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Universidad Tcnica de Ambato
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Facultad de Ciencia e Ingeniera en Alimentos
Ingeniera Bioqumica
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Ingeniera de Bioproceso
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Presente y futuro de los biosensores microbianos
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electroqumicos
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Integrantes:
Acosta Michael
Bustillos Diana
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Mera Anabel
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Moya Jenny
Palacios Diego
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Fecha: 04/07/2016
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Biosensores microbianos
Son dispositivos analticos que surgen de la combinacin de un microorganismo (m.o.) en contacto ntimo con un
transductor fsico adecuado, en el que se genera una seal medible proporcional a la concentracin de analito/s.
Se pueden clasificar en dos tipos:
- Biosensores de medicin de respiracin: Se basan en la inmovilizacin de microorganismos aerbicos sobre
un electrodo de O2. Se induce a que el m.o. metabolice O2 y no sustrato, por lo que, la determinacin de
esta especie se la realiza por medio de la disminucin de la presin parcial del gas (O2).
- Biosensores de medicin de metabolismo: Son capaces de detectar el metabolito producido por una
reaccin catalizada por el m.o. inmovilizado. inmovilizado. Utilizando distintos tipos de sensores de gases o
de iones, pueden monitorizarse los analitos de inters.
Ventajas de los biosensores microbianos:
-

Se emplean microorganismos como elemento de reconocimiento: Los microorganismos estn

presentes en todas partes y son capaces de metabolizar una variedad de compuestos qumicos.
Se emplean microorganismos como fuente de enzimas intracelulares.
Los microorganismos extremfilos hacen posible la fabricacin de biosensores menos susceptibles
de inhibirse por solutos y ms tolerantes a ambientes de pH subptimo.
Las clulas microbianas son fcilmente manipulables y tienen mejor viabilidad y estabilidad en
ambientes in vitro.

Tcnicas de inmovilizacin
La inmovilizacin de los microorganismos en los transductores tiene un papel esencial en la fabricacin de los
biosensores microbianos y condiciona su funcionamiento y estabilidad. La seleccin de la tcnica y/o el soporte de
inmovilizacin dependen de la naturaleza del biomaterial (clulas viables o no viables) y del sustrato y la
configuracin del transductor empleado.
Inmovilizacin covalente: para enzimas y anticuerpos. Las clulas estaran expuestas a potentes grupos reactivos y a
otras condiciones de reaccin severas que comprometen su viabilidad.
Entrecruzamiento con agente bifuncionales: utiliza reactivos como el glutaraldehdo, se han empleado con xito para
la inmovilizacin de clulas en varios soportes (gelatina, albmina, clara de huevo). Los reactivos qumicos de
entrecruzamiento utilizados frecuentemente, tambin afectan a la viabilidad celular.
Atrapamiento y adsorcin: para clulas viables. Un enfoque comn consiste en retener las clulas en las
proximidades de la superficie del transductor mediante membranas como las de dilisis.
En el caso de los biosensores microbianos electroqumicos, es muy interesante la inmovilizacin de los
microorganismos en polmeros conductores electrnicos.
Figura 1. Micrografas electrnicas de barrido de Brevibacterium ammoniagenes
atrapadas en un polmero de sulfonato de poli(estireno)-polianilina (PSSPANI). Se
utiliza un electrodo de platino sumergido en una disolucin de anilina en presencia del
polmero y del material biolgico, y se procede a su electrodeposicin aplicando un
potencial constante de +1,2 V vs SCE. En dicha figura se aprecian las clulas adsorbidas
sobre la superficie del electrodo de platino a), los primeros grnulos de polmero b) y
su crecimiento alrededor de las clulas (c y d), y sobre ellas (e y f).

