articulos BIORREMEDIACION DE SUELOS CONTAMINADOS Tania Lorena Volke Septiveda Area de Residuos Peligrosos. Centro Nacional de Investigacion y Capacitacién Ambiental! ‘Av. Michoacan y la Purisima sin, Gol. Vicentina. Iztapalapa 09940, D.F. Tel: (625) 56133821; Fax: (525) 56133787; e-mail: tve@xenum.uam.mx Palabras clave: biorremediacién de suelos, biodegradacién, contaminacién. Key words: soil bioremediation, bicdegradation, contamination, La demanda de mayores cantidades de combustibles, asi como el desarrollo de nuevos quimicos, han conducido @ la contaminacién de aire, suelos y aculferos en todo el mundo, siendo una de las mayores preocupaciones actuales. Esto, junto con la creacién de leyes ambientales, son factores que han impulsado ai tratamiento de contaminantes, mas que a su disposicién, La contaminacién de suelos tradicionalmente se ha tratado de solucionar con el uso de procesos fisicos y quimicos. Sin embargo, éstos pueden resultar muy costosos 0 solo parcialmente efectivos. Una altemativa mas econémica y ambientelmente mas segura, es e! uso de métodos biolégicos (biorremediacién), en los cuales los contaminantes son destruidos 0 transformados y generalmente no requieren de tratamientos adicionales. E| aprovechamiento de las habilidades bioquimicas de los micro-organismos, es la estrategia actualmente mas popular para el tratamiento de suelos y acuiferos Contaminados. Aunque no todos ios compuestos orgénicos son biadegradables, los procesos de biorremediacign se han usedo con éxito en suelos, lodos y sedimentos contaminados con hidrocarburos, solventes, explosives, pesticidas, herbicidas y conservadores de madera. Si bien, el uso de la biorremediacién puede implicar ciertos ‘riesgos, es importante conocerlos, para asi reducirlos 0 evitartos. En el presente trabajo, se revisan algunos de los factores que inciden en la biodegradacién de contaminantes, y se describen algunas de las variables mas importantes a considerar en la caracterizacién de un sitio contaminado, para la selecci6n de una tecnologia de biorremediacién. Se presentan y comparan las aplicaciones, limitaciones y costos de algunas de las tecnologias de biorremediacién in situ y ex silu mas comunes. Abstract Requirements of higher quantities of fuels, as well as the development of new chemicals, has driven to air, soils and aquifers contamination around the entire world, being one of the biggest current concerns. This, together with the creation of environmental laws, are factors favoring treatment, more than the disposition of pollutants. Soil contamination has traditionally been solved by means of physical and chemical processes. However, these kinds of processes might be very expensive or only partially effective. A cheaper and environmentally friendly alternative is m4 BioTecnologia 2002 Vol. 7 No. 1articulos the use of biological methods (bioremediation), where the pollutants are destroyed or transformed and generally, additional treatments are not required. The use of biochemical abiliies of microorganisms is actually the most Popular strategy for the treatment of polluted soils and aquifers. Although not all the organic compounds are biodegradable, the bioremediation processes have been successfully used for treatment of soils and groundwater polluted with hydrocarbons, solvents, explosives, pesticides, herbicides and wood preservatives. Bioremediation technology cen imply certain risks, however i is important to know them, to reduce or avoid this problem. Some of the factors related to the biodegradation of pollutants and the major characteristics to be considered for bioremediation of a polluted site, are reviewed in this work. Applications, limitations and costs of some in situ and x situ bioremediation technologies are presented and compared. INTRODUCCION El acelerado incremento en la poblacién mundial, ha dado como resultado la demanda de mayores cantidedes de combustibles, asi como ef desarrollo de nuevos quimicos, fertiizantes y Pesticidas. Aunque muchos de estos compuestos son utllizados y/o destruidos, un alto porcentaje de ellos se liberan en el aire, suelos y acuiferos, representando un riesgo ambiental _potencial (Semple y col., 2001), Aunado a lo anterior, durante los arios 60s y 60s, se instalaron cientos de miles de tanques para el almacenamiento de productos del petréleo compuestos y quimicos peligrosos. Muchos de ellos, se abandonaron 0 excedieron su Vide dtl, y hoy en dia son una fuente de contaminacién ambiental (Fan y Krishnamurthy, 1995). La limpieza de estos sitios de almacenamiento, ¢s un problema mundial real y representa un fuerte reto La contaminacién de suelos generaimente se ha tratado de solucionar con el uso de procesos fisicos y quimicos. Sin embargo, la aplicacion de muchas de estas tecnologias ha sido limitada, porque son excesivamente caras 0 sblo parcialmente efectivas (Riser-Roberts, 1998). Un factor que ha impulsado el desarrollo de tecnologias de remediacién, es Ia aparicién de Tegulaciones ambientales que promueven el tratamiento de desechos, més que su disposicién. Por esta razén, la remediacién de sitios contaminados ha aumentado en la mayoria de los paises industrializados desde los afios 70s (Sellers, 1908) El uso de la biorremediacion para el tratamiento de sitios contaminados es una tecnologia relativamente nueva, atin en desarrollo, y representa varias ventajas con respecto a los métodos fisicos y quimico porque (i) puede llevarse ‘a cabo a bajos costos; (Ii) los contaminantes son destruidos 0 transformados; y (li) generalmente, no requiere o necesita un minimo de tratamientos adicionales. En general, ninguna tecnologia de Femediacién de suelos, es aplicable para tratar contaminantes inorganicos. Sin embargo, con el uso de la biorremediacién, es posible cambiar su estado de valencia, favoreciendo asi su adsorcién, inmovilizacion en particulas de! suelo, precipitacion, acumulacién y/o concentracién en micro o macroorganismos (Van Deuren y col., 1997). BioTecnologia 2002 Vol. 7 No. 1 zaLA BIORREMEDIACION ‘COMO UN TRATAMIENTO ALTERNATIVO Cualquier tecnologia de remediacién debe cumpiir alguno de los siguientes obietivos sobre los contaminantes: (i) separarios de! suelo, agua u otro medio; (ii) aislartos 0 inmovilizarlos; o (lil) destruirlos (Sellers, 1999) EI aprovechamiento de las habilidades bioquimicas de los microorganismos, es la estrategia actualmente més popular para el tratamiento de suelos y acuiferos contaminados. Los micro-organismos, més que cualquier otro ‘organismo, tienen la habilidad dnica de interactuar ‘quimica y fisicamente con una enorme variedad de compuestos antropogénicos (hechos por el hombre) y naturales, provocando cambios estructurales o su completa degradacién (Semple y col., 2001). EI término biorremediacion se utiliza para describir una variedad de sistemas que utlizan ‘organismos vives (plantas, hongos, bacterias, etc.) para degradar, transformar © remover compuestos organicos téxicos @ productos metabélicos inocuos © menos t6xicos. Esta estrategia biolégica depende de las actividades catabélicas de los organismos, y por consiguiente de la utilizacién de los contaminantes como fuente de alimento y energia. Para que esto ocurra, es necesario favorecer las condiciones para el crecimiento y la biodegradacién (Van Deuren y col., 1997). La biorremediacion puede organismos autéctonos (nativos de! sitio) 0 ‘exégenos (de otros sitios), y puede realizarse in situ (en el sitio) 0 ex situ (fuera det sitio), en condiciones ‘aerobias 0 anaerobias (Eweis y col., 1998). Aunque no todos los compuestos organicos son susceptibles a la biodegradacién, los procesos de emplear 26 articulos biorremediacion se han us 1do con éxito para tratar suelos, lodos y sedimentos contaminados con hidrocarburos del petréleo (HPs), solventes (Benceno y tolueno), explosives (TNT), clorofenoles. (pentacolorfenol_[PCP)), pesticidas (Acido 2,4 diclorofenoxiacético [2,4-D)), conservadores de madera (creosota) e hidracarburos aromaticos policfclicos (HAPs) (Van Deuren y col, 1997; ‘Semple y col., 2001), La meta final de la biorremediacion es la mineralizacién det contaminante. La mineralizacion ccurre con la biodegradacién completa de una molécula organica hasta compuestos inorganicos (CO2, agua y formas inorganicas de N, P y S), ‘componentes celulares y productos de las rules metabélicas (Alexander, 1994; Eweis y col., 1998). Su aceptacién como una estrategia de limpieza viable, en muchos casos, depende de sus costes. Es decir, el métedo necesita ser menos costoso que los tratamientos fisicos y quimicos existentes. Sin embargo, muchas de tas estrategias de biorremediacién son competitivas en términos de costes y del impacto sobre la matriz contaminada (Semple y col., 2001), VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA BIORREMEDIACION La biorremediacién cfrece varias ventajas sobre los tratamientos fisicos y quimicos usados para el tratamiento de suelos y acuiferos contaminados (Eweis y col, 1998; Alexander, 1981) ¢ Es una tecnologia relativamente simple, ‘comparada con la mayoria de las otras. * Puede considerarse una estrategia efectiva y ambientalmente ‘amigable’, ya que BioTecnologia 2002 Vol. 7 No. 1biotransforma, parcial 0 completamente, los contaminantes hasta biomasa y productos estables e inocuos. * Los costes de la biorremediacién se ‘encuentran entre 100 y 250 USDim®, mientras que las tecnologlas més convencionales, como la incineracién © rellenos sanitarios seguros, pueden costar entre 250 y 1000 USDim*, ¢ Se enfoca a la biodegradacién y detoxificacion de contaminantes peligrosos, mientras que otras tecnologias (adsorcién en carbon activado, solidificacién/estabilizacién, lavado y disposicion en sanitarios), simplemente transfieren los contaminantes a un medio o lugar diferente. @ Una consecuencia comin de microbiana, es la detoxificacion de quimicos originaimente toxicos, rellenos. Sin embargo, existe un numero de desventajas asociadas con la aplicacion de la bioremediacion para el tratamiento de sitios contaminados (Van Deuren y col, 1997; Eweis y col, 1908), # Es dificil predecir la eficiencia del tratamiento, asi como el escalamiento de una prueba de Laboratorio 0 de escata piloto, + El éxito det proceso depende de la capacidad para crear y mantener las condiciones ambientales necesarias para el crecimiento microbiano. Una disminucién en la actividad microbiana provoca una disminucion en la degradacion y aumenta et periodo del tratamiento, ‘* Compuestos originaimente inocuos, pueden ser convertidos a productos dafiinos para una u otra especie. articulos * Generalmente se requiere de mayores tiempos que los tratamientos fisicos y quimicos. * Las concentraciones muy alas. de contaminantes pueden resulter téxicas e inhibir la biodegradacion, Aunque a8. tecnologias de biorremediacion presentan ventejas sobre otras métodos usados tradicionalmente para la remediaci6n de suelos (fisicos y quimicos), también representan una serie de desventajas, Cualquier nueva tecnologia, como Io es la biorremediacién, puede implicar ciettos riesgos. Sin embargo, reconocer los factores de riesgo es un primer paso para reducirios 0 evitarios, TIPOS DE CONTAMINANTES Y SU BIODEGRADACION Los compuestos quimicos. pueden clasificarse en orgdnicos e inorganicos. Los primeros, se componen basicamente de moléculas con una elevada proporcién de carbono, y pueden ser de origen antropogénico 0 natural. Los compuestos inorganicos, en cambio, no contienen atomos de carbone (con excepcién del cianuro), y comunmente incluyen metales (Sellers, 1999). Los contaminantes orgénicos, pueden clasificarse a su vez en seis grupos: (I) compuestos orgénicos volatiles (COVs) no halogenados; (ii) COVs halogenados; (il) compuestos. —_organicos semivolatiles (COSs) no halogenados; (iv) COSs halogenados; (v) combustibles; y (vi) explosives (Van Deuren y col., 1997) Independientemente de Ia naturaleza del compuesto, su estructura quimica determina su polaridad, solubilidad, volatilidad y capacidad para reaccionar con otras sustancias. Por consiguiente, 27 BioTecnologia 2002 Vol. 7 No.1_—_ articulos —____ las propiedades del contaminante, determinan la tecnologia de biorremediacién a utilizar (Sellers, 1999), La transformacion de un contaminante puede ccurrir como resultado de un proceso fisico, quimico 0 bioldgico. Los procesos de transformacién més importantes en el suelo, incluyen a biodegradacion, Ia pudricion natural y la degradacién quimica (reacciones fotoquimicas, de oxidacién-reduccién y de hidrdlisis) (Eweis y col., 1998). Para los fines de esta revisién, solamente se Presentan as reacciones de _transformacion biolégicas. ESTRUCTURA — QUIMICA = «éDE-—LOS. CONTAMINANTES La estructura quimica de un contaminante puede afectar su biodegradacién en dos sentidos: (i) la molécula puede contener grupos 0 sustituyentes que no pueden reaccionar con las enzimas presentes; (ii) la estructura puede ser tal, que ef compuesto se encuentre en un estado fisico en ef que la biodegradacién no ccurra fécilmente (Riser-Roberts, 1998). A continuacién se resumen algunas generalizaciones (validas para sistemas aerobios) acerca de Ia influencia de la estructura de un contaminante en su _biodegradabilidad (Alexander, 1994; Van Deuren y col., 1997). * El aumento en el tamafto, peso molecular y complejidad en la estructura de un compuesto, provoca una disminucién en la velocidad de degradacién. EI aumento en el numero de anillos —aromaticos.