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Sara Zapata Garca

Manuela Zapata Lpez


Carolina Cartagena Durango

CULTIVO Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS

PALABRAS CLAVES
Bacterias aerobias, microorganismos, medios de cultivo, mtodos de inoculacin.

RESUMEN
Las bacterias estn presentes en los diferentes ecosistemas, pero para su
crecimiento requieren de condiciones ptimas las cuales les permitan vivir. En esta
prctica se llev a cabo el cultivo y el aislamiento de diferentes bacterias, para
ello se emple distintos medios de cultivo cada uno de ellos con propiedades
desiguales, por otra parte para llevar a fin dicha siembra se realizaron diferentes
mtodos de cultivo.
Todo esto se realiz con la finalidad de identificar las particularidades de
crecimiento de algunos microorganismos dependiendo del medio de cultivo, los
medios de cultivo se dividen dependiendo del propsito, en este caso era para
observar que bacterias pueden crecer en los diferentes agares.
Se contempl el desarrollo de E. Coli el agar nutritivo sembrado con el mtodo
francs. En el agar eosina azul de metileno el cual es un agar selectivo crecieron
S. Aureus y E. Coli pero no germin la bacteria B. Cereus. Por otra parte en el
agar manitol sal solo se observ la proliferacin de S. Cilius pero no se
desarrollaron B. Cereus ni E. Coli. En comparacin con los otros medios de

cultivo en el agar sangre crecieron las tres bacterias S. Aureus, B. Cereus y E.


Coli.

MARCO TEORICO
Para aislar e identificar una especie bacteriana del medio y de otra especie que
pueda confundirse morfolgicamente es necesario usar medios de cultivos, ya que
nos permiten diferenciar las caractersticas del crecimiento de las bacterias y
establecer su identidad segn el medio de cultivo que se use.1
Los microorganismos se encuentran en muchos ambientes naturales como el
agua, el suelo, aire, el hombre y otros seres vivos, alimentos, entre otros.
Haciendo parte de los diferentes ecosistemas. Por esto se deben usar los medios
de cultivo adecuados que se asemejen al ambiente si queremos posibilitar el
crecimiento de la bacteria.1
Un medio de cultivo est diseado para posibilitar el desarrollo y nutricin de las
bacterias por esto cuenta con una cantidad de sustancias como: carbono, agua,
azufre, fosforo, nitrgeno, potasio, sodio, magnesio, entre otros. Tambin su
crecimiento depende de muchos factores entre ellos: un pH preferiblemente
neutro, humedad, oxigeno, temperatura, presin osmtica, todo esto en
condiciones adecuadas.2
Los medios de cultivo se clasifican dependiendo de las caractersticas que se
necesiten para su ptimo desarrollo los cuales segn su consistencia pueden ser:

Lquidos: no contienen agar y favorecen el crecimiento bacteriano ya que las


bacterias poseen una gran libertad de movimiento y al difundirse por todo el
medio encuentran su componente nutritivo y requerimiento de oxigeno ms
ptimo con gran facilidad, por ejemplo: las aerobias estrictas crecen en los
primeros 10-15mm de la superficie del medio, las microaerofilas ligeramente
por la superficie del medio, las anaerobias estrictas en los 10-20mm del fondo
y las facultativas por todo el medio.
Solidos: su concentracin de agar es de 1.5% a 2%, en estos las bacterias
crecen con mayor dificultad, ya que los nutrientes pueden agotarse fcilmente,
se utilizan para ver colonias, aislar microorganismos, caractersticas de
crecimiento, color, tamao, taxonoma, entre otros.
semi-solido: su concentracin de agar es de 0.5% y se utiliza para estudiar el
movimiento y algunas propiedades bioqumicas.2

Tambin segn su aplicacin se usa:

