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Unidad IV
Estudio de las bacterias
Morfologa y estructura fina de las bacterias
Entre las principales caractersticas de las bacterias figuran su tamao, su
forma su estructura y su tipo de agrupacin.
Segn su especie, las bacterias son esfricas, en formas de bastn o de espiral,
tambin las bacterias se organizan en grupos, siendo los ms comunes de ellos
pares, racimos, cadenas y filamentos.
Pleomorfismo
Muchas bacterias en algn momento de su desarrollo presentan formas
irregulares o variantes conocidas como formas pleomrficas, estas pueden ser:
a) Permanentes (mutaciones): son el resultado de alteraciones genticas y
son bastantes estables e irreversibles ejemplo: prdida permanente de
flagelo, perdida permanente de produccin de esporas.
b) Temporales: aparecen durante el crecimiento y la divisin, Ejemplo:
longitud y forma de la clula.
Forma de involucin
Son clulas degenerativas de forma inslita y filamentosa que se forman en
condiciones de cultivos anormales.
Estas formas se producen por alteraciones en la presin osmtica del medio,
por la presencia d iones metlicos, antibiticos y sustancias qumicas o de
acumulacin de productos de desecho.
Capsula
Algunas bacterias estn rodeadas por una sustancia viscosa que forma una
cubierta o envoltura alrededor de la clula. Esta estructura se denomina
capsula o capa
mucosa, no todas las especies bacterianas producen
fcilmente capsulas detectables y el volumen de estas es incluido por el medio
donde la bacteria se cultiva.
A las bacterias les proporciona una cubierta protectora y tal vez sea un
depsito de alimento o el sitio donde colocan las sustancias de desecho.
Pared celular
Las capas de la envoltura celular que se ubican entre la membrana
citoplasmtica y la capsula se conocen como la pared celular.
Esta constituido principalmente por pptidos glucano y cido teicoicos, en la
Gram negativas la pared celular incluye capas de pptidos glucano,
lipoprotenas, lipopolisacaridos y la membrana externa.
La pared celular bacteriana debe ser su resistencia a una envoltura compuesta
por una sustancia denominada mureina. Las paredes celulares parecen ser
esenciales para el desarrollo y divisin bacteriana.
Endosporas
Algunas bacterias tienen la facultad de producir cuerpos ovales de pared
gruesa que es una clula de alta resistencia, estas se llaman endosporas
o esporas. Todos los gneros Bacilus y Clostridium se caracterizan en
parte por la capacidad para producir endosporas.
Las bacterias que forman esporas se desarrollan y reproduce durante
muchas generaciones.
Esporulacin
El proceso de comienza cuando las condiciones nutricionales se vuelven
desfavorables (falta de N, C o ambos). La esporulacin implica produccin de
estructuras, enzimas y metabolitos nuevos junto con la desaparicin de
muchos componentes vegetativos celulares.
Las dos membranas de la espora sintetiza las capas especiales que formarn la
envoltura celular: La pared de la espora y la corteza.
Desarrollo bacteriano.
Crecimiento de poblaciones: el crecimiento se define como un aumento en el
nmero de clulas microbianas de una poblacin.
La velocidad de crecimiento es el cambio en el nmero de clulas de la masa
celular experimentado por unidad de tiempo. El intervalo para la formacin de
dos clulas a partir de una generacin y el tiempo transcurrido para que esto
ocurra se llama tiempo de generacin.
Crecimiento Exponencial: Este modelo de incremento de la poblacin en el
que cada perodo fijo del tiempo se duplica el nmero de clula se denomina
crecimiento exponencial.
parmetros del crecimiento el aumento del nmero de clulas que se produce
un cultivo bacteriano creciendo es una progresin geomtrica de base 2.
curva de crecimiento: la curva de crecimiento puede dividirse en distintas
fases llamada fase de latencia fase exponencial fase estacionaria y fase de
muerte.
fase de latencia: ocurre cuando se transfiere una poblacin de un medio ms
rico an no ms pobre para que ocurra crecimiento en un medio de cultivo en
particular las clulas deben tener un equipo enzimtico completo que permita
la sntesis de metabolitos esenciales en el medio.
fase exponencial: las clulas y crecimiento exponencial estn en el estado
ms sano y por ello las clulas tomadas en el punto medio del crecimiento
exponencial son las ms indicadas para el estudio enzimtico estructural la
velocidad de crecimiento est influenciada por las condiciones ambientales as
como por las caractersticas genticas del organismo.