—disminuye la biodegradabilidad del compuesto, ¢ Eltipo de sustituyentes en una molécula afecta su biodegradabilidad. Compuestos organicos normaimente mineralizables, pueden volverse 28 parcial o completamente resistentes a ésta, por la presencia de sustituyentes llamados xendfores (Cl, NOz; SO3H, Br, CN 0 CFs). Por otra parte, la presencia de OH, COOH, o grupes funcionales como amidas, ésteres 0 ‘anhidrides, pueden estimular la degradacion. ¢ La posicién y numero de xendforos en la molécula tiene una fuerte influencia en la degradacién. ¢ La presencia de ramificaciones se asocia con la persistencia de hidrocarburos y alecholes alifaticos y otros quimicos. Generalmente, las. moléculas no ramificadas son més biodegradables BIODEGRADACION DE CONTAMINANTES Las rutas de biodegradacién de ios contaminantes organicos, varian en funcién de la estructura quimica del compuesto y de las especies mictobianas degradadoras. EI proceso de biorremediacién incluye reacciones de oxido- reduccién, procesos de sorcién e intercambio nto -y quelacién que resultan en la inmovilizacién de metales (Eweis y col., 1998), ‘enico, y reacciones de acomplejar En algunos casos, los productos de la biodegradacién, son mas transformaciones subsecuentes y pueden ser reactivos para mineralizados, mientras que otros son susceptibles @ unirse con la materia organica del suelo, quedando inaccesibles (Semple y col., 2001). Para ciettos quimicos, es posible también una transformacién muy diferente 2 la mineralizacién: el cometabolismo, microorganismos utilizan como fuente de carbono y energia un compuesto, produciendo " enzimas Durante este proceso, los BioTecnologia 2002 Vol. 7 No.1capaces de transformar bioquimicamente otro compuesto sobre el cual no pueden crecer (Alexander, 1981) Un contaminante puede ser degradado a productos intermediarios 0 finales que pueden ser menos, igual 0 més téxicos que el contaminante original (Semple y col, 2001). Sin embargo, el Papel mas importante de los microorganismos en la transformacién de un contaminante, es su habilidad para producir su detoxificacion. La detoxificacién de un compuesto, se refiere a un cambio estructural que fo haga menos peligroso hac! especies susceptibles (humanos, animales, plantas. otros microorganismos). A continuacién se mencionan y describen brevemente algunos de los. una o mas Procesos que pueden conducir a la detoxificacién de un contaminante (Alexander, 1994), Hidrélisis. La ruptura de un enlace por adicién de agua, es una enzimética comun para la inactivacion de compuestos t6xicos. Hidroxilacién. La insercién de un grupo OH’ en moléculas arométicas 0 aliféticas puede disminuir su toxicidad, Deshaloyenacién. Muchos pesticidas y desechos industriales nocivos contienen cloro u_ otros. halégenos. La halégeno, generalmente convierte al téxico en un producto inocuo. Desmetilacién_o desalquilacion. Muchos pesticidas contienen sustituyentes alquilo unidos a N uO. La N- u O-desalquilacién puede provocar la pérdida parcial 0 total de la toxicidad de una molécula, Metilacién. La reaccién contraria a la anterior (adicién de un grupo metilo) puede inactivar fenoles toxicos (penta- y tetraclorofenoles). Nitro-reduccion. Los compuestos nitrados, nocivos Para muchos organismos, pueden transformarse en remocion del articulos ——————___ compuestos menos t6xicos por la reduccién det grupo NO} (nitro) a un grupo NH2* (amino). Conjugacién. Es la reaccién entre un metabolito natural y una molécula sintética téxica, El producto de esta unién, generalmente es menos téxico. BIORREMEDIACION DE SUELOS: La biorremediacién de suelos contaminados puede tlevarse a cabo in situ, o bien, el material puede ser excavado y tratado ex situ. Ambos tipos de procesos, pueden evitar las desventajas técnicas y econémicas, asi como los riesgos ambientales, generados por el transporie de desechos peligrosos a lugares alternatives para su tratamiento (Riser-Roberts, 1998). Factores que inciden en ta biorremediacién EI destino de un contaminants en el suelo std determinado por una variedad de factores que interactéan de manera compleja. Estos incluyen: (() Procesos quimicos (reacciones de _hidrélisis, oxidacién, reduccién, fotdlisis); (ll) fisicos 0 de transporte (adveccién, sorcién, dispersién ) biologicos blotransformacién, difusién, volatilizacién, solubilizacion); (bioacumulacién, biodegradacién, toxicidad); (iv) procesos abiéticos; y (v) factores ambientales combinados (Riser- Roberts, 1998). Esta serie de factores inciden en la efectividad de la biorremediacion y son un indicador Para decidir la aplicacién de una tecnologia de tratamiento para remediar un tipo de contaminacién en particular. En general, pueden clasificarse en tres grupos: fisicoquimicos, _biolégicos_y ambientales. (Eweis y col, 1998; Riser-Roberts, 1998), 29 BioTecnologia 2002 Vol. 7 No.1a. Factores fisicoquimicos Incluyen propiedades tanto de! contaminante como del suelo. Algunos de los factores del sistema suelo:contaminante mas significatives, son: (i) ‘composicién quimica de! contaminante; (ii) estado fisico del sistema; (iii) contenido de agua y solubilidad; (iv) reactividad quimica y efectos de disolucion en la materia organica del suelo; y (v) volatilidad. A continuacién se describen brevemente algunos de los factores fisicoquimicos_ mas importantes. Estructura _del_contaminante. Cada compuesto quimico