Simples: son apropiados para la mayora de microorganismos ya que poseen


requisitos nutricionales mnimos para desarrollarse.
Enriquecidos: permiten el crecimiento de bacterias difciles de cultivar, puesto
que se aade ciertos componentes muy ricos en nutrientes.
Selectivos: estos medios contienen componentes que inhiben el crecimiento
de algunas bacterias cuyo crecimiento no interesa, permitiendo as aislar una
determinada especie.
Diferenciales: en este se les adiciona sustancias para el crecimiento de
determinadas bacterias y al actuar sobre dichas sustancias adquieren un color
que las diferencia de otras colonias.
Enriquecimiento: son medios lquidos que favorecen la multiplicacin de
bacterias cuando la muestra obtenida es pobre.2

De acuerdo con su aplicacin los componentes usuales de los medios de cultivo


son:

Extracto de carne: constituye una fuente de carbono, nitrgeno, sales


orgnicas y otros nutrientes.
Peptonas: son protenas degradadas, ricas en nitrgeno y carbono.
Cloruro de sodio: importante para proporcionar un adecuado equilibrio
osmtico.
Tampones estabilizadores del pH: necesarios para contrarrestar las
variaciones del pH debido a los productos del metabolismo bacteriano.2

Nutrientes para medios de enriquecimiento:

Extracto de levadura: rico en vitaminas del complejo B, protenas y cidos


nucleicos.
Extracto de glbulos rojos: suministra los factores X (hemina) y V (difosfopiridin-adenin-nucleotido o coenzima I) imprescindibles para el crecimiento
bacteriano de algunos microorganismo.
Infusin de hgado o corazn y cerebro: son infusiones ricas en
aminocidos azufrados que reducen el potencial de xido reduccin.2

Agentes reductores:
Se adicionan tioglicolato sdico, cistena, cido ascrbico a los medios de cultivo
para promover la anaerobiosis.2
Agentes selectivos:

Colorantes: el cristal violeta, azul de metileno, el verde brillante y otras


sustancias usadas por su efecto toxico sobre las Gram positivas.
Cloruro sdico a altas concentraciones.
Bilis o Sales biliares
Antibiticos
Cicloheximida o actidiona: se aade para impedir el crecimiento de hongos
ambientales en los medios de cultivo.2

Azucares:
Se puede adicionar para fines nutritivos o para investigar la actividad metablica.2
Indicadores de pH:
Es esencial para detectar variaciones en la acidez o alcalinidad del medio
causadas por el metabolismo bacteriano.
Los medios de cultivo usados en el laboratorio fueron:

Agar nutritivo: est compuesto de extracto de carne, peptona, ClNa, agar y


agua destilada. Se usa como medio de cultivo general para la mayor parte de
los microorganismos y como base para la preparacin de medios selectivos y
enriquecidos.2
Agar sangre: compuesto por extracto de carne, peptona, ClNa, sangre, agra y
agua destilada. Lleva como base el agar nutritivo y se le adiciona sangre
desfibrinada en una porcin del 5-10%, principalmente sangre de conejo,
carnero y caballo ya que ofrecen buenas reacciones hemolticas. No se usa
sangre humana procedente de banco puesto que contiene citrato que puede
inhibir el crecimiento de algunos microorganismos y glucosa que falsea las
reacciones de hemolisis, aparte de anticuerpos y agentes antimicrobianos.
Aqu crecen la mayora de bacterias patgenas y algunas levaduras. Este
medio es adecuado para el cultivo y aislamiento de microorganismos
exigentes, tambin para estudiar la actividad hemolica.2
La hemolisis puede ser de 3 tipos: hemolisis: clarificacin parcial de la
sangre en una colonia, que produce un cambio de color gris verdoso o
pardusco en el medio; hemolisis: zona de clarificacin completa de la sangre
alrededor de las colonias debido una lisis completa de eritrocitos que produce
una eliminacin de la sangre del medio debajo de las colonias y a su alrededor;
hemolisis: sin lisis o cambio de color en los eritrocitos.3
Agar MacConkey: est compuesto por peptona, lactosa, ClNa, sales biliares,
cristal violeta, rojo neutro, agar y agua destilada. Los medios usados para el

