Professional Documents
Culture Documents
MATERI :
ISOLASI ENZIM PAPAIN DAN REAKSI ENZIMATIS
Disusun Oleh :
Kelompok
: 6
Anggota
NIM: 21030110141049
NIM: 21030110141134
Kelompok :
Anggota
NIM: 21030110141022
NIM: 21030110141049
NIM: 21030110141134
Laporan Praktikum Mikrobiologi Industri berjudul Isolasi Enzim Papain dan Reaksi Enzimatis ini
telah disahkan pada:
Tanggal : 20 Juni 2012
Di
: Semarang
Asisten Pengampu,
RINGKASAN
Enzim merupakan katalis yang berasal dari zat hidup dan memiliki derajat efisiensi tinggi.
Enzim banyak dimanfaatkan dalam industri. Tujuan percobaan ini adalah mengisolasi enzim papain
dari getah buah pepaya dan remasan daun pepaya, menghitung aktivitas enzim, dan membandingkan
garam pengendap, suhu, dan pH terhadap aktivitas enzim.
Enzim papain banyak digunakan dalam pelunakan daging dan untuk menghaluskan gandum.
Proses isolasi enzim meliputi ekstraksi padat cair, sentrifugasi, dan presipitasi. Faktor yang
mempengaruhi aktivitas enzim antara lain konsentrasi substrat, pH, konsentrasi enzim, temperatur, dan
racun enzim.
ii
iii
SUMMARY
Enzymes are catalysts derived from living matter and have a high degree of efficiency.
Enzymes are widely used in industry. The purposes of this experiment are to isolate the enzyme from
papaya latex and squeeze of papaya leaf, calculate the enzyme activity, and compare the precipitating
salt, temperature, and pH on enzyme activity.
The papain enzyme is widely used in the softening of meat and to smooth the grain. Enzyme
isolation process involves solid liquid extraction, centrifugation, and precipitation. Factors affecting the
activity of the enzyme: substrate concentration, pH, enzyme concentration, temperature, and toxic
enzymes.
Experiments carried out by grinding papaya latex and preparing squeezed papaya leaves. Then
take 20 grams papaya latex and 25 ml squeeze papaya leaf and add 3 gr cysteine, 18 ml ethanol, and 20
ml aquadest. Adjust the pH corresponding variable. Stirr with magnetic stirrer for 15 minutes, strain the
sediment with filter paper and vacuum pumps. Add NaCl corresponding variable to the filtrate and then
centrifugation for 20 min, 2000 rpm. Separate the precipitate with filter paper and vacuum pump, then
drain and save it, add NaCl to the filtrate and then store in refrigerator. After 1 day, separate the filtrate
and the precipitate using a filter paper and vacuum pumps, dry sediment. When the total sediment is > 1
gram, take 1 gram of dilute 10 ml. if not, take 1 ml of the filtrate dilute 10 ml. The solution is an enzyme.
For enzymatic reactions, 20 and 40% for milk SGM W 120 ml base. Perform enzymatic test at a
temperature of 300C, 500C and 700C, with a ratio of milk: the enzyme = 7: 3. Record the clotting time of
the first.
From the experimental results obtained that enzyme activity on variable with pH 3 is the best,
this is due to variable pH 3 there is no addition of salt, where the addition of salt to break the hydrogen
bonds that ultimately lead to denaturation. The quality of the enzyme from papaya latex is better than
squeeze papaya leaves, based on data on fruit papain proteolytic activity of about 400 MCu / gram while
the papaya leaves only 200 MCu / gram. Precipitating agent effect on the precipitation of proteins from
solution due to decrease in the amount of water bound to the protein. In all variables the highest enzyme
activity occurred at 70 C. This is because the optimum papain enzyme activity is 60-700C. The more
substrate, the enzyme likely to meet and react with the substrate will be higher as well.
