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METODOLOGIA CIENTIFICA I
PRACTICAS

BIOLOGA

MANUAL DE PRCTICAS DEL MODULO

DE METODOLOGIA CIENTIFICA I
DE LA CARRERA DE BIOLOGIA

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2013

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METODOLOGIA CIENTIFICA I
PRACTICAS

BIOLOGA

BALANZAS
INTRODUCCION
La balanza es un instrumento que mide la masa de una sustancia o cuerpo,
utilizando como medio de comparacin la fuerza de la gravedad que acta sobre
dicha masa es un instrumento de precisin capaz de medir masas, mediante una
palanca de primer grado. Existen diferentes balanzas entre las ms comunes se
encuentran las balanzas granataria, vernier y analtica que se pueden usar de
acuerdo a las necesidades de precisin y capacidad. En ellas puede
determinarse la masa de cualquier objeto u organismo, medir cantidades
precisas de cualquier material, muestra o reactivo, e incluso realizar
determinaciones analticas por diferencia de peso, para lo cual se requiere
conocer el uso correcto, y las precauciones necesarias.
Se debe tener en cuenta que el peso es la fuerza que el campo gravitacional
terrestre ejerce sobre la masa de un cuerpo, siendo tal fuerza el producto de la
masa por la aceleracin de la gravedad [F = m x g], que depende de factores
como la latitud geogrfica, la altura sobre el nivel del mar y la densidad de la
tierra en el lugar donde se efecta la medicin
OBJETIVO
1.- Que el alumno conozca el manejo correcto de los diferentes tipos de
balanzas.
2.- Que el alumno distinga la precisin que tienen las diferentes balanzas e
identifique los errores que se generan durante las mediciones.
MATERIAL
Balanza granataria de 1 plato.
Balanza
granataria
para
animales

Balanza granataria de 2 platos.

Balanza vernier
Balanza analtica
*Objetos pequeos para pesar

*Material proporcionado por el alumno

DESARROLLO

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PRACTICAS
Agrupe los objetos y asigne un nmero a cada uno.
Determine la masa de cada uno de los objetos mediante el uso de las
diferentes balanzas individualmente.
Intercambie los objetos con sus compaeros y obtenga la masa de cada uno.
Por equipo renan las masas de los objetos iguales y calcule un promedio
para cada grupo.
Represente los datos en un cuadro y compare los pesos promedios obtenidos
de los objetos en cada una de las balanzas y obtenga el coeficiente de
variacin.

1.
2.
3.
4.
5.

RESULTADOS

1. Realice un cuadro comparativo, indicando los diferentes pesos promedio de

un mismo objeto en los diferentes tipos de balanzas y describa mediante la
estadstica descriptiva bsica las variaciones y posibles fuentes de error.
2. Compare sus resultados y analice.

CUESTIONARIO

Con sus palabras

1. Cul fue la secuencia realizada para pesar los objetos en cada una de las
balanzas?
2. A que se le llama peso constante? Cundo se utiliza y de qu forma se
obtiene?
3. Se podra pesar 950.57 gr. de glucosa en todas las balanzas utilizadas?
Por qu?
4. En qu balanza se pesaran con exactitud 95 mg de pentobarbital,
ya que este es un anestsico muy usado en animales de laboratorio?
Adems indique cmo se leera el peso de este en la balanza.

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PRACTICAS

BIOLOGA

CUANTIFICACION DE SAFRANINA
INTRODUCCION
La determinacin de la concentracin de un compuesto particular que se
encuentre en presencia de otros (incluido o mezclado en otros), es un
problema cotidiano durante cualquier investigacin, para lo cual se emplean
frecuentemente tcnicas fotomtricas por su sencillez y exactitud.
La Ley Lambert Beer es un medio matemtico de expresar cmo la materia
absorbe la luz. Esta ley afirma que la cantidad de luz que sale de una
muestra es disminuida por tres fenmenos fsicos:

1. La cantidad de material de absorcin en su trayectoria (concentracin)

2. La distancia que la luz debe atravesar a travs de la muestra (distancia de
la trayectoria ptica)
3. La probabilidad de que el fotn de esa amplitud particular de onda sea
absorbido por el material (absorbencia o coeficiente de extincin)

Esta relacin puede ser expresada como:

A = dc

Donde
A
=

=
d
=
c
=

Absorbencia

Coeficiente molar de extincin

Distancia en cm

Concentracin molar

Con base en que la absorcin de luz por una sustancia en particular ocurre
a una determinada longitud de onda y que adems la concentracin de
dicha sustancia guarda relacin con la luz que absorbe, se han desarrollado
los mtodos fotocolorimtricos que son tiles en el anlisis qumico para la
identificacin y cuantificacin de dichas sustancias.

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PRACTICAS
Transmitancia
A medida que un haz de luz atraviesa un medio absorbente, la cantidad de
luz absorbida en cualquier volumen es proporcional a la intensidad de luz
incidente multiplicado por el coeficiente de absorcin. Consecuentemente,
la intensidad de un haz incidente decae exponencialmente a medida que
pasa a travs del absorbente. Esta relacin cuando se expresa como Ley
de Lambert es:
T = 10-cd or T = 10-A

Donde
T

Transmitancia

Coeficiente molar de extincin

Concentracin molar del absorbente

Distancia en cm

=
c
=
d
=

En un enfoque simplificado, la transmitancia puede ser expresada como la

intensidad de la radiacin incidente, Io, que divide a la luz emergente de la
muestra, I. Se refiere a la relacin I/Io como transmitancia o sencillamente
T.
Absorcin
La transmitancia puede ser trazada en relacin a la concentracin, pero la
relacin no es lineal. El logaritmo negativo en base 10 de la transmitancia s
es, sin embargo, lineal con la concentracin.
De esta manera, la absorcin es medida como:

A = -log10 (I/Io) or A = -log10 (T)

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PRACTICAS
Los mtodos fotocolorimtricos son aquellos en los que se mide
directamente la intensidad del color de la sustancia en funcin de la
capacidad que tiene esta para absorber la luz de una longitud de onda
especfica. Este mtodo se aplica tanto a soluciones coloridas como
incoloras.

OBJETIVOS

1. Que el alumno aprenda el uso, manejo y cuidados del espectrofotmetro y

fotocolormetro.
2. Que elabore una curva patrn y la emplee para determinar la concentracin de
una muestra problema.
3. Que determine la importancia del uso de la colorimetra en la investigacin en
Biologa.

