Abstrak

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengamati degradasi pati pisang yang disimpan
pada suhu rendah 13 C (kelompok dingin) dan pada suhu 19 C ( kelompok kontrol )
selama pematangan. Butiran pati diisolasi selama pada tahap-tahap yang berbeda pada
pematangan pisang. Pengamatan struktur dilakukan dengan teknik yang berbeda.
Aktivitas -amylase dan -amylase terkait dengan ranula pati yang ditentukan
menggunakan tes immunolocalization.
Peningkatan mobilitas molekul cenderung memfasilitasi intake dan tindakan dari amylase pada permukaan granula adalah enzim dalam pisang yang disimpan pada suhu
rendah. Penyimpanan dalam 10 hari pada suhu rendah juga mempengaruhi ukuran dan
bentuk butiran yang dominan butiran bulat dan lubang-lubang di permukaan bersama
dengan kandungan amilosa superior menyebabkan peningkatan jumlah rantai
amilopektin A dan kandungan alomorf-A.

Pendahuluan
Pisang merupakan buah klimakterik dan fisikokimianya dapat merubah pisang selama
pematangan yang membuat buah ini memiliki kondisi warna hijau yang pendek, yaitu
waktu yang berlalu antara panen dan awal produksi etilena yang memanipulasi kondisi
lingkungan, terutama suasana dan suhu yang digunakan untuk memperpanjang waktu
penyimpanan.
Penyimpanan pada suhu rendah adalah langkah dalam rantai dingin dari panen ke pasar
untuk memperpanjang hidup hijau buah. Secara umum, kondisi ini secara substansi
dapat mengurangi tingkat jalur metabolik yang menyebabkan penuaan buah, kerusakan
dan pembusukan kualitas. Suhu rendah merusak pematangan dengan mempertahankan
konsentrasi etilena tetapi
kebanyakan buah-buahan tropis mengalami gangguan
fisiologis dan penurunan kualitas saat terkena suhu rendah. Permukaan yang lubang
pada suhu lebih rendah dari 100C adalah gejala khas dari chilling injury dan pada buah
pisang kulit bisa berubah gelap / coklat yang mempengaruhi kualitas buah.
Dalam pisang, gejala kerusakan dingin terlihat, tergantung dan terkait dengan kelompok
genom. Genom ini memberikan resistensi dingin. Pisang hijau Nanico dapat
mengakumulasi tingkat tinggi pati(25%), yang sebagian besar rusak selama pemasakan
sehingga tinggi jumlah gula yang larut tinggi pada buah yang sudah masak (22%).
Namun, ketahanan dingin pada suhu rendah bisa menjadi suatu kerugian untuk
penyimpanan jangka panjang pisang Nanico karena buah yang disimpan di suhu rendah
selama beberapa hari mungkin menumpuk jumlah yang lebih rendah dari gula selama
pematangan. Meskipun peningkatan marginal kadar sukrosa diamati selama
penyimpanan terlihat adanya efek cyroprotective.
Efek cryoprotective marginal dapat menyebabkan perubahan dalam aklimatisasi dingin,
penurunan kualitas buah, dan jumlah akhir gula larut dalam buah matang yang lebih
rendah. Oleh karena itu, pemahaman yang lebih baik tentang efek dingin pada
metabolisme pati menjadi sukrosa, sensitivitas dingin pada pisang penting dari segi
kualitas makanan. Dalam hal ini, struktural dari granula pati yang merupakan substrat
untuk sintesis gula larut. Tingkat amilosa dan amilopektin atau bahkan kristalinitas
dapat memberikan perubahan yang terjadi di jaringan pulpa pisang selama aklimasi
dingin. Oleh karena itu, tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengamati degradasi pati
di pisang Nanico yang disimpan pada suhu rendah di tingkat granula pati. Karakteristik
struktural dari pati butiran dari kultivar ini diselidiki untuk menentukan kristalinitas dari
rasio tipe A menjadi rasio tipe B alomorf pati pada kadar air struktural granula pati, rantai
distribusi panjang amilopektin, dan kandungan amilosa. Selain itu, mikroskop digunakan
untuk mempelajari internal dan eksternal struktural fitur dari butiran dalam kaitannya
dengan fosfat dan amilosa distribusi dan terjadinya bentuk granul dan enzim utama yang
terlibat dalam degradasi pati.

