Guia de Laboratorio de Parásitos Emergentes

Facultad de Salud
Escuela de Bacteriologa y Laboratorio Clnico

Programa Acadmico de Bacteriologa y Laboratorio Clnico
Gua de laboratorios de parsitos emergentes, re-emergentes y exticos
CONTENIDO
1. Laboratorio 1: Diagnstico de Protozoarios intestinales y tisulares.
1.1. Protozoarios
1.2. Generalidades del diagnstico de las infecciones por protozoarios
1.2.1. Protozoos intestinales
1.2.2. Cultivo y aislamiento
1.2.3. Control de calidad
1.3. Morfologa de protozoarios intestinales que infectan humanos
1.3.1. Morfologa microscpica de Coccidias intestinales
1.3.2. Morfologa microscpica de Flagelados y Cromistas
1.3.3. Morfologa microscpica de Sarcodinos e Incertae sedis
1.4. Protozoos tisulares y hemticos
1.4.1. Diagnstico microscpico de los protozoos tisulares y hemticos
1.4.1.1. La gota gruesa y el extendido
1.4.1.2. Evaluacin de los frotis para el diagntico de la leishmaniasis
1.4.2. Morfologa microscpica de protozoos tisulares y hemticos
2. Laboratorio 2: Diagnstico de Helmintos: Cstodos, Digneos y Nematodos.
2.1.
Helmintos
2.2. Generalidades del diagnstico de las infecciones por helmintos
2.2.1.
2.2.2.
2.2.3.
2.3.
2.3.1.
2.3.2.
2.3.3.
2.3.4.
2.3.5.
2.3.6.
2.3.7.
Helmintos intestinales
Helmintos tisulares
Informe de laboratorio de los helmintos
Morfologa de helmintos que infectan humanos
Morfologa de los estadios diagnsticos de nematodos

Morfologa de los estadios diagnsticos de platelmintos
Morfologa de los adultos de nematodos
Morfologa de los adultos de platelmintos
Morfologa microscpica de Digeneos
Morfologa microscpica de Cstodos
Morfologa microscpica de Nematodos
3. Laboratorio 3: Laboratorio de tcnicas.
Escuela de Bacteriologa y Laboratorio Clnico|Gua para Laboratorio de Parsitos

Emergentes, Re-emergentes y Exticos. Parasitologa
Normas bsicas de seguridad en el laboratorio

En las prcticas de laboratorio se trabajar con agentes causantes de enfermedades
en humanos; por lo tanto, es importante tener en cuenta la siguiente premisa: TODA
muestra fresca que se trabaje dentro del laboratorio est CONTAMINADA hasta
que no se demuestre lo contrario. Por ende, es necesario que para evitar
inconvenientes se trabaje siguiendo detalladamente las recomendaciones de
bioseguridad.
Antes de empezar a trabajar es indispensable reconocer, entender y aplicar las
principales normas de bioseguridad. A continuacin, se dan a conocer las normas que
deben cumplir los estudiantes.
Vestuario
Ingresar al laboratorio con la bata puesta y abotonada.

Utilizar siempre zapatos cerrados.
NO utilizar vestimenta corta ni joyas y mantener el cabello recogido.
Comportamiento
Utilizar los elementos de Bioseguridad pertinentes (Bata, guantes,
gafas, tapabocas, etc.)
NO fumar, comer, beber o mascar chicle
NO pipetear con la boca.
NO correr, gritar, empujarse o causar pnico.
NO arrojarse lquidos o reactivos.
Est PROHIBIDO el uso de telfonos celulares y computadores
porttiles dentro del laboratorio.
Utilizar los elementos del laboratorio nicamente dentro de este.
Conocer la ficha tcnica de un reactivo previa manipulacin.
NO utilizar los equipos del laboratorio sin conocer las instrucciones de
manejo.
En caso de embarazo NO manipular sustancias txicas
Informar inmediatamente de cualquier accidente o derrame ocurrido en
el laboratorio.
Bioseguridad
Est PROHIBIDO manipular el microscopio con los guantes puestos.
NO es permitido manipular las manijas de las puertas con los guantes
puestos
NO tocarse el rostro, los ojos, la nariz, la boca, el cabello o la piel en
general con los guantes puestos.
Manejo de equipos y Materiales
Cada estudiante es responsable de su rea de trabajo, por lo tanto
debe realizar aseo de la misma ANTES y DESPUS de la prctica con
Etanol al 70%.
Cada estudiante es responsable de su microscopio, por lo tanto debe
revisarlo cuidadosamente ANTES de iniciar la prctica e informar si
presenta irregularidades.