MATERIAL
15 tubos de ensaye de 13 x
145 mm
2 pipetas de 5 ml
1 vaso de precipitados de 100
ml
3 pipetas de 1ml 1/100
2 pipetas de 10 ml
1 gradilla
REACTIVOS
Etanol al 96% (250ml)
Piseta con agua destilada
(500ml)

Solucin
problema
de
Safranina
Solucin de Safranina X 10-4
g/ml
*Papel Milimtrico
*Toallas de papel
APARATOS
Fotocolormetro
KlettSummerson con filtro verde
Espectrofotmetro

*Material Proporcionado por el

alumno

DESARROLLO
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PRACTICAS
1. Distribuya los tubos (previamente numerados), en la gradilla. Prepare los
tubos por duplicado
2. Adicione los volmenes que se indican en la tabla.

Stock de
Safranina
(3 X10-4 g/mL)

------------

10.00

UBO

Agua
Destilada(mL)

0.05

9.95

0.10

9.90

0.20

9.80

0.40

9.60

0.80

9.20
10 mL de la solucin problema de concentracin
desconocida de safranina

3. Utilice como blanco el tubo numero 1 y calibre a cero en el fotocolormetro

con filtro verde. El espectrofotmetro a 520 nm.
4. Determine las U.K. y Abs. Para los tubos 2 al 6 encada aparato.
5. Con los valores obtenidos complete la tabla y construya la curva patrn
graficando las Abs. Para los tubos 2 al 6 en cada aparato.

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TUBO

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Conc.
U.K.
g

BIOLOGA

ABS

TRANS

6. Determine el valor en U.K. y de Absorvancia de la solucin problema.

7. Interpole en la grfica los valores de la solucin y determine su
concentracin.

RESULTADOS
Obtenga la concentracin de la solucin problema
Compare el manejo y la exactitud entre los dos aparatos de medicin.
Compare los resultados y realice el anlisis respectivo.

CUESTIONARIO

1. Seale las partes caractersticas de un espectrofotmetro comn.

2. Qu entiende por absorbancia, transmitancia y unidades Klett?
3. Cules son las diferencias entre un fotocolormetro y un espectrofotmetro?
4. Qu hara para determinar la concentracin de safranina si no conociera la
longitud de onda a utilizar?

BIBLIOGRAFIA

-Williams,B.L. y Wilson, K. 1981. Principios y tcnicas de bioqumica

experimental. OMEGA: Barcelona Espaa

MICROSCOPIA

INTRODUCCION

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PRACTICAS

El estudio de microorganismos, de clulas o de sus organelos requiere del

empleo de microscopios, por lo que el aprender a usarlo es indispensable para el
trabajo de laboratorio.

Un microscopio compuesto fotnico cuenta con dos grupos de lentes:

objetivo y ocular, utiliza la luz visible como fuente de iluminacin. Usando este
microscopio se pueden examinar muestras muy pequeas as como detalles finos,
y en algunos casos microestructuras.

Una serie de lentes graduadas y las distancias de foco apropiadas,

permiten la obtencin de una imagen muchas veces ms grandes que la muestra.
Esta amplificacin se lleva a cabo cuando un haz de luz de la fuente de
iluminacin pasa a travs del condensador, donde los rayos incidentes se
compactan en un pequeo espacio en el punto focal de la lente objetivo,
atravesando la muestra, donde es dirigida a la lente ocular y de esta al
observador.

OBJETIVOS

1.-Que el alumno aprenda el uso adecuado de los microscopios y adquiera

destreza en la preparacin de muestras

2.-Que asimile los conceptos de aumentos totales, poder de resolucin,

distancia de trabajo, ndice de difraccin, iluminacin.

3.- Que identifique la utilidad del microscopio en el quehacer del bilogo

MATERIAL

6 tubos de ensaye

*Papel, milimtrico albanene*

6 tubos de goma

*Papel seda*

Microscopio estereoscpico

Piseta con agua destilada

Microscopio ptico

6 pipetas Pasteur

1 caja de Petri

2 agujas de diseccin

REACTIVOS

Cmara de Neubauer

Aceite de inmersin

10 cubreobjetos*

Azul de metileno

10porta objetos*

Rojo neutro 0.001%

Navaja de rasurar*

*Muestra (agua de charco,

Lancetas*
sangre,

*Papel celofn de colores*

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Cultivo de levadura

*Material proporcionado por el

Insectos, flores, suelo, hojas

alumno

de alcatraz, Siempreviva, cebolla,

semen, papa)*

DESARROLLO

1. Identifique cada parte del microscopio y determine cul es su funcin.

2. Realice preparaciones frescas, colocando una gota de la muestra sobre el
portaobjetos
3. Coloque lentamente el cubreobjetos sobre la muestra, evite la formacin de
burbujas.

3. Baje la platina, lentamente, hasta el tope con la ayuda del tornillo

macrometrico y coloque la preparacin sobre ella, sujtala con las pinzas.
4. Encienda la lmpara, girando el revlver coloque el objetivo de menor
aumento (10X) y eleve, lentamente, la platina con el tornillo macrometrico,
hasta el tope, de tal manera que pueda visualizar la imagen y enfoque con
el tornillo micromtrico lentamente la imagen hasta que pueda apreciar una
imagen ntida.
5. Utilice los tornillos de la platina (se puede identificar por el vernier que este
posee), para desplazar la preparacin y localizar el objeto deseado.
6. Si requiere mayor aumento, cambie con el revlver sin subir o bajar la platina,
la posicin del objetivo de 40x y enfoque la imagen con el tornillo micromtrico.
7. Para emplear el objetivo de inmersin gire el objetivo de 40X, con ayuda del
revlver, y deposite sobre la preparacin una gota de aceite de inmersin, gire
el revlver, nuevamente, para colocar el objetivo de inmersin sobre la gota y
observe, si es necesario enfoque con el tornillo micromtrico
8. Realice otra preparacin depositando una gota de rojo neutro o azul de
metileno sobre la muestra y repita la actividad desde el paso 3. Compare la
imagen con la no teida
9. Para observar la muestra de sangre realice un frotis depositando una
gota de sangre, que obtendr limpiando la yema del dedo con alcohol y
pinchando con una lanceta, coloque una gota de sangre en el extremo del
portaobjetos, ponga el extremo de otro portaobjetos cerca de la gota para
que se adhiera a l y arrastre el portaobjetos en un movimiento continuo
para formar una capa delgada sobre este.
Observe los diferentes tipos de clulas y dibjelas.

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BIOLOGA

Importante: emplee una nueva en cada ocasin y deposite las lancetas

usadas as como todo el material que haya estado en contacto con sangre
o cualquier otro fluido corporal, en un recipiente con cloro comercial al 3% y
mantngalo ah durante 20 minutos antes de lavarlo o desecharlo.

