ACTIVIDAD ENZIMATICA

FUNDAMENTO TERICO
Las enzimas sin molculas de protenas que facilitan y aceleran las reacciones
qumicas, estas tienen lugar en los tejidos vivos, disminuyendo el nivel de la
energa de activacin. El trmino cintica enzimtica implica el estudio de la
velocidad de una reaccin catalizada por una enzima y los efectos que pueden
tener factores como los inhibidores. Uno de los principales estudios que se
realizan en una enzima es medir el efecto en la velocidad de la reaccin cuando
se modifican las concentraciones del sustrato y se mantienen constantes la
concentracin de enzima, el pH, la fuerza inica del medio, la temperatura, entre
otros.
LA AMILASA
La amilasa es una enzima que se encuentra en la saliva y el pncreas, su funcin
es degradar el almidn (de los alimentos) a una mezcla de hidratos de carbono
ms sencillos.
El almidn es un polisacrido compuesto por unidades de glucosa con dos
componentes; uno mayoritario, llamado amilasa, de estructura lineal (las unidades
estn unidas exclusivamente, por enlaces -1,4-glucosidicos), y otro minoritario,
llamado amilopectina, de estructura ramificada (cada cierto nmero de eslabones
lineales hay una ramificacin, que encabeza una glucosa unida mediante enlace
-1,6-gucosidico a una de las glucosas de la estructura lineal).
LA CATALASA
Enzima que se encuentra en los peroxisomas de la clula, su funcin es de
convertir el H2O2 en H2O.Su funcin es necesaria para que se degrade el agua
oxigenada (molcula toxica) que se forma en el metabolismo celular.
La existencia de la catalasa en tejidos animales, es aprovechada para utilizar el
agua oxigenada como desinfectante cuando se hecha sobre una herida. Como

muchas bacterias son anaerobias, mueren con el desprendimiento de oxigeno que

se reduce cuando la catalasa de los tejidos acta sobre el agua oxigenada.
OBJETIVOS
Estudiar algunos factores que afectan la actividad enzimtica, como la
temperatura, el pH, la concentracin del sustrato y de la enzima.
Comprender la importancia de la accin de la amilasa salival en el
desdoblamiento de los alimentos.
Estudio de diferentes variables en la accin enzimtica de la catalasa .

MATERIALES

Un trozo de papa
10 ml de Lugol
Un beaker
20 gramos de hgado de pollo
Agua oxigenada al 2%
Agua destilada
10 ml de HCL 1N
10 ml de NAOH 1N
Un mortero
Un mechero
Bao mara a 37 C
15 tubos de ensayo
Plumn indeleble
Papel absorvente
Bagueta

PROCEDIMIENTO
A) Estudio de la actividad de la amilasa
Obtencin de la a-amilasa salival:
En un beaker de 10 ml limpio se deposita una pequea cantidad de
saliva ( de al menos de dos personas)
Antes de utilizarlo, se debe agitarse para obtener una solucin
homognea.
Determinar la presencia de almidn

 Triturar en el mortero un trozo de papa.

Colocar en un tubo de ensayo N 1 la papa triturada con ayuda de la
bagueta.
Agregar unas gotas de lugol al tubo.
Anotar las observaciones.

Tubo N 1
control
Agua
destilada
Agua
oxigenada
ndice de
reaccin

Tubo N2
Hgado en
trozos

Tubo N3
Papa en
trozos

Tubo N 4
Hgado
triturado

Tubo N 5
Papa
triturado

3 ml

3 ml

3 ml

3 ml

3ml
3 ml

B.)
B.1 Reutilizando la enzima
Colocar en el tubo de ensayo N 6, 1ml de sobrenadante del tubo N 2.
Agregar 3 ml de agua oxigenada.
Anotar las observaciones.
B.2 Efecto de la temperatura
Colocar en el tubo de ensayo N 7, 3 ml de agua destilada.
Colocar en el tubo de ensayo N 8 algunos trozos de hgado.
Colocar en el tubo de ensayo N 9, una pequea cantidad de hgado
triturado.
Hervir el contenido de los tres tubos
Una vez fras las muestras aadir 3 ml de agua oxigenada.
Anotar las observaciones (indique los ndices de reaccin)

Tubo N 7
Control
Agua destilada
Agua oxigenada

3 ml
3 ml

Tubo N 8
Hgado en
trozos

Tubo N 9
Hgado triturado

3 ml

3 ml

ndice de
reaccin

B.3.1. Efecto del pH de un acido

Aadir al tubo N 10; 3 ml de agua destilada.

