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TESIS
ASESORES:
MVZ. Mc. ALFREDO ARROYO LARA
MVZ. AMALIO ALONSO BUSTAMANTE
VERACRUZ, VER.
ENERO 2013
NDICE GENERAL
Pgina
NDICE DE CUADROS
iii
NDICE DE FIGUR AS
iv
DEDICATORIAS
AGRADECIMIENTOS
vi
RESUMEN
vii
1.
INTRODUCCIN
2.
ANTECEDENTES
3.
JUSTIFICACIN
15
4.
HIPTESIS
17
5.
OBJETIVO GENERAL
17
6.
OBJETIVOS ESPECFICOS
17
7. MATERIAL Y MTODOS
18
7.1 LOCALIZACIN
18
18
18
19
20
21
8.
RESULTADOS Y DISCUSIN
23
9.
CONCLUSIONES
41
42
ii
NDICE DE CUADROS
Pgina
Cuadro 1. Patrn de sensibilidad de Salmonella enteritidis y Escherichia coli a una
suspensin de cebolla (Allium cepa) blanca al 10%
33
33
34
35
Cuadro 5.- CMI del ajo necesaria contra las bacterias de la investigacin
36
39
Cuadro 7.- Tasa (%) de eliminacin de los extractos de ajo y cebolla sobre las
bacterias de Escherichia coli y Salmonella enteritidis
40
iii
NDICE DE FIGUR AS
Pgina
Figura 1. Compuestos sulfurados del ajo (Ganado, 2001)
22
23
24
24
25
26
26
27
28
28
29
30
30
Figura 15. Pozos de una microplaca utilizada para observar la CMI, la cual fue
determinada mediante la presencia o ausencia de turbidez
32
Figura 16. Control positivo de diluciones seriadas del uno al tres, donde puede
observarse crecimiento de cepas de Escherichia coli en Agar McConkey
37
Figura 17. Control positivo de diluciones seriadas del uno al tres donde puede
observarse crecimiento de colonias de Salmonella enteritidis en Agar Verde
Brillante
37
iv
DEDICATORIAS
A mis padres:
Jaime Snchez Gutirrez
Leonor Aguilar Betanzos
Porque gracias a su gua y apoyo incondicional he logrado completar esta nueva
etapa. Los quiero demasiado, a ustedes les debo la vida y espero algn da
recompensarles todo el esfuerzo y la confianza que depositaron en m.
A mi hermana:
Gabriela Abigail Snchez Aguilar
Por las veces en que me brind apoyo y por haberme dado la oportunidad de
conocer a mi sobrina, la pequea Atzin, que lleg a darle otra visin a la vida.
A mi abuela:
Celia Betanzos Lpez
Por ser una mujer admirable de gran entereza, gracias por el cario brindado en
cada momento de mi vida. Eres un ejemplo a seguir.
A mi tutora:
MVZ. Rosa Mara Cordero Pulido
Por ser como una madre durante mi carrera. Agradezco su comprensin y apoyo
en los momentos en que ms los requer.
AGRADECIMIENTOS
A mis asesores:
MVZ. Mc. Alfredo Arroyo Lara
MVZ Amalio Alonso Bustamante
Por su apoyo, gua y enseanzas para la realizacin de esta tesis. Les estar
eternamente agradecida.
A mi jurado:
Dr. David I. Martnez Herrera
MC. Luis A. Landin Grandvallet
Dra. Violeta T. Pardo Sedas
Por sus consejos y observaciones para la redaccin y correccin de este trabajo.
