AVALIAO DA CONSOLIDAO SSEA EM CADELAS SUBMETIDAS

OVARIOSSALPINGO-HISTERECTOMIA, UTILIZANDO HIDROXIAPTATITA COM

ALANDRONATO E HIDROXIAPATITA COM COLGENO
ROQUE R ;ANITA ISABEL 1*; BARALDI A; SILVANA2; OLIVEIRA;DANIELA3
MARCO TERICO
Os estrgenos so estimuladores da formao do tecido sseo, pois influenciam o
aparecimento e o desenvolvimento dos centros de ossificao. Nos casos de desenvolvimento
deficiente das gnadas ou de ovariossalpingo-histerectomia (OSH) de animais em crescimento,
as cartilagens epifisrias permanecem por mais tempo, de modo que o indivduo atinge estatura
acima da normal (Junqueira e Carneiro, 1999). Depois da interrupo da funo ovrica,
observa-se diminuio da massa ssea (que caracteriza a osteoporose) com desorganizao
da microarquitetura trabecular e, consequentemente, aumento do risco da ocorrncia de
fraturas ou refraturas (Souza et al., 2003). Malluche et al. (1988) estudaram, por meio de
anlises histomorfomtricas, a remodelao ssea em ces da raa Beagle, com perda
significativa do osso quatro meses aps a OSH, e observaram que a insuficincia osteoblstica
a responsvel pelo balano negativo da manuteno do osso e pela osteopenia. Alguns
compostos de hidroxiapatita com colgeno foram desenvolvidos como biomateriais em potencial
para a reconstruo ssea por apresentarem uma composio similar do osso (Du et al.,
1998; Bakos et al., 1999). O aspecto mais importante na utilizao de colgeno na forma de
compostos com biocermicas o fato de esta protena ser a matriz em que os sais de fosfato
de clcio se depositam para dar origem ao tecido sseo (Mann et al., 1989). Os efeitos
biolgicos do alandronato derivam da forte afinidade pelo osso, o que possibilita uma interao
direta com osteoblastos, aumentando a formao e, com os osteoclastos, diminuindo a
reabsoro ssea, por meio de uma variedade de ciclos bioqumicos (Masarachia, 1996). A
densitometria ptica um mtodo que no depende de equipamentos sofisticados, vivel e
de fcil execuo, custo baixo, altamente confivel, no invasivo e que permite a realizao de
anlises qualitativas e quantitativas do contedo e da densidade mineral. Com esta tcnica,
eliminam-se possveis interpretaes subjetivas que ocorrem durante a avaliao radiogrfica,
pois esta apresenta baixa sensibilidade para o diagnstico precoce de perdas sseas, que so
detectadas somente quando excedem 30% a 50% e, por muitas vezes, s so perceptveis no
momento em que ocorre uma fratura ou refratura (Gluer e Genant, 2013).
O PROBLEMA DA PESQUISA
Em medicina humana, estudos realizados em algumas espcies animais tm o intuito
analisar as alteraes sseas aps a OSH e correlacion-las com as da mulher. O efeito
deficincia hormonal sobre a consolidao das fraturas em cadelas pode ser diferente
mulher e de outros animais e, portanto, anlises comparativas entre espcies frente
influencias hormonais sobre a consolidao ssea requerem estudos criteriosos.

de
da
da
s

OBJETIVO
O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da hidroxiapatita com alandronato e da
hidroxiapatita com colgeno na consolidao ssea do rdio de cadelas adultas submetidas
ovariossalpingo-histerectomia.
1

M.V, Msc Ciruga de Pequeos Animales UNESP/Brasil. Docente de Clnica y ciruga de pequeos
2
animales- Universidad de los Llanos.Ponente. MV, Msc, PhD en Morfofisiologa, Docente de
3
1
Morfofisiologa- UNESP-Brasil MV, Msc en Ciruga- UFRPE-Brasil./ Facultad de Ciencias Agropecuarias
y Recursos Naturales- Escuela de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad de los Llanos Colombia. Grupo de Investigacin de Medicina Interna y Farmacologa Experimental- ELITE
* anyroque@hotmail.com. Telfono: 57-08-3114509905/Colombia.

