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ACADMICA
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LABORATORIO II
MEDIOS DE CULTIVO Y TECNICAS DE SIEMBRA

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RESULTADOS DE APRENDIZAJE:

DESCRIBIR LOS DIFERENTES TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO Y SUS USOS EN MICROBIOLOGIA

APLICAR DIFERENTES TECNICAS DE SIEMBRA EN MICROBIOLOGIA PARA OBTENER CULTIVOS AXENICOS

MEDIOS DE CULTIVO
Todas las formas de vida, desde los microorganismos a los seres humanos, comparten ciertos requerimientos
nutricionales en lo que se refiere a las sustancias qumicas necesarias para su crecimiento y funcionamiento normal.
Debemos tener presente que en la naturaleza existe una gran variedad de tipos de requerimientos nutricionales entre
las bacterias. Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que
crean las condiciones necesarias para el desarrollo de microorganismos.

COMPONENTES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Fuentes de Carbono y Sales: En muchos casos la glucosa, lactosa u otros azucares se emplean como fuente de
carbono Algunos medio se complementan con sales minerales como el NaCl o fosfatos y sulfatos de potasio,
magnesio amonio etc.
Factores de Crecimiento (FDC): Los factores orgnicos de crecimiento son compuestos orgnicos especficos
requeridos en muy pequeas cantidades y que no pueden ser sintetizados por la clula. Algunos
microorganismos, sin embargo, pueden no requerirlos, otros necesitar slo de uno y algunos pueden utilizarlos
todos. Algunos microorganismos son capaces de sintetizar estos compuestos, se denominan prototrofos para
diferenciarlos de los mutantes auxtrofos que requieren el factor de crecimiento.
1. Vitaminas: en la mayora de los organismos las vitaminas se utilizan en la formacin de coenzimas.
2. Aminocidos: se requieren principalmente como constituyentes de las protenas. El requerimiento de un
aminocido por parte de un organismo se debe a su incapacidad para sintetizarlo y stas se relacionan
con la carencia de las enzimas necesarias para su sntesis.
3. Purinas y pirimidinas: se usan como los bloques estructurales de los c. nucleicos y de los coenzimas.
4. Otros factores de crecimiento: Algunos microorganismo requieren un anillo porfirnico o uno de sus
derivados.
Ciertos microorganismos presentan mayores dificultades al cultivarlos, ya sea, por su lentitud de crecimiento o
por la baja biomasa que alcanzan. En este caso se puede agregar al medio de cultivo los llamados Suplementos,
los cuales no siendo vitales para su desarrollo los favorecen de manera significativa.
Extractos: Para su preparacin ciertos rganos o tejidos animales o vegetales son extrados por agua y calor y
posteriormente concentrados hasta formar una pasta o un polvo. Son una fuente rica de vitaminas y otros FDC.
Peptonas: Son mezclas complejas de compuestos nitrogenados y sales minerales que se obtienen por digestin
enzimtica o qumica de protenas animales o vegetales (carne, gelatina, casena) son ricas en pptidos y
aminocidos pero pueden carecer de vitaminas y otros FDC.
Fluidos corporales: Sangre completa, plasma o suero sanguneo. Se agregan a los medios de cultivo para
contribuir con FDC as como inhibidores de crecimiento de algunas bacterias.
Sistemas amortiguadores: Se agregan al medio para mantener el pH en el rango ptimo para el crecimiento de
algunos microorganismos ya que la mayora de los microorganismos de inters son neutrfilos (crecen a pH
cercano a 7), aunque pueden usarse para microrganismos que crezcan en otros rangos de pH.
Indicadores de pH: Se aaden a los medios de cultivo para evidenciar cambios de pH, importantes para
detectar reacciones qumicas producidas por los microrganismos.
Agentes reductores: Cistena, tioglicolato y otros son usados para general las condiciones que permitan el
crecimiento de microorganismos que requieren poco oxigeno (microaerofilicos) o ausencia de este
(anaerobios).
Agentes selectivo: La adicin de sustancias que permiten el crecimiento de determinados organismos
inhibiendo a otros (cristal violeta, sales biliares, azida sdica, telurito, Antibioticos)

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CONDICIONES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

1.
2.
3.
4.