Fase estacionaria: Lo que generalmente sucede es que un nutriente esencial
del medio de cultivo se usa y llega a tener un factor limitante de crecimiento o
bien se acumulan en el medio algunos productos de desecho hasta niveles
inhibitorios que hace que cese el crecimiento exponencial al producirse esto la
poblacin alcanza la fase estacionaria.
Es una tcnica muy sensible, puede ser irrealizable cuando se trata del
recuento de muestras naturales. El recuento directo en muestras naturales
suele dar un nmero mucho mayor de organismo que los que se obtienen en
cultivo en placas de cualquier tipo de medio de cultivo.
Por qu los recuentos en placa dan menores nmeros de clulas que los
recuentos directos al microscopio? Factores: Los mtodos microscpicos
cuentan clulas muertas, mientras que los mtodos de viables no; diferentes
organismos pueden tener requerimientos nutricionales y de cultivo muy
diversos.
Medidas indirectas del crecimiento microbiano: turbidez.
Mtodo muy rpido y til de obtener estimaciones del nmero de clulas. Una
suspensin celular aparece turbia a la vista porque las clulas dispersan la luz
que atraviesa la suspensin. Cuantas ms clulas estn presentes mayor ser
la luz dispersada y, por tanto, mayor la turbidez. La turbidez puede medirse
con aparatos como el fotmetro o espectro fotmetro que hacen pasar la luz a
travs de suspensiones celulares y detectan la cantidad de luz emergente no
dispersada. La diferencia es que el primero usa un filtro simple y el segundo un
prisma o red de difraccin para generar luz.
Obtencin de una curva estndar.
Antes de utilizar la turbidez como sistema para estimar el nmero de clulas,
se debe de preparar para cada microorganismo a estudiar una curva estndar
relacionando alguna media directa del nmero de clulas o de la masa con la
medida indirecta obtenida por turbidez.
Las medidas de la turbidez se usan con frecuencia para seguir la velocidad de
crecimiento en los cultivos microbianos; la misma muestra puede medirse
repetidamente, los resultados se pueden representar semilogaritmicamente
frente al tiempo y usarse para calcular el tiempo de generacin de un cultivo
en crecimiento.
Recuento de colonias.
Casos:
parezcan
ser
consecuencia
de
la
utilizar
coloracin).
Despus
de
la
incubacin,
los
organismos
detectan
la
cantidad
de
luz
ser
el
fotmetro
el
espectrofotmetro.
Las medidas de turbidez se usacon frecuencia para seguir la velocidad de
crecimiento en los cultivos microbianos.
Obtencin de una curva estndar.
En el caso de organismos unicelulares, las unidades fotomtricas son
proporcionales al nmero de clulas, por consiguiente, las lecturas de turbidez
pueden usarse como un sustituto de los mtodos de recuento directo.
Antes de utilizar la turbidez para estimar el nmero de clulas, se debe
preparar primero, para cada microorganismo a estudiar, una curva estndar de
calibracin. Tal curva puede contener datos tanto del nmero de clulas como
de la masa celular, permitiendo una estimacin de ambos parmetros a partir
de una simple lectura de la turbidez.
A altas concentraciones celulares, la luz dispersada por una clula puede ser
dispersada por otra, cuando esto ocurre, la curva estndar de calibracin entre
el nmero de clulas y la turbidez, pierde su linealidad.
Determinacin del peso seco de las clulas.
Es el mtodo ms directo para las mediciones cuantitativas de la masa celular
y probablemente en ms fcilmente realizable y reproducible, aunque se debe
aplicar solo en suspensiones celulares muy densas y las clulas deben ser
lavadas muy bien para evitar la presencia de materiales extraos.
Determinacin de la masa celular mediante la medida de los cambios
qumicos.