10. Para contar clulas deposite una gota de levaduras sobre la cmara de
Neubauer o recuento leucocitario y ponga el cubreobjetos sobre ella.
Coloque en la platina y utilice el objetivo de 10X, enfoque hasta observar la
cuadricula y las clulas sobre ellas.
Ubique el cuadro central y cuente el nmero de clulas en 5 de las 25
subdivisiones que observa.

Clculos: Sume el nmero de clulas por cuadro, divdalo entre cinco,

para obtener el promedio multiplique este por 25 para obtener el total
de las clulas en el recuadro central que equivale a una diezmilsima
de mililitro.
El resultado anterior se deber multiplicar por 10 000 para obtener el
nmero de clulas por mililitro.

11. Ponga una flor o insecto sobre una caja de Petri y colquela en la
platina del microscopio Estereoscpico, encienda la lmpara y enfoque
con el tornillo micromtrico. Disgregue con agua y trate de localizar
estructuras. Dibuje lo observado

RESULTADOS
Dibuje la imgenes observadas con y sin colorante
De las clulas observadas en el frotis sanguneo dibjelas y seale sus
nombres
Indique el numero de clulas que cont al usar la Cmara de Neubauer y
muestre la operacin realizada para esto

CUESTIONARIO

1. Indique en que consiste la Iluminacin Khler

2 Que limita el poder de resolucin del microscopio fotnico?
3. Cul es mayor aumento que puede alcanzar un microscopio fotnico?
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PRACTICAS
4. Qu importancia tiene el microscopio estereoscpico
biosistemtica?

BIBLIOGRAFIA

en

la

-Williams, B.L. y Wilson,K. 1981 y principios y tcnicas de bioqumica

experimental. OMEGA. Barcelona Espaa.
Barrera Escorcia Hector, Crdenas Reygadas
microscopio Optico. P y V editores, Mxico 88pp

Rodolfo.

1997,

El

Castillo Morales Gabriela (edit), 2004, Ensayos Toxicolgicos Y Mtodos de

Evaluacin de Calidad de Aguas Centro Internacional de Investigaciones
para el desarrollo /Instituto Mexicano de tecnologa del agua Mxico 189
pp

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POTENCIMETRO
INTRODUCCION
Las concentraciones de iones hidronio y hidroxilo son importantes en los
sistemas biolgicos porque los protones son libre para moverse del H 3O+
asocindose con grupos cargados negativamente (neutralizndolos) y los
iones hidroxilo disponibles neutralizaran a los grupos cargados
positivamente. Debido al efecto del pH en la ionizacin de los grupos
bsicos y cidos de las protenas y otras molculas biolgicas, el pH de los
lquidos intra y extracelular debe mantenerse entre lmites estrechos en los
que pueden actuar los sistemas enzimticos. Por lo que la determinacin
del pH es indispensable en el anlisis de cualquier proceso biolgico.
OBJETIVO
1.- Que el alumno determine la concentracin de iones hidrogeno (pH) por
los mtodos colorimtrico (empleo de sustancias indicadoras) y
potenciometrico (fuerza electromotriz).
2.- Que el alumno identifique una solucin amortiguadora.
MATERIALES
1 probeta de 100 ml
3 pipetas de 10ml
2 pipetas de 1 ml
Balanza vernier
1 gradilla
1 piseta con agua destilada
1 varilla de vidrio
10 tubos de ensaye
2 pipetas de 5ml

ml
-

1 embudo de plstico chico

7 vasos de precipitados de 50
1 termometro 5 ml de HCL 1N
Papel filtro
- APARATOS
Potencimetro
-

REACTIVOS
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PRACTICAS
- Buffer de referencia (sol.
- Glicina 10 mM
- Muestra*
(leche,
refresco,
Calibradora)
- 20 ml NaOH 10 mM
vinagre, jugos de frutas naturales,
- 20ml KH2PO4 10 mM
suelo)
- 5 ml NAOH 1 N
- 10 ml de azul de bromotimol al
0.1%
-

*Material proporcionado por el alumno

DESARROLLO
-

MTODO COLORIMTRICO:
-

1.- Prepare una serie de patrones de pH coloreados, como se seala en el

siguiente cuadro.
T KH2PO4 NaOH H2O COLOR
PH
UBO
10Mm(mL)
10mM
(mL)
1
5.0
---5.0 Amarillo
cido
2
5.0
0.15
4.8
Verde
Neutro
5
3
----5.0
5.0
Azul
Bsico
2. Aada posteriormente 5 gotas de azul de bromotimol a cada tubo. Mezclar
cuidadosamente el contenido, observe los valores especficos de pH para
cada color en el cuadro 2 de la seccin de pH.
3. Para medir el pH de las muestras lquidas, coloque 10 ml de esta en tubos de
ensaye y adicione 5 gotas del indicador azul de bromotimol al tubo de ensaye,
mezcle y se busque el color equivalente o ms cercano en la serie de patrones
que prepar en el punto 1.
4. Anote el valor aproximado del pH de sus muestras en una tabla para comparar
contra el siguiente mtodo.
5. La muestra de suelo se prepara de la siguiente manera: Pese 5 g. de ste en
un vaso de precipitados y se agregue 30 ml de agua destilada, agite y deje
reposar por 5 minutos.
6. Si es necesario filtre a travs de papel con ayuda de un embudo, determine el
pH como se indica en el paso 2.
Mtodo Potenciomtrico:
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PRACTICAS
1. Calibracin del potencimetro: Lave el
electrodo con agua destilada,
colquelo en un vaso de precipitados con 10 ml de buffer de referencia (pH 4,7
10), y de acuerdo al instrumento mida la temperatura de la solucin y
ajuste el valor correspondiente en el aparato, el pH se regula, colocando la
perilla en pH
2. Coloque la perilla en Stand by antes de retirar el electrodo de la solucin y
volver a lavar los electrodos, repita la operacin despus de cada
determinacin.
3. Determinacin del pH de las muestras: coloque 10 ml en vasos de precipitado,
introduzca el electrodo y coloque la perilla en posicin pH. Repita el inciso 2
4. Curva de titulacin de aminocidos, adicin de un cido o alcal. Colocar 10 ml
de Glicina 10 mM en un vaso de precipitados. y registre el pH con ayuda del
potencimetro.
5. Adicione 1 ml de HCL1N gota a gota, agitando suavemente, registre el pH
simultneamente hasta observar cambios de pH (adicione ms cido si es
necesario) anote el volumen de HCL que modific una unidad el pH.
6. Repita desde el inciso f con otro vaso, para adicionar un lcali (NaOH 1N) en
sustitucin del cido (HCl 1N)
- RESULTADOS
- -En un cuadro comparativo represente los valores obtenidos de pH de las
diferentes muestras por el mtodo colorimtrico y potenciomtrico. Analice y
discuta la veracidad de los resultados.
- -En otro cuadro comparativo anote el volumen requerido de cido lcali
para cambiar una unidad de pH a la muestra de alka-seltzer y agua destilada,
compare los resultados y explica.
- Grafique el volumen de cido lcali contra pH de la solucin de glicina, e
interprete la curva de titulacin.
- CUESTIONARIO
1. Qu ventajas hay al medir pH potenciomtricamente a diferencia de la
colorimtricamente?
2. Estara en desuso determinar el pH colorimtricamente? Por qu?
3. Considera que el alka-seltzer es una solucin amortiguadora? Por qu?
4. Por qu es importante para un ser vivo regular su pH?
Revisar apndices para seguir los instructivos de uso de los
Potencimetros Hanna Modelos120 y 11 Orion .
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2013