From the experiments it can be concluded that the enzyme optimum pH is 5-7, the best the
quality of the enzyme is an papain enzyme from papaya latex, precipitating agents affect the
precipitation of proteins from solution, the optimum temperature of enzyme activity is 60-700C, and
with more substrates, the enzyme is easier meet and react with the substrate. Therefore, in observing the
formation of deposits more thoroughly, drying the precipitate should be completely dry, and the
temperature must be kept constant.
iv
PRAKATA
Puji syukur penyusun panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa atas rahmat dan
anugerah-Nya sehingga penyusun dapat menyelesaikan Laporan berjudul Isolasi Enzim Papain dan
Reaksi Enzimatis. Laporan ini disusun sebagai kelengkapan tugas mata kuliah Praktikum Mikrobiologi
Industri.
Penyusun menyadari sepenuhnya bahwa tanpa bantuan dan kerja sama dari berbagai pihak
maka laporan ini tidak akan dapat terselesaikan. Oleh karena itu dalam kesempatan ini penyusun
mengucapkan terima kasih kepada:
1.
Dosen Pembimbing Praktikum Mikrobiologi Industri Jurusan Teknik Kimia Fakultas Teknik
Universitas Diponegoro Semarang tahun 2012.
2.
Untuk itu, segenap kritik dan saran yang membangun sangat penyusun harapkan. Semoga laporan ini
dapat bermanfaat bagi pembaca.
Penyusun
DAFTAR ISI
Halaman Pengesahan ............................................................................................................................................................... ii
Ringkasan ..................................................................................................................................................................................... iii
Summary ........................................................................................................................................................................................v
Prakata ......................................................................................................................................................................................... vii
Daftar Isi .................................................................................................................................................................................... viii
Daftar Tabel................................................................................................................................................................................ ix
Daftar Gambar.............................................................................................................................................................................x
BAB I
Pendahuluan
I.1
I.2
I.3
BAB II
BAB III
Metodologi Percobaan
III.1
BAB IV
BAB V
Alat .................................................................................................................................8
III.1.2
Bahan ............................................................................................................................8
III.2
III.3
III.4
IV.2
Pembahasan .................................................................................................................................. 13
Penutup
V.1
Kesimpulan .................................................................................................................................... 17
V.2
Saran ................................................................................................................................................ 17
vi
DAFTAR GAMBAR
Gambar III.1 Erlenmeyer .........................................................................................................................................................8
Gambar III.2 Beaker Glass ......................................................................................................................................................8
Gambar III.3 Centrifuge ..........................................................................................................................................................9
Gambar III.4 Mortar.................................................................................................................................................................9
Gambar III.5 Indikator pH .....................................................................................................................................................9
Gambar III.6 Kertas Saring ....................................................................................................................................................9
vii
viii
Latar Belakang
Enzim merupakan katalis yang berasal dari zat hidup yang mempunyai derajat dan
efisiensi tinggi. Enzim juga banyak dimanfaatkan dalam proses industri, misalnya enzim amilase
untuk mengubah pati menjadi glukosa. Mengingat betapa besar manfaat enzim maka praktikum
isolasi enzim perlu dilakukan.
I.2
Tujuan Percobaan
1.
Mengisolasi enzim papain dari getah buah pepaya dan remasan daun pepaya.
2.
3.
I.3
Manfaat Percobaan
1.
Dapat mengetahui sifat-sifat enzim papain sehingga dapat menghasilkan enzim papain
berkualitas baik dan produktif.
2.
3.
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
1.
Pengertian Umum
Enzim berasal dari kata en = in = dalam dan zim = yeast = khamir. Artinya dalam khamir
yang maksudnya katalis dari zat hidup yang punya derajat efisiensi tinggi. Enzim merupakan
sejenis protein kompleks yang unik dan merupakan bahan antara yang penting untuk
metabolisme dan berbagai perubahan kimia dalam tubuh.
2.
Isolasi Enzim
Untuk mengisolasi enzim papain dari getah buah pepaya dilakukan 3 proses pemisahan :
a.
Ekstraksi padat-cair
Merupakan salah satu metode pemisahan cairpadatan. Pada proses ini, komponen
yang tidak larut dipisahkan dari bahan padatan dengan bantuan solvent. Ketika solvent
dicampur dengan sampel, maka solvent akan melarutkan ekstrak dengan difusi sampai
terjadi keseimbangan konsentrasi.
b.