HIPTESE
As cadelas submetidas ovariossalpingo-histerectomia apresentaram alterao na
consolidao sea. A hidroxiapatita com alandronato e hidroxiapatita com colgeno acelero o
proceso de consolidao sea.
MATERIAIS E MTODOS
Utilizaram-se 14 cadelas adultas (dois a seis anos de idade), de porte mdio (141,3kg), com
base nos resultados de exame clnico detalhado e testes hematolgicos, coproparasitolgicos e
de urina. As cadelas foram vacinadas e vermifugadas, alimentadas com rao balanceada e
gua vontade. Depois de aclimatadas por um perodo de um ms, antes do incio do
experimento, foram distribudas aleatoriamente em dois grupos: grupo-controle e grupo das
submetidas ovariossalpingo-histerectomia (OSH). Quatro meses aps a realizao da
ovariossalpingo-histerectomia, as cadelas dos dois grupos foram submetidas cirurgia para
produo de duas falhas sseas de 4mm de dimetro no tero proximal e distal do rdio de
ambos os membros. No tero distal do membro direito, foi implantada a hidroxiapatita com
alandronato, e no membro esquerdo, a hidroxiapatita com colgeno. No tero proximal, a falha
ssea no foi preenchida por biomateriais, estabelecendo-se como controle de ambos os
grupos. Nas cadelas dos dois grupos, foram feitas avaliaes clnicas dirias, at o 20 dia do
psoperatrio; os exames laboratoriais hemograma, dosagens de fosfatase alcalina, clcio,
fsforo e magnsio foram realizados no quarto ms ps-OSH.As avaliaes radiogrficas e
densitomtricas foram realizadas nos dias 0, 30, 60, 90 e 120 do perodo psoperatrio. As
inferncias estatsticas dos dados de densidade ptica foram avaliadas em esquema de
parcelas subdivididas no tempo, considerando como parcelas as cadelas-controles e OSH e os
tratamentos hidroxiapatita com alandronato e hidroxiapatita com colgeno e as subparcelas os
dias de ps-operatrio (0, 30, 60, 90 e 120 dias). Aplicou-se, ainda, o teste de Tukey para
comparaes mltiplas (Gomes, 1987).
RESULTADOS E DISCUSSO
Na avaliao clnica, realizada diariamente durante os 20 dias subsequentes cirurgia,
observou-se que todos os animais apresentaram evoluo clnica satisfatria, sem alteraes
sistmicas que pudessem ser atribudas aos biomateriais utilizados. No ocorreram deiscncias
das suturas ou outra manifestao que demonstrasse reaes locais associadas rejeio do
implante, tais como, fstulas ou exsudados purulentos, evidenciando-se, assim, a
biocompatibilidade destes produtos, como j descrita por outros pesquisadores (Bell e Beirne,
1988; Pissiotis e Spanberg, 1990; Meraw e Reeve, 1999; Linhares, 2000). No primeiro dia psoperatrio e durante as primeiras 72 horas, verificou-se em um animal do grupo-controle
claudicao moderada do membro torcico esquerdo e em dois animais do grupo OSH
claudicao moderada do membro torcico direito. Borges (1998) e Rezende et al. (1998)
observaram claudicao em todos os animais nas primeiras 12 horas do perodo psoperatrio;
j Linhares (2000) observou que todos os animais do grupo tratado com COLHAP
apresentaram claudicao intensa, durante as primeiras 72 horas do ps-operatrio, em
decorrncia de o limiar de dor desses animais ser mais exacerbado em relao aos demais. Os
resultados dos exames laboratoriais realizados quatro meses ps-OSH revelaram valores de
hemograma dentro dos parmetros normais para ambos os grupos. Muitos pesquisadores
afirmaram que, aps quatro meses da OSH, existe uma perda significativa de osso e uma
notvel diminuio do fsforo e do clcio (Malluche et al., 1986; Malluche et al., 1988; Skolnikov
et al., 1992; Chachra et al., 2000). Neste estudo, ao se avaliarem as dosagens de clcio, fsforo
e magnsio sricos, no foram observadas diferenas significativas entre as dosagens do grupo
OSH (10,80,8mg/dL; 4,61,1mg/dL e 2,20,3mg/dL, respectivamente), e as do grupo-controle
(10,50,6mg/dL; 3,70,6mg/dL e 2,10,9mg/dL, respectivamente), indicando que no houve
interferncia da OSH sobre esses parmetros. A mdia dos valores da fosfatase alcalina foi

significativamente maior no grupo-controle (13038,8U/L) em relao ao grupo OSH

(84,323,3U/L). A fosfatase alcalina, enzima envolvida na formao das clulas sseas, o
marcador mais amplamente utilizado na estimativa da taxa de formao ssea, mesmo que
essa medida inclua a atividade derivada de outras fontes, tais como fgado e intestino delgado
(Stepan et al., 1987), evidenciando provavelmente maior absoro de clcio pelos animais do
grupo-controle. Todas as cadelas do grupo-controle apresentaram estro durante a realizao do
experimento. A Fig. 1A ilustra o exame radiogrfico no dia 0 do ps-opertorio, observando-se
as falhas sseas realizadas no tero proximal e distal de ambos os membros. Verificou-se no
30 dia psoperatrio, em todos os animais do grupo controle, fechamento total da falha ssea
no tero distal do membro direito, onde foi utilizada a HAP-AL. J no tero proximal, somente
quatro animais apresentavam fechamento total e o restante dos animais, fechamento parcial.
Comparando com o tero distal do membro esquerdo, onde se utilizou a COL-HAP, quatro
cadelas apresentavam fechamento parcial. No tero proximal do mesmo membro, quatro
cadelas apresentaram fechamento total e trs, fechamento parcial. Analisando estes resultados,
pode-se inferir que a HAP-AL um biomaterial que acelera o processo de cicatrizao, por
apresentar quimiotactismo pela superfcie do osso, diminuindo a reabsoro e aumentado a
formao ssea (Pols et al., 1999).