Material dan metode

2. Bahan-bahan dan metode-metode 2.1. Bahan pisang hijau matang, Musa acuminata,
AAA, cv. 'Nanico', diperoleh pada CEAGESP (Companhia de Entrepostos e Armazns
Gerais do Estado de So Paulo, Brazil) segera pasca panen. Buah dicuci dengan larutan
natrium hipoklorit (0,1%, w / v) dan dipisahkan menjadi dua kelompok yang disimpan di
berbagai ruang sebagai berikut: buah-buahan disimpan di 19 C (kelompok kontrol) sampai
sepenuhnya matang dan buah-buahan yang disimpan di 13 C (kelompok dingin disimpan)
selama 15 hari. Kemudian, kelompok dingin disimpan disimpan pada 19 C sampai masak.
Tingkat pematangan dipantau melalui kedua CO2 dan etilen tingkat dan hasil yang diperoleh
disajikan dalam pekerjaan sebelumnya (Agopian et al. (2011). Sampel dikumpulkan, kupas,
iris, beku dalam N2 cair dan disimpan pada -80 C untuk analisis masa depan. 2.2. Isolasi
granula pati Berdasarkan profil degradasi pati, granula pati yang terisolasi dari jaringan
pulpa menurut Soares et al. (2011) selama berbagai tahap pematangan: pati diisolasi dari
kontrol buah-buahan dengan 1, 10, 15, 17, 21 dan 22 hari setelah panen, dan pati diisolasi
dari buah-buahan dingin disimpan (pada 13 C) dengan 10, 17, 21 dan 22 hari setelah
panen. 2.3. Laser diferensial gangguan kontras mikroskop butir pati tersuspensi dalam air
ditempatkan pada slide dan tertutup oleh kaca penutup. Pati divisualisasikan menggunakan
confocal laser scanning mikroskop (CLSM, Zeiss, Jena, Turingia, Jerman, LSM 510) dan
gambar dianalisis dalam Laser Scanning Mikroskop (LSM) Program Gambar Browser. 2.4.
mikroskop optik Campuran kering pati dan 50% gliserol itu tetap di atas kaca geser, dan
analisis dilakukan menggunakan Polarizing Optik mikroskop (Zeiss-Axioplan 2 mikroskop,
Carl Zeiss, Gttingen, Jerman) dilengkapi dengan kamera 3CCD (Color Vision Camera
Modul, Donpisha). 2.5. Pemindaian mikroskop elektron (SEM) Sampel tetap dalam bertopik
oleh tape double wajah dan dilapisi dengan platinum lapisan 10-nm-tebal di Bal-tec MED020 Coating System (Kettleshulme, UK). Sampel dianalisis dalam FEI Quanta 600 FEG
Scanning Electron Microscope (FEI Perusahaan, Oregon, USA). pengamatan SEM
dilakukan di sekunder Modus elektron beroperasi pada 2 kV, 5 kV dan 10 kV. 2.6.
kandungan amilosa Untuk mengukur kadar amilosa pati, yang enzimatik Megazyme Metode
(Kit K-amil 04/06, Megazyme Internasional Irlandia Ltd, Wicklow, Irlandia) digunakan,
menurut Peroni-Okita et al. (2010).
2.7. APTS Pewarnaan
The APTS pewarnaan dilakukan seperti yang dijelaskan oleh Blennow
et al. (2003), dan Giro, Koch, dan Blennow (2006), dengan mengikuti
modifikasi. Butiran pati (5 mg) diinkubasi
di 10 L larutan APTS baru dibuat (20 mM 8-amino-1,3,6Asam pyrenetrisulfonic, Molecular Probes, Carlsbad, Amerika Serikat, dilarutkan
di 15% asam asetat) dan 10 L dari 1 M natrium cyanoborohydride. Itu
Campuran diinkubasi pada 30 C selama 18 jam. Butiran dicuci
lima kali dengan 1 mL air suling dan ditangguhkan dalam 20 L dari
50% gliserol. Untuk mikroskopi, 2 L dari campuran granul itu tetap
pada slide kaca. Sebuah confocal laser scanning mikroskop (CLSM, Zeiss,
Jena, Turingia, Jerman, LSM 510) digunakan untuk mendeteksi fluoresensi
sinyal dari butir pati bernoda. Untuk APTS, sebuah 488 nm
garis laser digunakan untuk eksitasi, dan cahaya terdeteksi antara
500 dan 535 nm. Untuk setiap granul pati, setumpuk optik horisontal
bagian diperoleh sesuai dengan Blennow et al. (2003). Itu
gambar dianalisis dalam laser scanning mikroskop (LSM) image
program browser.
2.8. cabang amilopektin rantai distribusi panjang