poses caracteristicas Gnicas que dictan ef mecanismo o combinacién de ellos, y que controian ‘su movimiento y biodegradabilidad. Este parémetro es uno de los factores mas importantes en la biodegradacién (Alexander, 1994), Solubilidad. La biodegradabilidad de un compuesto depende de su solubilidad. En general, al aumentar la solubilidad, la disponibilidad para los microorganismos aumenta. Un microbio puede asimilar un compuesto poco soluble en agua por alguno de los siguientes mecanismos; (i) contacto directo con gotas de! contaminante mas grandes que Ia célula, o (ii) con gotas en la fase acuosa (<1 |utn); 0 (i) del contaminante en forma soluble (Reddy y col, 1982; Singer y Finnerty, 1984) Ditusion. La velocidad de movimiento de un contaminante a través del suelo, es proporcional a su conoentracién y a su coeficiente de difusion. La difusién de un contaminante hacia dentro y fuera de los poros del suelo es un importante factor que controla su blodegradacion. Es uno de los procesos abiéticos que compite mas efectivamente con los microorganisms por el sustrato (Alexander, 1994; Riser-Roberts, 1998) 30 articulos Sorcién. La soreién de un compuesto quimico tiene un gran impacto’en su biodegradacién, e involucra procesos de adsorcion y absorcién. La adsorcién, es. la retencién del compuesto en las superficies del material sélido; en la absorcién, el contaminante es retenido dentro de la masa del s6lido. Le adsorcién afecta la volatiizacion y difusién de! contaminante, asi como su disponibilidad para. fos. microorganismos. Involucra reacciones quimicas (quimiosorcién) 0 fisicas (fuerzas de van der Waals). La principalmente por las. adsorcion esta propiedades del contaminante y por las del suelo (Alexander, 1994; Riser-Roberts, 1998). controlada Volatilizacién. Es el proceso en el que un. compuesto quimico se mueve de una fase liquida o sélida a a gaseosa, como resultado de su difusién molecular, La velocidad de volatilizacién de un compuesto en el suelo, es una funcién de su concentracién, su presion de vapor y su solubilidad La volatiiizacion depende del tipo de. compuesto, del contenido de humedad, de la temperatura y de la porosidad del suelo, y del contenido de materia organica y arcillas (Eweis y col., 1998) Densidad. La migracién de un compuesto inmiscible depende de su densidad y viscosidad. La densidad determina Ia tendencia de la fase inmiscible a flotar (© sumergirse en la superficie del suelo, y por consiguiente el lugar en donde éste quedaré concentrado (Bouwer y Zehnder, 1993). b. Factores ambientalos Los factores ambientales son aquellos que afectan directamente el crecimiento y actividad de los organismos que llevan a cabo la biodegradacién. Estos factores, determinan la efectividad y velocidad de la degradacién, y pueden limitar el BioTecnologia 2002 Vol. 7 No. 1crecimiento microbiano y la disponibilidad de contaminantes. A continuacion se describen algunos de los mas importantes. Temperatura, La temperatura del sitio influye directamente en la actividad microbiana. Un descenso en la temperatura provoca una disminucién. en la velocidad de degradacion. Mientras que altas temperaturas pueden perjudicar la actividad de algunos organismos, provocar la voiatilizecién del contaminante y un aumento en su solubilidad, ssi como ia disminucién en fa solubilidad del Oz. Como regia general, un aumento de 10° C en Ia temperatura, incrementa casi dos veces la velocidad de biodegradacién (Van Deuren y-col, 1997; Eweis y col., 1988), 2H. La actividad microbiana disminuye a valores extremos de pH, en cambio 2 valores moderados, Ja biodegradacion es mas rapida. El pH influye también en la solubilidad, y en consecuencia, en la contaminante y otros constituyentes del suelo que afectan ta actividad biolégica (Alexander, 1994). Biodisponibilidad. Para que la biodegradacion se leve a cabo, el contaminante debe estar accesible al organismo. Le persistencia de contaminantes en ambientes en que ias especies degrada-doras estan presentes, se debe a que el contaminante no esta accesible, Esta inaccesibiidad es resultado de la sorcién del compuesto en las particulas del suelo © de su baja solubilidad en agua (Bouwer y Zenhder, 1983). disponibilidad del ‘Nutrientes. Para que un microorganismo pueda crecer, ademas de un compuesto organico que sirva como fuente de carbono y energia, se requiere de nutrientes y de un aceptor de electrones (O2 para aeroblos). Se ha demostrado que la adici6n de fuentes de carbono de facil articulos asimilacién (glucosa, cides organicos) puede promover e incrementar la degradacién de contaminantes. La adicién de N y P (como fertiizantes) al suelo estimula la biodegradacion de hidrocarburos e incrementa la abundancia de microorganismos; su carencia puede limiter la actividad microbiana (Singleton, 1995) Disvonibilidad de_oxigeno. Los contaminantes oraanicos pueden ser biodegradados bajo condiciones aerobias o anaerobias. Aunque algunos contaminates pueden ser metabolizados bajo condiciones anaerobias, Ia gran mayoria son susceptibles al alaque de microorganismos aerobios, Ademés, la demanda de Oz por ja microflora del suelo se incrementa con la adicién de carbono orgénico. Por lo tanto, asegurar las condiciones serobias, mejoraré la velocidad de blodegradacion de muchos compuestos (Alexander, 1994), Humedad, \.0s microorganismos requieren una humedad adecuada para su crecimiento y actividad 1 agua sive como medio de transporte para nutrientes y constituyentes organicos hacia la célula microbiana, y de productos de desecho hacia fuera de la célula. El nivel éptimo de humedad, depende de las propiedades del suelo, [a naturaleza del contaminante y del tipo de transformacion (aerobia o anaerobia). En general, un contenido de humedad bajo disminuye ta biodegradacién (Van Deuren y col., 1997) Coneentracién. Muchos compuestos xenobisticos extrafios a los organismos vivos que son tolerados 1 bajas concentraciones, pueden ser toxicos para los microorganismos a concentraciones mayores. Una baja concentracion, puede también representar problemas, ya que la fuente de carbono y energia para el crecimiento y mantenimiento puede ser a BioTecnologia 2002 Vol. 7 No. 1insuficiente. En consecuencia, la biorremediacién de un contaminante, puede estar limitada por