Al terminar las prcticas, cada estudiante debe realizar aseo (etanol al

70%) de las siguientes partes del microscopio: platina, pinza de la
platina, tornillos macromtrico y micromtrico.
NO trabajar lejos de la mesa de laboratorio, no colocar objetos en el
borde
Verificar que el material de vidrio est en buenas condiciones en el
momento de recibirlo y devolver el material astillado o quebrado a la
persona responsable.
Depositar el material de vidrio roto en el lugar apropiado para tal fin.
Reportar al profesor el material/equipo: quebrado, extraviado o daado
Desechar los guantes usados NICAMENTE en la bolsa roja.
Cumplir con el programa de vacunacin establecido por la Universidad,
para el ingreso a los laboratorios.
Seguir los procedimientos establecidos por el profesor, para el manejo
de preparados y micropreparados.
Si sus manos han entrado en contacto con la muestra, debe lavarse las
manos con agua y jabn.
NO introducir ningn elemento a la boca.
Identificar la ubicacin de la ducha lavaojos, extintores y salidas de
emergencia.
En caso de emergencia, de aviso al profesor o persona encargada del
laboratorio y siga el protocolo para obtener ayuda.
Introduccin.
La parasitologa es el rea de la zoologa encargada del estudio de las relaciones
simbiticas parasitarias que se presentan entre organismos pertenecientes a
diferentes especies, en las cuales uno de los organismos, el parsito, usa al otro, el
hospedero (tambin llamado hospedador), como su sitio de residencia
(medioambiente), su fuente de alimento y en algunos casos puede incluso haber una
dependencia a nivel fisiolgico. De esta relacin, el parsito saca provecho para su
alimentacin, sobrevivencia y reproduccin, y el hospedero puede verse afectado en
mayor o menor grado, con lo cual pueden alterarse algunas de sus funciones
biolgicas (crecimiento, tasa reproductiva y/o supervivencia).
Los humanos, al igual que muchos otros seres vivos de los reinos Animal y Vegetal,
hemos establecido relaciones de tipo parasitario con organismos pertenecientes a los
reinos Monera, Chromista, Protista, Hongo y Animal; incluso con los virus tenemos
relaciones de tipo parasitario, de hecho, estos constituyen uno de los ejemplos
extremos de este tipo de relacin. Sin embargo, el trmino Parsito se emplea, en un
espectro menos amplio, bsicamente para describir organismos eucariotas, uni o
multicelulares, de los reinos Chromista, Protista y Animal.
Los parsitos que afectan al hombre se cuentan entre las principales causas de morbimortalidad en los pases tropicales y sub-tropicales. En las ltimas dcadas del siglo
XX con la aparicin del VIH-SIDA, la masificacin de las transfusiones y los trasplantes
de rganos, el uso indiscriminado de antibiticos (antibacterianos, antifngicos y
antiparasitarios), as como los fenmenos conducentes al cambio climtico han
facilitado la aparicin de nuevas entidades (Emergentes), entre las que se cuentan las
Microsporidiosis y las infecciones por Cyclospora cayetanensis y Cryptosporidium sp.,
o el resurgimiento de enfermedades que se crea estaban controladas en algunas

