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1.

Mencione la diferencia entre: esterilizacin, desinfeccin y asepsia o antisepsia:


Esterilizacin: eliminacin o muerte de todos los microorganismos que contiene un objeto
o sustancia, y que se encuentran acondicionados de tal forma que no pueden
contaminarse nuevamente.
Desinfeccin: en este proceso se eliminan los agentes patgenos pero no
necesariamente todas las formas de vida, se aplica solo a objetos inanimados.
Antisepsia: es el proceso, por su baja toxicidad, se utiliza para la destruccin de
microorganismos presentes sobre la superficie cutnea-mucosa, tampoco implica la
destruccin de todas las formas de vida.
2. Cuntos tipos de esterilizacin existen y en qu consisten?
Para esto contamos con procedimientos fsicos o qumicos.
Los procedimientos fsicos se dividen en energticos y mecnicos. Dentro de los
primeros se encuentran: el calor y las radiaciones, dentro de los segundos, la
filtracin.
A. DESTRUCCION DE MICROORGANISMOS MEDIANTE CALOR:
La energa trmica es la forma ms efectiva de esterilizacin.
Esta puede utilizarse como calor hmedo o seco.
Mecanismo de Accin: Al igual que los procesos de desinfeccin, la esterilizacin trmica
destruye a los microorganismos en forma gradual; es por esto que no hay un nico
mecanismo de accin, sino ms bien la suma de distintos eventos complejos que se van
sucediendo a medida que aumenta la temperatura. El efecto final de la esterilizacin por
calor hmedo a 121C es la desnaturalizacin y coagulacin de las protenas. El primer
efecto letal sera la produccin de rupturas de cadena nica en el ADN que
provocaran la muerte celular por activacin o liberacin de enzimas con actividad de
endonucleasas. El punto crtico aqu, para la supervivencia de la clula sera su
capacidad para reparar la lesin, funcin que depende del estado gentico y fisiolgico de
la bacteria. A medida que aumenta la temperatura se agregara la prdida de la integridad
funcional de la membrana citoplsmica, lo que producira interferencias en el intercambio
con el medio externo, los procesos respiratorios y la sntesis proteica. Por ltimo, las
temperaturas ms elevadas activaran ribonucleasas que degradando el ARNr producen
la prdida de viabilidad de las clulas expuestas.
Las temperaturas a la cual puede usarse el calor hmedo son:
Por debajo de 100C
--- Pasteurizacin: se utiliza para la destruccin de grmenes
patgenos, con resistencia trmica similar o inferior M.tuberculosis, Brucella y Salmonella
A 100C
--- Ebullicin y Tindalizacin: la ebullicin consiste en mantener un
objeto o sustancia en un bao a 100C durante 30'. Aplicado as destruye la mayora de
las formas vegetativas bacterianas, hongos y virus lipdicos. La tindalizacin destruye las
formas vegetetivas durante los perodos de ebullicin, permitiendo que los esporos
germinen durante el reposo volvindose susceptibles al prximo calentamiento.
Por encima de 100C --- Autoclavado: utiliza vapor de agua a 121C durante 15' o
20'. Esta temperatura se logra si se obtiene una presin de una atmsfera relativa (dos
atmsferas absolutas), ya que el aumento de la presin provoca aumentos proporcionales
en el punto de ebullicin del agua. Es el mecanismo de destruccin microbiana ms
efectivo, y bien utilizado asegura esterilizacin. El equipo que se utiliza es la autoclave.
II. CALOR SECO:
Mecanismo de accin: Es diferente al del calor hmedo. El calor seco (o desecacin en
general) provoca desnaturalizacin de protenas, lesiones por oxidacin y efectos txicos
por niveles elevados de electrolitos. La accin letal es el resultado del calor trasmitido
desde el material con el cual los microorganismos estn en contacto, y no desde el aire