Contener sustancias nutritivas necesarias para el desarrollo de los microorganismos (tales como aminocidos,
carbohidratos, polialcoholes, vitaminas, minerales)
Tener un pH que permita un desarrollo ptimo, por lo general las bacterias patgenos necesitan un pH eutro
o ligeramente alcalino (7.0 7.4), en cambio las levaduras y hongos requieren un pH cido (5.0).
Estar previamente esterilizados o preparados en condiciones aspticas
Estar protegidos de la contaminacin ambiental por tapones de algodn card, tapones de goma, tapas
metlicas o roscas.

AGENTES SOLIDIFICANTES
Los medios de cultivo segn el uso que se les desee dar, pueden tener distinta consistencia, debido a esto se
distinguen: medios lquidos (0% de agentes solidificantes); semislido (0,6%); slidos (1,5 - 2%).
Medios lquidos: Fueron los primeros medios de cultivo usados y fueron ideados por Luis Pasteur. En ellos el
crecimiento microbiano est uniformemente disperso por todo el lquido.
Medios slidos: Fueron introducidos por R. Koch (1881) y han representado un valioso aporte en bacteriologa, para
obtener cepas puras de microorganismos, lo cual facilita la clasificacin y tipificacin bacteriana. Para obtener un
medio slido, basta agregar un agente solidificante a un medio lquido.
El ms comn de los agentes solidificantes:
Agar-Agar: el agar es un polisacrido complejo que se extrae de un alga del gnero Gelidium sp. Tiene la propiedad de
absorber 500 veces su peso en agua y formar jalea resistente que lican solamente sobre los 100C de temperatura y
solidifica a los 45C. El ms simple de estos medios es el agar corriente o nutritivo que se prepara con un caldo al cual
se le agrega agar.
Otros agentes solidificantes:
Protenas animales: se preparan solidificando las protenas de animales (por ejemplo gelatina) absorbe agua similar al
agar, pero en menor cantidad. Dentro de sus propiedades estn: ser insoluble en agua fra y fundir entre 25 y 28C
por lo que debe usarse para incubar slo a temperatura ambiente, adems hay microorganismos proteolticos que la
usan como fuente de nitrgeno.
Protenas Vegetales: El carrageno que es una gelatina vegetal extrada de algas y que se usa normalmente en la
industria alimenticia. Sus propiedades son: solidificar entre 55- 60C, no ser degradada por la mayora de los
microorganismos. Una de sus desventajas es que puede alterar el pH del medio, por lo cual se usa con buffer fosfato.
Inorgnico: muchas especies importantes de microorganismos del suelo, estrictamente auttrofos son afectadas
negativamente en cultivos artificiales por la presencia de cualquier sustancia orgnica, como el agar. Al mismo tiempo
diversas especies de microorganismos heterotrficos del mar y del suelo digieren o lican con rapidez el agar o la
gelatina. Por ambas razones surgi la necesidad de un medio inorgnico como el slice gel, que es un gel inorgnico
que se prepara con HCl y silicato de sodio.

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo pueden clasificarse segn su origen (Naturales o Artificiales) segn su composicin (Definidos o
no definidos) o segn su consistencia (lquidos, semislidos o slidos), sin embargo la clasificacin ms til es segn su
utilizacin:
1. Medios Generales: Permiten el desarrollo de una gran cantidad de microorganismos (MO).
2. Medios de enriquecimiento: Favorece el crecimiento de determinados MO sin inhibir totalmente al resto.
3. Medios selectivos: Permiten el desarrollo de un microorganismo determinado, inhibiendo al resto.
4. Medios diferenciales: Aquellos en los que se ponen en evidencia propiedades de un determinado tipo de MO.

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TECNICAS DE SIEMBRA EN MICROBIOLOGIA

La siembra de un microorganismo consiste en depositar un inculo aspticamente en un medio de cultivo. Las
siembras sucesivas de un medio de cultivo a otro se denominan resiembra. Las siembras pueden hacerse en cultivos
slidos o lquidos partiendo de microorganismos desarrollados en medios slidos o lquidos. El cuidado en la
manipulacin es absolutamente imprescindible para mantener cultivos puros.
En la naturaleza los microorganismos se encuentran en comunidades ms o menos complejas, por lo que para poder
estudiarlas debemos ser capaces de separar estas comunidades. Aunque existen numerosas tcnicas de aislamiento
las ms utilizadas utilizan medios slidos en las que se desarrollaran colonias macroscpicas como resultado del
crecimiento y divisin de los microorganismos. Tericamente cada colonia se originara a partir de una sola clula
bacteriana sin embargo una colonia tambin podra ser el resultado de una agrupacin de clulas. Es por eso que en
microbiologa al contar bacterias en una placa es ms correcto referirnos a ellas como Unidades formadoras de
colonia (UFC)
Tabla 1. Material utilizado para sembrar bacterias
Material
Asa en loop