reas (Re-emergentes), como la TBC y la Malaria, por citar algunos ejemplos. El
personal mdico y mdico-asistencial (enfermeras, bacterilogos, microbilogos
clnicos, laboratoristas) debe conocer cules son los posibles agentes parasitarios
presentes en diferentes circunstancias e individuos y estar en capacidad de realizar
una correcta toma y manipulacin de la muestra para obtener un resultado confiable, y
establecer qu tcnica se ha de emplear para ofrecer un diagnstico acertado de las
enfermedades parasitarias. De este modo se logra una atencin oportuna, eficiente y
adecuada del paciente.
1. Laboratorio 1: Diagnstico de Protozoarios intestinales y tisulares.
1.1. Protozoarios
El hombre es hospedero de varias especies de protozoarios, algunos actan como
comensales, otros lo hacen como parsitos obligados y unos cuantos ms son
parsitos oportunistas. Dependiendo de su localizacin, el tiempo de evolucin y el
cuadro clnico del paciente se debe decidir cul es la muestra ptima a utilizar para
diagnosticar todas aquellas infecciones, que se sospecha, son causadas por
protozoos. Igualmente, dependiendo de la muestra, hay diferentes tipos de pruebas
que el laboratorio debe aplicar para determinar la presencia del patgeno, bien sea de
manera directa o indirecta. Sin embargo, en la mayora de los casos el diagnstico de
las infecciones por protozoos tiene como base la determinacin de la presencia del
agente y su correcta identificacin con base en sus caractersticas morfolgicas, por lo
tanto, una gran parte del diagnstico recae en el examen directo, con o sin
coloraciones especiales. En otros casos, como en las infecciones por Toxoplasma
gondii y Trypanosoma cruzi, son de gran utilidad las pruebas indirectas, aquellas que
miden indirectamente la presencia del parsito al establecer el nivel de respuesta
inmune del paciente ante la presencia del patgeno, bien sea determinando la
presencia de anticuerpos o la respuesta inmune celular.
Entre los protozoos que afectan al hombre encontramos algunos de localizacin
intestinal, bien en intestino delgado o grueso, mientras otros son hemticos o tisulares.
Entre estos ltimos, algunos se localizan en piel, otros en diferentes rganos y unos
ms pueden incluso ser multi-sistmicos. Entre los parsitos intestinales se
encuentran Cryptosporidium sp. y Giardia duodenalis, los cuales, por su prevalencia,
generan alta morbilidad, principalmente en poblacin infantil y en edad escolar.
Adems, Cryptosporidium y los Microsporidios estn asociados con diarreas crnicas
en pacientes con inmunocompromiso, incluidos VIH+. De los parsitos tisulares son de
gran importancia T. gondii y T. cruzi. El primero puede ocasionar cuadros clnicos
agudos o crnicos en fetos, recin nacidos y pacientes con diferentes tipos de
inmunosupresin, mientras el segundo generalmente se detecta en pacientes con
cuadros crnicos; en ambos casos se puede comprometer la vida del paciente o
generar alta morbi-mortalidad. Tambin son importantes Leishmania, por el efecto
desfigurante de sus lesiones en piel y mucosas, adems de la mortalidad infantil en los
cuadros viscerales, y Plasmodium por la posibilidad de malaria severa, malaria
complicada y mortalidad tanto de adultos como de nios.
1.2. Generalidades del diagnstico de las infecciones por protozoarios.

1.2.1. Protozoos intestinales: Las parasitosis intestinales son una de las principales
causas de morbilidad en poblacin infantil. Entre los protozoos ms frecuentemente
informados como causantes de infeccin intestinal en humanos se encuentran
Iodamoeba buetschlii, Endolimax nana y varias especies de Entamoeba, en el grupo
de las amibas; Giardia duodenalis, Chilomastix mesnili y Trichomonas hominis entre
los flagelados; Balantidium coli como el nico ciliado y Blastocystis sp. como el nico
Chromista. Entre las coccidias intestinales se encuentran Cyclospora cayetanensis,
Cystoisospora (Sin. Isospora) belli, Sarcocystis bovihominis, S. suihominis y varias
especies de Cryptosporidium.
Las amibas, los flagelados, B. coli, C. belli y Blastocystis se diagnostican usualmente
por examen microscpico de muestras de materia fecal en directo con solucin salina
y coloracin temporal con lugol (Figura 1) y concentracin o enriquecimiento por
sedimentacin o flotacin. En el caso de las coccidias intestinales se emplean tcnicas
de coloracin cido alcohol resistente como Ziehl-Neelsen y Kinyoun, o la coloracin
de Safranina (Figura 2). Sin embargo, el examen morfolgico no puede en ocasiones
diferenciar las especies involucradas (especialmente en los gneros Entamoeba sp, y
Cryptosporidium sp.), por lo cual se requieren tcnicas moleculares. La definicin de la
especie es importante para poder establecer la fuente de infeccin y las medidas de
control.
Figura 1. Para el diagnstico por examen coprolgico es necesario realizar el montaje de dos soluciones homogenizadas
de la muestra de materia fecal, una con solucin salina y la otra con lugol. Al realizar este procedimiento debe verificarse
que se pueda leer un texto impreso a travs de la preparacin. Si queda muy gruesa ser imposible discernir entre
artefactos y formas parasitarias. Si queda muy delgada es posible que no haya suficiente muestra y los parsitos estn
ausentes en la preparacin.
Imagen tomada de: http://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticProcedures/stool/microexam.html
Figura 2. Para el diagnstico de las coccidias intestinales se recomiendan las coloraciones AAR (Ziehl-Neelsen y
Kinyoun) (derecha) y de Safranina (izquierda).
Imagen tomada de: http://www.cdc.gov/dpdx/cryptosporidiosis/index.html