caliente que los rodea. Existen tres formas principales de esterilizacin por calor seco:
flambeado, incineracin y mediante la utilizacin del horno Pasteur: consiste en un recinto
metlico de doble pared con aislante entre ambas (para evitar la prdida de calor) y una
puerta. La fuente de calor suele ser elctrica y est incorporada. Posee un ventilador que
facilita la circulacin del aire caliente, para homogeneizar la temperatura. Un termmetro
(con alcance mnimo de 200C) visible desde afuera, registra la temperatura del interior
del recinto.
Por calor seco se pueden esterilizar: materiales de inyectables, vidrios, instrumentos
quirrgicos y objetos metlicos, as como aceites, vaselinas y polvos, que como ya se
ha dicho son impermeables al vapor.
Controles de esterilizacin: Existen tres tipos: fsicos, qumicos y biolgicos.
Controles fsicos: estn relacionados al operario que realiza el procedimiento y la
vigilancia de ciertos parmetros como: presin, tiempo, temperatura, etc.
Controles qumicos: consiste en tiras de papel con una sustancia que cambia de color al
ser expuesto a la temperatura correspondiente. La ventaja de este mtodo, es la rapidez
con que se sabe el resultado, ya que es inmediato. La gran desventaja es que dice poco
sobre el tiempo de exposicin, por lo que no asegura un procedimiento correcto.
Estos controles deben utilizarse en todos los ciclos de esterilizacin.
Controles biolgicos: consisten en exponer esporas bacterianas al ciclo de esterilizacin
y luego verificar su viabilidad.
B. POR RADIACIONES
Con este fin pueden utilizarse tanto las radiaciones ultravioletas (UV) como las ionizantes
y rayos infrarrojos.
RADIACIONES UV:
Mecanismo de accin: el principal mecanismo del efecto letal de la luz UV sobre las
bacterias, se atribuye a su absorcin por el ADN y el resultante dao de este. As
provocan la formacin de uniones covalentes entre los residuos de pirimidina adyacentes
pertenecientes a la misma cadena, lo que provoca la formacin de dmeros de pirimidina
de tipo ciclobutano. Esto produce distorsiones en la forma del DNA e interfiere en el
apareamiento normal de las bases. El resultado final es la inhibicin de la sntesis de ADN
y secundario a esto, inhibicin del crecimiento y la respiracin.
C. ESTERILIZACION POR METODOS
MECANICOS: FILTRACION: Existen distintos tipos de filtros: de asbesto-celulosa, de
vidrio, de cermica y de steres de celulosa o membranas. Las membranas estn
compuestas por steres de celulosa biolgicamente inertes. Los poros varan desde
0.025m a 25m de dimetro, siendo los de 0.22m los ms utilizados ya que son lo
suficientemente pequeos para detener a todas las bacterias. Con este mtodo se
esterilizan: azcares, urea, sueros, antibiticos, etc
3. Cules son las unidades de concentracin ms utilizadas en las soluciones
empleadas en las prcticas de este manual?
mM, M, M y porcentual (p/v y v/v).
4. Realice los clculos para preparar las siguientes soluciones, consulte la forma de
preparacin en las prcticas 2 y 5 de este manual.

5. Describa las tcnicas adecuadas para el lavado y enjuagado del material de


laboratorio.

Es importante que se use material que no contenga residuos qumicos ni biolgicos. Para
lavar el material primero se remoja en una solucin de hipoclorito de sodio, enjuagar con
agua, lavado con escobilln y detergente no inico, luego se enjuaga con agua y se
sumerge por 5 min. en agua destilada y se deja secare, finalmente se prepara para su
esterilizacin.
6. Qu caractersticas de esterilidad debe tener el material empleado en Gentica
Molecular?
Libre de agentes patgenos as como de partculas de cualquier otro material que puedan
interferir con las pruebas empleadas, que preferentemente sea nuevo y que tengan las
caractersticas necesarias para cada prueba.
Bibliografa
http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2027.pdf

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