vi
Snchez Aguilar Mara Antonia, 2013. Efecto inhibitorio de Allium cepa y Allium
sativum sobre cepas de Escherichia coli y Salmonella enteritidis. Tesis. Facultad
de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Veracruzana. Veracruz,
Veracruz. Mxico
RESUMEN
La herbolaria tradicional tiene una amplia gama de productos que son
utilizados para tratar enfermedades de diversa ndole y que son de fcil acceso
para productores de traspatio, quienes muchas veces no cuentan con los recursos
necesarios para aplicar buenas prcticas de bioseguridad. Se ha comprobado que
los principios activos de muchos productos naturales tienen efecto sobre
diferentes tipos de bacterias, es por ello que se realiz un estudio del efecto
inhibitorio que tienen los extractos de Allium cepa (cebolla) y Allium sativum (ajo)
sobre cepas de Escherichia coli y Salmonella enteritidis, las cuales son bacterias
asociadas a trastornos entricos de muchos animales y que tambin pueden
afectar al hombre. Mediante un anlisis en microplaca se determin que se
requieren cantidades de por lo menos 12.5 mg/ml de ajo para inhibir el crecimiento
de las bacterias mencionadas. La cebolla no present resultados favorables en el
anlisis en microplaca, pero mediante la determinacin de la tasa porcentual de
eliminacin se observ que ejerce un efecto bactericida sobre las bacterias,
concluyendo que se requieren al menos concentraciones mayores al 10% de su
extracto para tener resultados favorables. A dicha concentracin, tanto la cebolla
como el ajo demostraron tener un efecto sobre Escherichia coli y Salmonella
enteritidis, por lo que puede utilizarse como una opcin de desinfectantes
biodegradables y econmicos.
Palabras clave: Escherichia coli, Salmonella enteritidis, inhibicin, ajo, cebolla.
vii
1. INTRODUCCIN
En la actualidad, las producciones pecuarias en general
tienen en claro la
2. ANTECEDENTES
Por lo general, existe un equilibrio entre los seres vivos y los microbios, lo que
permite que casi todo se encuentre en buen estado de salud, el cual puede llegar
a romperse si los microbios se vuelven grmenes patgenos capaces de producir
enfermedades (Marcn, 2000).
y que por azar descubrieron poco a poco que ciertas plantas les eran beneficiosas
y otras txicas (Barquero, 2007).
(Marcn,
maderas y hierbas para alejar a los insectos que por aquel entonces se crea eran
los causantes de las enfermedades. Esta tcnica fue utilizada en el combate
contra las epidemias. En el siglo XVII, con el surgimiento de la peste bovina, los
establos se desinfectaban quemando madera de enebro y vapores de vinagre.
Despus, se desinfectaban con mezclas de plvora de can, tabaco y plantas
aromticas (Rodrguez, 2005). Debido a esa necesidad de destruir aquellas
causas de enfermedades y evitar su proliferacin, el trmino desinfectante fue
utilizado por primera vez como trmino mdico en el mismo siglo (Paez y Ocampo,
2005).
El ajo es una planta que se conoce desde hace 3,000 aos y cuyo cultivo se
remonta a los tiempos babilnicos (Domingo y Lpez, 2003). Su nombre cientfico
es Allium sativum y es una planta originaria de Asia, desde donde pas al resto
de Europa y a Amrica (Cap, 2005). Su trmino en ingls garlic deriva de
races anglosajonas que significan de manera literal planta lanza, refirindose a
la forma de sus hojas (Ganado, 2001). Es una raz bulbosa conformada por varios
segmentos denominados dientes. Su cultivo es rpido y sencillo en clima templado
y florece en primavera y verano (Cap, 2005).
que tiene actividad inhibitoria sobre varias bacterias gram positivas y gram
negativas, entre las que se incluyen Micrococcus spp, Enterobacter spp,
Escherichia coli , Lactobacillus spp, Pseudomona spp, Klebsiellas spp, Shigella y
Proteus spp (Fani et al., 2007) y hace muy poco, se estudi el efecto bactericida
que tiene sobre Campylobacter jejuni, el cual incrementa conforme se agrega ms
cantidad de concentrado (Xiaonan et al., 2011), as como la eficacia que posee
para reducir la presencia de bacterias salivales causantes de infecciones orales
(Borjan et al., 2012). Tambin se ha comprobado que tiene actividad contra virus,
hongos y parsitos (Garca y Herrera, 2007), reduce los niveles de azcar,
colesterol y triglicridos de la sangre, favorece la coagulacin sangunea, protege
al hgado de dao heptico y reduce la incidencia de cncer (Ganado, 2001)
Por su parte, la cebolla, cuyo nombre cientfico es Allium cepa es una planta
con hojas cuya longitud puede llegar a medir hasta un metro, est conformada por
un solo bulbo subterrneo que posee races poco profundas (Annimo, 2007).
