Universidad Cristiana Evanglica

Nuevo Milenio

Asignatura:
Serologa
Tema:
Tcnicas Serolgicas
Catedrtico:
Dra. Lourdes Daz
Alumna :
Eva Ester Padilla Martnez

Pea Blanca, Cortes. 30 de octubre del 2015

Serologa

Es un anlisis de sangre para detectar la presencia de anticuerpos contra

un microorganismo. Ciertos microorganismos estimulan al cuerpo para
producir anticuerpos durante una infeccin activa.
Un examen serolgico puede determinar si usted alguna vez ha estado
expuesto a un microorganismo particular, pero esto no necesariamente es
indicio de una infeccin actual.

Tcnica de precipitation
El complejo Ag-Ac precipita espontneamente o por centrifugacin cuando
la proporcin de Ags y Acs de la mezcla es equivalente. En la Figura 7 se
muestra un esquema de los tipos de complejos formados al mezclar, en
tubos de ensayo, soluciones con diferentes cantidades de antgenos a los
que se aaden igual cantidad de un antisuero.
La precipitacin es mxima all donde la proporcin entre ambos es ptima
(parte central de la curva), pero va disminuyendo a medida que
predomine el Ac o el Ag (izquierda y derecha de la curva respectivamente)
Este tipo de reaccin no es muy utilizado al requerirse grandes
concentraciones de antgeno y de anticuerpo para poder medir el
precipitado formado.

Curva de precipitacin obtenida mezclando concentraciones de antgeno con una cantidad

constante de anticuerpo.

Tcnica de difusin radial doble de Ouchterlony

Esta tcnica se realiza en placas de agar en donde se practican pocillos, en

uno de estos pozos se coloca el suero o muestras a investigar y en el resto
se coloca el anticuerpo preparado frente a la sustancia que se quiere
identificar.
Cuando difunden, ambos sistemas se encontrarn y se formar en la zona
de equivalencia el complejo Ag-Ac correspondiente que se hace visible en
forma de una lnea de precipitacin. En una preparacin que contenga
varios antgenos, se obtendrn mltiples lneas de precipitado. La tcnica
de Ouchterlony permite identificar sustancias segn la forma de unirse las
lneas de precipitacin de dos o varios sistemas.

Placa de doble difusin de Ouchterlony en agar preparada

3. Tcnica de inmunoelectroforsis
La inmunoelectroforsis es una tcnica que se realiza en dos fases.
Primero se separa la mezcla de Ags por electroforesis y posteriormente el
antgeno que se desea detectar se hace reaccionar con un anticuerpo
especfico colocado en un pocillo lateral. Por difusin llegan a encontrarse
los antgenos y el antisuero, apareciendo el complejo Ag-Ac visible en
forma de lneas de precipitacin que pueden ser estudiadas por
comparacin con un sistema estndar. En Inmunologa clnica, esta tcnica
puede utilizarse en la identificacin de las protenas de mieloma.

Incremento de precipitacin por inmunoelectroforsis con

contracorriente

Esta tcnica puede aplicarse a antgenos que migran hacia el polo positivo
en la electroforesis en agar (si es necesario, los antgenos pueden
sustituirse por grupos con carga negativa para lograr este fin). El antgeno
y el antisuero se colocan en orificios realizados en el agar y se les aplica
una corriente elctrica (Figura 10). El antgeno migra de manera
progresiva a la zona del anticuerpo donde sucesivamente se une ms
y ms a las molculas del anticuerpo, en esencia con un aumento artificial
de la concentracin efectiva de anticuerpo y, en consecuencia, forma una
lnea de precipitina.

Prueba Inmunoenzimtica (ELISA)

La tcnica inmunoenzimtica ELISA forma parte de aquellas reacciones
serolgicas que utilizan conjugados para poder visualizar la reaccin
ANTIGENO-ANTICUERPO. El ELISA, se basa en el uso de anticuerpos
marcados con una enzima (generalmente la peroxidasa), de forma que
los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunolgica como
enzimtica. Al estar uno de los componentes (antgeno anticuerpo)
insolubilizados sobre la placa, la reaccin antgeno-anticuerpo quedar
inmovilizada y por tanto, podrn fcilmente ser revelada mediante la
adicin del sustrato, que al actuar sobre la enzima, producir un color
observable a simple vista o cuantificable mediante un colormetro.

Procedimiento
a) Se tapiza la placa con el anticuerpo especfico frente al antgeno a
determinar.

b) Se aade la muestra con el antgeno.

c) Se adiciona el anticuerpo secundario marcado con la enzima que
en presencia de su sustrato da un producto coloreado soluble, este
producto es cuantificado mediante el lector de ELISA, e indirecto o
competitivo, se diferencia del caso anterior en que se aaden los
anticuerpos, previamente incubados con la muestra, los anticuerpos
que no se han unido a los antgenos de la muestra lo harn a los
antgenos de los pocillos. Como enzimas se suelen utilizar la
peroxidasa, la galactosidasa o la glucosa oxidasa.
Esta tcnica se utiliza para la medida de hormonas, antgenos de la
hepatitis y otras muchas sustancias que se encuentran a muy bajas
concentraciones.
Una variante de esta tcnica de gran utilidad se conoce como ensayo en
fase slida y est orientada a la determinacin de anticuerpos frente a
un determinado antgeno. Para ello el antgeno se encuentra fijo a un
soporte (por ejemplo tubo de plstico). Al aadir la muestra con el
posible anticuerpo se unir y podr ser detectado aadiendo antiinmunoglobulinas marcadas con el enzima.
En la primera lnea se observa el suero
control positivo y en la segunda el
negativo. Los sueros problema por
duplicado han sido colocados en el resto
de la placa, se observan positivos (azul)
y negativos (sin color).