1.2.2. Cultivo y aislamiento: En algunos casos se recomienda la realizacin de

cultivos tanto para protozoos intestinales como tisulares, pero no estn al acceso de
todos los pacientes pues usualmente se realizan en laboratorios especializados. Estos
cultivos pueden ser xnicos, axnicos o en cultivos celulares (para los intracelulares
obligados) y permiten obtener un mayor nmero de organismos para realizar con ellos
la identificacin morfolgica, as como otras pruebas diagnsticas o de genotipificacin
molecular. Tambin se puede hacer cultivo in vivo o inoculacin en animales de
laboratorio, pero igualmente esto solo se logra en laboratorios de referencia y a unos
costos no asequibles para muchos de los pacientes.
1.2.3. Control de calidad
Los laboratorios requieren de controles internos y externos para asegurar la calidad
del diagnstico. Para ello se remiten muestras conocidas por la entidad encargada de
realizar los controles externos pero desconocidas para el personal del laboratorio.
Estas muestras deben ser evaluadas y los resultados entregados a la entidad
acreditadora. Cuando se realiza este tipo de procedimientos se deben tambin
implementar las tcnicas de coloracin de extendidos de materia fecal, bien sea con
Hematoxilina Frrica o Colorante Tricrmico de Wheatley, consideradas estndares de
oro del diagnstico coprolgico.
1.3. Morfologa de protozoarios intestinales que infectan humanos.
(Las caractersticas detalladas que identifican los diferentes protozoarios intestinales,
hemticos y tisulares deben ser estudiadas en los textos complementarios sugeridos
en clase). Cabe recordar que los protozoarios intestinales presentan los estadios de
trofozoito, quiste, ooquiste y varias morfologas en Blastocystis. En el caso de las
amibas, el trofozoito tiene una forma irregular, cuando la materia fecal est fresca se
puede apreciar la movilidad de sus seudpodos y se debe identificar la morfologa de
sus ncleos, pues estos varan entre los diferentes gneros y especies. Los quistes de
las amibas varan en su forma, su tamao, su nmero y la apariencia de los ncleos.
Las coccidias intestinales: se diferencian por la morfologa y tamao de sus
ooquistes, as como por diferencias en la captacin del colorante cuando se realiza la
coloracin AAR. De las coccidias Cystoisospora belli es la nica que puede ser
diagnosticada solo con base en sus caractersticas morfolgicas en examen directo.
Cryptosporidium y Cyclospora cayetanensis deben ser diagnosticadas por medio de
coloraciones especiales, las cuales no se incluyen en el examen coprolgico de rutina,
por lo cual el mdico tratante debe hacer la solicitud expresa de la coloracin en la
orden que se enva al laboratorio. Se debe tener en cuenta que la mayora de expertos
recomienda la realizacin de al menos dos exmenes, usualmente tres, en das no
consecutivos para lograr una mayor sensibilidad en el examen coprolgico.
Los flagelados intestinales: presentan trofozoito y quiste, con excepcin del gnero
Trichomonas, en el cual solo se encuentra el estadio de trofozoito. Los flagelados en
general tienen forma piriforme en estadio de trofozoito y cuando estn viables se
aprecia el movimiento de los flagelos. Los quistes varan en tamao y forma y son
fcilmente distinguibles unos de otros.
El Chromista: Blastocystis es bastante pleomrfico tanto en tamao (vara entre 5 m
y 40 m), como en sus mltiples formas (vacuolar o de cuerpo central, granular,
multivacuolar, ameboide y quiste, entre otras), de las cuales la ms fcilmente

reconocible es la forma de cuerpo central, en la cual hay una gran vacuola en el centro
del trofozoito que deja un muy delgado halo de citoplasma en el cual se distribuyen los
ncleos.
1.3.1. Morfologa microscpica de Coccidias intestinales
PROTOZOOS INTESTINALES: Coccidias
Nombre: Cryptosporidium sp
Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:
Nombre: Cyclospora cayetanensis