Uso
Siembra de microorganismos en superficie o medio liquido

Asa recta

Siembra de microorganismos en picadura

Pipetas Pasteur

Traspaso de lquidos en volmenes pequeos

Asa de Drigalsky

Extensin de siembra en placa

MANEJO Y TOMA DEL INOCULO

La toma de un inoculo de una muestra es simple pero requiere algunas consideraciones (Figura 1):
1. Disponga frente al manipulador el mechero y la muestra que contiene los microorganismos as como el resto del
material necesario.
Figura 1. Manejo de muestra y toma de inoculo
2. Tome el asa de siembra y flamee el
filamento hasta que alcance un rojo
incandescente. Enfrelo en la proximidad de
la llama (10s).
3. Tome con la otra mano el recipiente que
contiene la muestra. Si la muestra esta
tapada destpela usando los dedos anular y
meique manteniendo la tapa en la mano
flamee la boca del tubo. Si est en una placa
Petri, deje la tapa boca abajo y toma la parte
que contiene los microorganismos. En la
proximidad del mechero.
4. Trabajando siempre cerca del mechero,
tome la muestra con el asa. Si el medio es
lquido agite ligeramente.
5. Transfiera a otro medio de cultivo,
flameando la boca de los tubos y trabajando
en proximidad el mechero. Si la
transferencia es a un caldo estril descargue
mediante agitacin del asa. Si la trasferencia
es a una placa deposite el inoculo y siembre
en zigzag.
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6. Una vez realizada la transferencia

A. En caso de tubos, flamee la boca del tubo y tape. Marque el tubo con toda la informacin necesaria (identificacin,
fecha y nombre)
B. Si se realiza en placa Petri, tape la placa. Marque la base de la placa (en donde est el medio de cultivo) con toda la
informacin necesaria (identificacin, fecha y nombre)
7. Antes de dejar el asa en el mesn flamelo a incandescencia nuevamente para esterilizar.
(Gamazo, 2005)

AISLAMIENTO POR AGOTAMIENTO POR ESTRIAS

El aislamiento por estras se trata de un mtodo rpido simple de agotamiento progresivo que permite obtener
un nmero reducido de bacterias distribuidas individualmente sobre una placa Petri.
1.
Trabajando siempre en la proximidad del
mechero tome un inoculo pequeo con el asa estril y
transfiera a la placa en un sector prximo al borde.
Extienda formando estras muy juntas (Fig. 2-1)
2.
Flamee nuevamente el asa y enfriarla. Tomar una
muestra a partir de la zona de estras del punto 2 extender
en estras ms separadas en el sector adyacente evitando
tocar el sector anterior (Fig. 2-2)
3.
Flamear el asa y enfriarla. Repetir el mismo
proceso anterior, con estras ms separadas. en el ltimo
sector de la placa evitando tocar las secciones anteriores
(Figura 2-3)
Si en la placa de agar ha crecido ms de un tipo de
bacterias, se debe realizar el aislamiento de 1 colonia a
otro medio de cultivo semejante o a medios selectivos
con fines diagnsticos. En el caso de los medios lquidos,
una vez obtenido el crecimiento bacteriano, se debe
realizar un aislamiento de una gota o con un asa del
cultivo a un medio slido para obtener colonias aisladas y
puras.

Si fuese necesario las colonias se sometern a uno o ms re-aislamientos, hasta obtener cultivos puros, es decir, que
todas las colonias sean similares, presenten la misma morfologa y microscpicamente correspondan a un solo tipo de
bacteria.
Slo en este momento se puede proceder a la identificacin de la especie bacteriana mediante el traspaso de 1 sola
colonia a una batera de medios diferenciales.