aislamiento selectivo de enterobacterias se caracterizan por contener lactosa y


un indicador de cambio de pH que detecta la actividad fermentadora sobre este
azcar. Adems estos medios de cultivos llevan sustancias inhibidoras de
Gram positivos. Las sales biliares y el cristal violeta actan como inhibidores.
El indicador vira a rojo ladrillo en medio acido. Las bacterias que fermentan la
lactosa producen colonias de color rojo que pueden estar rodeadas de una
zona opaca debida a la precipitacin de sales biliares; las no fermentadoras
dan colonias incoloras ms o menos transparentes.2
Agar EMB (Eosina azul de metileno): compuesto por peptona, fosfato
dipotsico, lactosa, eosina azul de metileno, agar y agua destilada. Su uso es
prcticamente el mismo del agar MacConkey. El azul de metileno acta como
indicador e inhibidor al mismo tiempo. Las colonias fermentadoras de lactosa
presentan un tono violeta ms o menos intenso. Por ejemplo Escherichia Coli
origina colonias muy oscuras, frecuentemente con brillo verde metlico que
facilita su deteccin en aguas contaminadas con materias fecales. 2
Agar AMS (Manitol sal): es un medio de cultivo altamente selectivo, pues
tiene una alta concentracin de cloruro de sodio que impide el crecimiento de
la mayora de las bacterias, sin embargo tolera los estafilococos. Adems el
cultivo contiene manitol como nico carbohidrato y rojo fenol como indicador
del pH, cuyo mbito de viraje esta entre pH 8,4 (rojo) y pH 6,8 (amarillo).
Cuando hay produccin de cido a causa de la fermentacin de manitol, las
colonias aparecen rodeadas de un halo amarillo; el medio permanecer sin
cambio de color o acentuara a rojo medio si las bacterias no fermentan el
manitol.4
Caldo nutritivo: es un medio lquido compuesto por una infusin de carne,
ClNa, peptona, extracto de levadura y tambin fosfato disdico. Es usado como
base para otros caldos que puedan contener ms nutrientes. 5

METODOLOGA
Para este laboratorio se utilizaron cepas de Gram positivas y cepas de Gram
negativas, se implementaron medios de cultivo como lo fue el agar nutritivo que es
en medio simple, el caldo nutritivo, el agar EMB que es un medio selectivo,
tambin el agar AS que es un medio enriquecido, el agar AMS que es un medio
diferencial y otros materiales como mecheros, asas y agujas de inoculacin, cinta
de enmascarar.

Se realiz el procedimiento en 3 tipos de cultivo, en cultivo en placa de agar, en


cultivo en agar inclinado y cultivo en caldo nutritivo.
En el cultivo en placa de agar se utilizan varios mtodos de siembra por estras en
superficie entre las cuales tenemos el francs y el clsico de los cuales tenamos
como objetivo conseguir colonias separadas para lograr un mejor anlisis
En el mtodo francs flameamos el asa y tomamos la muestra de E. coli y la
pusimos en la caja de petri con el inoculo extendiendo el cultivo haciendo lneas
paralelas, despus flameamos de nuevo el asa e hicimos otras lneas paralelas de
forma vertical y despus volvimos a flamear e hicimos las lneas de forma
horizontal hasta que cubrir toda al caja.

En el mtodo clsico utilizamos barias cepas por lo cual marcamos en la cinta de


enmascarar los nombres de dichas bacterias, en el cual tambin se utiliz un asa
flameado pero a diferencia del anterior este se esparca por la caja de petri en
forma de zig-zag hasta cubrirla.
En el cultivo de agar inclinado lo primero que hicimos fue rotular los tubos y
ponerles los datos necesarios para la observacin que se hizo al da siguiente.
Luego de flamear el asa se tom una muestra del cultivo teniendo cuidado en el
remover el tapn y mantenerlo en la zona estril ya luego se tom el tubo en el
que se iba a inocular el cual se flameo la boca para introducir la porcin de cultivo
haciendo una estra en la superficie en lnea recta. Ya para terminar se flamearon
las asas. Esquema 1

Esquema 1

Esquema 2

En el cultivo en caldo nutritivo realizamos los mismos pasos del anterior pero en
este caso la muestra de cultivo la sumergimos y la agitamos con el asa ene l
medio lquido Esquema 2.

