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Compartimentos intracelulares e

endereamento

FFI0710- Biologia Molecular e Celular II


IFSC, 2015

Clula endotelial bovina corada:


verde, membranas do RE; em laranja, mitocndrias

Mecanismos de importao pelas organelas


O destino de uma protena sintetizada no citosol depende
de sua seqncia de aminocidos;
Sinal de distribuio
Se no h sinal: residem no citosol;
Sinais diferentes podem direcionar p/:
ncleo, mitocndrias, cloroplastos, peroxissomos ou RE.

Viso geral da principal via de distribuio de protenas em clulas eucariticas

Como a protena pode ser importada ?


1.

Transporte mediado: as protenas se


movimentam entre o citosol e o ncleo
por meio dos poros nucleares (funcionam
como portes seletivos).

2.

Transporte transmembrana: protenas


translocadoras transportam diretamente
protenas entre citosol-organelas.

3.

Transporte vesicular: carregam


protenas a partir do RE.
Todos requerem energia!

Qual o compartimento destino?


Seqncia sinalizadora
(15 a 60 aminocidos)
Sinal de distribuio tpico.
Freqentemente removido aps a
sntese
As seqncias-sinal que especificam o
mesmo destino podem variar.
Propriedades fsicas mais importantes
que a seqncia exata.

Regio sinalizadora
Arranjo especfico tridimensional de
tomos na superfcie protica.
Persistem aps a sntese.
Podem direcionar para o ncleo e
lisossomos, p.e.

Transporte mediado:
citosol-ncleo
Envelope nuclear:
2 membranas concntricas.
O envelope nuclear perfurado por POROS NUCLEARES
Formam canais para o trnsito de macromolculas
Entram: protenas nucleares
Saem: RNAm maduros (mRNPs= complexo mRNA+protenas) e
subunidades ribossomais, tRNAs
Seqncia-sinal = 1 ou 2 seq. curtas contendo vrias K ou R
Sinal de localizao nuclear

Micrografia eletrnica de varredura (criofratuta) de


uma ponta de raiz de cebola mostrando o ncleo e
os poros nucleares.
Fonte:http://www.bioweb.wku.edu

Complexo do poro nuclear (NPCs)


(~80 milhes de Daltons nos vertebrados;
50 diferentes protenas em mltiplas cpias)
cl. tpica de mamfero: 3 a 4 mil NPCs

RE

Membrana nuclear externa


Espao perinuclear
Membrana nuclear interna
Complexo
poro nuclear

Fibrilas
citoplasmticas
Anel citoplasmtico
Membrana ext.
Domnio luminal
Membrana int.

Anel nuclear
Cesta nuclear
Anel distal

www.scripps.edu/~stoffler/proj/NPC/npc.html

Modelo simplificado de translocao via


NPC

a) Esquema do NPC. NE, nuclear envelope; CF, cytoplasmic filament; NF, nuclear
filament. The FG-surface is formed by FG nucleoporins.
b) Ions and small neutral proteins can pass via the selective filter by diffusion.
c) Large molecules or complexes penetrate via NPC only within transport
complexes.
REVIEW: Nucleocytoplasmic Transport of Proteins (DOI: 10.1134/
S0006297907130032)

Destino: ncleo
A interao de sinais de localizao nuclear
com o poro nuclear requer auxlio de
Receptores de importao nuclear (importinas)

Ligam-se ao sinal de localizao nuclear


Receptores ajudam a direcionar a protena
por interao com as nucleoporinas.
A transferncia utiliza energia da hidrlise do GTP

Mudanas
conformacionais da
importina-

Structure, Vol. 16, Issue 6, Pages 906915, 2008.

Ran a GTPase que dirige o transporte

Transporte citoplasma-ncleo

Volume 11, Issue 12, 2001, Pages 497503

AS NUCLEOPORINAS FG

Antonin, W. Dont get stuck in the pore". The EMBO Journal (2013) 32, 173 - 175
doi:10.1038/emboj.2012.338

Como a protena pode ser importada para


organelas?
1.

Transporte mediado: citosol-ncleo


atravs dos poros nucleares que
funcionam como portes seletivos.

2.

Translocadores proticos: protenas


translocadoras transmembrana
transportam diretamente protenas
entre citosol-organelas.

3.

Transporte vesicular: carregam


protenas a partir do RE.

Destino: mitocndria e
cloroplastos

As protenas esto desdobradas para


entrar;
Protena
precurssora

possuem uma seq.-sinal, geralmente


clivada aps a translocao;
as seq-sinais so necessrias e
suficientes para importao;
O transporte a um stio especfico na
organela requer outra sequncia-sinal;

Hsp 70
citoslica
Seqncia de
direcionamento p/ a matriz

Importao de protenas para o interior da


matriz mitocondrial
Protena
precurssora

Hsp 70
citoslica
Seqncia de
direcionamento p/ a matriz

Receptor de
importao

Poro principal
de importao

citosol

Stio de contato

Espao
intermembranas
Hsp70 da
mitocondrial

Matriz mitocondrial
protena
ativa

Protease de
processamento
da matriz
Seqncia de
direcionamento
clivada

Setas identificam locais de contato entre


a membrana externa e interna na
mitocndria

Destino: Retculo Endoplasmtico (RE)


Porta de entrada p/ : Golgi, endossomos, lisossomos e
secreo;
Recebe 2 tipos de protenas do citosol:
Hidrossolveis, que so completamente translocadas pela
membrana do RE e liberadas no lmen.
Transmembrnicas, que so parcialmente translocadas pela
membrana do RE e tornam-se embebidas nela.
As protenas geralmente entram enquanto so sintetizadas...
(co-traducional)

A seqncia-sinal guiada
1.

Por uma partcula


reconhecedora de sinal
(PRS ou SRP)
presente no citosol, liga-se
sequncia-sinal de RE exposta

2.

At o receptor de SRP,
embebido na membrana do RE.

H stios moleculares de
posicionamento conectando os
ribossomos que esto
sintetizando protenas aos
canais de translocao
disponveis.

Sntese de protenas solveis e seu transporte co-traducional


atravs da membrana do RE

(Partcula reconhecedora de sinal)

Seqncia
sinal

citosol

= protein conducting channel

Mammalian Sec61 Complex in:


Science. 2009; 326(5958): 13691373.
doi: 10.1126/science.1178535

Sntese de protenas transmembranas


na bicamada lipdica do RE
Nem todas as protenas que entram no RE so liberadas no lmen...
Algumas permanecem na membrana do RE (ou outras organelas)
unipasso

multipasso

Modelo de translocao de protena


transmembrana unipasso

Sntese e insero na membrana do RE das protenas


unipasso do tipo II

citosol

Lmen
do ER

Sequncia
sinalncora
interna

Experimentos com microssomos

Algumas protenas so presas membrana


por uma ncora fosfolipdica

Glicosilfosfatidilinositol
(GPI)

Transporte vesicular:
viso geral das vias
secretora e endoctica
de distribuio de
protenas

Qual o caminho das


protenas a partir do
RE?
Como so carregadas?