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LABORATORIO 2: ACTIVIDAD PRCTICA

OBJETIVO:

CONOCER LOS DIFERENTES TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLOGICO

CONOCER DIFERENTES TECNICAS DE SIEMBRA EN MICROBIOLOGIA
METODOLOGIA: REALIZAR TRASPASO BACTERIANO A DIFERENTES TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO
1. Obtencin de un cultivo axnicos en placa por Mtodo de estras
1) Disponga frente suyo el material necesario para realizar la siembra (Placa Petri, tubo de muestra, asas de
siembra y marcador permanente) cerca del mechero encendido.
2) Tome el asa y flamee en llama caliente el filamento hasta que alcance un rojo incandescente. Enfrenlo en
la proximidad de la llama (10 -20 s) (Fig. X-1)
3) Tome con la otra mano el tubo de muestra, agtelo ligeramente para homogenizar, retire el algodn o tapa,
afirmado con su dedo meique y anular (Fig. X-2)
4) Trabajando siempre en la proximidad de la llama flamee la boca del tubo y tome un inoculo pequeo con el
asa estril y transfiera a la placa en un sector prximo al borde. Extienda formando estras muy juntas (Fig. Y1)
5) Flamee nuevamente el asa y enfriarla. Tomar una muestra a partir de la zona de estras del punto 4 extender
en estras ms separadas en el sector adyacente evitando tocar el sector anterior (Fig. Y-2)
6) Flamear el asa y enfriarla. Repetir el mismo proceso anterior, con estras ms separadas. en el ltimo sector
de la placa evitando tocar las secciones anteriores (Figura Y-3)
7) Rotule e Incube
2. Traspaso a tubos.
1) Disponga frente suyo el material necesario para realizar la siembra (Placa Petri, tubo de muestra, asas de
siembra y marcador permanente) cerca del mechero encendido.
2) Tome el asa y flamee en llama caliente el filamento hasta que alcance un rojo incandescente. Enfrenlo en
la proximidad de la llama (10 -20 s) (Fig. X-1)
3) Tome con la otra mano el tubo de muestra, agtelo ligeramente para homogenizar, retire el algodn o tapa,
afirmado con su dedo meique y anular (Fig. X-2)
4) Trabajando siempre en la proximidad de la llama flamee la boca del tubo y tome un inoculo pequeo con el
asa estril
5) Con la otra mano, tome el tubo recepto, bralo con su dedo anular y meique, flamelo y siembre.
a. Tubo Medio Solido inclinado: Con asa en loop haciendo un zig-zag sobre el extendido
b. Tubo Medio Semislido: Con asa recta, haciendo un pinchazo recto hasta el fondo del tubo
c. Tubo Medio Liquido: Con asa en loop agitando en el medio receptor.
d. Rotule e Incube

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INFORME DE LABORATORIO
Debe imprimir este informe y entregarlo segn los plazos establecidos por su profesor de prctico.
Nombre: ______________________________________________________________________________________
Seccin: ______________
Fecha de Entrega: ___________________________

1. Medios de Cultivo: Busque informacin para los siguientes medios de cultivo e indique con una X si corresponden a
Selectivos, De enriquecimiento, Diferenciales o Generales.
Medio de Cultivo
Agar Nutritivo
Agar MacConkey
Agar Urea de Christensen
Agar Sabouraud
Agar XLD
Agar Mller Hinton

Selectivo

Enriquecimiento

Diferencial

General

A las 48 horas de incubacin ud deber concurrir al laboratorio a revisar sus placas sembradas durante el prctico.
Al respecto dibuje los resultados obtenidos en sus experiencias y responda las preguntas formuladas:
2. Agotamiento mediante mtodo de estras: Dibuje la placa obtenida rotulando las estructuras identificadas
Es posible obtener colonias aisladas. Cules son las consideraciones
que debe tener para un buen resultado.
_________________________________________________________
_________________________________________________________
_________________________________________________________
_________________________________________________________
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3. Complete la siguiente tabla con la observacin de sus medios de cultivo. Utilice informacin disponible y bibliografa
Se observa:
Medio de cultivo

Crecimiento

Puede usarse como:

Colonias aisladas

Medio de Aislamiento

Medio de Identificacin

Placa Petri
Tubo Medio Solido
Tubo Medio Liquido
Tubo Medio Semislido

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