Biosensores microbianos electroqumicos

Estos sensores son amperomtricos, se basan en utilizar un potencial fijo entre un electrodo (con
microorganismos) y otro de referencia. Se produce la reduccin u oxidacin de un producto metablico
electroactivo generndose una variacin de corriente que se relaciona con la concentracin de compuestos de
inters.
Una ventaja de estos biosensores es que utilizan microorganismos como microrreactores, eliminando la
necesidad de aislar enzimas individuales. Otra d sus caractersticas es la amplia sensibilidad.
Un problema que se ha presentado es la poca eficiencia del proceso de transferencia electrnica del sistema
biocatatico microbiano al electrodo. Ante esto ha surgido una estrategia para identificar analitos generados por
los microorganismos, basada en combinar los microorganismos con mediadores redox que facilitan las
reacciones de transferencia electrnica entre el compuesto en estudio y la superficie del electrodo. Los
microorganismos ms utilizados son Gluconobacter oxydans, Pseudomonas putida y Pseudomonas fluorescens en
combinacin con polmeros de osmio, para la deteccin de glucosa y fenol. Nuevos desarrollos impulsan el
empleo de electrodos de pasta de carbono con nanotubos de carbono (CNTs).
En este grupo se incluyen los biosensores conductimtricos (relaciona concentracin de analito y cambios de
conductividad asociadas a la produccin y consumo de especies inicas durante la actividad metablica)
Figura 1.
a) esquema de
oxidacin del sustrato S
catalizasa por la enzima DH
(deshidrogenasa)
en
la
membrana
d
un
microorganismo. Mox y Mred
son las formas redox del
mediador. b) Funcionamiento
de un biosensor microbiano
para la deteccin de glucosa.
Fuente: Campuzano, S. (2011).
Presente y futuro de los
biosensores
microbianos
electroqumicos.

Tambin se han desarrollado biosensores microbianos potenciomtricos (miden concentracin de especies de

estudio con la diferencia de potencial).

Deteccin de nitrobenceno, nitrotoluenos y nitrofenoles

Biosensores
microbianos (BM)

Geneticamente modificados con actividad organofosforo-hidrolasa

Detectan txicos organofosforados

BM
electroqumicos

Deteccin del p-nitrofenol

Se relaciona con la concentracin de fenol
BM de organofosfatos p-nitrofenil sustituidos

En determinacin
de fenol y
derivados

Degradacin de fenol (como fuente de carbono)

Microchips

BM micro-fluidico (toxicidad del agua)

Determinacin de
metales pesados

Por actividad metablica de bacterias

Anlisis aguas residuales

Aplicaciones. Anlisis Ambiental

Anlisis ambiental

Biosensor amperomtrico basaso en S. cerevisiae para determinacion de Cu

Demanda biolgica de oxgeno (DBO)

Desarrollo de biosensores microbianos para evitar el largo tiempo de mtodo DBO5 y estimar de forma
precisa y rpida del ndice de polucin en aguas industriales y naturales. Un sistema basado en la eucariota
Saccharomyces cerevisiae y un doble medidor de ferricianuro y menadiona. El ferricianuro transporta
electrones desde el centro redox de enzimas bacterianas reducidas a la superficie del electrodo en
presencia de compuestos orgnicos. La menadiona es un medidor lipofilico que puede penetrar en la
membrana externa de la clula, forma un radical que transfiere el electrn al ferricianuro. El ferricianuro
formado alcanza el electrodo y se reoxida, generando la respuesta electroqumica.
Un sensor en la escala de L con volumen de 560L y dos electrodos de carbono. Respuesta electroqumica
se genera por cronoamperometra, aplicando potencial de 900mV al electrodo de trabajo durante 3s y
tomando la respuesta final del cronoamperograma como seal analtica. Este biosensor permite determinar
DBO en intervalo de 6,6 a 220mg O2/L en 15 minutos, aplicable para aguas dulces y marinas.

a) Esquema y b) seccin transversal del biosensor microbiano utilizado para la determinacin de DBO. PET, polietilentereftalato.

Biosensores para anlisis de alimentos.

BIBLIOGRAFA
Campuzano, S. (2011). Presente y futuro de los biosensores microbianos electroqumicos. An. Qum. 2011,
107(4), 350357 Recuperado de
https://www.google.com.ec/url?sa=t&rct=j&q&esrc=s&source=web&cd=6&cad=rja&uact=8&ved=0ahUKE
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