Sentrifugasi
Merupakan cara memisahkan bagian seperti partikel dalam medan gaya sentrifugal
partikel yang berukuran berbeda dalam berbagai ukuran. Densitas dan bentuk akan
mengendap searah sentrifugal dengan kepentingan berbeda.
c.
Presipitasi
Banyak agen pemisah yang digunakan untuk mengendapkan protein seperti garam
proteolitik, polimer, panas, pH, dan solvent organik.
4.
Imobilisasi Enzim
Enzim tidak dapat mengalami perubahan reaksi kimia, maka enzim dapat digunakan
berulangulang. Pada umumnya reaksi dan pemisahan enzim dari produk dengan menggunakan
modifikasi pH, panas atau kedua-duanya. Penggunaan cara seperti ini mengakibatkan enzim
kehilangan sebagian besar aktivitas katalitiknya, sehingga enzim tidak dapat digunakan
berulangulang. Agar dapat digunakan berulang-ulang pemisahan enzim dari produk harus
dengan cara tertentu sehingga didapatkan enzim dalam bentuk terimobilisasi tanpa mengurangi
aktivitas katalitiknya.
Enzim menyesuaikan diri di sekitar substrat untuk membentuk suatu kompleks enzim
substrat.
b.
Karena adanya gaya tarik antara enzim dan substrat, ikatan substrat menjadi tegang.
Ikatan tegang ini mempunyai energi tinggi dan lebih mudah terpatahkan, sehingga reaksi
lebih mudah dan membentuk kompleks enzimproduk.
c.
Karena produk dan substrat tidak sama, maka kesesuaian antara produk dan enzim tidak
sempurna.
d.
Bentuk produk menyebabkan kompleks berdisosiasi dan permukaan enzim siap untuk
menerima substrat lain. Teori aktivitas enzim ini disebut teori kesesuaian terimbas
(Induced-fit Theory).
E + S ES EP E + P
6.
7.
b)
c)
d)
e)
f)
g)
Inhibitor Enzim
Inhibitor Kompetitif
Inhibitor yang bersaing dengan substrat dengan cara meniru bentuk substrat sehingga
dapat berikatan dengan sisi aktif enzim.
Tidak bersaing langsung dengan substrat tetapi menempel pada bagian lain enzim
sehingga bentuk enzim berubah.
8.
Konsentrasi substrat
Pengaruh pH
Konsentrasi Enzim
Temperatur
Racun Enzim
Fungsi Reagen
a) Getah buah pepaya: sumber enzim papain.
b) NaOH
: pengatur pH.
c) Garam
d) Celite
e) Cystein HCl
kertas saring,melarutkan
bisa
diendapkan.
f) Casein
g) Aquadest
h) Solvent
cair-padat
getah
(Aceton,
Formaldehid,Etanol).
10.
Kegunaan Produk
a) Sebagai pelunak daging.
b) Sebagai bahan antidingin pada pembuatan beer.
c) Sebagai pelunak kulit pada industri penyamakan kulit.
11.
Penelitian Terdahulu
1.
2.
3.
Getah pepaya
4.
NaOH
2.
Cystein 0,04 mg
5.
H2SO4
3.
Aquadest
6.
Gelas ukur
6.
Fermentor
2.
Beaker glass
7.
Centrifuge
3.
IndiKator pH
8.
Erlenmeyer
4.
Magnetic stirrer
9.
Kompor listrik
5.
Saringan vakum
10. Oven
Penetapan Variabel
a)
Variabel Tetap
-
Sistem operasi
: 50 gr
Kecepatan pengadukan
: 3 digit
: batch
b)
4.
Waktu operasi
Pengendapan enzim
Pencucian enzim
: 15 menit
: acetone
: aquadest
Variabel Berubah
-
Suhu operasi
: 10 C, 50 C
pH operasi
: 5, 7, 9
: 200,100,125ml
o
Prosedur percobaan
a.
Ambil 50 gr getah pepaya, tambahkan cystein , atur ph dengan naoh dan H2SO4
2.
3.
4.
5.
Ambil nata dan aceton dengan perbandingan 1:1. Ditutup dan disimpan dalam
keadaan dingin selama 1 malam, kemudian di sentrifugasi sehingga timbul
endapan papain. Pisahkan endapan dan keringkan dengan oven.
b.