Contiene protenas, calcio y flavonoides (Sampath Kumar et al., 2010), as como
compuestos sulfurados, principalmente el disulfuro de alilpropilo, que le confiere
sus propiedades medicinales (Sun- Ho et al., 2011). El olor penetrante que la
caracteriza se debe a estos compuestos y puede percibirse cuando la cebolla es
cortada, debido a la accin que ejercen las enzimas sobre los aminocidos
(Sampath Kumar et al., 2010).
padecimientos
comunes
como
diarreas
clera.
Diversas
10
investigaciones han revelado que, al igual que el ajo, reduce los niveles de
colesterol y azcar en la sangre (Morales, 1999). Tambin, se usa para reducir
infecciones orales, combatir las infecciones urinarias, anemias y trastornos
cardiovasculares, tratamiento para el acn, impulsar el deseo sexual y prevenir el
cncer (Sampath Kumar et al., 2010).
heces y orina,
14
3. JUSTIFICACIN
Segn la OMS, un desinfectante es aquel agente que es capaz de inhibir el
crecimiento de un microorganismo o de destruirlo, siempre que no se trate de una
bacteria en su fase esporulada; sin embargo, la accin de un desinfectante no
conlleva la total destruccin de los microorganismos de una superficie, aunque s
los reduce a cantidades mnimas que no daen la salud (OMS, 2004).
15
16
4. HIPTESIS
Las diferentes concentraciones de ajo y cebolla determinan el efecto
antimicrobiano que poseen stos frente a la Escherichia coli y Salmonella
enteritidis.
5. OBJETIVO GENERAL
6. OBJETIVOS ESPECFICOS
17
7. MATERIAL Y MTODOS
7.1 LOCALIZACIN
El presente trabajo se realiz en las instalaciones del Laboratorio Cordobs de
Diagnstico Pecuario que se encuentra en la ciudad de Crdoba, Veracruz con
domicilio en Av. Las Quintas S/N Fraccionamiento las Quintas.
18
El mismo
19
20
21
22
8. RESULTADOS Y DISCUSIN
Se filtraron los primeros 7 tubos con ajo deshidratado en diferentes
concentraciones para medir las Absorbancias (ABS) que tienen las muestras el
mismo da de su preparacin. Las medidas fluctan entre 550 y 625 nm, que estn
representadas con las lneas de colores. En la figura 3, se puede observar que la
ABS tiene un aumento lineal conforme se incrementa la concentracin de ajo
deshidratado, donde la concentracin del 10% es la que posee los niveles ms
altos en los cuatro valores de medidas de nm utilizados.
1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
ABS
550
575
600
625
0%
2%
4%
6%
8%
10%
12%
Concentracin
23
1.6
ABS
1.4
1.2
1
550
0.8
575
0.6
600
0.4
625
0.2
0
0%
2%
4%
6%
8%
10% Concentracin
12%
ABS
1.6
1.4
1.2
550
575
0.8
0.6
600
0.4
625
0.2
0
0%
2%
4%
6%
8%
10%
12%
Concentracin
24
Los mismos criterios fueron utilizados en los tubos con las diferentes
concentraciones de cebolla deshidratada. Se midi la ABS del grupo de muestras
filtradas el mismo da de su preparacin y se pudo observar que, al contrario que
el ajo, los valores de ABS de la cebolla aumentaban de manera lineal en las
concentraciones del 1 al 5 %, pero present disminucin en aquellas
concentraciones mayores a stas. El mejor nivel de ABS se obtuvo a una
concentracin del 5% (Figura 6).