Como ejemplo, es posible tomar bacterias que producen cido al fermentar la
glucosa. Se supone que la cantidad de cido que se produce, bajo condiciones
ptima
para
su
desarrollo.
Existen
cuatro
grupos
de
Psicrfilos (15-20C)
Mesfilos (30-37 C)
Termfilos (50-60C)
Hipertermfilos (T > 70C)
2. El pH.
Cada organismo tiene un rango de pH dentro del cual es posible el crecimiento
y normalmente posee un pH ptimo bien definido. La mayora crece en un
margen de pH de 2-3 unidades. La mayora de ambientes naturales tienen un
valor de pH entre 5-9 y los organismos con pH ptimos de este orden son los
ms comunes.
Los organismos que crecen mejor a bajo pH son llamados acidfilos, entre ellos
se encuentran algunos hongos y bacterias. De hecho existen algunas bacterias
que son incapaces de crecer a pH neutro y son llamados acidfilos estrictos.
Algunas de las bacterias acidfilas estrictas son de la especie de Thiobacillus,
tambin se presentan algunos gneros de
Termoplasma y Ferroplasma.
El factor crtico ms importante para el carcter acidfilo estricto es la
estabilidad
de
la
membrana
citoplasmtica,
que
requiere
de
altas
aw
equilibrio con una sustancia o solucin y la presin de vapor del agua pura a la
misma temperatura. Sus valores se encuentran entre 0 y 1.
El agua difunde desde una regin con una alta concentracin de agua (baja
concentracin de solutos) hasta una regin con menor concentracin de agua
(mayor concentracin de solutos) por el proceso denominado osmosis.
En la mayora de los casos el citoplasma de una clula tiene una concentracin
de solutos mayor que el medio, por lo que el agua tiende a entrar dentro de la
clula, dicindose que existe un balance de agua positivo. Cuando esto no
ocurre, existe una tendencia del agua a salir de la clula.
Los microorganismos marinos tienen una dependencia especfica del ion sodio,
tales microorganismos se llaman halfilos.
Estos requieren al menos algo de NaCl, pero la cantidad ptima de este varia
con el organismo, teniendo entonces los halfilos discretos (1-6% NaCl), los
halfilos moderados (6-15% NaCl) y los halfilos extremos (15-30% NaCl).
Se le llama organismos halotolerantes a aquellos que pueden soportar una
reduccin en su valor de actividad de agua, que crecen mejor en ausencia de
solutos aadidos. Pero algunos organismos se desarrollan con muy baja
actividad de agua y son de gran inters en la industria alimentario, donde los
solutos como la sal y la sacarosa son usados como conservantes para evitar el
crecimiento microbiano.
Los organismos capaces de crecer en ambientes con alta concentracin de
azcares se llaman osmfilos y los que son capaces de crecer en ambientes
muy secos se llaman xerfilos.
4. Oxigeno
Muchos microorganismos pueden vivir en ausencia de oxgeno. Existen en
nuestro planeta abundantes hbitat microbianos anxicos (libres de oxigeno)
en los cuales proliferan microorganismos procrticos.
Rango Taxonomico.
En la taxonoma bactereana,los niveles o rangos utilizados con
ahora
frecuencia son los siguientes:especies, generos, familias, ordenes, calses, y
phyla. Los nombres de los grupos microbianos de cada nivel o rango tienen
terminaciones (sufijos)caractersticos a este nivel.
Gnero : es un grupo bien definido de una o ms especies que esta
claramente separado de otros generos.
Cepa: es una poblacin de organismos que descienden de un unico organismo
o de un aislamiento en cultivo puro.
UNIDAD V
FISIOLOGA BACTERIANA
Podemos considerar a una clula como una unidad que cambia continuamente
al tiempo que realiza sus procesos vitales.
Las sustancias qumicas del ambiente a partir de las cuales se forma una clula
se llaman: nutrientes.
Anabolismo: proceso mediante el cual la clula se constituye a partir de
nutrientes sencillos obtenidos de su medio ambiente.