Figura 1. A. Imagem radiogrfica em projeo lateromedial do membro torcico direito (D) e

esquerdo (E) de uma cadela no dia 0 do ps-operatrio. B. Imagem radiogrfica em projeo
lateromedial no 90 dia ps-operatrio em uma cadela do grupo controle. Observa-se no tero
distal do membro torcico esquerdo a remodelao da neoformao do calo sseo e
fechamento parcial da falha ssea (seta). C. Imagem radiogrfica em projeo lateromedial no
120o dia ps-operatrio em uma cadela do grupo OSH. Observa-se o fechamento total no tero
proximal de ambos membros e no tero distal direito (seta grossa) e fechamento parcial das
falhas sseas do tero distal esquerdo (seta fina).
No grupo OSH, quatro animais apresentaram fechamento total no tero distal do membro direito
(HAP-AL), e os demais apresentaram fechamento parcial aos 30 dias do perodo psoperatrio.
Analisando o tero distal do membro esquerdo (COL-HAP), no se observou em nenhum dos
pacientes fechamento parcial nem total da falha ssea; j no tero proximal de ambos os
membros, verificou-se em cinco cadelas fechamento parcial e em duas fechamento total. Notouse que, nos animais do grupo OSH, o tempo de cicatrizao das fraturas foi mais demorado,
observaes semelhantes foram feitas por Bagi et al. (1992); Skolnikov et al. (1992); Han e
Szarzanowicz (1998) ao relatarem que a depleo de estrgenos aumenta a produo de
osteoclastos, o que pode interferir na consolidao ssea.

Avaliando as densidades sseas, no 30 dia do perodo ps-operatrio das cadelas do grupocontrole, verifica-se que a densidade ssea foi maior no tero distal do membro direito onde se
implantou a HAP-AL, mas no houve diferena significativa entre os tratamentos (P>0,05). J
nos 60, 90 e 120 dias do psoperatrio, no tero distal dos membros esquerdos tratados com
COL-HAP, a densidade foi significativamente menor, (P<0,05). Observa-se, neste experimento,
que a densidade ssea foi significativamente maior nas cadelas do grupo-controle (P<0,05)
(Tab. 4). Este resultado confirma o fato de que os estrgenos estimulam a formao do tecido
sseo (Junqueira e Carneiro, 1999), e que a interrupo da funo ovariana diminui a massa do
osso, incrementando a reabsoro da rea endocortical (Bagi et al., 1992; Souza et al., 2013) e,
consequentemente, a diminuio da densidade ssea. Alm disso, tambm se evidenciou em
todos os animais de ambos os grupos maior densidade ssea no tero distal onde foi
implantada a HAP-AL. Resultado semelhante foi obtido por Rocha (2001) ao observar que o
alandronato aumentou a densidade ssea alveolar em ces. No 60 dia ps-operatrio, nas
cadelas do grupo controle, observou-se o remodelamento da reao periosteal, e constatou-se
espessamento da cortical com maior intensidade no membro direito, onde foi colocada a HAPAL. Obteve-se, portanto, resultados similares aos de Meraw e Reeve (1999) que utilizaram
implantes dentrios em ces com uma camada de alandronato e Yaffe (1997; 1999) que utilizou
este mesmo biomaterial na mandbula de ratos, estes autores concluram que o alandronato
aumentou a neoformao ssea. Aos 90 dias ps-operatrios, o calo sseo neoformado e
remodelado no tero distal do membro direito apresentou-se com aumento da radiopacidade.
Observou-se o fechamento parcial da falha ssea no tero distal do membro esquerdo, em
duas cadelas do grupo OSH e uma cadela do grupo-controle (Fig. 1B). Evidenciou-se no 120
dia ps-operatrio remodelao da neoformao ssea e fechamento total da falha ssea do
tero proximal de ambos os membros e no tero distal do membro direito dos dois grupos. No
tero distal esquerdo, uma cadela do grupo-controle e duas do grupo OSH apresentavam
fechamento parcial (Fig. 1C).Estes achados no diferem das observaes feitas por Linhares
(2000), pois no 120 dia do psoperatrio, os animais do grupo tratado com COL-HAP
mostraram radiopacidade igual do osso somente prxima s bordas do defeito, com reas
radiotransparentes no centro da falha, no apresentando preenchimento total do defeito sseo.
Ao contrrio dessa observao (Bell e Beirne, 1988), no encontraram alteraes no padro de
reparao ssea, quando compararam a hidroxiapatita pura e a hidroxiapatita associada ao
colgeno. Contudo Pissiotis e Spangberg (1990) constataram que o tecido sseo de reparao
mostrava-se mais imaturo quando o implante se constitua de colgeno associado
hidroxiapatita. Baseado nestas observaes, pode-se inferir que a associao do colgeno com
a hidroxiapatita parece diminuir a capacidade osteocondutora do biomaterial na reparao
ssea, o que tambm foi observado por Linhares (2000). No grupo OSH, verificou-se que aos
30, 60, 90 e 120 dias do ps-operatrio, a densidade ssea foi maior (P<0,05) no tero distal do
membro direito onde foi implantada a HAP-AL.
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