Aadir al tubo N 11: hgado en trozos.
Aadir al tubo N 12: hgado triturado.
Aadir a los tres tubos de ensayo, 1 ml de HCL 1N y mezclar con cuidado.
Agregar 3 ml de agua oxigenada a los tres tubos.
Anotar las observaciones (indique los ndices de reaccin)

Tubo N 10
control

Tubo N 11
Hgado
trozos

Tubo N 12
en Hgado triturado

Agua destilada

3 ml

HCL 1N

1 ml

1 ml

1 ml

Agua oxigenada

3ml

3ml

3ml

ndice
reaccin

de

B.3.2.Efecto del pH: accin de una base

Aadir al tubo N 13; 3 ml de agua destilada.

Aadir al tubo N 14: hgado en trozos.
Aadir al tubo N 15. Hgado triturado.
Aadir a los tres tubos de ensayo 1 ml de NaOH 1N y mezclar con cuidado.
Agregar 3 ml de agua oxigenada a los tres tubos.
Anotar las observaciones (indique el ndice de reaccin)
Tubo N 13
control

Tubo N 14
Hgado
trozos

Tubo N 15
en Hgado triturado

Agua destilada

3 ml

NaOH 1N

1 ml

1 ml

1 ml

Agua oxigenada

3 ml

3ml

3 ml

ndice
reaccin

de

RESULTADOS
En el experimento N 1 para determinar la presencia de almidn, al agregar
lugol a las dos muestras de papa, tanto en trozos y tambin la triturada,
hubo reaccin al instante, pues como el almidn de la papa es un
polisacrido, el yodo del lugol se fija fuertemente a la molcula de almidn,
dando as un color negruzco.
Reacciones de las muestras de papa con agua oxigenada:
Tubo N3: al agregar agua oxigenada al tubo con trozos de papa, se
observ que la reaccin demoro un poco; fue algo lenta, hubo poco
burbujeo.
Tubo N 5: al agregar agua oxigenada al tubo hubo reaccin al instante. En
esta parte se observ una reaccin abundante de la enzima catalasa o
peroxidasa y se evidenci por la produccin de burbujas de aire en la
superficie del tubo.
Reacciones de las muestras de hgado con agua oxigenada:

Los resultados obtenidos en los tubos con hgado, el tubo N 8 y 9,

realizado con el hgado de pollo fueron similares a los obtenidos con la
papa, aunque un poco disminuidos proporcionalmente, debido a la

interferencia que puede darse entre las reacciones enzimticas con otros
componentes celulares presentes en el tejido animal.
INFLUENCIA DE LA SUPERFICIE DE LA MUESTRA DEL HGADO EN SU
ACCIN ENZIMTICA

En este experimento se pudo observar que ocurre una reaccin enzimtica

mayor, con abundante produccin de burbujeo en el pedazo de hgado que
fue macerado, mientras en los pedazos cortados en trozos grandes fue
inferior, notndose slo reaccin superficial en las partes expuestas al
perxido de hidrgeno.
Estos resultados se deben a que en el hgado triturado existe una mayor
superficie de contacto entre las enzimas y el sustrato correspondiente, es
decir, el perxido de hidrgeno agregado, y adems las enzimas catalasas
del tejido se hacen ms abundantes con el macerado, pues se extraen del
interior de los tejidos y contactan mejor y en mayor nmero con el perxido,
haciendo ms evidente la reaccin enzimtica
REACCIONES CON EL AGUA OXIGENADA
Las burbujas que se producen en este tipo de reacciones enzimticas son
bsicamente oxgeno que se desprende de la reaccin entre las molculas
de perxido de hidrgeno y la enzima catalasa, que la degrada en agua y
oxgeno molecular que se libera en forma de gas.

INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

A temperaturas cercanas a la temperatura ambiental y corporal las enzimas
presentan su mejor funcionamiento, es decir, se encuentran en un rango
ptimo de temperaturas.
CUESTIONARIO

1. Explicar la reaccin del almidn con el lugol.

Cuando agregamos lugol al almidn de la papa hay una reaccin al instante, lo
primero que pudimos observar es el cambio de color, pues la muestra se torna de
color negruzco. Esto se puede explicar de la siguiente manera: dado que el
almidn es un polisacrido, y esta tiene un gran poder de absorcin de yodo
contenido en el lugol, es por eso que la muestra cambia de color.
2. En la prueba de la amilasa. Por qu despus de agregar la amilasa la reaccin
de lugol da negativo?