2.
3.
4.
5.
6.
!
!.!.!.!
A: aktivitas enzim
E: berat sampel
T: waktu yang diperlukan untuk terjadinya gumpalan enzim
III.1.2
Alat
a.
Erlenmeyer
f.
Kertas saring
b.
Beaker glass
g.
Thermometer
c.
Centrifuge
h.
Pipet tetes
d.
Mortar
i.
Magnetic stirrer
e.
Indikator pH
j.
Gelas ukur
Bahan
a.
f.
b.
g.
Aquadest secukupnya
c.
NaCl @ 3 gram
h.
d.
Etanol 18 ml
e.
Cystein @3 gram
Getah 20 gr, cysteine 3 gr, etanol 18 ml, aquadest 20 ml, garam pengendap NaCl 0 gram, dan
pH 3
Getah 20 gr, cysteine 3 gr, etanol 18 ml, aquadest 20 ml, garam pengendap NaCl 3 gram, dan
pH 5
Remasan daun pepaya 25 ml, cysteine 3 gr, etanol 18 ml, aquadest 20 ml, garam pengendap
NaCl 3 gram, dan pH 7
Haluskan getah pepaya yang diperoleh menggunakan mortar, setelah halus, timbang getah
pepaya untuk 2 variabel masing-masing 20 gram, masukkan beaker glass. Siapkan cairan
remasan daun pepaya 25 ml, masukkan beaker glass.
b.
Tambahkan ke dalam beaker glass tersebut cystein, aquadest, ,dan etanol lalu atur pH
sesuai variabel.
c.
Aduk dengan magnetic stirrer campuran tersebut selama 15 menit pada suhu kamar.
d.
Saring dengan kertas saring dan menggunakan pompa vakum, sehingga didapat filtrat I
dan endapan I, buang endapannya.
e.
f.
Masukkan pada cuvet lalu disentrifugasi selama 20 menit dengan kecepatan 2000 rpm.
g.
Saring hasil sentrifugasi dengan kertas saring dan menggunakan pompa vakum, sehingga
diatur didapatkan endapan II dan filtrat II.
h.
i.
Tambahkan NaCl sesuai variabel pada filtrat II, lalu simpan 1 malam dalam lemari es.
j.
Saring filtrat II dengan kertas saring dan menggunakan pompa vakum, sehingga
didapatkan endapan III dan filtrat III.
k.
l.
Ambil endapan II, campurkan dengan endapan III, jika jumlah dari endapan II dan III (a
+ b gram) lebih besar dari 1 gram, ambil 1 gram endapan tersebut, larutkan dalam air
sampai 10 ml (larutan ini adalah enzim).
m. Jika a+b kurang dari 1 gram, ambil 1 ml filtrat III, encerkan sampai 10 ml (larutan ini
adalah enzim).
Reaksi Enzimatis
a.
Buat larutan susu SGM 20% W dan 40% W dengan basis 120 ml.
b.
Panaskan larutan susu SGM tersebut sampai suhu 70 C, 50 C dan 30 C (suhu kamar).
c.
Setelah mencapai suhu tersebut, tuangkan larutan enzim ke dalam larutan susu.
Beaker
Glass
Laboratorium Mikrobiologi Industri
pH = sesuai variabel
Magnetic Stirrer
Etanol
t
=
15
menit
Filtrat I
Endapan I buang
+ NaCl
Centrifuge
Endapan II = a gr
Filtrat II
+
NaCl
Lemari
Es
Endapan III = b gr
Filtrat III
BAB IV
HASIL PERCOBAAN DAN PEMBAHASAN
Berat Endapan
Variabel
I
II
III
a (gram)
0,32
0,21
1,25
b (gram)
0,61
1,19
1,3
a+b (gram)
0,93
1,40
2,55
Reaksi Enzimatis
Variabel
t
(detik)
A
(Mcu/gr)
t
(detik)
A
(Mcu/gr)
t
(detik)
A
(Mcu/gr)
I
II
III
30C
20%
W
40%
W
T
(C)
50C
20%
W
40%
W
70C
20%
W
40%
W
117
0.0086
451
0.0022
992
0.001
157
0.0064
434
0.0023
53
0.0189
28
0.0358
108
0.0092
69
0.0145
480
0.0021
324
0.0031
779
0.0013
45
0.0222
256
0.0039
221
0.0045
20
0.0501
70
0.0143
69
0.0145
a.
b.
