3 ml de solucin salina fisiolgica 0.9% (SSF) a temperatura ambiente
(TA) cuidando que en ningn momento se seque el fragmento de la piel y la zona
en donde fue retirada la piel.

Se implantar el tejido a zona destinada como receptora. Es importante que los


bordes queden adyacentes uno del otro para garantizar el contacto y la irrigacin
de este.

Se fija con puntos de sutura de seda 3-0 cuidando que el tejido quede adherido a
la superficie del implante.

Se depositar al ratn en su jaula y se agregar a su botella de agua un antiestamnico

Se deber registrar los cambios que presenta el transplante hasta transcurridos


13 das.

43

Resultados

Dibujos

Conclusiones

44

EVALUACIN
Nombre:
Cdigo:
Correo Electrnico:
Telfono: ____________________________________________
Carrera:
Horario:

FOTO

Profesor:
Profesor de laboratorio:

1
2
3
4

PRACTICAS
tica en el manejo de animales de
laboratorio.
rganos del Sistema Inmune
(modelo murino)
Inflamacin

Inflamacin
2. parte
Reaccin Antgeno- Anticuerpo

Pruebas cruzadas

Inmunidad de tumores

Hipersensibilidad Retardada

TOTAL

Transplante
1.parte
10 Transplante
2.parte
EVALUACIN

A.- ASISTENCIA
P.- PARTICIPACION
R.- REPORTE DE PRCTICA
45