0.7
ABS
0.6
0.5
550
0.4
575
0.3
600
0.2
625
0.1
0
0%
2%
4%
6%
8%
10%
Concentracin
12%
25
0.5
ABS
0.45
0.4
0.35
0.3
550
0.25
575
0.2
600
0.15
625
0.1
0.05
0
0%
2%
4%
6%
8%
10%
12%
Concentracin
ABS
0.35
0.3
0.25
550
0.2
575
0.15
600
0.1
625
0.05
0
0%
2%
4%
6%
8%
10%
Concentracin
12%
26
ABS
0.35
0.3
0.25
550
0.2
575
0.15
600
0.1
625
0.05
0
0%
2%
4%
6%
8%
10%
Concentracin
12%
27
0.4
ABS
0.35
0.3
0.25
550
0.2
575
0.15
600
0.1
625
0.05
0
0%
2%
4%
6%
8%
10%
12%
Concentracin
ABS
0.35
0.3
0.25
550
0.2
575
0.15
600
0.1
625
0.05
0
0%
2%
4%
6%
8%
10%
Concentracin
12%
28
ABS
0.18
0.16
0.14
0.12
550
0.1
575
0.08
600
0.06
625
0.04
0.02
0
0%
2%
4%
6%
8%
10%
12%
Concentracin
29
0.25
ABS
0.2
0.15
550
575
0.1
600
625
0.05
0
0%
2%
4%
6%
8%
10%
Concentracin
12%
ABS
0.12
0.1
550
0.08
575
0.06
600
0.04
625
0.02
0
0%
2%
4%
6%
8%
10%
Concentracin
12%
30
Se
31
32
POCILLOS
CEPAS
Salmonella enteritidis
Escherichia coli
10
Salmonella enteritidis
Escherichia coli
10
33
Salmonella enteritidis
Escherichia coli
10
34
Salmonella enteritidis
Escherichia coli
10
de
Escherichia coli fue de 12.5 mg/ml, en tanto que para Salmonella enteritidis fue de
25 mg/ml. Estos datos distan de los proporcionados por Alwazni y Drewsh (s/f),
quienes concluyeron que la CMI inhibitoria del ajo sobre las bacterias antes
mencionadas es de al menos 500 mg/0.5 ml.
35
Cuadro 5.- CMI del ajo necesaria contra las bacterias de la investigacin
BACTERIA
Salmonella enteritidis
Escherichia coli
25 mg/ml
12.5 mg/ml
36
El control positivo dio como datos que los inculos bacterianos tenan
12,000 Unidades Formadoras de Colonias (UFC) de Escherichia coli y 270,000
UFC de Salmonella enteritidis. Al obtener el conteo de las placas de control
positivo, se compararon los resultados obtenidos de la prueba de determinacin
37
38
Escherichia
Salmonella
coli
enteritidis
UFC
UFC
Ajo 2x
130
Ajo 1X
740
Ajo 0.5 X
2,000
Cebolla 2x
30
30
Cebolla 1X
110
100
Cebolla 0.5 X
640
2,810
Control positivo
12,000
270,000
39
Cuadro 7.- Tasa (%) de eliminacin de los extractos de ajo y cebolla sobre
las bacterias de Escherichia coli y Salmonella enteritidis
% sobre
% sobre
Escherichia
Salmonella
coli
enteritidis
Ajo 2x
48.17
100
Ajo 1x
29.66
100
Ajo 0.5 x
19.07
100
Cebolla 2x
63.78
72.80
Cebolla 1x
49.95
63.17
Cebolla 0.5 x
31.20
36.50
40
9. CONCLUSIONES
Los resultados obtenidos durante este estudio demuestran que los principios
activos del ajo a niveles de 10% pueden ser usados como desinfectante natural
para la inhibicin de Escherichia coli y Salmonella enteritidis. En el caso de la
cebolla, es posible que los efectos obtenidos para la inhibicin en el crecimiento
de los microorganismos en las microplacas, no hayan sido los adecuados por las
concentraciones utilizadas, como pudo comprobarse con la tcnica de tasa (%) de
eliminacin. Es probable que se requieran concentraciones de al menos el 20%
para observar el efecto antimicrobiano deseado. Se sugiere una evaluacin en
aves de traspatio con la finalidad de observar el efecto en los parmetros
productivos que tienen este tipo de aves bajo manejos rustico, ya que el efecto
mostrado puede ser una buena alternativa tecnolgica para mejorar la viabilidad
de las aves.
41
s/f. Espectrofometra:
colorimtrica
de
Espectros de
Absorcin y cuantificacin
biomolculas.
Disponible
en
3.- Alwazni WD y Drwesh MF s/f. Comparative study of effect garlic and anion
extract on the growth of some gram negative bacteria. Disponible en
http://www.iasj.net/iasj?func=fulltext&aId=36460 , consultada el 26 de enero del
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42
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http://www.fmvz.unam.mx/fmvz/cienciavet/revistas/CVvol3/CVv3c05.pdf
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infecciones
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46
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Garlic-Derived Organosulfur Compounds on Campylobacter jejuni by Using Fourier
Transform Infrared Spectroscopy, Raman Spectroscopy, and Electron Microscopy.
Applied and environmental microbiology 77(15): 52575269
47