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biopeligrosos.
WC.
En el texto que sigue a continuacin y en la tabla se resumen las pautas para una recogida y
un transporte apropiados de las muestras.
Sangre
Lquido cefalorraqudeo
La meningitis bacteriana es una enfermedad grave que se asocia con una alta morbilidad y
mortalidad si se retrasa el diagnstico causal. Debido a la labilidad de algunos patgenos
comunes (p. ej., Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae), las muestras de lquido
cefalorraqudeo deben ser procesadas inmediatamente despus de su obtencin. Bajo
ningn concepto se debe refrigerar la muestra o colocarla directamente en una incubadora.
Se procede a desinfectar la piel del paciente antes de realizar la puncin lumbar, y se recoge
el lquido cefalorraqudeo en tubos estriles con tapn de rosca. Cuando se reciba la
muestra en el laboratorio de microbiologa, se concentra por centrifugacin y se utiliza el
sedimento para inocular medios bacteriolgicos y preparar una tincin de Gram. El tcnico
del laboratorio debe notificar inmediatamente al mdico si se observan microorganismos por
microscopia o en cultivo.
Odo y ojo
Se precisa la timpanocentesis (es decir, la aspiracin de lquido del odo medio) para
conseguir el diagnstico especfico de una infeccin del odo medio. Sin embargo, en la
mayora de los pacientes no es necesario, porque la mayora de los patgenos ms
frecuentes que causan estas infecciones (S. pneumoniae, H. influenzae y M. catarrhalis)
pueden ser tratados de modo emprico. Las infecciones del odo externo estn causadas por
lo general por P. aeruginosa (odo de nadador) o S. aureus. La muestra apropiada que
debe obtenerse para cultivo es un raspado del rea auditiva afectada. Es difcil la recogida
de muestras para el diagnstico de las infecciones oculares porque por lo general la muestra
obtenida es muy pequea y puede haber en ella una cantidad relativamente pequea de
microorganismos. Las muestras de la superficie ocular deben ser recogidas con una torunda
antes de la aplicacin de anestsicos tpicos, seguido de raspados corneales cuando sea
necesario. Las muestras intraoculares se recogen por aspiracin directa del ojo. Se deben
inocular los medios de cultivo cuando se recojan las muestras y antes de que se remitan al
laboratorio. Aunque la mayora de los patgenos oculares crecen rpidamente (p. ej., S.
aureus, S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, Bacillus cereus), algunos pueden
precisar una incubacin prolongada (p. ej., estafilococos coagulasa-negativos) o el empleo
de medios de cultivos especiales (N. gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis).
Con frecuencia, las heridas abiertas que drenan pueden estar contaminadas con
microorganismos potencialmente patgenos que no guardan relacin con el proceso
infeccioso especfico. Por consiguiente, es importante recoger muestras de la profundidad
de la herida despus de haber limpiado la superficie. Cuando sea posible, debe evitarse el
empleo de una torunda porque es difcil obtener una muestra representativa sin
contaminacin con microorganismos que colonizan la superficie. Igualmente, se deben
recoger aspirados a partir de un absceso cerrado tanto del centro como de la pared del
absceso. Recoger sencillamente pus de un absceso por lo general es improductivo porque
la mayora de los microorganismos se replican activamente en la base del absceso ms que
en el centro. Se puede recoger por aspiracin material de drenaje de infecciones de los
tejidos blandos. Si no se obtiene material de drenaje, se puede infundir una pequea
cantidad de suero salino en el tejido y a continuacin retirarla para proceder a cultivarla. No
se debe emplear solucin salina que contenga un conservante bactericida. Se deben
obtener los tejidos a partir de porciones representativas del proceso infeccioso, y cuando
sea posible se recogern mltiples muestras. Se debe transportar la muestra de tejido en un
recipiente estril con tapn de rosca, y se debe aadir solucin salina para evitar la
desecacin si se ha recogido una muestra de pequeo tamao (p. ej., muestra de biopsia).