Inmunocromatografa o Prueba Rpida

La Inmunocromatografa se basa en la migracin de una muestra a
travs de una membrana de nitrocelulosa. La muestra es aadida en la
zona del conjugado, el cual est formado por un anticuerpo especfico
contra uno de los eptopos del antgeno a detectar y un reactivo de
deteccin. Si la muestra contiene el antgeno a problema, ste se unir
al conjugado formando un complejo inmune y migrar a travs de la
membrana de nitrocelulosa. Sino, migrarn el conjugado y la muestra
sin unirse.

La zona de captura est formada por un segundo anticuerpo especfico

contra otro eptopo del antgeno. Al llegar la muestra esta zona, los
complejos formados por la unin del antgeno y conjugado quedarn
retenidos y la lnea se colorear (muestras positivas). En el caso
contrario las muestras son negativas.
La zona control est formada por un tercer anticuerpo que reconoce al
reactivo de deteccin. Cuando el resto de muestra alcanza esta zona, el
anticuerpo se unir al conjugado libre que no ha quedado retenido en la
zona de captura. Esta lnea es un control de que el ensayo ha
funcionado bien, porque se colorea siempre, con muestras positivas y
negativas.
Esta tcnica es utilizada en las detectar enfermedades como, Hepatitis
A-B, embarazos, helicobacter pylori, dengue, adenovirus entre otras.
Procedimiento
1. Remueva los Casetes necesarios a utilizar de su sobre metalizado
2. Tenga los componentes a temperatura ambiente antes de llevar a
cabo la prueba.
3. Identifique el casete a utilizar con los datos del paciente.
4. Tome 5 micros litros de la muestra, suero, plasma o sangre total y
dispense en el rea S1 marcada en el rea de la ventana.
5. Agregue de 2 a 3 gotas de solucin buffer en la zona marcada S1.
6. Interprete los resultados de la prueba en un lapso mximo de 20
minutos. Un resultado positivo franco deber aparecer antes de los 10
minutos.

Interpretacin de resultado

(Prueba dengue)

Tcnica de Aglutinacin
Esta tcnica es til para la deteccin de antgenos y anticuerpos. Su
fundamento es inducir una agrupacin microscpicamente visible de
partculas, causada por interacciones antgeno anticuerpo que forman
puentes entre ellas.
Usualmente el antgeno se encuentra en las partculas y los anticuerpos
forman puentes. Existen varios tipos de aglutinacin en donde se
destacan:
Aglutinacin activa: anticuerpos dirigidos contra componentes de las
partculas (eritrocitos, bacterias). Un ejemplo de este caso es la
determinacin de grupos sanguneos.

Aglutinacin pasiva: los anticuerpos se dirigen contra molculas que

se han adherido intencionalmente a una partcula que acta como medio
de soporte pasivo (ltex).
Entre esta se destaca
las pruebas de FR,
Protena C Reactiva,
Antgenos Febriles, RPR.
Estas pruebas nos
sirven en la deteccin
de enfermedades
como artritis
reumatoide, ETS,
entre otras.
Interpretacin de
Negativo: suspensin homognea.

Positivo: aglutinacin
de los 2 minutos. Se

resultados

que aparece dentro

califica de 1 a 4 +.

Titulacin: inversa de la mxima

dilucin a la que se produce
aglutinacin visible macroscpicamente.

Tcnica Inmunofluorescencia.
Es una tcnica de laboratorio empleada para identificar anticuerpos o
antgenos especficos. La identificacin de los anticuerpos por lo general
se realiza en la sangre (suero).
Dentro de sus ventajas se pueden obtener resultados rpidos. -No es
necesario realizar cultivos.
Se puede identificar microorganismos especficos en un grupo mixto.
Determina la identidad de un organismo muerto.
Es sensible.
Desventajas
Costos en reactivo y equipo
Debe ser realizado por personal muy especializado.
Los resultados no son 100% especficos (como toda tcnica serolgica).
Valores normales
Los resultados negativos son normales

Significado de los resultados anormales

La inmunofluorescencia se emplea generalmente para detectar la
presencia y cantidad de anticuerpos antinucleares (AAN), los cuales son
anticuerpos que el organismo crea contra s mismo en algunas
enfermedades autoinmunes, como l LES. . Un resultado positivo, en
este caso, indica que el sistema inmune del cuerpo ha reconocido el
patgeno en algn momento en el pasado.
las enfermedades por la cual se puede realizar la prueba tenemos,
Fiebre por garrapatas de Colorado, Glomeruloesclerosis focal y
segmentaria, Enfermedad de Lyme, Pnfigo vulgar, Fiebre maculosa de
las Montaas Rocosas.