10
2.
Reaksi Enzimatis
a.
Grafik Hubungan A vs T
0.04
0.03
0.02
Variabel I
0.01
Variabel II
Variabel
III
suhu
kamar
50
70
Suhu
11
80
0.06
0.05
0.04
0.03
Variabel I
0.02
Variabel II
0.01
Variabel III
0
suhu
kamar
50
70
80
Suhu
Dari grafik dapat dilihat bahwa pada variabel I dan variabel II, aktivitas enzim
o
optimum pada suhu 70 C. Hal ini terjadi karena enzim papain memiliki suhu
o
optimum antara 60-70 C. Sedangkan pada variabel III suhu optimumnya adalah
o
12
BAB V
PENUTUP
V.1
Kesimpulan
1.
2.
Kualitas enzim yang lebih baik adalah enzim papain dari getah papaya
3.
4.
5.
Semakin banyak substrat, makin besar kemungkinan enzim bertemu dan bereaksi dengan
substrat
V.2
Saran
1.
2.
3.
4.
DAFTAR PUSTAKA
Diktat Mikrobiologi Industri Teknik Kimia UNDIP
13
14
LEMBAR PERHITUNGAN
1.
2.
1
=
= 1.11 /
0.9
Menghitung kebutuhan susu untuk larutan 20% W dan 40% W basis 120 ml
=
Aktivitas Enzim
!
Variabel 1
a)
T = 30 C
20% W
=
40% W
1
1.11 0.9 117
= 0,0086 mCu/gr
b)
= 0,0021 /
40% W
1
1.11 0.9 157
= 0.0064 mCu/gr
1
1.11 0.9 45
= 0,0222 /
T = 70 C
20% W
=
1
1.11 0.9 28
= 0,0358 mCu/gr
-
1
1.11 0.9 480
T = 50 C
20% W
c)
40% W
=
1
1.11 0.9 20
= 0,0501 mCu/gr
Variabel 2
a)
T = 30 C
20% W
=
40% W
1
1.11 0.9 451
= 0,0022 mCu/gr
b)
1
1.11 0.9 324
= 0,0031 mCu/gr
T = 50 C
20% W
40% W
A-15
1
1.11 0.9 434
= 0,0023 mCu/gr
c)
= 0,0039 mCu/gr
T = 70 C
20% W
=
40% W
1
1.11 0.9 256
= 0,0092 mCu/gr
1
1.11 0.9 256
1
1.11 0.9 70
= 0,0143 mCu/gr
Variabel 3
d)
T = 30 C
20% W
=
40% W
1
1.11 0.9 992
= 0,0010 mCu/gr
e)
40% W
1
1.11 0.9 53
1
1.11 0.9 221
= 0,0045 mCu/gr
T = 70 C
20% W
=
= 0,0013 mCu/gr
T = 50 C
= 0,0185 mCu/gr
f)
1
1.11 0.9 779
20% W
=
40% W
1
1.11 0.9 69
= 0,0145 mCu/gr
1
1.11 0.9 69
= 0,0145 mCu/gr
LAPORAN SEMENTARA
PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI INDUSTRI
A-16
MATERI :
ISOLASI ENZIM PAPAIN DAN REAKSI ENZIMATIS
Disusun Oleh :
Kelompok
: 6
Anggota
21030110141022
21030110141049
21030110141134
TUJUAN PERCOBAAN
1.
Mengisolasi enzim papain dari getah buah pepaya dan remasan daun pepaya.
2.
3.
II
PERCOBAAN
II.1 Bahan yang Digunakan
a.
f.
b.
g.
Aquadest secukupnya
c.
NaCl @3 gram
h.
d.
Etanol @18 ml
A-17
e.
Cystein @3 gram
III
a.
Erlenmeyer
f.
Kertas saring
b.
Beaker glass
g.
Thermometer
c.
Centrifuge
h.
Pipet tetes
d.