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BIOLOGA

AISLAMIENTO DE CLOROPLASTOS Y
CUANTIFICACIN DE CLOROFILA
- INTRODUCCION
El aislamiento de organelos celulares por centrifugacin diferencial es una
tcnica muy valiosa para el estudio de la morfologa, bioqumica y fisiologa de
los elementos que conforman a las clulas, se requiere de aparatos como la
centrifuga refrigerada para asegurar el buen estado de los organelos durante el
aislamiento, pero se pueden separar fracciones ricas en determinados organelos,
utilizando la centrifuga clnica.
Los cloroplastos son los organelos encargados de realizar la fotosntesis, en
plantas, algas y protozoarios. Este proceso consiste en sintetizar azucares
utilizando la energa luminosa, que puede captar gracias a pigmentos como las
clorofilas que se encuentran incluidas en las membranas tilacoidales de los
cloroplastos. Las concentraciones de clorofilas a y b varan de acuerdo a las
especies y puede determinarse mediante tcnicas espectrofotomtricas basadas
en la ley de Beer y Lambert, sin necesidad de aislarlas y purificarlas lo cual es
lento y difcil debido a la naturaleza de la sustancia misma y a limitantes de
carcter tcnico.
-

- OBJETIVO
- 1.- Que el alumno evale importancia de la centrifugacin diferencial como
tcnica para separar componentes celulares para su posterior estudio
- 2.- Que determine la concentracin de clorofila a y b en una muestra de
cloroplastos utilizando el espectrofotmetro y aplicando la ley de Beer.
- 3.-Que el alumno compare las proporciones de clorofilas a y b en diferentes
especies
- MATERIAL
-

16
2013

- 2 vasos de precipitados de 250 ml

- 1 mortero con pistilo, previamente fros
- 3 pipetas de 5 ml
- 3 pipetas de 1ml
- 1 embudo pequeo de vidrio
- 1 piseta con agua destilada
- 1 probeta de 50 ml
- Gasa y papel filtro
- APARATOS
Balanza granataria de dos platos
- Balanza granataria de un plato
- Centrifuga clnica
- Microscopio ptico
- REACTIVOS
- Solucin de NaCl a 0.35 M
- Solucin amortiguadora tris-HCl 0.2 M pH 8
- Acetona al 80%
- 50 gr aproximadamente de hojas frescas y verdes* (espinacas, acelgas)
- DESARROLLO
- 1.- Lave las hojas con agua corriente y sacudirlas perfectamente
- 2.- Mantngalas en frio dentro de una bolsa de plstico obscura para
asegurar su turgencia
- 3.- Remueva las nervaduras ms grandes y pesar 30 g.
- 4.-Corte fragmentos pequeos y molerlos en un mortero con 60 ml de
solucin de NaCl 0.35M y 10 ml de solucin amortiguadora.
- 5.- Macere firmemente por un periodo no mayor de 4 minutos (si lo juzga a
necesario macerar en dos partes). Coloque el mortero sobre el hielo para
inactivar las enzimas hidrolticas que se liberan durante la ruptura celular.
- 6.- Filtre sobre cuatro capas de gasa, recuperando el homogenizante en el
vaso de precipitados.
- 7.- Antes de centrifugar es necesario equilibrar el peso de los tubos en la
balanza granataria de dos platos.
- 8.- Centrifugue durante 3 minutos a 500 rpm para sedimentar fragmentos de
tejido y organelos grandes
- 9.- Observe muestras al microscopio iniciando con el objetivo de menor
aumento

1.
2.
3.
4.

- 10.- Recupere el sobrenadante y centrifugue a 3000 rpm durante 10

minutos en esta centrifugacin la mayor parte de los cloroplastos sedimentan
- 11.- Resuspenda la pastilla (pellet) de cloroplastos en 2ml de la solucin de
NaCl 0.35 M., con una pipeta de 1 ml suave y lentamente hasta que la pastilla
se disgregue completamente
- 12.- Adicione 5ml mas de NaCl 0.35 M, a cada tubo
- 13.- Centrifugue a 3000rpm durante 10 minutos para lavar los cloroplastos
- 14.- Decante con cuidado el sobrenadante y resuspenda todas las pastillas
en 2ml totales de amortiguador (Tris HCl 0.2M,pH8) para concentrar los
cloroplastos en una sola muestra
- 15.- De la muestra anterior se tomar 0.1 ml para adicionarlo a 20 ml de
acetona al 80% para solubilizar la clorofila
- 16.- Filtre a travs de papel filtro
- 17.-Mida en el espectrofotmetro utilizando como blanco acetona al 80%, a
663 y 645 nm que corresponde a las longitudes de absorbancia mxima de las
clorofilas a y b
RESULTADOS

- Sustituya los valores de absorbancia en las siguientes formulas y

determinar la concentracin de clorofila total, clorofila a y clorofila b, obtnga
los valores en miligramos por mililitro
Clorofila total = 0.0202 (abs. 645) +0.00802 (abs 663) = mg clorofila / ml
Clorofila a = 0.0127 (abs 663) 0.00269 (abs 645)
Clorofila b = 0.0229 (abs 645) 0.00468 (abs 663)
- Calcule la concentracin por gramo en peso fresco
- CUESTIONARIO
Cul es el fundamento de la centrifugacin diferencial?
Qu papel juega el NaCl y el tris- HCl en el asilamiento de los cloroplastos?
Cul es la importancia de una metodologa como la centrifugacin?
Por qu se emplean longitudes de onda de 645 y 663 mm, para cuantificar
clorofila y como se relaciona con la ley de Beer?
- BIBLIOGRAFIA
- -Hipkins, M.F y Baker, N.R. 1986 Photosynthesis: energy transduction: a
practical approach, IRL, prees, Oxford.
-