REQUERIMIENTOS DE CARBONO.
a) Las bacterias auttrofas utilizan el CO 2 como fuente de carbono con la
ayuda de la energa procedente de la luz solar (fotosinttica) o de loas
oxidaciones de compuestos inorgnicos (quimiosinteticos). Los
auttrofos obligados solo utilizan carbono inorgnico y su crecimiento
suele ser inhibido por compuestos orgnicos.
Los auttrofos facultativos
pueden utilizar carbono inorgnico u
orgnico, y los auttrofos asimilatorios utilizan bixido de carbono como
fuente principal de carbono.
Entre los microorganismos
quimiosinteticos, los tiobacilos pueden
obtener energa por oxidacin de tiosulfatos.
b) Las bacterias heterotrficas necesitan de compuestos inorgnicos
complejos como fuente principal de carbono, aunque puede en menor
grado emplear bixido de carbono. Las fuentes de energa pueden ser
fotosintticas o quimiosinteticos.
Los hetertrofos fotosintticos emplean compuestos orgnicos como
fuentes principales de carbono y donadores de hidrogeno. Necesitan de
vitaminas y algunos crecen aerbicamente en la oscuridad por oxidacin
de compuestos inorgnicos.
Los heterotrficos quimiosinteticos integran gran parte de las bacterias
estudiadas que se relacionan con la microbiologa general y aplicada. Un
ejemplo es la E. Coli esta especie tiene la capacidad de crecer en sales
inorgnicas y glucosa.
Los microorganismos necesitan para crecer de un medio que tenga carbono,
nitrgeno, energa e iones inorgnicos. La necesidad de azufre queda cubierta
para la mayor parte de microorganismos proporcionndoles el ion sulfato.
Fosforilacin de sustrato
La transformacin de glucosa a cido lctico en un medio que contenga
constituyentes celulares preformados, proporciona suficiente energa para
producir 20 gramos de clulas por mol de glucosa metabolizada.
La clave en el fenmeno energtico es el tipo de unin de fosfato al carbono.
La hidrlisis de una unin de fosfato semejante a la glucosa-6-fosfato, hace que
se liberen de 2,000 a 3,000 caloras, pero la hidrlisis del fosfato del primer
carbono del cido-1,3-difosfoglicrico y el fosfato del fosfoenolpiruvato hace
que se liberen de 8,000 a 10,000 caloras por mol.
A estas uniones de fosfato se les ha llamado ricas en energa. Todos los
sistemas biolgicos pueden transferir energa por medio de fosfato rico en
energa y por ciertas uniones de carbono-azufre. En consecuencia, la finalidad
de los sistemas energticos es redisponer las molculas para obtener uniones
de fosfatos ricas en energa o uniones de otro tipo.
Cuando el fosfato se encuentra a nivel de alta energa, puede transferirse a
ADP o AMP para formar, respectivamente, ATP o ADP.
Para utilizar la glucosa til en la liberacin de energa, se necesit ATP para que
las molculas fueran lo suficientemente reactivas. Al emplear ATP para formar
glucosa-6-fosfato y despus glucosa-1,6-difosfato, el equilibrio electrnico de la
molcula se modific al grado de que pudo desdoblarse fructosa-1,6-difosfato.
A pesar de que se emplearon dos fosfatos ricos en energa, se obtuvieron dos
fosfatos ricos en energa, se obtuvieron por ltimo cuatro, lo cual dio una
ganancia neta de dos fosfatos ricos en energa por molcula de glucosa en la
conversin de glucosa a lactato.
Fosforilacin oxidativa
Fotofosforilacin
En la fotosntesis, la luz comunica energa a los electrones en la clorofila. En
estas circunstancias los electrones son captados o recibidos por una molcula
que contiene hierro llamada ferredoxina. La ferredoxina transfiere los
electrones al fosfato de NADP y ulteriormente a un sistema de transporte
electrnico para generar ATP en forma semejante a lo que acontece en la
fosforilacin oxidativa.
5.4. OXIDACIONES BIOLGICAS
Muchas bacterias obtienen energa por reacciones denominadas oxidaciones.
