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Pesquisa de helmintos
Tcnicas Laboratoriais
Pesquisa de Helmintos
Pesquisa de Protozorios
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Pesquisa de helmintos
ndice
AULA PRTICA 1 Mtodo de Hoffman, Pons e Janer ou HPJ.............................2
AULA PRTICA 2 Mtodo de Willis...................................................................2
AULA PRTICA 3 Mtodo de anal swab............................................................3
AULA PRTICA 4 Mtodo de Baerman..............................................................4
AULA PRTICA 5 Mtodo de Rugai...................................................................5
AULA PRTICA 6 Mtodo de Tamisao...........................................................5
AULA PRTICA 7 Mtodo de Kato Katz.............................................................6
AULA PRTICA 8 Mtodo de
Stoll.....................................................................7
AULA PRTICA 9 Mtodo de Faust...................................................................9
AULA PRTICA 10 Mtodo de Ritchie...............................................................9
AULA PRTICA 11 Mtodo de Hematoxilina Frrica.......................................10
COLORAO ACID-FAST................................................................................12
COLORAO DE KINYOUN................................................................................13
COLORAO DE SAFRANINA.............................................................................14
COLORAO DE TRICRMIO.............................................................................15
COLORAO DE GRAM CHROMOTROPE.............................................................17
COLORAO DE LEISHMAN..............................................................................19
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Pesquisa de helmintos
2) Encher o clice com gua aquecida a 45C, at que o nvel da gua alcance a
massa fecal contida no recipiente emborcado;
3) Uma hora depois, pipetar o sedimento que se acumulou no vrtice do clice de
sedimentao, colocar em uma lmina ou em vidro relgio e examinar ao
microscpio ou lupa.
4) Usar o quadro 63.2 (em anexo) para identificao das larvas.
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Pesquisa de helmintos
Contagem da lmina:
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Pesquisa de protozorios
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Pesquisa de protozorios
15 mL
Adicionar o cido soluo-estoque pouco antes de usar. Por ser uma soluo txica,
pode-se substituir pelo fixador de Junod (soluo aceto-formulado):
Acetato de sdio -----------------------------------------------
1,5 g
4,0 mL
2,0 mL
1g
20 mL
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5g
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Tcnicas de Colorao
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Tcnicas de Colorao
COLORAO DE KINYOUN
* Objetivo: identificao de Cryptosporidium sp., Isospora belli, Cyclospora
cavetanensis.
* Princpio: fundamenta-se na caracterstica lcool-cido resistente dos parasitas.
* Amostra: fezes, escarro, lquidos cavitrios ou material de secreo.
Reagentes:
Fucsina Carblica de Kinyoun
Fucsina bsica ---------------------- 4 g
Etanol 95% -------------------------- 20 mL
Fenol ---------------------------------
8 mL
3g
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Tcnicas de Colorao
COLORAO DE SAFRANINA
* Objetivo: identificao de Cryptosporidium sp., Isospora belli, Cyclospora
caetanensis.
* Princpio: fundamenta-se na caracterstica lcool-cido resistente dos parasitas.
* Amostra: fezes, escarro, lquidos cavitrios ou material de secreo.
Reagentes:
1. lcool-cido 3%
cido clordrico ---------------------- 3 mL
Etanol --------------------------------- 97 mL
2. Corante de Safranina
Safranina ----------------------------
1g
3g
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Tcnicas de Colorao
4,5 mL
50 mL
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Tcnicas de Colorao
Colorao:
Colocar em frasco coletor uma parte de MB para 3 partes de formol 10%.
Fazer esfregao fino, com 10l de amostra conservada, em lmina.
Deixar secar a temperatura ambiente.
Fixar com metanol 3 a 5 minutos.
Colocar a lmina no corante tricrmio por 90 minutos.
Lavar em lcool-cido por 1 a 3 segundos.
Lavar em etanol 95% mergulhando por 5 segundos.
Colocar em etanol por 1 minuto (2 trocas).