concentraciones, tanto altas. como bajas. (Alexander, 1994). Toxicidad. El factor clave para decidir la remedi én de un sitio contaminado, es la toxicidad para los seres vivos. La descarga de quimicos t6xicos a un suelo implica, entre muchos otros problemas, que son generalmente resistentes a la biodegradacién. Si el contaminante como tal no 8 tOxico, algunos de sus componentes pueden resultar t6xicos 0 inhibitorios para ciertos microorganismos, retardando o impidiendo ta biodegradacion de otros degradables contaminantes ©. Factores biolégicos Los factores biolégicos se refieren a la presencia de organismos con rutas metabélicas capaces para degradar los compuestos de interés, y a la aclimatacién o induccién de enzimas que catalicen las reacciones necesarias en la poblacién microbiana. La persistencia de un agente quimico en el suelo puede ser el resultado de diferentes tipos de interacciones biolégicas (Riser-Roberts, 1998) * Las propiedades biocidas de ese quimico hacia los microorganismos del suelo, * Inhibicion directa. de las enzimas de microorganismos degradadores. ‘ Inhibicién en los procesos de propagacién de los microorganismos efectivos. * Tiempo insuficiente para que las rutas metabélicas involucradas_- degraden al contaminante, * Aclimatacién induccién de las enzimas que catalizan las reacciones de biodegradacién. 32 articulos © Efectos cooperatives y competitivos entre organismos. Muchos microorganismos del suelo producen antibiéticos que pueden afectar la Viabilidad de otros. En cambio, otros mas, producen biosurfactantes que pueden mejorar la biodisponibilidad del contaminante. TECNOLOGIAS DE BIORREMEDIACION DE ‘SUELOS IN SITU La principal ventaja de los tratamientos in situ es que permiten tratar el suelo sin necesidad de excavar ni transportar, dando como resultado una isminucién de los costes. Sin embargo, este tipo de tratamientos generaimente requiere de periodos de tratamiento mas largos, es menos seguro en cuanto a la uniformidad del tratamiento debido a la heterogeneidad propia del suelo y a que es més dificil verificar ta eficacia del proceso. Las tecnologias de biorremediacién in situ, incluyen el bioventeo, la bioaumentacién, la bioestimulacién, la jolabranza, ta atenuacién natural y la fitorremediacién (Van Deuren y col., 1997) a. Bioventeo El bioventeo es una tecnologia relativamente nueva, cuyo objetivo es estimular la biodegradacion natural de cualquier compuesto biodegradable en condiciones aerobias. El aire se suministra en el sitio contaminado por movimiento forzado (extraccién o inyeccién), con bajas velocidades de fijo, con el fin de prover solamente el oxigeno necesario para sostener la actividad de los micro- organismos degradadores (Van Deuren y col. 1997). Aplicaciones. E\ bioventeo es usado para tratar COSs 0 no volatiles biodegradables. Ademas de favorecer la degradacién de _contaminantes BioTecnologia 2002 Vol. 7 No. 1 aadsorbidos, pueden degradarse COVs como vapores, por medio de su movimiento a través del suelo biolégicamente activo (Ewels y col., 1998). Se ha utilzado exitosamente para remediar suelos contaminados con HTPs, solventes no clorados, Pesticides, conservadores de la madera y algunos otros quimicos (Van Deuren y col., 1997), Limitaciones. Algunos factores que pueden limitar ta aplicacion efectiva de esta tecnologia son: (i) el tipo y concentracién del contaminante, (ji) falta de nutrientes en la superficie; (li) bajo contenido de humedad; y (iv) dificultad para aleanzar el flujo de aire necesario (Ewels y col., 1998). Costa y tiempos de remediacion. Es una tecnologia de mediano a largo piazo, en el que los tiempos de limpieza van desde algunos meses hasta varios afios. Los costos de operacién se encuentran entre 10 y 70 USDim*, Esta tecnologia no requiere de equipo caro, pero los costos pueden verse afectados por la permeabilidad del suelo, ademas del espacio, nimero de pozos y velocidad de bombeo requeridos (Van Deuren y col., 1997). b. Bloaumentacién Esta tecnologia es utilizada cuando se requiere el tratamiento inmediato de un sitio contaminado 0 cuando la microflora natural es insuficiente en némero 0 capacidad para. degradar__ los contaminantes involucrados. Consiste en la adicion de microorganismos vivos, capaces de degradar el contaminante en cuestién, para promover su biodegradacién o biotransformacién, El tamafio del inoculo a utilizar, depende del tamafio de la zona ‘contaminada, de su dispersion y de la velocidad de crecimiento de los microorganismos degradadores (Riser-Roberts, 1998) articulos ————_—__________ Aplicaciones. La tecnologia se ha usado para tratar suelos contaminados con herbicides (2,4-D. clorofam), insecticidas (lindano, clordano, paratién), clorofencies (PCP) y nitrofenoles, _bifenilos policlorados (BPCs), HTPs y HAPs (Alexander, 1994). Se ha usado efectivamente para tratar desechos con concentraciones relativamente altas de metales (Eweis y col., 1998). Limitaciones. Antes de llevar a cabo la bicaumentacién en un sitio, es necesario realizar cultivos de enriquecimiento, aislar microorganismos capaces de cometabolizar o utilizar e! contaminante ‘como fuente de carbono, y cultivarlos hasta obtener grandes cantidades de biomasa (Alexander, 1994) Costo y tiempos de remediacién. Es una tecnologia de mediano a largo plazo, y su utilizacion no implica mucho capital ni costos de operacién, ¢. Bloestimulacién La bicestimulacién implica la circulacion de soluciones acuoses (con nuttientes yl oxigeno) a través del suelo contaminado, para estimular la actividad de los microorganismos naturales, y mejorar asi la biodegradacién de contaminantes corgénicos hasta su conversién a productos inccuos, © bien, la inmovilizacién de contaminantes inorgénicos in situ. Tipicamente, implica la inyeccién de agua con nutrientes y saturada con Or cisuclto. Pueden también adicionarse mictoorganismos adaptados (bioaumentacion) y una fuente adicional de oxigeno (H:0:) (Van Deuren y col, 1997). Aplicaciones. La técnica se ha usado con éxito para remediar suelos contaminados con gasolina, COVs y COSs, y pesticidas (Alexander, 1994), Estudios a escala piloto, han mostrado la biodegradacién de suelo contaminados con desechos de municiones. 