CLONACON ANIMAL

Qu es la clonacin?

en general, clonar significa obtener uno o varios individuos a partir de una clula
somtica o de un ncleo de otro individuo, de modo que los individuos clonados son
idnticos o casi idnticos al original.

La palabra clonacin deriva del griego, idioma en que significa gajo o brote.
Cualquier organismo descendiente obtenido asexualmente (sin fecundacin),
cuya informacin gentica proviene de un solo progenitor, no de la combinacin de
los genes del padre y la madre. Es una copia exacta de su original biolgico.
Individuos genticamente iguales.
No constituye una manipulacin gentica ya que no existe alteracin del ADN ni
de los genes. El genoma permanece intacto.

Aplicaciones de la clonacin

La clonacin reproductiva tiene distintas aplicaciones en

biotecnologa animal.

- Clonado con fines agropecuarios

- Clonado de animales de zoolgicos y mascotas
- Clonado para introducir modificaciones genticas

La clonacin teraputica se aplica en medicina humana.

Tipos de
clonacin

Existen tres tipos de clonacin segn el mtodo

que se utiliza:

1- Particin embrionaria

2- Paraclonacin por transferencia de

ncleos de clulas embrionarias o fetales

3- Clonacin (en sentido estricto): por

transferencia de ncleos de clulas de
individuos nacidos

Particin embrionaria
Particin de un embrin, o separacin de blastmeros en
embriones preimplantatorios (de 2-32 clulas).

Cada mitad o trozo desgajado del embrin se introduce en una

zona pelcida de otro vulo, o en una cubierta artificial (ZPA), y
se implanta.

Blastmero de 4
clulas totipotentes

Paraclonacin
Transferencia de ncleos procedentes de blastmeros
embrionarios o de clulas fetales en cultivo a vulos no
fecundados enucleados y a veces, a zigotos enucleados.
El progenitor de los clones es el embrin o feto.

Ncleo haploide

vulo enucleado

Blastmero

Clon que dar

lugar al nuevo
Blastmero

Clonacin (en sentido estricto)

Transferencia de ncleos de clulas de individuos ya nacidos a

vulos o zigotos enucleados.

Se originan individuos casi idnticos entre s (salvo mutaciones

somticas) y muy parecidos al donante (del que se diferencian
en mutaciones somticas y en el genoma mitocondrial, que
procede del vulo receptor).

Principios de la clonacin
En los animales, la clonacin se basa en el uso de la tcnica de
transplante nuclear.
Mediante esta tcnica, una clula donante del individuo a clonar se
transfiere a un ovocito previamente enucleado.

clula donante
ovocito

embrin sinttico

Enucleacin

Electrofusin

TRANSPLANTE NUCLEAR

Clonacin (Oveja Dolly)

Dolly fue desarrollada por Wilmut y colaboradores (Nature 385:810-813, 1997) en
el Instituto Roslin de Edinburgo, Escocia.

Muere Feb.14, 2003

Cancer de pulmn,
artritis. Era
genticamente ms
vieja

Clulas donantes

Clulas adultas

- La vida media es de 20 divisiones celulares.

- La tasa de divisiones de 0,8 divisiones por da.
- Son muy sensibles a la inhibicin por contacto.
- Se desarrollan en menor proporcin.

Clulas fetales

- La vida media es de 35 divisiones celulares.

Ello permite su manipulacin gentica.
- La tasa de divisiones de 1,3 divisiones por da.
- Son muy sensibles a la inhibicin por contacto.

- Se desarrollan en mayor proporcin.

cortar el tejido

explanto

Fibroblastos provenientes de:

Biopsia
de adulto

Feto

El gran descubrimiento de I. Wilmut fue el

plantear la desprogramacin de las clulas
adultas a fin de retrasar su reloj biolgico
para volverlas a cero,
Esto se consigue mediante el tratamiento de
las referidas clulas a base de reducir el
aporte energtico de las mismas a un 10%
sometindolas a una especie de hibernacin
durante cinco das .

Quedan en la fase G0, en consecuencia su

cronologa biolgica pasara de la fase G2 a
la fase G0 y de este modo aquellas
sintonizan con mucha ms facilidad los
estmulos de crecimiento que van a recibir
del nuevo alojamiento en el ovocito
enucleado.

Ovocito
recipiente

24 hs

Expansin de las
clulas del cmulus

OVOCITOS INMADUROS
Primer cuerpo polar

OVOCITOS MADUROS
Los ovocitos obtenidos de
ovarios de animales
sacrificados para consumo
deben ser madurados in vitro.
La maduracin consiste en el
avance de la divisin meitica
hasta la metafase II.
En este estado se observa la
extrusin del primer cuerpo
polar.

Fusin celular

Gentileza de Biosidus S.A.

Aplicacin de un pulso de corriente continua por medio del equipo de

electrofusin permite la fusin de la membrana de la clula donante con la
del ovocito

Activacin

Post-fusin

Agregado de ionforos
de Ca2+ o pulsos
elctricos

Post-activacin

Formacin de 2
proncleos
Desarrollo
embrionario
y preez

El embrin se cultiva durante 6-7 das y luego se transfiere a la hembra receptora

Principales dudas sobre los animales clnicos

La edad de las clulas donantes permite suponer que tienen
aberraciones debidas a la edad, radiaciones, errores en el DNA, etc.
que se desconoce su comportamiento al ser transferidas al clnico.
Las mutaciones genticas producidas en las celulas durante el
cultivo in vitro
Los embriones producidos por la fusin de ambas celulas tienen
muchas posibilidades de ser embriones mosaicos. Los criterios que se
utilizan para seleccionas los embriones que van a ser transferidos al
tero no podran diferenciar embriones mosaicos de embriones
normales.