Tambin debe remitirse una muestra de tejido para examen histolgico. Dado que la
recogida de muestras tisulares requiere procedimientos invasivos, se debe hacer todo lo
posible para recoger la muestra apropiada y asegurarse de que se cultiva para todos los
microorganismos clnicamente significativos que puedan ser responsables de la infeccin.
Ello requiere una estrecha comunicacin entre el mdico y el microbilogo.
Orina
La orina es una de las muestras que con mayor frecuencia se remiten para cultivo. Debido a
que la uretra est colonizada por bacterias potencialmente patgenas, debe desecharse la
primera porcin de la orina recogida por miccin o cateterizacin. Los patgenos del tracto
urinario pueden crecer tambin en la orina; por tanto, no debe producirse retraso en el
Muestras genitales
A pesar de la variedad de bacterias que se asocian con enfermedades de transmisin
sexual, la mayora de los laboratorios se concentran en la deteccin de N. gonorrhoeae y C.
trachomatis. Tradicionalmente se ha venido haciendo inoculando la muestra en un sistema
de cultivo selectivo en relacin con estos organismos. Sin embargo, se trata de un proceso
lento, que lleva 2 o ms das para obtener un cultivo positivo e incluso ms tiempo en
relacin con la identificacin definitiva de los aislados. Se ha observado tambin que los
cultivos son insensibles porque los microorganismos son extraordinariamente lbiles y se
mueren rpidamente durante el trnsito en condiciones subptimas. Por estas razones, se
utiliza en la actualidad una variedad de mtodos sin cultivo. Los mtodos ms populares son
los procedimientos de amplificacin de cidos nucleicos (p. ej., amplificacin de secuencias
de cido desoxirribonucleico [ADN] especficas de especie por la reaccin en cadena de la
polimerasa u otros mtodos) en relacin con ambos microorganismos. La deteccin de estas
secuencias amplificadas con sondas es sensible y especfica. Sin embargo, puede
producirse una contaminacin cruzada si no se controlan cuidadosamente los
procedimientos de la prueba. Si se utiliza la orina para estas pruebas, se debe analizar la
primera porcin de la orina miccionada y no la porcin media del chorro de orina, como se
emplea en relacin con el cultivo de orina. La otra bacteria importante que causa
enfermedad de transmisin sexual es Treponema pallidum, el agente causal de la sfilis.
Este microorganismo no puede ser cultivado en el laboratorio clnico, de modo que el
diagnstico se efecta con empleo de la microscopia o de la serologa. Debe examinarse el
material de las lesiones con empleo de la microscopia de campo oscuro porque el
microorganismo es demasiado fino para ser detectado con la microscopia de campo claro.
Adems, el microorganismo se muere rpidamente cuando se expone al aire o a
condiciones de desecacin; por consiguiente, ha de efectuarse el examen microscpico en
el momento de la recogida de la muestra.
Muestras fecales
Una amplia variedad de bacterias puede producir infecciones gastrointestinales. Para poder
aislar estas bacterias en cultivo ha de recogerse una muestra fecal adecuada (por lo general
no constituye problema alguno en un paciente con diarrea), transportarse al laboratorio de
modo que se asegure la viabilidad del organismo infeccioso y se inocule en medios
selectivos apropiados. No deben remitirse muestras rectales obtenidas con torunda porque
han de inocularse mltiples medios selectivos para aislar los diversos patgenos posibles.
La cantidad de heces recogida con una torunda sera insuficiente. Las muestras de heces
deben ser recogidas en un recipiente amplio y limpio y luego ser transferidas a un recipiente
impermeable muy bien cerrado. Se deben transportar las muestras rpidamente al
laboratorio para evitar cambios cidos en las heces (causados por el metabolismo
bacteriano), que son txicos para algunos microorganismos (p. ej., Shigella). Si se prev un
retraso en el envo, las heces deben ser mezcladas con un conservante, como amortiguador
fosfato mezclado con glicerol.