- PRACTICA BIOMEDICA

INTRODUCCION
Las tcnicas seleccionadas constituyen parte de la tecnologa utilizadas en
los laboratorios de anlisis clnicos. Dentro de las razones que llevaron a
esta seleccin se puede mencionar: la interrelacin terica y prctica entre
todas ellas, de forma tal que los resultados de cada fase ayudan en la
discusin final de toda prctica. Los aparatos y equipos son usados en
varios momentos con el fin de ejemplificar en ms de una ocasin su uso. Y
por ltimo, la importancia de utilizar tecnologa es que se puede discutir lo
visto en clase sobre el ciclo ciencia bsica-ciencia aplicada-tecnologa.
OBJETIVOS
El alumno integrara los conocimientos referentes al uso y manejo de los
aparato y las tcnicas ms comunes de biomdica.
FASE I: Preparacin de reactivos.
FASE II: Examen de orina.
FASE III: Curva de calibracin.
FASE IV: Determinacin de glucosa en sangre.
FASE V: Recuento leucocitario
FASE VI: Anlisis bacterio0logico de orina.
ACTIVIDADES PREVIAS.
Se recomienda que previo a la realizacin de la practica el alumno tenga
conocimiento del manejo y uso de los instrumentos a utilizar, y revise los
siguientes temas: los leucocitos (su funcin, importancia y tcnicas de
conteo), las bacterias (su descubrimiento e importancia en la relacin con el
ser humano), el rion (su funcin y la importancia del examen de orina) y la
diabetes (que es, su descubrimiento y alteraciones en el cuerpo).

- FASE I: PREPARACIN DE REACTIVOS

- Reactivos:
Acido actico al 3%
Oxalato de potasio y amonio
Reactivo de Benededict
- Medios:
Agar St. 110
Agar Muller Hinton.

Y diverso material estril para

la fase de bacteriologa

Matraz aforado de 50 ml

cido actico glacial

2 Matraces aforados de 100 ml

Carbonato de sodio anhidro

2 Pipetas de 5 ml

Citrato de sodio

3 Frascos mbar para reactivo de

100 ml

Sulfato de cobre

2 Matraces Erlenmeyer de 50 ml

Oxalato de amonio

4 Matraces Erlenmeyer de 500 ml

Oxalato de sodio

5 Tubos de ensaye de 13*100 con

tapn de baquelita

Agua destilada

Pipeta de 1 ml

Azul de metileno en solucin

6 Cajas Petri

Agar St. 110

Gradilla

Agar Muller Hinton

Probeta de 100 ml

4 Abatelenguas

4 Isopos

Papel estraza

Cinta testigo para esterilizacin

Piseta con agua destilada

PREPARACIN DE SOLUCIONES
CIDO ACTICO AL 3%
Se colocan en un matraz aforado de 100 ml, 3ml de acido actico glacial y
se afora con agua destilada. Se le agregan unas gotas de azul de metileno
nicamente para darle una ligera tonalidad azul. La solucin se guarda en
un frasco para reactivo.
OXALATO DE AMONIO Y DE POTASIO
Se colocan en un matraz aforado de 100ml los siguientes reactivos:

Oxalato de amonio
1.2g
Oxalato de potasio
0.8g
Agua destilada
100ml
La mezcla se guarda en un frasco para reactivo.
De esta solucin se colocan los tubos de ensaye 0.5 ml y se meten a la
estufa hasta la evaporacin total.

REACTIVO BENEDICT
Se disuelven 10g de Carbonato de sodio anhidro y 17.3g de Citrato de
sodio en 70ml de agua destilada. Se disuelve por separado, 1.73g de
Sulfato de cobre en 10ml de agua destilada y se vierte esta solucin en la
de Carbonato de citrato, con agitacin constante. Se afora a 100ml. El
reactivo se guarda en un frasco etiquetado.
Medios de cultivo y esterilizacin
Se lavan perfectamente las cajas Petri y se enjuagan con abundante agua
se les aplica un segundo enjuague con agua destilada. Se secan al aire y
se envuelven con papel estraza una por una. Se les pone cinta testigo y se
colocan en autoclave.
Se preparan los medios de cultivo de acuerdo con las especificaciones del
fabricante en los matraces Erlenmeyer de 500ml, se les coloca un tapn de
gasa y se depositan en el autoclave.
Se esteriliza todo el material de acuerdo con las instrucciones para el uso
del autoclave.
En condiciones de esterilidad se vacan los medios a las cajas (2 por cada
uno) y se refrigeran. Sobraran dos cajas para la fase 6.
FASE II: EXAMEN DE ORINA
MATERIAL
Vasos de precipitados de 50 ml
Piseta con agua destilada
Tubos para centrifuga (2)
Tubos de ensaye (3)
Mechero bunsen
Bao Mara

REACTIVOS
Reactivo de Benedict
MATERIA BIOLOGICO
Orina de paciente sano
Orina de diabtico

- Tripie
- APARATOS
- Pipeta de 1ml
- Microscopio
- Pipeta de 5ml
- pHmetro
- Portaobjetos (5)
- Centrfuga
- Cubreobjetos (5)
- EXAMEN DE SEDIMENTO
1. Se homogeniza la orina en el recipiente que la contiene suavemente
2. Se colocan 5ml de orina en un tubo para centrifuga y se centrifuga a 2500
rpm durante 5min.
3. Se decanta y se pone el sedimento en un portaobjetos. Se coloca el
cubreobjetos con una gasa o papel absorbente se limpia el exceso. Se
coloca al microscopio y se examina.
4. Se buscan principalmente leucocitos, clulas epiteliales, levaduras y bacteria.
- DETERMINACIN DEL PH.
1. Calibre el pHmetro de acuerdo con las instrucciones proporcinadas con
anterioridad por los profesores.
2. Coloque la orina en un vaso de precipitados de 50ml y se procede a la lectura
-

PRUEBA PARA SUSTANCIAS REDUCTORAS

Aun cuando esta prueba puede dar positiva con cualquier tipo de
substancia reductora, es una buena indicadora cualitativa de la presencia
de glucosa en orina.

1.- Se pone a hervir agua en bao Mara

2.- En un tubo de ensaye lo suficientemente grande para que sobresalga del
bao Mara, se mezclan 5ml de reactivo de Benedict y 0.5ml de orina.
3.- Se pone en bao de agua hirviente durante 5 min
4.- Se deja enfriar a temperatura ambiente y se lee de acuerdo al siguiente
cuadro

Color
Azul
Azul verdoso
Verde

Resultado
(-)negativo
(hs) huellas
(+)aprox. 0.5% de substancia reductora

Pardo verdusco
- (++)aprox. 0.1 % de substancia reductora
Amarillo
- (+++) aprox. 1.5 de substancia reductora
Rojo ladrillo
- (++++) aprox. de 2.0% de substancia reductora
Interpretacin de colores obtenidos con el reactivo de Benedict.