RESULTADOS Y DISCUSION

1. CULTIVO EN CAJA PETRI DE


AGAR NUTRITIVO
METODO: Francs
BACTERIA: Sherichia coli
CONSITENCIA: Solido

El agar nutritivo es un medio de cultivo


simple
utilizado
para
propsitos
generales como para el aislamiento y
recuento de microorganismos con
escasos requerimientos nutricionales.6
Se aconseja como medio de cultivo
general para la mayor parte de los
microorganismos y como base para la
preparacin
de
otros
medios
7
enriquecidos y selectivos.
El mtodo utilizado fue el francs. En la imagen 1 se pueden observar algunas
colonias separadas.
El crecimiento de la Scherichia coli, se puede decir fue porque este cultivo no es
selectivo por tanto la mayora de las bacterias crecen en l.
La bacteria cultivada presento las siguientes caractersticas:

Forma

Puntiforme

Color

Blanco
Transparentoso

Borde

Entero

Elevacin

Convexa

Forma

Circular

Color

Blanco
Transparentoso

Borde

Entero

Elevacin

Convexa

2. CULTIVO EN AGAR-SANGRE
Mtodo: Clsico
Bacterias: Scherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus.
Imagen 2
En el agar sangre crecen la mayora de bacterias
y levaduras, ya que es un medio enriquecido de
nutrientes que se usa principalmente para
microorganismos exigentes.8
Como se observa en la imagen 2 las bacterias
Staphylococcus aurerus, Bacillus cereus y
Scherichia coli, sembradas en este cultivo
formaron colonias.
Staphylococcus aurerus
Se observaron colonias grandes con las siguientes caractersticas:
Forma

Ameboide

Color

Amarillo opaco

Borde

Ondulado

Elevacin

Convexa

Es una colonia Beta hemoltica, porque se


puede observar un halo transparente
alrededor de la colonia.
Tanto la S. aureus y B. cereus son colonias
B-hemoliticas, pues poseen enzimas

llamadas hemolisinas que hacen lisis de los globulos rojos.8


Scherichia coli
La colonia de Scherichia coli present las siguientes caractersticas:
Forma

Puntiforme

Forma

Circular

Color

Gris apagado

Color

Gris apagado

Borde

Entero

Borde

Entero

Elevacin

Convexa

Elevacin

Convexa

Es una colonia gamma hemoltica porque la E. coli no es capaz de realizar


hemolisis.9
3. CULTIVO EN AGAR EMB (EOSINA AZUL DE METILENO)
Mtodo: Clsico
Bacterias: Scherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus.
Imagen 3
Scherichia coli
Esta bacteria en agar EMB presenta un brillo
verde con negro producido por miembros que
fermentan vidamente lactosa.
La colonia de Scherichia coli present las
siguientes caractersticas:

Forma

Puntiforme

Forma

Circular

Color

Verde brillante

Color

Verde brillante

Borde

Entero

Borde

Entero

Elevacin

Convexa

Elevacin

Convexa

Las bacterias Staphylococcus aureus y Bacillus cereus no muestran crecimiento,


porque son bacterias Gram positivas, y en este medio de cultivo solo crecen
bacterias Gram negativas.9
4. CULTIVO EN AGAR MANITOL SAL
Mtodo: Clsico
Bacterias: Scherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus.

Imagen 4
Ninguna bacteria mostro crecimiento. (Imagen
4)
La S. aureus es una bacteria capaz de crecer
en este medio pues los estafilococos crecen en
altas concentraciones de sal y la S. aureus
posee coagulasa que fermenta el manitol y se
visualiza como colonias amarillas rodeadas de
una zona del mismo color. Pero en este cultivo
no crecio, se concluye que fue por falta de
tiempo ya que La American Public Health
Association (A.P.H.A) recomienda la incubacin
durante 3 das a 32 C, en aerobiosis.10

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1-Garca Gustavo, Gmez Guillermo, Velsquez Luis, Pineda Fabio, Saldarriaga