Transferencia de hidrgeno (y electrones)
En la mayor parte de las oxidaciones biolgicas, hay paso rpido de electrones
de una molcula de sustrato, llamada donador de hidrgeno, a otra sustancia,
aceptor de hidrgeno. Entre el donador y el aceptor puede haber varios
portadores de hidrgeno, sustancias que aceptan fcilmente y liberan
hidrgeno (FAD, FMN, NAD, NADP).
Fermentacin
En la fermentacin, sustancias orgnicas sirven simultneamente como
aceptores y donadores de hidrgeno; en consecuencia, distintas partes de la
misma molcula cubren estas funciones. Dado que los productos incluyen
considerables cantidades de energa, el producto de energa disponible durante
la fermentacin es bajo.
Gluclisis
La forma mejor conocida para obtener energa a partir de la glucosa
anaerbicamente es por gluclisis, que se conoce como la va de MeyerhofEmbden. En las bacterias homolcticas la glucosa es metabolizada a cido
lctico, aunque pueden formarse cantidades nfimas de otros productos.
La cantidad de ellos puede aumentar al cambiar el pH. Con la levadura, el
piruvato no es convertido a lactato, pero en vez de ello es convertido a etanol y
a bixido de carbono. En uno u otro caso se obtiene una ganancia neta de dos
molculas de ATP.
En la fermentacin heterolctica, solamente actan o participan partes de la
va de Meyerhof-Embden, dado que faltan algunas enzimas.
Los microorganismos emplean una va distinta: la va del monofosfato de
hexosa, que tiene variaciones y se encuentra en varios microorganismos:
Eschericha coli, Pseudomona fluorescens, Azotobacter vinelandii, Bacillus
subtilis.
Leuconostoc mesenteroides oxida la glucosa-6-fosfato a 6-fosfogluconato, que
a su vez se descarboxila. La pentosa-fosfato resultante se desdobla en una
unidad de tres carbonos y una unidad de dos carbonos. Los productos finales
son lactato y etanol.
Respiracin
La oxidacin biolgica en que el oxgeno molecular es el ltimo aceptor de
hidrgeno se denomina respiracin, a veces llamada especficamente
respiracin aerobia. El producto, bixido de carbono, es la forma ms oxidada
del carbono, y en esta forma se produce la mayor cantidad de energa. Los
microorganismos autotrficos quimiosintticos obtienen energa al oxidar
substancias inorgnicas: hidrgeno gaseoso, cido sulfhdrico, azufre
elemental, hierro, tiosulfato, amonaco y nitritos.
5.5. ENZIMAS
Las enzimas son protenas y son producidas nicamente por clulas vivas.
Pueden ser extradas de las clulas estudiadas en vivo.
Una enzima es un catalizador orgnico que modifica el ndice o velocidad de
una reaccin qumica que permanece prcticamente inalterado al terminar la
reaccin. Su funcin es aproximar los sustratos y orientarlos en forma tal que
reaccionen lo ms cercano posible. Al formar un complejo con el sustrato nico
o mltiple, la enzima efecta una redistribucin de energa con los sustratos, y
en esta forma se necesitan cantidades menores de energa para iniciar la
reaccin.
Temperatura
pH
Inhibidores
Concentracin de reactivos
Enzimas extracelulares
La exoenzimas o enzimas extracelulares, son productos de secrecin celular o
catalizan reacciones en el exterior de la clula. Por lo regular son hidrolasas y
actan en la digestin de material alimentario complejo.
Enzimas intracelulares
Este tipo de enzimas son las que se encuentran en la clula y su actividad se
limita al interior de la misma.
UNIDAD VI
ESTUDIO DE LOS VIRUS Y RICKETTSIAS
6.1.
Los virus son los agentes infecciosos ms pequeos que contienen como
genoma slo una clase de cido nucleico (RNA o DNA). El cido nucleico se
encuentra encerrado en una cubierta protenica, la cual puede estar rodeada
por una membrana que contiene lpidos. Toda la unidad infecciosa se denomina
virin. Los virus son inertes en el medio extracelular, se replican slo en clulas
vivas y su parasitismo es a nivel gentico. El cido nucleico virial contiene la
informacin necesaria para programar a la clula husped infectada a que
sintetice varias macromolculas especficas del virus requeridas para la
produccin de la progenie viral.
