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DETERMINACIN QUMICA Y ESTUDIO TERAPUTICO DE AGAVE TEQUILANA


WEBER
Huad-Marroqun L.A1; A. Prez-Lin1; D. Resendez-Prez2; C. Moreno2; S. Lara Vsquez3; D.
Lzaro Lpez3 y C. Luna Rodrguez3
Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Autnoma de Nuevo Len, Nuevo Len. MXICO
1
Laboratorio de Qumica y manejo integral de Rec. Naturales
2
Jefa del Departamento de Biologa Celular y Gentica
3
Estudiantes asistentes en investigacin bajo la coordinacin de la Dra. Huad L.A.
leticiahauad@gmail.com

Resumen
El gnero Agave es considerado de gran importancia en nuestro pas debido a su
gran cantidad de propiedades los cuales permiten darle una gran cantidad de
usos.(Bravo-Hollis H y Sanches-Mejorada,1989). Una de estas propiedades,
reconocida sobre todo entre los pueblos indgenas, es la medicinal.(Huad M. L.A,
Cordova-Puente C. 2005) En este trabajo se busc realizar la determinacin qumica
de extractos de Agave tequilina weber, con tres distintos solventes: hexano,
cloroformo y metanol y posteriormente evaluar su actividad biolgica. El extracto
hexnico dio positivo solo para flavonoides; el extracto clorofrmico dio positivo para
flavonoides y oxhidrilos fenlicos y el extracto metanlico dio positivo para
flavonoides, oxidrihilos fenlicos y antronas. Todos los extractos dieron negativo para
saponinas y para alcaloides (Domnguez X.A. 1973). La activad biolgica se
determin

sobre

los

diferentes

extractos

presentando

actividad

contra

microorganismos de importancia en salud humana con grandes oportunidades de


utilizarse a nivel medicinal.

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Introduccin
El gnero Agave (Figura 1), cuyo significado es noble o admirable, fue dado a
conocer por Carlos Lineo en 1973. Dicho gnero comprende aproximadamente 200
especies, de las cuales el 75 % se encuentran en Mxico, lugar considerado el
centro de origen. Junto con el frijol y el maz, el agave fue una de las primeras
plantas cultivadas en Mesoamrica y gracias a su gran cantidad de usos, es tambin
considerado como el rbol de la vida13
Clasificacion Taxonmica y Descripcion
Reino: Plantae
Divisin: Magnoliophyta
Clase: Liliopsida (Monocotiledneas)
Subclase: Liliidae
Orden: Liliales
Familia: Agavaceae
Gnero: Agave
Subgnero: Agave
Seccin: Rigidae
Especie: Agave tequilana Weber2

Figura 1. Agave tequilana Weber (Foto de Prez-Lin, A., 2009).

Se caracteriza por su difcil determinacin taxonmica ya que existen autores que no


reconocen al gnero Agave dentro de la familia Agavaceae, sino lo incluyen dentro
de la familia Amarylidaceae o la familia Liliaceae. Por otro lado, la clasificacin
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propuesta por Dahlgren es la ms aceptada pues

ha sido basada en anlisis

morfolgicos y moleculares; en ella Daghler considera que la familia Agavaceae


incluye 8 gneros con 295 especies, de los cuales 125 especies (75 %) se
encuentran en Mxico13.
Dichas plantas son de tipo herbceo suculentas, en algunos casos son
arborescentes. Sus hojas se encuentran dispuestas en forma de roseta,
generalmente con espinas en los mrgenes o dientes y una espina terminal. Son
plantas pernnes o monocrpicas. Su inflorescencia emerge del centro de la roseta y
puede ser en forma de espiga o ramificada, con las flores creciendo en umbelas
sobre los pednculos laterales. Su reproduccin puede ser sexual o asexual
mediante los vstagos que emergen de rizomas de la planta madre13.
Distribucin
Este gnero se distribuye a lo largo del continente americano en zonas que van
desde los 40 grados latitud norte hasta los 20 grados latitud sur. Al norte se
encuentra presente en zonas ridas y semiridas de Norteamrica y Mxico, bajando
por las islas del Caribe hasta Colombia y Venezuela. En la cuenca Europea del
Mediterrneo fueron introducidas con fines ornamentales, posteriormente se
dispersaron fuera de los cultivos y actualmente se encuentran naturalizados13.
Diferentes Usos del Agave
El estudio del gnero Agave, se encuentra representado prcticamente por las
secciones Rigidae y Sisalanae, las cuales son cultivadas en gran medida para
diversos propsitos como son: a.) la obtencin de bebidas alcohlicas como el
tequila y el mezcal; b.) la obtencin de fibras naturales de gran resistencia c.) la
obtencin de compuestos esteroidales y otros compuestos de uso medicinal15.
Uso Medicinal
Desde tiempos muy antiguos en Mxico, el agave ha sido considerado como una
planta con propiedades medicinales, sobre todo dentro de la medicina indgena.