RESULTADOS

Reporte los resultados de acuerdo a la tabla siguiente, y discuta los valores

obtenidos con los valores que normalmente se reportan en la bibliografa
para pacientes sanos

Resultados
Paciente
No.1
pH
Reaccin
benedict
Sedimento
Leucocitos
Bacterias
Levaduras
Clulas
epiteliales

Result
ados

Paciente No2

pH
Reaccin
Benedict
Sedimento
Leucocitos
Bacterias
Levaduras
Clulas
epiteliales

Resultad
os

FASE III: CURVA DE CALIBRACIN

Elabore una curva de calibracin de glucosa la cual se utilizara para el

anlisis de la siguiente fase.

MATERIAL
Matraz aforado de 100 ml
Jeringa de 10 ml
Tubos de ensaye 15 cm
Pipeta de 1ml
Pipeta de 5 ml
Pipeta de 10 ml
Mechero Bunsen
Tripie
Bao Mara

REACTIVOS

Glucosa
Agua destilada
Reactivos de orto-toluidina en
acido actico
Aparatos
Espectrofotmetro con celda

PREPARACIN DEL PATRN DE GLUCOSA

Peer exactamente 0.300g de glucosa y aforarlos a 100 ml con agua
destilada

Curva de calibracin
Se prepara una serie de tubos de acuerdo con el siguiente cuadro
- Tubo
- Patrn de
- Agua
- Glucosa
glucosa
destilada
- (mg en
(mL)
(mL)
100mL)
- 1
- 0.0
- 3.0
- 0
- 2
- 0.5
- 2.5
- 50
- 3
- 1.0
- 2.0
- 100
- 4
- 2.0
- 1.0
- 200
- 5
- 3.0
- 0.0
- 300
Distribucin de reactivos y los equivalentes en glucosa para los tubos del 1
al 5 ej: al tubo 2 se le coloca 0.5 ml de patrn de glucosa, mas 2.5 ml de
agua destilada, y esto equivale a 50 g de glucosa en 100 ml. Esta
equivalencia servir para trazar la curva patrn
Con los tubos ya preparados y perfectamente marcados se procede de
acuerdo con la siguiente tabla, de tal forma que se rotulan otros 5 tubos
para la reaccin a los cuales se les marcara como 6, 7, 8, 9 y 10
Tu
- T
- T
- Tubo
- T
- T
- T
bo
u
u
3
u
u
u
s
b
b
b
b
b
o
o
o
o
o
1
2
4
5
6
- (
m
L
)
Tol
- 5
uid
ina
Tu
- 0.
- --- -------- -- --- 5
bo
1
---------6
----------Tu
- -- 0.
- -------- -- --- 5
bo
-1
--------7
--------

Tu
bo
8

Tu
bo
9

Tu
bo
10

----------------

---------

---------

---------

0.1

---------------

------------

-----

---------

---------

0.
1

Preparacin de los tubos del 6 al 10 ej: al tubo 6 se le coloca 0.1 ml del tubo
1 y 5 mL de ortotoluidina
Agite los tubos y colquelos en bao Mara a ebullicin y cuente 8
minutos. El nivel del agua debe ser superior al nivel de los reactivos (No de
los tubos).
Saque los tubos del bao y enfrelos al chorro de agua
Lea la longitud de onda de 630 nm o con el filtro correspondiente (rojo)
ajustando al 100% de transmitancia o cero de absorbancia con el blanco de
reactivos (tubo 6)
Trazar en papel milimtrico la curva de calibracin con los datos obtenidos
en el laboratorio, de la siguiente forma:

0.8
0.6
Absorvancia

0.4

f(x) = 0.01x
R = 1

0.2
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80
Glucosa (mg /100 mL)

-----0.
1

FASE IV DETERMINACIN DE GLUCOSA EN SANGRE

Material
Tubo de ensaye 15 cm
Pipeta de 1 ml (3)
Pipeta de 5ml (2)
Pipeta de 10 ml
Mechero Bunsen
Tripe
Bao Mara
Gradilla
Tubo de centrifuga (2)
Jeringa estril de 10 ml con
aguja
Jeringa de 10 ml
Tubos con anticoagulantes
(oxalatos) (Preparados en la
fase 1 y 2)
Material biolgico
Sangre venosa recin obtenida
Aparatos
Espectrofotmetro con celda
Centrifuga
Reactivo
Orto- toludina

- Procedimiento
- 1.- Se obtienen 10 ml de sangre venosa de acuerdo con las instrucciones del
profesor
- 2.- Se depositan 5ml en dos de los tubos con anticoagulante que fueron
preparados en la fase 1
- 3.- Se homogenizan suavemente durante 2 minutos
- 4.- Uno de los tubos servir para la fase 5, por lo que se rotulara y se guardara
en refrigeracin. El otro tambin rotulado, se trasvasara a un tubo para
centrifuga y se centrifugara a 3000 rpm durante 5 minutos.
- 5.- Se rotularan los tubos como blanco y problema los cuales se les prepara
de la siguiente forma
- Reactivo
- Blanco
- Problema
- Suero problema
- ------------- 0.1mL
- Agua destilada
- 0.1 mL
- --------- Orto-toluidina
- 5.0 mL
- 5.0 mL
- Preparacin de los tubos blanco y problema ej.: al tubo blanco se le
coloca 0.1ml de agua destilada y 5.0 ml de orto-toluidina
- Se agitan y se colocan en bao de agua hirviendo durante 8 minutos al
trmino de los cuales se sacan y se enfran al chorro de agua
- Leer la longitud de onda de 630 nm ajustando a 100% de transmitancia o
cero de absorbancia con el blanco reactivo, e interpolar el resultado en la
curva de calibracin elaborada en la fase anterior
- Resultados
- Reporer el resultado obtenido y discuta sobre la importancia de la
determinacin de la glucosa en sangre, as como la diferencia con la
determinacin de glucosa en orina, ventas y desventajas en los mtodos.
- FASE V RECUENTO LEUCOCITARIO
- Material
- Bulbo parta pipeta Pasteur
- Cmara de Neubauer
- Perlas de vidrio
- Cubrehematimetro
- Tubo de 5cm con tapn
- Material biolgico
- Pipeta de 1 ml (5)
- Sangre
venosa
con
- Pipeta Pasteur
anticoagulante (obtenida en la
- Pipeta de 10 ml
fase anterior)