33 BioTecnologia 2002 Vol. 7 No. 1Limitaciones. Esta tecnologia no es recomendable para suelos arcillosos, altamente estratificados 0 demasiado heterogéneos, debido a limitaciones en la transferencia de O2. Los factores que pueden limitar su aplicacién, incluyen: (i) que el tipo del suelo no favorezca el crecimiento microbiano; (ii) incremento en la movilidad de los contaminantes por la circulacién de agua; (ji) obstruccion en los pozos de inyeccién provocada por el crecimiento, microbiano. Costo y tiempos de remediacién. Es una tecnologia de largo plazo, la limpieza de una pluma puede tomar varios afios. Su costo oscila entre 30 y 100 UsDim®. La naturaleza y profundidad de los contaminantes y el uso de bioaumentacién puede aumentar sus costos (Van Deuren y col., 1997). @. Biolabranza La biolabranza se refiere a la aplicacién controlada de residuos al suelo, para su inmovilizacién, biodegradacion 0 transformacin por los microorganismos nativos. EI suelo contaminado se mezcla con agentes de volumen y nutrientes, y se remueve periédicamente para favorecer su aireacién. Las condiciones del suelo (pH, temperatura, aireacion) se controlan para optimizar la velocidad de degradacién y generaimente se incorporan cubiertas u otros métodos para el control de Iixiviados (Riser Roberts, 1998). La diferencia entra le biolabranza y el composteo, es que en la biolabranza, se mezcia el suelo contaminado con suelo limpio, mientras que el composteo generalmente se realiza sobre el suelo (Van Deuren y col, 1997) Aplicaciones. Los contaminantes tratados con éxito por biolabranza, incluyen diesel, gasolinas (No. 2 6), lodos aceitosos, PCP, creosota y coque, 34 articulos ademas de algunos pesticidas y HTPs (Alexander, 1994). Es una tecnologia de gran escala, que se practica en los Estados Unidos, Canadé, Reino Unido, Holanda, Suiza, Dinamarca, Francia y Nueve Zelanda (Reiser-Roberts, 1998), Limitaciones. La biolabranza debe manejarse con cuidade para prevenir la contaminacién de acuiferos, superficies de agua, aire o en la cadena alimenticia. El mayor problema es la posibllidad de lixiviades de los contaminantes hacia suelo y agua. tra limitante para su utiizacion, es que por la Incorporacién de suelo contaminado en suelo limpio, se genera un gran volumen de material contaminado. No es recomendable su uso para contaminantes diluidos, ni tampoco cuando no todos los contaminantes son biodegradables (Van Deuren y col., 1997). Casto y tiempos de remediacion, Es una tecnologia de mediano a largo plazo. El costo para su aplicacion en desechos peligrosos, oscila entre 10 y ‘50 USD/ton. Los costos de preparacién de la cama se encuentran por debajo de 100 USD/m® (Van Deuren y col., 1997; Relser-Roberts, 1998). @. Atenuacién natural Es un proceso natural que permite reducir la concentracién de contaminantes hasta niveles aceptables. No es una tecnologia per se, si no que generalmente describe un rango de procesos fisicoquimicos y biologics que, por la intervencion humana deliberada, reduce la conceniracién, toxicidad 0 movilidad de los contaminantes (Van Deuren y col., 1997), La consideracin de esta opcién, generalmente requiere del modelamiento y evaluacién de las velocidades de degradacién del contaminate. Durante et proceso, es necesario llevar a cabo BioTecnologia 2002 Vol. 7 No.1muestreo y andlisis, para confirmar que la limpieza procede a una velocidad consistente con las metas de limpieza (Van Deuren y col., 1897). Aplicaciones. Los contaminantes que pueden tratarse por esta tecnologia son: solventes volatiles (incluyendo BPCs), HTPs, metales y explosives. Gasolinas y algunos solventes clorados, son los compuestos mas comunmente evaluados por atenuacién natural (Van Deuren y col., 1997). Limitaciones. Esta tecnologia puede considerarse para la remediacion de contaminants en suelos, solamente si los factores especificos del sitio permiten mantener su uso. Estos factores incluyen: condiciones geolégicas y geoquimicas favorables, tiempos razonables de biodegradacién y presencia de microorganismos degradadores. Ademds, es necesaria la caracterizacién exhaustiva de! sitio, con un monitoreo 2 largo plazo (aumento en costes); asf como la verificacién de ta toxicidad de intermediarios ylo productos, y de la migraci6n de contaminantes antes de su degradacién 0 transformacion, Costo_y tiempos de_remediacién. implica costos adicionales por ef modelamiento para la prediccion de velocidades de degradacién. implica costos adicionales para contenedores, muestreo y analisis para determinar el grado de contaminacién y confirmar su degradacion y el estado de la limpieza. Fitorremediacion La fitorremediacién es un proceso que utiliza plantas para remover, transferir, estabilizar, concentrar y/o destruir contaminantes (organicos e inorganicos) en suelos 0 sedimentos. Los mecanismos de fitorremediacién incluyen la rizodegradacién, la fitoextraccion, la fitodegradacion «yy la fitoestabilizacion. En ecosistemas naturales, las articulos plantas téxicas (Van Deuren y col., 1997; Hutchinson y col. 2001). La rizodegradacién se lleva a cabo en el suelo que rodea a las raices de la planta. Las sustancias excretadas naturalmente por las raices suministran Rutrientes para los microorganismos, mejorando asi su actividad biol6gica. ran y reciclan sustancias potenciaimente Durante Ja fitoextraccion, las plantas remueven contaminantes del suelo y los concentran en sus tejidos. Inicialmente, Ios contaminantes son captados por las raices (fitoacumulacién), para Posteriormente ser traslocados y/o acumulados hacia los tallos y hojas (fitoextraccién) En la fitoestabilizacion, las plantas limitan la movilidad y biodisponibilidad de los contaminantes en el suelo. Este proceso involucra mecanismos fisicos y quimicos. Las raices de las plantas Producen compuestos quimicos que pueden adsorber 0 formar complejos._ con los contaminantes, inmovilizandolos én la interfase entre las raices y el suelo (Sellers, 1999). La fitodegradacién consiste en el metabolismo de contaminantes dentro de los tejidos de la planta, a través de enzimas que catalizan su degradacién. Aplicaciones, La fitorremediacién puede aplicarse con éxito para tratar suelos contaminados con compuestos orgénicos e inorganicos, como benceno, tolueno, etilbenceno y xilenos (BTEX); solventes clorados; HAPs; desechos de nitrotolueno; pesticidas