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Algunos tipos de agave son utilizados para tratar procesos inflamatorios, artritis y
fiebre6. Las pencas machadas y aplicadas en cataplasma provocan supuracin; sirve
tambin para desalojar los piojos de las bestias; las infusin de raz es depurativa y
mezclada con races de zarzaparrilla se dice que tiene valor curativo1.
Uso Agrcola
La fibra es utilizada principalmente para la confeccin de sacos o costales para el
empaquetamiento de granos como el caf, tambin

son utilizadas para la

elaboracin de artculos como alpargatas, colchones, cordelera y tapetes. Las


plantas jvenes son utilizadas para preparar un encurtido; se hierven para quitar lo
mucilaginoso y posteriormente se agrega agua, sal y vinagre. Finalmente el sumo de
las hojas es utilizado por las lavanderas para el lavado de la ropa delicada1.

Figura 2. Vista microscpica de fibra de Agave tequilana observada a 30X (Foto: Claudio
Moreno) FCB, UANL.

Fotoqumica del Agave


La fotoqumica es la ciencia que ha permitido la deteccin y posteriormente la
identificacin de los principios activos responsables de alguna propiedad atribuida a
alguna planta7. En el caso del Agave, se han identificado saponinas y sapogeninas,
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las cuales son un grupo de glicsidos que se disuelven en agua formando espuma.
Varias especies de Agave son fuentes de sapogeninas esteroidales, de donde se
pueden derivar compuestos anticonceptivos, antiinflamatorios y hormonas sexuales7.
As mismo se han reportado azcares los cuales se encuentran en cantidades
considerables. Se ha encontrado tambin una goma verdadera, la cual es una goma
de excrecin que se produce en la superficie de las hojas como reaccin a las
picaduras de insectos1.
Por otro lado, tambin se sabe que dicha planta cuenta con ciertas propiedades
medicinales; sin embargo, existen muy pocos reportes referentes a los compuestos
qumicos responsable de estas propiedades. Debido a lo anterior, este estudio tuvo
como objetivo la determinacin qumica de diferentes extractos de agave y la prueba
de su activad biolgica para establecer si alguno de los extractos contiene algn
compuesto que tenga potencial como fitofrmaco.
Materiales y Mtodos
Obtencin de los Extractos
El material vegetal se obtuvo de una planta de Agave tequilana Weber localizada en
una zona semi-rida correspondiente al estado de Nuevo Len. El material vegetal
seco, se cort en trozos pequeos y se colocaron 145 g en tres extractores tipo
Soxhlet (Figura 4), utilizando solventes de polaridad creciente (hexano, cloroformo y
metanol), por un periodo de 48 horas. Al trmino de las 48 horas, se repiti la
extraccin con el mismo solvente. Finalmente cada extraccin de los distintos
solventes, fue evaporada a sequedad en un Rotavapor Bchi B-114, con capacidad
de un litro (Figura 4).

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MATERIAL VEGETAL
SECO

Extraccin en caliente

HEXANO

CLOROFORMO

METANOL

PRUEBAS
QUIMICAS

PRUEBAS
BIOLOGICAS
Figura 3. Proceso metodolgico para el estudio qumico y biolgico de Agave tequilana
Weber.

Figura 4. Rotavapor Bchi B-114

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Estudios Preliminares
Mtodo Qumico
Las pruebas qumicas se basaron en los reportes de estudios ya realizados en
Nopalea cochenillifera y Chlorophora tinctoria, en el 2005. En ellos se reportan
algunos mtodos para la determinacin qumica de los principales compuestos
fitoqumicos.
Prueba para Flavonoides (Prueba Shinoda)
Se disolvieron 2-3 mg del extracto seco en 1 ml de metanol, se agregaron 3-4 gotas
de cido clorhdrico concentrado y una limadura de magnesio. La prueba es positiva
cuando las flaconas viran a color naranja, las flavononas a color rojo y los flavonoles
a color rojo azulado11.
Prueba para Saponinas y Sapogeninas
Una porcin del extracto se disolvi con agua destilada en un tubo de ensayo de 75 x
12 mm y se agit vigorosamente durante 2 minutos. La formacin de espuma que
persista por ms de un minuto, se considera prueba positiva11.
Prueba para Oxhidrilo Fenlico
Se disolvieron 2-3 mg del extracto seco en 1ml de una solucin de cloruro frrico al
2.5% en etanol. La prueba es considerada positiva si aparecen colores intensos11.
Prueba de Antrona
Se prepar una solucin de Antrona de la siguiente forma: 5mg de Antrona se
disolvieron en 4 ml de Acido sulfrico concentrado. Una pequea cantidad del
extracto se disolvi en 1 ml de agua y la solucin de Antrona se pasa poco a poco
por las paredes del tubo. La prueba da positiva si aparece un anillo azul verdoso
intenso en la interfase11.