Aparatos
Microscopio
Reactivos
Acido actico al 3% (liquido de
dilucin)

Gradilla
Procedimiento
1.- En un tubo se colocan 1.9 ml de liquido de dilucin (acido actico al 3%)
2.- El tubo que contiene la sangre se homogeniza suavemente durante 1
min. Aproximadamente y se toma 0.1 ml el cual se deposita en el tubo el
liquido de dilucin. Se le agrega una perla de vidrio y se agita fuertemente
pero sin verter.
3.- Inmediatamente despus de agitar, se toma con una pipeta Pasteur y se
coloca una gota de la dilucin en una seccin de la cmara de Neubauer
(ver prctica de Microscopio)
4.- Se coloca la cmara en la platina del microscopio y se realiza el
recuento

RESULTADOS
Reporte los resultados de cada uno de los cuadrantes de las esquinas
Realize los clculos correspondientes, considerando las dimensiones de la
cmara y el factor de dilucin
Discuta con base en la importancia del recuento leucocitario.
Compare los resultados con los valores normalmente obtenidos para
pacientes sanos, de acuerdo con la bibliografa
FASE VI ANLISIS BACTERIOLGICO DE ORINA
Material
2 Matraces Erlenmeyer de 500
ml
Mechero Bunsen
Tripie
Tela de asbesto
Cajas de Petri estriles
2 Cajas de Petri con St. 110

2 cajas de Petri con Muller

Hinton
2Asas de siembra
Material Biolgico
Orina de paciente sano
Orina de paciente diabtico
Aparatos

Incubadora a 37 0c
Autoclaves
Reactivos
Agar gelosa sangre
Agar st 110

Se preparan 2 cajas de Petri con medio Gelosa Sangre de acuerdo con las
especificaciones del fabricante utilizando la sangre sobrante de la fase 5
Con el mechero encendido, se abre el frasco cerca de la flama y se coloca
la tapa sin enroscar. El frasco queda junto al mechero. Se flamea el asa de
siembra y se enfra en una orilla del interior de la caja de la flama, se quita
la tapa del frasco con la orina y se toma una asa del espcimen. A
continuacin se siembra en el agar gelosa sangre por estra cerrada.
Se repite la operacin con el agar St 110
Se esteriliza el asa al fuego, se enfra en el agar a una orilla de la caja,
procurando no tocar la muestra. Una vez fra, se asla mediante estra
abierta.
Las cajas se incuban durante 24 horas, al cabo de las cuales se revisan
para detectar el desarrollo.
En caso de detectarse bacterias patgenas (como sera el crecimiento de
microrganismos en St 110) se proceder a sembrar en estra cerrada en las
cajas de Muller y Hinton, para efectuar el antibiograma. Este consiste en
colocar en un multidisco de antibiticos sobre la placa de agar M.H.
despus de la siembra y leerlo a las 24 horas.
Resultados
En todos los casos puede haber desarrollado en el medio de gelosa sangre,
no as en el de st. 110 que es selectivo para Staphylococcus. Discutir los
resultados con la investigacin bibliogrfica
Bibliografa
-Baker, f. y M Breach. R. 1190 Manual de Tecnicas de Microbiologia Medica
- Bradshaw, L.J. 1976 Microbiologia de Laboratorio. El Manual Moderno
Mexico
- Collins CH y lyne MP 1989 Mtodos Microbiolgicos, Acribia Espaa
-Lennette e h 1987 Manual de Microbiologa Clnica. Panamericana.
Argentina

TABLA PERIDICA DE LOS ELEMENTOS

- Cada elemento qumico contiene un enlace que explica

sus propiedades qumicas, efectos sobre la salud, efectos sobre el
medio ambiente, datos de aplicacin, fotografa y tambin
informacin acerca de la historia y el descubridor de cada elemento.
Tambin puede consultar el apartado especial de terminologa de los
efectos
de
las
radiaciones sobre
la
salud.
-

- Elija los elementos por

su nombre, smbolo y nmero
atmico.

V
-

Cl

Br

Pinche aqu para acceder a

la historia de la tabla peridica.

Z
n
3

F9

C
d
4

I53

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H
g
8

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U
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N
o Lr
1

Read more: http://www.lenntech.es/periodica/tablaperiodica.htm#ixzz2JZ2ShGUR

F m

Y
b

BIBLIOGRAFIA
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Biblioteca joven)
Mendez, R. I., D. Nahimira G., L Moreno A. y C. Sosa de Mtz 1984 el
protocolo de investigacin ed trillas
Montiel, M.M. 1986administracion del tiempo. Coordinacin de apoyo y
servicios educativos. UNAM-SEP.
Montgomery, D. 1991. Diseos y anlisis de experimentos. Grupo editorial
iberoamericana

Olea, F.P. y sanchez del C., F. 1973. Manual de tcnicas de investigacin

documental para la enseanza media. Ed esfinge Mexico

- Apndice
-

Gua para el uso del Phmetro (Potencimetro)

- Hanna mOD 210
-

1. Conectar el adaptador a la corriente elctrica y

2. Quitar la cubierta del electrodo de pH
3. Enjuagar ambos electrodos (temperatura y pH) con agua destilada
4. Sumergirlos en una solucin Buffer con rango conocido
5. Prender el pHmetro con el botn gris (parte derecha superior del aparato)
6. Esperar a que se estabilice el pH
-Si el pH que se lee es igual al del Buffer, continuar con las indicaciones
-De lo contrario, calibrar (leer la siguiente seccin (CALIBRACIN))
7. Sacar los electrodos del Buffer y colocarlos en el brazo del pHmetro , tapar
solucin Buffer.
8. Enjuagar los electrodos con agua destilada y colocarlos en la solucin
problema
9. Esperar a que se estabilice y leer.
10. Si es ms de una la solucin problema sacar los electrodos, repetir los
pasos 7 y 8 hasta terminar.
11. Al finalizar, sacar los electrodos enjuagarlos, colocarle el capuchn al
electrodo de pH, colocarlos en su posicin (brazo), desconectar.

CALIBRACIN del Phmetro (potencimetro) Hanna Mod 210

El pHmetro cuenta con 5 valores de pH para calibrar (4.01, 6.86, 7.01, 9.18
y 10.01) y se puede calibrar con 1 y /o 2 Buffers.