3. En la prueba de la catalasa Cul presenta una mayor reaccin, el tubo 2, 3, 4

5? Por qu?
En la prueba de la catalasa, pudimos observar que en las tres muestras hubo
reaccin, pero nos llam la atencin el tubo nmero 5 que tena papa triturada, al
agregarle 3 ml de agua oxigenada se produjo bastante burbujeo, hasta el punto de
que la espuma rebals del tubo de ensayo.
Esto debe en gran parte a que en la papa y en todos los tejidos animales y
vegetales se encuentra la catalasa, la papa triturada tenia catalasa el cual
reacciono cuando agregamos agua oxigenada a la muestra, la catalasa de la papa
triturada reacciono descomponindolo en agua y oxgeno, lo cual produjo el
abundante burbujeo.
4. Hubo reaccin en el tubo 11? Por qu?
Lo que pudimos observar es que en el tubo 11 que corresponde al hgado en
trozos, es que no hubo reaccin, pues antes de que le aadiramos agua
oxigenada, agregamos a la muestra 1 ml de HCl 1N, lo cual afecta en gran medida
la actividad enzimtica.

Adems no hubo reaccin porque las superficie de contacto es muy importante en

la actividad enzimtica, pues el hgado estaba en trozos, y ms porque el pH de la
muestra, al agregarle HCL se volvi acido, y el pH acido hace que la enzima se
inactive. Esto nos da a conocer que la enzima catalasa, para que funcione
correctamente debe estar a un pH neutro y a temperatura ambiente.
5. Cmo afecta el calor y el pH en la actividad enzimtica?
EFECTO DEL CALOR: Al igual que ocurre con la mayora de las reacciones
qumicas, la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas se incrementa
con la temperatura. La variacin de la actividad enzimtica con la temperatura es
diferente de unos enzimas a otros en funcin de la barrera de energa de
activacin de la reaccin catalizada. Sin embargo, a diferencia de lo que ocurre en
otras reacciones qumicas, en las reacciones catalizadas por enzimas se produce
un brusco descenso de la actividad cuando se alcanza una temperatura crtica.
Este efecto no es ms que un reflejo de la desnaturalizacin trmica del enzima
cuando se alcanza dicha temperatura.

La Temperatura influye en la actividad enzimtica. En general por cada 10C que

aumente la temperatura la velocidad de la reaccin aumenta de 2 a 4 veces. Esta
regla se cumple hasta que la temperatura alcanza un valor mximo (T ptima)
donde la actividad es mxima. Esto se debe a que al aumentar la T aumenta el
movimiento de las molculas y, por tanto aumenta la probabilidad de encuentro
entre el Sustrato y la Enzima.

Si la T aumenta por encima de la T ptima, disminuye e incluso cesa la actividad

enzimtica debido a que la enzima se desnaturaliza. Cada enzima posee una T
ptima, en las enzimas humanas suele estar alrededor de 37C. Los animales
poiquilotermos debido a que carecen de mecanismos para regular la T corporal,

se ven obligados a hibernar en la estacin fra pues la actividad de sus enzimas

debido a las bajas temperaturas es muy baja.
EFECTO DEL pH: El pH es otro factor que influye en la actividad enzimtica,
debido a que el pH influye en la ionizacin de los grupos funcionales de los
aminocidos que forman la protena enzimtica. Cada enzima realiza su accin
dentro de un determinado intervalo de pH, dentro de este intervalo habr un pH
ptimo donde la actividad enzimtica ser mxima. Por debajo del pH mnimo o
por encima del pH mximo el enzima se inactiva ya que se desnaturaliza. En la
mayora de las enzimas el pH ptimo est prximo a la neutralidad, aunque hay
excepciones.

La mayora de los enzimas presentan un pH ptimo para el cual su actividad es

mxima; por encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye bruscamente.

Este efecto se debe a que, al ser los enzimas de naturaleza proteica, al igual que
otras protenas, se desnaturalizan y pierden su actividad si el pH vara ms all de
unos lmites estrechos. De ah la conocida importancia biolgica de los sistemas
tampn.

CONCLUSIONES
Como producto del anlisis de los resultados del experimento realizado en el
laboratorio, se pueden extraer las siguientes conclusiones:

 La influencia de la superficie es muy importante, pues tanto en la papa e

hgado triturados hubo mejor reaccin enzimtica, mientras que en las
muestras de papa e hgado, pero en trozos, las reacciones fueron
inferiores, notndose solo reaccin superficial en las partes expuestas, por
ejemplo con el agua oxigenada.
La temperatura es un factor determinante en las reacciones enzimticas
porque acelera o retarda la accin de las enzimas, lo que se evidencia con
la produccin de burbujas.
Para que la catalasa funcione correctamente debe tener un ph neutro y
temperatura ambiente.
BIBLIOGRAFIA

DE ROBERTIS (H.)-HIB-PONZIO. Biologia Celular y Molecular. Editorial El

ateneo 2003
VILLEE, Claude A. Biologa. McGraw-Hill. 1988