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Prueba de Cromatografa en Capa Delgada


La muestra se coloc en una placa de aluminio de 5X10 cm, cubierta con silica gel
marca Analtech, por medio de un capilar. La placa se introdujo en una cmara de
vidrio de boca ancha, con un sistema de eluentes3 que difiri dependiendo del
extracto: para el extracto hexnico y clorofrmico se utilizo un eluente benceno
acetona 9:1 mientras que para el extracto metanlico se utilizo el eluente cloroformo
metanol 7:3.
Cada placa de silica se sac de la cmara y se sec a temperatura ambiente para
evaporar los eluentes y se procedi a su revelado.
Para revelar la cromatografa fue necesario el uso de ciertos agentes cromognicos.
Luz ultravioleta: la cromatografa se expuso a la luz ultravioleta de onda larga,
proveniente de una lmpara UVGL de una longitud de 365nm11, se registraron las
bandas y se calcul el Rf de cada una.
Cloruro de cobalto: Se realiz una solucin de 10 gr de CoCl2 y 50 ml de H2SO4
concentrado en 500 mL de agua destilada11. La cromatografa se roci con dicha
solucin y se calienta en la estufa a 120C por 10 minutos, se registraron las bandas
y se calcul el Rf de cada una.
Para calcular el Rf se mide la distancia del punto de aplicacin de la muestra hasta el
centro de la mancha detectada y se divide dicho valor por la distancia del punto de
aplicacin hasta el frente del eluente11.
Prueba para Alcaloides (Dragendorff)
En la cromatografa de capa delgada se revel con el reactivo de Dragendorff9 el cual
se prepar de la siguiente forma: Solucin A: Se disolvi 0.85 gr de Bi(NO3)3 nitrato
de bisumuto en una mezcla de 10ml de cido actico y 40 ml de agua. Solucin B: se
disolvi 8 gr de yoduro de potasio en 20 ml de agua destilada. Al momento se
mezclaron 5ml de la solucin A con 5 ml de la solucin B, se agregaron 20 ml de
cido actico y se afor a 100 ml con agua destilada. La solucin se roci en la
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placa cromatogrfica. La prueba da positiva si las manchas se colorean de naranja y


persisten mas de 24 horas.
Resultados
Cuadro 1. Resultados de las pruebas qumicas preliminares.

Prueba qumica Hexnico


Extracto
Flavonoides
Saponinas
Oxhidirlos fenlicos
Antronas

Positivo
Negativo
Negativo
Negativo

clorofrmico

metanlico

Positivo
Negativo
Positivo
Negativo

Positivo
Negativo
Positivo
Positivo

Cromatografas
En la cromatografa del extracto hexnico bajo la luz UV se mostr una sola mancha
roja con RF de 0.98; mientras que el revelado con cloruro de cobalto, dej ver dos
manchas color morado con RF de 0.35 y 0.85 respectivamente (Figura 5).

Rf = 0.85
Rf = 0.35
Rf = 0.35

Figura 5. Cromatografa de extracto hexnico en eluente benceno acetona 9:1 y


revelado con CoCl3.
Finalmente la cromatografa del extracto metanlico, bajo la luz UV, mostr una
mancha azulada con RF de 0.86 y una roja al 0.98; en el revelado con cloruro de
cobalto apareci una nueva mancha con RF de 0.84 (Figura 6).

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Rf= 0.98
Rf= 0.84, 0.86

Figura 6. Cromatografa de extracto metanlico en eluente cloroformo metanol 7:3 y


revelado con CoCl3.
Las cromatografas para alcaloides en todos los extractos dieron negativas.
Discusin
El objetivo inicial de este trabajo era la determinacin qumica y el estudio teraputico
de distintos extractos de A. tequilana. Debido al tiempo, no se alcanzaron a tener los
resultados de la actividad biolgica, sin embargo, los estudios ya fueron comenzados
por lo que se sugiere que en un futuro se muestre el reporte completo.
Por otro lado, el extracto metanlico proporcion un precipitado, el cual se sabe es
de

un

solo

compuesto

por

lo

que

actualmente

encuentra

en

estudios

espectroscpicos para la determinacin de su estructura qumica.


As mismo, las pruebas qumicas para oxhidrilos fenlicos dieron positivo para los
extractos clorofrmicos y metanlicos. Esto resulta relevante dado a que Garca et al4
public en 1999, un artculo en donde se evalu la actividad antimicrobiana de A.
intermixa, y sugiere que dicha propiedad se deba a la gran cantidad de compuestos
fenlicos. Sera interesante probar esta propiedad en dichos extractos para
corroborar los resultados obtenidos por Garca et al6. Por el contrario, todos los
extractos dieron negativo para saponinas, lo cual contradice lo encontrado en el
artculo de Gonzalez et al, publicado en el 2004.
Finalmente otro artculo publicado en el ao 2000 por Garca5 et al., evalu la
propiedad antiinflamatorio de A. intermixa, con muy buenos resultados; por lo que

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consideramos sera de gran importancia la continuidad en los estudios o en las


investigaciones de esta cactacea.
Agradecimientos
A la Academia Mexicana de Ciencias por el apoyo para realizar estancia

de

investigacin en el XIX Verano de la Ciencia. ( Id 9398) en el Laboratorio de Qumica


y Manejo Integral de recursos naturales bajo la direccin de la Dra. Leticia A. Huad
UANL-PAICYT Proyectos de Investigacin.

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9. Huad-Marroquin L. A., Crdova-Puente A., Rangel-Llanas A., Garca-Gonzles


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