clorados e insecticidas organo-fosfatados; ademas de metales como Cd, Cra, Co, Cu, Pb, Ni, Se y Zn (Sellers, 1999). Se ha demostrado también su eficiencia en la remocién de metales radicactivos y toxicos de suelos y agua, 38 io Tecnologia 2002 Vol. 7 No. 1Limitaciones. Existen varias limitaciones para el uso de la fitorremediacién: (i) el tipo de plantas utilizadas determina la profundidad de ta zona a tratar; (i) eltas concentraciones de contaminantes, pueden ser toxicas para las plantas; (ll) puede depender de la estacién del afio; (iv) no es efectiva para tratar contaminantes fuertemiente sorbidos: (v) la toxicidad y biodisponibilidad de los productos de la degradacién no siempre se conocen y pueden movilizarse 0 bioacumularse en animales. Costo y tiempos de remediacion. Se estima que la fitorremediacion de un suelo contaminado con Pb (60 cm de profundidad) puede costar entre 24,000 y 40,000 USD/na (Van Deuren y col, 1997), TECNOLOGIAS DE BIORREMEDIACION DE SUELOS EX SITU La principal ventaja de las tecnologias ox situ, es que generaimente requieren de periodos mas cortos que los tratamientos in situ. Son mas seguros en cuanto a Ia uniformidad del tratamiento, ya que el sistema puede homogeneizarse, protegerse y mezciarse continuamente. Otra ventaja, es que los subproductos permanecen dentro de la unidad de tratamiento hasta la ‘obtencién de productos no peligrosos. Sin embargo, los tratamientos ex situ requieren de la excavacién del suelo, lo que provoca un aumento en los costes y en Ia ingenieria para equipos. Las tecnologias para la bloremediacion de suelos ex situ, en general Incluyen procesos de composteo (biopilas) y el uso de biorreactores (de lodos y en fase sélida) (Van Deuren y col., 1997). a. Composteo EI composteo es un proceso biolégico controlado, por el cual los contaminantes organicos pueden 36 articulos convertirse en subproductos inocuos esiables. El material contaminado es mezclado en plas, con sustancias organicas s6lides biodegradabies, como estigreol y desechos agricolas. Estos materiales son adicionados como paja fresca 0 seca, aserri agente de volumen, para mejorar el balance de nutrientes (C/N) para la actividad microbiana, y pare asegurar la generacién del calor necesario pera el proceso. Los sistemas de composteo incluyen tambores rotatorios, tanques circulares, recipientes abiettos y biopilas (Alexander, 1994; Eweis y col., 4998; Semple y col, 2001), Biopilas. Las pilas estéticas son una forma de composteo en el cual, ademas de agentes de Volumen, el sistema es adicionado con nutrientes y agua, y colocado en areas de tratamiento (que incluyen sistemas para colectar lixiviados y alguna forma de aireacién). Las pilas de suelo generaimente se cubren con plastico para controlar los lixiviados hacia un suelo no contaminado, ta evaporacién y volatiizacién de contaminentes, ademés de favorecer su calentamiento (Eweis y col, 1998) Aplicaciones. El proceso puede aplicarse para tratar suelos y sedimentos contaminades con compuestos corgénicos biodegradables. El composteo se ha usado con éxito, para la remediacién de suelos contaminados con PCP, gasolinas, HTPs, HAPs, y se ha demostrado util para la reduccion en ta concentracién y toxicidad de explosivos (TNT) hasta niveles aceptables. El uso de estrategias de composteo para la biodegradacién/bioremediacion de contaminantes orgénicos, se ha adoptado seria mente hasta los titimos 3 a 5 afios (Van Deuren y ol, 1997; Semple y col, 2001). Limitaciones Algunas limitaciones del proceso incluyen: (i) la necesidad de espacio; (i) es BioTecnologia 2002 Vol. 7 No. 1necesatio excavar el suelo contaminado, 10 que puede provocar la liberacién de COVs) (ii) incremento volumétrico del material por ta adicion de agentes de volumen; (iv) no es posible el tratamiento de metales pesados (Van Deuren y col, 1997), Costo y tiempos de remediacién. El costo de las tecnologias de composteo depende de varios factores: (i) cantidad y fraccion de suelo a tratar, (ji) disponibilidad de agentes de volumen; (ji) tipo de contaminantes y proceso; (v) necesidad de tratamientos previos y posteriores; y (vi) necesidad de equipos para el control de COVs. Es una tecnologia de corto plazo, que puede lievar desde algunas semanas hasta varios meses. Los costos tipicos se encuentran entre 130 y 260 USDim* (Riser-Roberts, 1998). 6. Biorreactores Los biorreactores son la tecnologia més adecuada para casos en que los peligros potenciales de descargas y emisiones sean serios. Su utilizacién representa ventajas en témminos de tiempo y eficiencia, en comparacién con otras tecnologias de biorremediacion. Con el uso de biorreactores, es posible combinar de manera controlada y eficiente, procesos quimicos, fisicos y biolégicos, que mejoren y aceleren la biodegradacién (Reiser- Roberts, 1998). En general, existen dos tipos de biorreactores: ios estaticos y los dinamicos. En los. Primeros, el material se encuentra estatico y son utilizados para el tratamiento en fase sélida (biorreactores de lecho empacado). En los Feactores dinémicos, el material se agita mecanicamente, y pueden tratarse materiales en fase solida 0 liquida (biotreactores de tambor rotatorio, de tambor agitado, y de lecho fuidizado), articulos Reactores de lodos. Es uno de los biorreactores mas utiizados para remediar suelos. En éstos, el suelo contaminado se mezcla constantemente con un liquido, y la degradacion se lleva a cabo en la fase acuosa por microorganismos en suspension © inmovilizados en la fase solida, El tratamiento puede realizarse en lagunas construidas para este fin (en donde se introduce el suelo), 0 bien, pueden emplearse reactores en los que se mezcian los materiales contaminados (Alexander, 1994). Aplicaciones. Los biorreactores pueden usarse para tratar suelos heterogéneos y poco permeables, o cuando es necesario disminuir el tiempo de tratamiento, Los biorreactores de lodos aerobios, se utiizan principaimente para tratar HTPs, COSs no halogenados y COVs. Se ulilizan también, reactores. secuenciales de lodos aerobios/anaerobios para tratar BPCs, COSs halogenados, pesticidas y desechos de artilleria (Van Deuren y col., 1997). Limitaciones. Entre los factores que pueden limitar el uso y Ia efectividad de los biorreactores, se encuentran: (i) el suelo debe tamizarse; (ji) los suelos heterogéneos y arcillosos pueden generar problemas de manipulaci6n; (ii) cuando se tratan materiales explosives 0 solventes clorados, los productos intermediarios pueden ser mas t6xicos que el contaminante original; (Iv) los residuos pueden requerir de tratamiento 0 disposicién final (Van Deuren y col., 1997; Riser-Roberts, 1998), Costo y tiempos de remediacién. Los biorreactores de lodes pueden clasificarse como una tecnologia de corto a mediano plazo. El uso de biorreactores de lodos oscila entre 130 y 200 USDIm*. 