Mortar
i.
Magnetic stirrer
e.
Indicator pH
j.
Gelas ukur
Cara kerja
Isolasi Enzim
a.
Haluskan getah pepaya yang diperoleh menggunakan mortar, setelah halus, timbang getah
pepaya untuk 2 variabel masing-masing 20 gram, masukkan beaker glass. Siapkan cairan
remasan daun pepaya 25 ml, masukkan beaker glass.
b.
Tambahkan ke dalam beaker glass tersebut cystein, aquadest, etanol, dan atur pH sesuai
variabel.
c.
Aduk dengan magnetic stirrer campuran tersebut selama 15 menit pada suhu kamar.
d.
Saring dengan kertas saring dan menggunakan pompa vakum, sehingga didapat filtrate I
dan endapan I, buang endapannya.
e.
f.
Masukkan pada cuvet lalu disentrifugasi selama 20 menit dengan kecepatan 2000 rpm.
g.
Saring hasil sentrifugasi dengan kertas saring dan menggunakan pompa vakum, sehingga
diatur didapatkan endapan II dan filtrat II.
h.
i.
Tambahkan NaCl sesuai variabel pada filtrat II, lalu simpan 1 malam dalam lemari es.
j.
Saring filtrat II dengan kertas saring dan menggunakan pompa vakum, sehingga
didapatkan endapan III dan filtrat III.
k.
l.
Ambil endapan II,campurkan dengan endapan III, jika jumlah dari endapan II dan III (a +
b gram) lebih besar dari 1 gram, ambil 1 gram endapan tersebut, larutkan dalam air sampai
10 ml (larutan ini adalah enzim).
m. Jika a+b kurang dari 1 gram, ambil 1 ml filtrat III, encerkan sampai 10 ml (larutan ini
adalah enzim).
Reaksi Enzimatis
a.
Buat larutan susu SGM 20 dan 40%W dengan basis 120 ml.
b.
Panaskan larutan Susu SGM tersebut sampai suhu 70 C, 50 C dan 30 C (suhu kamar).
A-18
c.
Setelah mencapai suhu tersebut, tuangkan larutan enzim ke dalam larutan susu.
Perbandingan susu : enzim = 7 : 3.
d.
Beaker Glass
Getah
Aquadest
Cysteine
Endapan I buang
Etanol
Magnetic Stirrer
t= 15mnt
Filtrat I
+ NaCl
Filtrat II
Centrifuge
Endapan II = a gr
+
NaCl
Lemari
Es
IV
Endapan III = b gr
Filtrat III
Hasil Percobaan
Densitas Susu SGM = 0.9 gr/ml
Berat endapan yang diperloreh :
Variabel
I
II
III
a (gram)
0,32
0,21
1,25
b (gram)
0,61
1,19
1,3
a+b (gram)
0,93
1,40
2,55
Variabel
30C
20%
W
40%
W
T
(C)
50C
20%
W
40%
W
70C
20%
W
40%
W
A-19
t (detik)
117
480
157
45
28
20
II
t (detik)
451
324
434
256
108
70
III
t (detik)
992
779
53
221
69
69
Mengetahui,
Praktikan
............................
Asisten
A-20
Asisten
Variabel
:
1. Getah 20 gr, cysteine 3 gr, etanol 18 ml, aquadest 20 ml
2. Getah 20 gr, cysteine 3 gr, etanol 18 ml, aquadest 20 ml
3. Remasan daun pepaya 25 ml, cysteine 3 gr, etanol 18 ml, aquadest 20 ml
Suhu magnetic stirrer : suhu kamar ; selama 15 menit
Sentrifugasi 2000 rpm ; selama 20 menit
pH 1 = 3 2 = 5 3 = 7 ;
NaCl 1 = 0 gr 2 = 3 gr 3 = 3 gr
Reaksi Enzimatis
Susu selain Dancow basis 120 ml
20%W
susu : enzim = 7 : 3
40%W
o
o
o
Suhu pencampuran = 30 C (suhu kamar), 50 C dan 70 C
A-21
LEMBAR ASISTENSI
DIPERIKSA
NO
KETERANGAN
TANDA TANGAN
TANGGAL