Colocar em xilol por 10 minutos e esperar secar.
Observar ao microscpio com objetiva de imerso (100X).
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Tcnicas de Colorao
3. Lugol de Gram
Soluo 1
Hidrxido de sdio ----------- 4 g
gua deionizada -------------- 25 mL
Soluo 2
Iodo metlico ----------------- 2 g
Iodeto de potssio ------------ 1 g
4. lcool Acetona
Acetona ------------------ 75 mL
ter etlico --------------- 25 mL
5. Corante tricrmio Weber
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Chromotrope 2R ----------- 6 g
Verde malaquita ----------- 0,15 g
cido Fosfotngstico ----- 0,7 g
cido actico glacial ------ 3 mL
gua deionizada ----------- 100 mL qsp
4,5 mL
50 mL
Colorao:
Colocar em frasco coletor uma parte da amostra para 3 partes de formol 10%.
Fazer esfregao fino, com 10l de amostra conservada, em lmina.
Deixar secar a temperatura ambiente.
Fixar com metanol ou sob a chama do bico de Bunsen (3 vezes, 1 segundo sob a
chama, ou 5 minutos a 60C em estufa).
Cobrir a lmina com soluo cristal violeta 1%, adicinar 3 gotas de carbonato de
sdio 5% e deixar por 2 minutos.
Lavar o excesso com gua deionizada.
Cobrir a lmina com lugol de gram por 2 minutos.
Lavar com gua deionizada.
Descorar com mistura acetona-ter.
Colocar no corante tricrmio por 10 minutos.
Colocar em lcool-cido por 1 a 3 segundos.
Lavar em etanol 95% mergulhando.
Colocar em etanol PA por 1 minuto e 2 trocas.
Deixar secar e observar ao microscpio com objetiva de imerso (100X).
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Tcnicas de Colorao
COLORAO DE LEISHMAN
* Objetivo: visualizao e identificao de Blastocystis hominis.
* Princpio: baseia-se na deteco de microrganismos atravs da colorao destes
parasitas.
* Amostra: fezes, secrees, lquidos cavitrios ou de derrames e bipsias.
Reagentes:
1. Laboazul
Soluo aquosa concentrada de 1-2-3 Propanetricarboxylic acid, 2 Hydroxy
Cooper Sodium Salt (1.2.1) Tetrahydrate
2. Leishman
Leishman ----------------------
2,5 g
3. gua deionizada
4. leo de imerso
Colorao:
Verificar a presena de vermes, ao abrir o frasco.
Homogeneizar o material acrescentando 3 gotas de laboazul.
Fazer um esfregao fino deixando secar a temperatura ambiente ou na chama do
bico de Bunsen.
Cobrir a lmina com Leishman por 3 a 5 minutos.
Gotejar sobre a lmina gua deionizada de maneira a se obter uma diluio do
corante para mais ou menos a metade, homegeneizar a mistura e deixar mais 15
minutos.
Lavar em gua deionizada e deixar secar temperatura ambiente.
Fazer a leitura em microscpio ptico em objetiva de imerso (100X), aps adio
de leo de imerso.
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Tcnicas de Colorao
(lugol)
(sudam III)
2) Gorduras
(lugol)
(sudam III)
3)Tecido conjuntivo
RESDUOS DE ORIGEM VEGETAL
4)Celulose Digestvel
A)Amido
a) amido amorfo
b) amido includo
c) amido cru
B) Vegetais
a) fibra vegetal
b) pelo vegetal
c) esporo vegetal
d) vaso vegetal
C) Cristais (40x)
a) Oxalato de clcio
b) Fosfato amonaco magnesiano (fosfato triplo)
c) cidos graxos
d) Caroteno
e) Charcot-Leyden
f) Colesterol
g) Outros (medicamentos, sulfas, etc...)
5)Celulose Indigestvel
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cocos
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bacilos
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leveduras
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Referncia Bibliogrfica:
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