Gua de Laboratorio: Diabetes

Introduccin
La diabetes es una enfermedad metablica en que no existe una
correcta regulacin de los niveles de glucosa sangunea. En condiciones
normales, el pncreas sintetiza insulina, la cual es secretada al
producirse un aumento de la glicemia y acta disminuyendo la cantidad
de glucosa en el torrente sanguneo.
En pacientes con Diabetes Tipo I, el pncreas es incapaz de secretar
insulina, por lo cual los niveles de glucosa no son regulados y aumenta
la glicemia. La Diabetes Tipo II viene precedida de una condicin
conocida como resistencia a la insulina, en la cual disminuye la
respuesta a la insulina, con lo cual los niveles de glicemia se encuentran
elevados.
En este trabajo prctico, se evaluarn los niveles de glucosa sangunea
en condiciones basales y post-prandial (1 hora despus de consumir
alimento) mediante el uso de una tcnica automatizada.

Mtodo
Los niveles de glucosa sern determinadas en muestras de suero
mediante una tcnica automatizada de ELISA directo.

Reaccin enzimtica

La glucosa es determinada al ser oxidada en presencia de glucosa

oxidasa. Se forma perxido de hidrgeno, el cual reacciona con fenol 4aminoantipirina formando quinoeimina, un compuesto rojo-violeta cuya
absorbancia se puede medir a 500 nm.

Glucosa + O

Glucosa
Oxidasa
2 (GOD)

cido glucnico + H2O2

Peroxidasa
(POD)

2H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol

Quinioeimina + 4H2O2

Reactivos

1. Estndar (STD):
100 mg/dl de glucosa
2. Reactivo enzimtico (RGT):
Buffer fosfato (pH
7,5)
4-aminoantipirina
Fenol
Glucosa oxidasa
Peroxidasa
Mutarotasa
Azida de Sodio

100 mmol/l
0,25 nmol/l
0,75 nmol/l
15 KU/l
1,5 KU/l
2 KU/l
0,095 %

Esquema de pipeteo

STD o
Muestra
RGT

Cantidad (l)
10
1000

Mezclar e incubar por 10 min a 20-25 C (temperatura ambiente). Medir

absorbancia antes de 60 min a 500 nm.

Observaciones

La prueba es lineal hasta 400 mg/dl de glucosa

La azida de sodio contenida en el reactivo de reaccin no debe ser
ingerida ni entrar en contacto con piel y mucosas. Trabajar con
precaucin.
Muestra ictrica no puede ser usada en la prueba. Los triglicridos
interfieren a partir de 2500 mg/dl y la hemoglobina desde 500 mg/dl.

Resultados

Muestra o STD

Absorbancia (A)

C = 100 * Amuestra/ASTD (mg/dl)

Concentracin
de Glucosa (C)

Interpretacin clnica de los resultados

Responder las siguientes preguntas

Qu resultados de glicemia se esperaran de un paciente con
resistencia a la insulina en condiciones de ayuno y post-prandiales? En
qu se diferenciaran estos resultados de los de un paciente con
diabetes tipo 1 y tipo 2?
Mediante la elaboracin de un grfico, explicar cmo varan los niveles
de insulina luego de ingerir alimentos en un paciente sano, un paciente
con diabetes tipo 1 y un paciente con diabetes tipo 2 (sin tratamiento).
Qu ocurre con la produccin de insulina con el transcurso del tiempo si
un paciente que sufre de diabetes tipo 2 no sigue un tratamiento
apropiado?
Un paciente llega a la unidad de toma de muestra para realizarse un test
de tolerancia a la glucosa oral. Al medir sus niveles de glucosa basal, se
obtiene un resultado de 202 mg/ml. Cmo se procede? Por qu?
Explique en qu consiste el clamp euglicmico. Cul es su utilidad?
Sera conveniente su aplicacin rutinaria en el laboratorio clnico?