37 BioTecnologia 2002 Vol. 7 No. 1©. Blodegradacién por hongos Es una tecnologia de remediacién en desarrollo, en ta cual se utilizan hongos de pudricion blanca de ta madera para degradar una variedad de contaminantes organicos. Existen evidencias que demuestran la capacidad de estos hongos para mineralizar una gran cantidad de contaminantes, por accion de sus sistemas enzimaticos inespecificos: _peroxidasas extracolulares (lignin y manganeso peroxidasas) y lacasas. Se han considerado dos sistemas para el uso de esta tecnologia: in situ y en biorreactores (Reddy, 1995; Van Deuren y col, 1997). relativamente Las razones para considerar el empleo de estos hongos para la biorremediacién de suelos, incluyen: (i) son capaces de mineralizar una serie de compuestes t6xicos; (ji) son habitantes comunes en ambientes naturales; (i) tienen potencial para ‘oxidar sustratos poco solubles; (iv) sus enzimas se expresan bajo condiciones nutricionales deficientes, presentes en muchos suelos (Reddy, 1995). Aplicaciones. Se ha demostredo ta eficiencia de Phanerochaete chrysosporium y otros hongos de pudricién blanca, para degradar y mineralizar HAPs, BPCs, clorofenoles (PCP), colorantes azo, nitrotoluenos (TNT), ademas de algunos pesticidas y herbicidas (Reddy, 1995). Limitaciones. Algunos factores que pueden limitar el uso de hongos, son: (j) altas concentraciones de contaminantes; (ji) dificutad para alcanzar niveles de limpieza aceptables; (ji) competencie con poblaciones biodisponibilidad de contaminantes (Van Deuren y col, 1997). becterianas —nativas, (iv) articulos Costos. Los costos son del orden de 100 USD/m*. Sin embargo, las aplicaciones comerciales de Ia tecnologia son muy limitadas. CONCLUSIONES Y PERSPECTIVAS La presente revisin presenta el gran potencial que tienen las técnicas biolégicas para la remediacion de sitios. contaminados con hidrocarburos y compuestos quimicos. Aunque hasta ahora, el uso de las tecnologias de biorremediacion se ha limitado a sitios. contaminades con compuestos biodegradables, algunas de ellas representan un uso potencial para la remediacién de sitios contaminados con compuestos no biodegradables. Tal es el caso de la fitorremediacién, que aunque es una tecnologia en desarrollo, se ha demostrado su aplicacion exitosa en suelos contaminados con metales. O bien, el uso de algunos microorganismos que tienen capacidad para cambiar [a valencia de ciertos compuestos (Cr), disminuyendo asi su toxicidad, o permitiendo ‘su acumulacién en otros organismos y finalmente su recuperacién. Los procesos biolégicos implican también una altemmativa mas econémica ambientalmente mas segura, en comparacién con ottas tecnologias, como Ia incineracién y el venteo. ‘Ademas de la degradacién de contaminantes, pueden mejorar Ia calidad del suelo por la adicién de materia organica Sin embargo, @ pesar de las numerosas ventajas de las tecnologias de bioremediacién, éstas también representan algunas desventajas que pueden limitar su uso. La investigacién y generacién de conocimiento en algunos campos, podria ser una de las vias mas adecuadas para evitar este problema, Por ejemplo, la investigacién 38 BioTecnologia 2002 Vol. 7 No.1en utes metabdlicas y/o condiciones que favorezcan la detoxificacién y mineralizacién de contaminants; el desarrollo de instrumentos para la evaluacién mas eficiente de la remediacién in situ; © bien, la evaluacién de las capacidades articulos ingenieros y edafélogos. El mayor reto que implica esta relacién multidisciplinaria es el desarrollo de tecnologias que aseguren el contacto de los microorganismos degradadores. con _— los contaminantes, nutrientes y oxigeno, degradadoras de microorganismos que habitan en condiciones extremas. La biorremediacién de suelos involucra una serie de disciplinas, por lo que es recomendable la interaccion entre biotecnélogos, _quimicos, Referencias bibliograficas Alexander, M. 1981, Biodegradation of chemicals of environmental concer. Science, 211: 132-138. ‘Alexander, M. 1994, Biodegradation and Bioremediation. Academic Press, San Diego. 302 pp. Bouwer, E.J. y Zehnder, A.J.B. 1993. Bioremediation of organic compounds - putting microbial metabolism to work. Trends Biotechnol. 11: 360-367. Eweis, J.B Ergas, SJ.; Chang, D.P y Schroeder, E.D. 1988. Bioremediation Principles. McGraw-Hill International Editions. 296 pp. Fan, CY. y Krishnamurthy, S. 1995. Enzymes for enhancing bioremediation of petroleum-contaminated soils: a brief review. Air &Waste Manage, 45: 453-460, Hutchinson, S.L; Banks, M.K. y Schwab, A.P. 2001. Phytoremediation af aged petroleum sludge: effect of inorganic fertilizer. J. Environ. Qual, 30: 395-403. Reddy, P.G.; Singh, H.D.; Roy, PK. y Baruah, J.N, 1982. Predominant role of hydrocarbon solubilization in the microbial uptake of hydrocarbons. Biolechnol. Bioeng. 224:1241-1269. Reddy, C.A. 1995. The potential for white-rot fungi in the treatment of pollutants. Current Opinion Biotechnol. 6: 320-328 Riser-Roberts, E. 1998, Remediation of petroleum contaminated soils. Lewis Publishers. 542 pp. Sellers, K. 1999. Fundamentals of hazardous waste site remediation. Lewis Publishers. 326 pp. Semple, K.T.; Reid, BJ. y Fermor, T.R. 2001. Impact of composting strategies on the treatment of soils contaminated with organic pollutants. Environ. Pollution, 112: 269-283. Singer, ME. y Finnerty, W.R. 1984. Microbial metabolism of straight-chain and branched alkanes, En: Petroleum Microbiology. Atlas, R.M. (Ed.). Macmillan, Nueva York. pp: 1-69. Van Deuren, J Wang, Z. y Ledbetter, J. 1997. Remediation Technologies Screening Matrix and Reference Guide, 3° Ed. Technology Innovation Office, EPA. http:/hmww.epa.govitioiremed. htm. 7 39 BioTecnologia 2002 Vol. 7 No. 1