PARA CALIBRAR
PASOS:

CON NICAMENTE

1 BUFFER, HAY QUE SEGUIR LOS SIGUIENTES

1. Conectar el adaptador, quitar la cubierta del electrodo de pH, y enjuagar

ambos electrodos con agua destilada; introducirlos en una solucin Buffer

con rango conocido, prender el pHmetro (botn gris), esperar a que se
estabilice el pH
2. Presionar la tecla CAL
-

---En el lado izquierdo de la pantalla, aparecen los indicadores CAL-

BUF 1

- --- En el lado derecho BUFFER PH y el valor 7.01

3. Si el buffer con el cual se va a calibrar no es de ese valor, presionar las

teclas

, para seleccionar el Buffer deseado.

4. En el lado izquierdo de la pantalla, aparece NOT READY, esperar a

estabilizar
5. Cuando aparezca READY y las iniciales CFM parpadeen en la pantalla , se

oprime el botn CFM

6. El valor del Buffer aparece en la pantalla
7. Presionar el botn CAL , concluyendo con la calibracin.

CUANDO SE USAN DOS BUFFERS

1. Segur los pasos 1al 6 anteriores

2. Sacar el electrodo y enjuagarlo rpidamente, colocar este en el segundo
Buffer,
3. Si el buffer con el cual se va a calibrar no es de ese valor, presionar las teclas
C C , para seleccionar el Buffer deseado.
4. En el lado izquierdo de la pantalla, aparece NOT READY, esperar a estabilizar
5. Cuando aparezca READY y las iniciales CFM parpadeen en la pantalla , se
oprime el botn CFM
6. El pHmetro queda calibrado y muestra en la pantalla automticamente para
realizar mediciones.
-

MENSAJES DE CALIBRACIN:

READY:

Confirmacin requerida.

WRONG:

Se detecta un Buffer invalidado

WRONG OLD:

Existen inconsistencias
actuales y los viejos.

WRONG
TEMPERATURE:

La tempertura del Buffer se encuentra fuera del

rango definido

CAL INTV

SE REQUIERE CALIBRACIN

entre

los

parmetros

Gua para el uso del Phmetro Hanna Mod 111

1. Conectar el adaptador a la corriente elctrica y quitar la cubierta del

electrodo de pH, enjuagar ambos electrodos (temperatura y pH) con agua
destilada
2. Sumergirlos en una solucin Buffer con rango conocido
3. Prender el pHmetro con el botn gris (parte derecha superior del aparato)
4. Esperar a que se estabilice el pH
5. Para seleccionar el programa que se requiera usar, presione RANGE ( pH,
ISE/ORP(mV) o MV relativo)
6. Para registrar la configuracin de calibracin de pH presionar la tecla CAL
7. Para cambiar el Buffer de calibracin presionar las teclas de Flechas de pH
correspondientes
8. Para despejar la calibracin Presione la tecla CAL, y las iniciales CFM en
la pantalla se mantienen un momento
9. Sacar los electrodos del Buffer y colocarlos en el brazo del pHmetro , tapar
solucin Buffer.
10. Enjuagar los electrodos con agua destilada y colocarlos en la solucin
problema
11. Esperar a que se estabilice y leer.
12. Al finalizar, sacar los electrodos enjuagarlos, colocarle el capuchn al
electrodo de pH, colocarlos en su posicin (brazo), desconectar.
- Para efectuar lecturas exactas, asegurar que se tiene bien calibrado el
pHmetro y con los electrodos listos
- Para compensacin de temperatura: hay dos maneras:
o Automtico Usar el electrodo de temperatura junto con el de pH
o Manual: Sin el electrodo de temperatura usar las teclas teclas
seleccionar la temperatura deseada
-

C , para

TRABAJANDO CON BUFERS HABITUALES

1. Conectar el adaptador, 2.- Quitar la cubierta del electrodo de pH, 3.-Enjuagar
ambos electrodos con agua destilada;4.- Introducir en una solucin Buffer
habitual5.- Prender el pHmetro (botn gris) y esperar a que se estabilice el
pH
2. Presionar las teclas de flechas de pH, hasta que parpadee en la pantalla
BUFFER PH
3. El cambio del valor del Buffer habitual est de acuerdo con la temperatura,
entonces presione SET y las teclas correspondientes de temperatura

Nota: Los buffers habituales estn establecidos en el modo SETUP

CALIBRACIN del Phmetro Hanna Modelo 111

El pHmetro cuenta con 5 valores de pH para calibrar (4.01, 6.86, 7.01, 9.18
y 10.01) y se puede calibrar con 1 y /o 2 Buffers.

PARA CALIBRAR
PASOS:

CON NICAMENTE

1 BUFFER, HAY QUE SEGUIR LOS SIGUIENTES

1. Conectar el adaptador, quitar la cubierta del electrodo de pH, y enjuagar

ambos electrodos con agua destilada; introducirlos en una solucin Buffer
con rango conocido (7.01 o 6.86) , prender el pHmetro (botn gris),
2. Cuando aparezca READY y las iniciales CFM parpadeen en la pantalla , se
oprime el botn CFM
3. Presionar la tecla CAL
-

---En el lado izquierdo de la pantalla, aparecen los indicadores

CAL- BUF 1 y en el lado derecho BUFFER PH y el valor 7.01

4. Si el buffer con el cual se va a calibrar no es de ese valor, presionar las teclas

de flechas correspondientes al buffer., para seleccionar el Buffer deseado.
5. En el lado izquierdo de la pantalla, aparece NOT READY, esperar a estabilizar
6. El valor del Buffer aparece en la pantalla
7. Presionar el botn CAL, concluyendo con la calibracin.
-

CUANDO SE USAN DOS BUFFERS

1. Conectar el adaptador, quitar la cubierta del electrodo de pH, y enjuagar

ambos electrodos con agua destilada; introducirlos en una solucin Buffer
con rango conocido (7.01 o 6.86) , prender el pHmetro (botn gris),
2. Cuando aparezca READY y las iniciales CFM parpadeen en la pantalla , se
oprime el botn CFM, para aceptar el punto de calibracin
3. Sacar el electrodo y enjuagarlo rpidamente, colocar este en el segundo
Buffer (4.0 10.0) y seleccionar este en el LCD secundario
4. Si el buffer con el cual se calibra no aparece en la pantalla, presionar las
teclas de flechas del Buffer, para seleccionar el Buffer deseado.
5. En el lado izquierdo de la pantalla, aparece NOT READY, esperar a estabilizar
6. Cuando aparezca READY y las iniciales CFM parpadeen en la pantalla , se
oprime el botn CFM

7. El pHmetro queda calibrado y muestra en la pantalla automticamente para

realizar mediciones.
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UNA TERCERA SOLUCIN BUFFER:

Esperar a que CFM parpadee en pantalla, presione la tecla CFM y regresar

al modo de medicin todo lo dems igual
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