Yamill; Manual de Laboratorio de Microbiologa General; Medelln

2-Garca Martos P, Fernndez del Barrio M. T, Paredes Salido F; Microbiologa


Clnica Practica; 2 ed; [Internet]; Universidad Cadiz; 1994 [Consultado 2014 Feb
07];
Disponible
en:
http://books.google.com.co/books?id=4N8qVKckrUUC&pg=PA59&lpg=PA59&dq=a
gar+nutritivo&source=bl&ots=MzpORnHtoh&sig=RJfj5PaPQnO8zC14atA0RYHJHt
k&hl=es-419&sa=X&ei=fIP1UpJFe3gsASquIGgAw&ved=0CD8Q6AEwBTgK#v=onepage&q=agar%20nutritivo&f=t
rue

3-Elmer W, Koneman,Stephen Allen; Koneman. Diagnostico Microbiologico/


Microbiological diagnosis: Texto y Atlas en color; 6 ed; [Internet]; Medica
Panamericana;
2006
[Consultado
2014
Feb
09];
Disponible
en:
http://books.google.com.co/books?id=jyVQueKro88C&pg=PA677&dq=hemolisis&h
l=es&sa=X&ei=kNv3UpaAGqrFsAS2goHQDQ&redir_esc=y#v=onepage&q=hemoli
sis&f=false
4-Rodrguez Cavallini E, Gamboa Coronado M, Hernndez Chavarra F, Garca
Hidalgo J; Bacteriologa General: Principios y Prcticas de Laboratorio; [Internet];
Universidad de Costa Rica; 1856-2006 [Consultado 2014 Feb 07]; Disponible en:
http://books.google.com.co/books?id=vwB0fgirgN0C&pg=PA135&lpg=PA135&dq=
agar+manitol+sal&source=bl&ots=xXxdE1tezl&sig=MiExVt9ucyly6Qm9uZta9siECf
Q&hl=es&sa=X&ei=IY73UuqVHMfxkQfgoICoBw&redir_esc=y#v=onepage&q=agar
%20manitol%20sal&f=false

5- Guillem Prats; Microbiologa Clnica; 1 ed; [Internet]; Mdica Panamericana;


2005
[Consultado
2014
Feb
09];
Disponible
en:
http://books.google.com.co/books?id=TdsoWPEYaoUC&pg=PA29&dq=caldo+nutri
tivo&hl=es&sa=X&ei=a3UvPGCqvLsATT4YD4AQ&redir_esc=y#v=onepage&q=caldo%20nutritivo&f=false

6-Laboratorios Britania; Nutritivo Agar [Internet]; [Consultado 2014 Feb 06];


Disponible en: http://www.britanialab.com/productos/234_inserto_es.pdf
7- Garca Martos P, Fernndez del Barrio M. T, Paredes Salido F; Microbiologa
Clnica Practica; 2 ed; [Internet]; Universidad Cadiz; 1994 [Consultado 2014 Feb
07];
Disponible
en:
http://books.google.com.co/books?id=4N8qVKckrUUC&pg=PA59&lpg=PA59&dq=a
gar+nutritivo&source=bl&ots=MzpORnHtoh&sig=RJfj5PaPQnO8zC14atA0RYHJHt
k&hl=es-419&sa=X&ei=fIP1UpJFe3gsASquIGgAw&ved=0CD8Q6AEwBTgK#v=onepage&q=agar%20nutritivo&f=f
alse
8-Whin, Allen, Janda, Koneman, Procop, Schereckenberg, Woods. Koneman;
Diagnostico Microbiolgico; [Internet]; [Consultado 2014 Feb 09]; Disponible en:
http://books.google.com.co/books?id=jyVQueKro88C&pg=PA677&dq=hemolisis&h
l=es&sa=X&ei=kNv3UpaAGqrFsAS2goHQDQ&redir_esc=y#v=onepage&q=hemoli
sis&f=false
9- American Society for Microbiology; [Internet]; [Consultado 2014 Feb 09];
Disponible
en:
http://www.microbelibrary.org/component/resource/laboratorytest/2871-eosin-methylene-blue
10- Laboratorios Britania. Manitol salado agar. [Internet]; [Consultado 2014 Feb
09]; Disponible en: http://www.britanialab.com/productos/246_hoja_tecnica_es.pdf

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