En general, no obstante, un transporte rpido de la muestra al laboratorio es siempre
superior al empleo de cualquier medio de transporte. Es importante notificar al laboratorio la
sospecha de un patgeno intestinal particular porque con ello se ayudar al laboratorio a
seleccionar el medio de cultivo especializado apropiado. Por ejemplo, aunque las especies
de Vibrio pueden crecer en medios comunes utilizados para el cultivo de las muestras de
heces, el empleo de un medio selectivo para Vibrio facilita el rpido aislamiento y la
identificacin de este microorganismo. Adems, algunos microorganismos no se aslan de
modo rutinario por los procedimientos de laboratorio. Por ejemplo, Escherichia coli
enterotoxignica puede crecer en medios de cultivo de rutina pero no sera fcilmente
distinguible de E. coli no patgeno. Igualmente, no se esperara la presencia de otros
microorganismos en una muestra fecal porque la enfermedad est causada por la toxina
producida en el alimento y no por el crecimiento del microorganismo en el tracto
gastrointestinal (p. ej., S. aureus, B. cereus). El microbilogo debe poder seleccionar la
prueba apropiada (p. ej., cultivo, ensayo de toxina) si se indica el patgeno especfico.
Clostridium difficile es una causa significativa de enfermedad gastrointestinal asociada a
antibiticos. Aunque puede cultivarse el microorganismo a partir de muestras fecales, si se
remiten con celeridad al laboratorio, el modo ms especfico para diagnosticar la infeccin
es por la deteccin de las toxinas de C. difficile en extractos fecales responsables de la
enfermedad o de los genes que codifican estas toxinas. Dado que son muchas las bacterias,
tanto patgenas como no patgenas, que se hallan presentes en las muestras fecales, con
frecuencia el aislamiento y la identificacin del patgeno llevan ms de 3 das. Por ello, se
utilizan los coprocultivos para confirmar el diagnstico clnico, y el tratamiento, en caso de
estar indicado, no debe retrasarse a la espera de los resultados de los cultivos.
las pruebas de difusin en agar, se vierte sobre la superficie del medio con agar una
concentracin estandarizada de bacterias y a continuacin se colocan sobre la superficie de
agar discos o tiras de papel impregnados con antibiticos. Despus de una noche de
incubacin se observa una zona de inhibicin del crecimiento que rodea los discos o las tiras
de papel. El tamao del dimetro de inhibicin se corresponde con la actividad del
antibitico; cuanto ms sensible sea el microorganismo al antibitico, mayor es el dimetro
de inhibicin del crecimiento. Al estandarizar las condiciones de la prueba en relacin con
las pruebas de difusin en agar, el dimetro de inhibicin corresponde al valor de la CMI. En
efecto, una compaa comercial ha desarrollado una prueba en la que se calcula el valor de
la CMI a partir de la zona de inhibicin del crecimiento alrededor de una tira con un
gradiente de concentraciones de antibitico desde el comienzo hasta la terminacin de la
tira. Las pruebas de dilucin en caldo fueron llevadas a cabo originalmente en tubos de
ensayo y eran muy laboriosas. En la actualidad se dispone de sistemas preparados
comercialmente en donde las diluciones de antibiticos se preparan en bandejas de
microtitulacin preparadas, y la inoculacin de las bandejas y la interpretacin de las CMI
estn automatizadas. Los inconvenientes de estos sistemas son que la gama de los
diferentes antibiticos viene determinada por la casa fabricante y que el nmero de
diluciones de un antibitico dado es limitado. Por ello, puede no disponerse de los
resultados en relacin con antibiticos recientemente introducidos en el mercado. Las
pruebas de difusin son laboriosas y la interpretacin del tamao del rea de inhibicin
puede ser subjetiva; sin embargo, la ventajas de estas pruebas es que puede probarse
prcticamente cualquier antibitico. La capacidad de ambos mtodos de sensibilidad para
predecir la respuesta clnica a un antibitico es equivalente; por tanto, la seleccin de las
pruebas viene determinada por consideraciones de tipo prctico.