pati itu debranched menggunakan isoamylase Pseudomonas

sp. (Megazyme International Ireland Ltd., Irlandia), menurut
prosedur yang dijelaskan oleh Peroni-Okita et al. (2010). Cabang
rantai distribusi-panjang amilopektin dianalisis dan dihitung
dengan menggunakan performa tinggi pertukaran anion kromatografi
dilengkapi dengan berdenyut amperometrik detektor (HPAEC-PAD,
Dionex, Sunnyvale, CA, USA), seperti yang dijelaskan oleh Peroni-Okita et al.
(2010).
2.9. Wide-angle difraksi sinar-X (WAXD)
Diagram WAXD dicatat menggunakan berputar-anoda Xray
difraksi (Rigaku korporasi, Danvers, MA, USA) dengan
Ni-disaring Cuk radiasi (= 1.542A) yang beroperasi di 50 kV dan
100 mA di Brasil Synchrotron Light Laboratorium (Campinas,
Brazil), menurut Cardoso dan Westfahl (2010). difraksi
pola dicatat selama 10 eksposur menit pada mar345 sebuah
piring gambar ditempatkan di 200,0 mm dari sampel dan alumina
Pola yang digunakan untuk mencapai kalibrasi. Pengukuran yang
dilakukan pada sampel setelah kadar air diatur dengan serapan
pada 90% kelembaban relatif (RH) selama sepuluh hari di hadapan sebuah
larutan natrium klorida jenuh. Sampel yang telah disiapkan di
tabung (0,01 mm) kaca kapiler berdinding tipis (0,7 mm).
kapiler disentrifugasi untuk berkemas butiran di bagian bawah
dan disegel untuk mencegah perubahan yang signifikan dalam kadar air
selama pengukuran. Profil WAXD diperoleh oleh
averaging radial dan dinormalisasi ke daerah yang terintegrasi antara
2 = 5 dan 40. Pola WAXD digunakan untuk menentukan
kristalinitas dan masing-masing jumlah A- dan B-jenis alomorf
seperti yang dijelaskan dalam literatur (Thys et al., 2008).
2.10. pengukuran NMR
Waktu relaksasi dianalisis dalam Ultra-bidang rendah Maran
NMR spektrometer (Oxford Instrumen, UK), menggunakan 18 mm NMR
tube dioperasikan pada 23 MHz untuk inti hidrogen. denyut nadi
Urutan digunakan untuk memperoleh data pada spin-spin waktu relaksasi
adalah Carr-Purcell-Meibom-Gil (CPMG) dan 90 pulsa 4,7 s
telah dikalibrasi secara otomatis oleh perangkat lunak instrumen. Itu
sampel yang sama dianalisis di 27 C dan 50 C. Nilai relaksasi
dan intensitas relatif diperoleh dengan pas eksponensial
data dengan bantuan program WINFIT. Terdistribusi eksponensial
cocok diperoleh dengan memplot amplitudo relaksasi
terhadap waktu relaksasi menggunakan software WINDXP. kedua WINFIT
dan WINDXP adalah program komersial dan dibundel dengan
-Bidang rendah NMR spektrometer.
2.11. Ekstraksi protein yang berhubungan dengan granul pati
permukaan dan kegiatan - dan-amilase
Enzim terikat pada granula pati selama berbeda
tahap pematangan diekstraksi menurut Peroni et al. (2008).
Ekstrak terkonsentrasi di Centriprep-10 dan Centricon10, menurut produsen manual (Millipore Corporation,
Bedford, MA 01730 USA, 2000). Kegiatan in vitro ditentukan
setelah ekstrak yang diperoleh diinkubasi dengan substrat spesifik
dari -amylase (BPNPG7-Ceralpha, Megazyme) dan -amylase
(PNPG5-Betamyl, Megazyme) di lempeng a. warna dikembangkan
dibacakan di 410 nm.
2.13. Pro-Q berlian pewarnaan
Analisa dilakukan sesuai dengan Giro et al. (2006).

Butiran pati pada berbagai tahap pematangan (50 mg) yang

diinkubasi dengan 200 L dari 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM CaCl2,
dan 1 mg / mL Tripsin dan Proteinase K selama 4 jam pada 37 C. Itu
pati dicuci dua kali dengan SDS penyangga (0,1% SDS, 5 mM EDTA,
50 mM Tris-HCl, pH 8,0) dan tiga kali dengan air suling. Kemudian,
500 L dari Pro-Q Berlian phosphoprotein gel noda (Molecular
Probe) dicampur dengan granula pati dan diinkubasi
pada suhu kamar selama 1 jam. Setelah mencuci tiga kali dengan suling
air, butiran dihentikan di 20 L dari 50% gliserol.
Sebuah aliquot dari 5 L dicampur dengan 5 L dari 80% gliserol pada kaca
meluncur. The SYPRO Ruby (Molecular Probes) pewarnaan dilakukan
bersamaan menggunakan pendekatan yang sama. butir berlabel yang
dilihat menggunakan confocal Laser Scanning Microscope (CLSM, Zeiss,
Jena, Turingia, Jerman, LSM 510) dan gambar dianalisis di
Laser Scanning Mikroskop (LSM) Gambar Browser Program. Itu
berlabel granula pati yang diukur menggunakan Program ImageJ 1.46r
(Wayne Rasband National Institutes of Health, USA).