La gama del husped para un virus determinado puede ser amplia o
extraordinariamente limitada. Se sabe que los virus infectan microorganismos
unicelulares como microplasma, bacterias y algas, y todas las plantas y los
animales superiores.
Mucha informacin acerca de las relaciones virus-husped se ha obtenido de
los estudios con bacterifagos, los virus que atacan a las bacterias.
DEFINICIONES EN VIROLOGA
Sintomatologa
combinara
el
ADN.
El
virus
inoculara
el
cdigo
gentico
Virus ADN
C.Adenovirus Los adenovirus son una familia de virus que infectan tanto humanos
como animales. Son virus no encapsulados de ADN bicatenario que pueden provocar
infecciones en las vas respiratorias, conjuntivitis, cistitis hemorrgica y gastroenteritis
A.Parvovirus
Son virus que contienen ADN que presentan una geometra cubica,
D.Herpesvirus
estrategia de replicacin,
Virus ARN
A.picornavirus Es una familia de virus infectivos para animales. Contienen un
genoma ARN monocatenario positivo
Calicivirus son virus infectivos que contienen un genoma ARN monocatenario
positivo
C.Reovirus es una familia de virus ARN de vertebrados que pueden afectar al
sistema gastrointestinal y a las vas respiratorias del husped.
Coronavirus son un gnero de virus ARN de vertebrados de Coronaviridae.
Son virus envueltos con un genoma de ARN de cadena sencilla con polaridad
positiva y simetra helicoidal
Retrovirus Son virus con envoltura que presentan un genoma de ARN
monocatenario de polaridad + y se replican de manera inusual a travs de una
forma intermedia de ADN bicatenario
6.4
con
capsmeros
Virus mixtos, o complejos: cpsidas con una zona icosadrica, seguida de otra
zona helicoidal. Estos virus infectan bacterias.
Atendiendo a la clula que infectan:
LPIDOS VIRALES
CARBOHIDRATOS VIRALES
Las cubiertas virajes contienen glucoprotenas. En contraste con los lpidos de
las membranas virales que se derivan de la clula husped, las glucoprotenas
de la cubierta estn modificadas por virus. Sin embargo, los azucares aadidos
a las glucoprotenas virales reflejan a menudo a la clula husped en la que
est creciendo el virus.
cromosomas,
cromosomas
Conteo de virus
A. Mtodos fsicos: Las partculas virales pueden ser contadas
directamente en el microscopio electrnico mediante su
comparacin con una suspensin estndar de partculas de ltex
de tamao semejante. Sin embargo, una preparacin
relativamente concentrada de virus es necesaria para este
procedimiento, y las partculas virales infectantes no pueden ser
distinguidas de las no infectantes.
B. Mtodos biolgicos:
El punto final de las investigaciones
biolgicas depende de la medicin de la muerte del animal, de la
infeccin del animal o de los efectos citopaticos en el cultivo de
tejido en una serie de diluciones del virus a prueba.
6.7 PURIFICACIN E IDENTIFICACIN DE LOS VIRUS
Formaldehido
El formaldehido destruye la efectividad viral al reaccionar con el cido nucleico.
Hombre
Hombre
Artrpod
o
Artrpod
o
Vertebra
do
infer ior
Vertebra
do
inferior
Artrpod
o
Hombre
Artrpodo
Hombre
Vertebr ad
o inferior
Artrpodo
6.12. RICKETTSIAS
Estas bacterias tiene forma de bacilo, o son cocoides o pleomrficas, presentan
paredes tpicas Gram negativas y carecen de flagelos. Todas las especies son
parsitas o mutualistas.
Carecen de la ruta glucoltica y no utilizan glucosa como fuente de energa,
sino que oxidan glutamato y productos intermedios del ciclo de los cidos
tricarboxlicos como el succinato.
a.
b.
c.
d.
Rickettsia
Rickettsia
Rickettsia
Rickettsia
ricketsii
conorii
tsutsugamushi
akari
Datos clnicos