Algunos ejemplos de animales clonados

El primer mamfero clonado a partir de una clula somtica

fue una oveja, la ahora mundialmente conocida Dolly.

Tomado de: http://www.roslin.ac.uk/imagelibrary/

Algunos ejemplos de animales clonados

CLONACIN DE MASCOTAS

La primer mascota clonada fue un gato llamado Nicky en 2004. La

duea pago US$ 50.000
Fue clonada por la empresa Genetic Saving and Clone.

Algunos ejemplos de animales clonados

EN ARGENTINA

Pampa, la primera ternera nacida en Argentina obtenida por clonado de

una clula fetal (fibroblasto extrado de piel)
Naci el 6 de agosto de 2002, luego de 278 das de preez.

ANIMALES
TRANSGNICOS

Algunas aplicaciones
Produccin de alimentos:
- Incremento en la velocidad de crecimiento y/o masa muscular en cerdos y peces
- Introduccin de genes de resistencia a enfermedades
Produccin de rganos para xenotransplante:
- Produccin protenas humanas que bloquean la accin del complemento en cerdos
(ejemplo, CD59)
- Transplantes temporaros de corazn o hgado hasta la obtener donantes compatibles

Fines ornamentales:
- Peces que expresan proteinas fluorescentes
Produccin de frmacos (molecular pharming)
- Produccin de protenas recombinantes humanas en leche y suero

Modelos animales para patologas humanas

- Efectos de sobreexpresin de genes
- Eliminacin de genes (knock out)

Animales
transgnicos

Un animal transgnico es aquel que tiene una

porcin de ADN forneo en su genoma.
- Los primeros animales transgnicos producidos fueron
. ratones, obtenidos mediante microinyeccin de cigotas

Macho frtil

Hembra superovulada
X

Colecta de
embriones

Inyeccin con ADN

forneo
Promotor

Implantacin de los embriones

en hembras seudopreadas

Cras

Extraccin del ADN y deteccin de la

presencia del transgen

Animales
transgnicos

Los ratones transgnicos se utilizan

fundamentalmente:
Como herramientas de laboratorio para estudiar los
genes, su funcin, y cmo se regula su expresin si se
cambia el lugar o el tiempo de expresin de ese gen.

Como modelos de enfermedades para el desarrollo de

drogas y estrategias de tratamiento.

La tcnica de microinyeccin de cigotas resulta muy poco eficiente

en bovinos
Microinyeccin de cigotas bovinos

Eficiencia en la produccin de animales Transgnicos por

microinyeccin
Cigotas microinyectadas

2.800

Sobreviven la microinyeccin

2.500

Embriones transferidos a receptoras

Preeces
Terneros transgnicos

250
50
1

Clonacin y
transgnesis

La introduccin de genes por transfeccin y posterior

seleccin de clulas totipotenciales permite producir
animales transgnicos con muy alta eficiencia.

Gentileza de Biosidus S.A.

Transgnesis en bovinos. Produccin de alimentos

Cambios cualitativos en la produccin de leche:

- Produccin de lactoferrina en leche bovina
- Produccin de leches humanizadas
- Modificacin de las casenas para la produccin de quesos especiales

Cambios cualitativos en la produccin de carne:

- Produccin de carne bovina libre de riesgo de BSE
- Modificaciones cualitativas

Transgnesis en bovinos. Produccin de alimentos

Bovinos genticamente modificados para
mejorar la produccin lctea.
La mastitis produce perdidas millonarias en
la industria lctea.
La expresin de la protena lisostafina (de
origen bacteriano) otorga resistencia a la
mastitis por Staphilococus aureus.

El uso de animales genticamente

modificados resistentes a esta enfermedad
permitira disminuir notablemente el uso de
antibiticos.
La insercin de copias extra del gen de la
casena, que ya ha sido reportada, permitir
mejorar la calidad de los derivados lcteos.

Transgnesis en bovinos. Produccin de frmacos

En Argentina
La primera ternera transgnica desarrollada por clonacin fue obtenida por
BioSidus en Argentina en 2002.

Produce la hormona de crecimiento humana en su leche.

Obtencin de Pampa Mansa

A los fibroblastos se les incorpor el gen

que codifica para una protena que es la
hormona de crecimiento humana (el
plsmido transformado se incorpora al
genoma)

Clarn

Algunos nmeros
Produccin de protenas recombinantes en leche
de animales transgnicos (Biosidus):
Productividad
de 1 animal transgnico:

1,5 kg de protena
teraputica/ao =
equivalente a 200.000 L
de fermentacin
o sea

1 animal transgnico =
4 fermentadores
de 500 L
Demanda anual de hormona de crecimiento (hGH):
- Mercado latinoamericano: produccin de 2 animales transgnicos
- Mercado mundial: produccin de 40 animales transgnicos

Transgnesis
en peces.
Fines
ornamentales

Expresin de protenas fluorescentes

en peces cebra

http://www.glofish.com/photos.asp

Transgnesis
en aves

La expresin de protenas en la clara de huevo

tiene un enorme potencial.
La transgnesis en aves se enfrenta todava
con notables dificultades tcnicas derivadas
de los problemas del aislamiento de ovocitos
y cigotas y el posterior cultivo embrionario.

Pollos transgnicos producidos por la empresa Viragen aplicando una tcnica

desarrollada por el Instituto Roslin de Edimburgo.

Transgnesis
en peces.
Produccin
de alimentos

La introduccin de copias extra del gen de hormona de crecimiento

(HGH) aumenta notablemente la velocidad de desarrollo de
truchas y salmones.

Tomado de: Devlin et al., Nature, 2001.