Estadio?:
Tcnica:
Nombre: Cyclospora cayetanensis

Estadio?:
Tcnica:
Nombre: Cystoisospora belli

Estadio?:
Tcnica:

1.3.2. Morfologa microscpica de Flagelados y Cromistas

PROTOZOOS INTESTINALES: Flagelados y Cromistas
Nombre: Giardia duodenalis

Estadio?:
Tcnica:
Nombre: Giardia duodenalis

Estadio?:
Tcnica:
Nombre: Blastocystis sp
Estadio?:
Tcnica:
Nombre: Blastocystis sp
Estadio?:
Tcnica:

1.3.3. Morfologa microscpica de Sarcodinos e Incertae sedis

PROTOZOOS INTESTINALES: Sarcodinos e Incertae sedis
Nombre:
Entamoeba
histolytica/E.
dispar/E. moshkovskii
Estadio?:
Tcnica:
Nombre:
Entamoeba
histolytica/E.
dispar/E. moshkovskii
Estadio?:
Tcnica:
Nombre: Urbanorum sp
Estadio?:
Tcnica:

1.4.
Protozoos tisulares y hemticos: Estos protozoos requieren procedimientos
de toma de muestras ms invasivos, tcnicas ms complejas y, en la mayora de los
casos, el diagnstico recae ms en las tcnicas indirectas (determinacin de
anticuerpos). En los casos en que se pueden emplear tcnicas directas se requiere el
apoyo de coloraciones para lograr un buen diagnstico. Para los protozoos hemticos
tambin se recurre a las coloraciones para facilitar la identificacin especfica con base
en las caractersticas morfolgicas de los diferentes estadios.
Los flagelados tisulares: presentan las formas de amastigote, epimastigote,
promastigote y tripomastigote. Hay diferencias entre los gneros Leishmania y
Trypanosoma en cuanto a cules de estas formas estn presentes en su ciclo de vida.
Para la realizacin del examen directo se recurre frecuentemente a la coloracin de
Giemsa, con la cual se resaltan las caractersticas morfolgicas de los organismos.
Esta misma coloracin se emplea para los parsitos sanguneos y para colorear
taquizoitos de Toxoplasma gondii obtenidos por aislamiento en cultivo o en ratn.
Las leishmaniasis son enfermedades zoonticas producidas por parsitos del gnero
Leishmania y transmitidas por insectos vectores hematfagos. Las leishmaniasis
comprenden un amplio espectro que incluye infecciones subclnicas (asintomticas o
inaparentes), localizadas (lesiones en piel) y diseminadas (cutnea, mucosa o
visceral). Afecta a ms de 88 pases en el mundo y se estima que anualmente 1.5
2.0 millones entre nios y adultos desarrollan la enfermedad. Aproximadamente 350
millones de personas estn en riesgo de adquirir la enfermedad y ms de 12 millones
estn actualmente infectadas. Las manifestaciones clnicas de la enfermedad estn
asociadas con la especie del parsito y, por consiguiente, con el rea endmica.
Existen ms de doce especies diferentes de Leishmania que producen enfermedad en
humanos.
Leishmania es un parsito unicelular obligado que sobrevive intracelularmente en
clulas fagocticas (principalmente macrfagos) del hospedero. Es trasmitido a
animales mamferos y al hombre (hospederos) a travs de la picadura de insectos
vectores infectados (principalmente Phlebotomus en el Viejo Mundo y Lutzomyia en el
Nuevo Mundo). Las formas promastigotes del parsito (flageladas), presentes en el
insecto, son inoculadas en la piel durante la picadura. En el hospedero infectan los
macrfagos de la piel y se transforman en amastigote (aflagelado). Los amastigotes se
reproducen dentro del macrfago. En el sitio de inoculacin puede desarrollarse una
lesin y/o, dependiendo de la especie, el parsito puede migrar a otros tejidos del
cuerpo (mucosa o vsceras).
El diagnstico presuntivo de la leishmaniasis se basa en la presentacin clnica de la
enfermedad, aspectos epidemiolgicos relacionados con la transmisin del parsito, y
en algunos casos, en el resultado de la prueba intradrmica de leishmanina o
Montenegro. Sin embargo, el diagnstico definitivo solo se logra a travs de la
visualizacin del agente etiolgico de la enfermedad. El examen directo permite hacer
el diagnstico inmediato visualizando la forma intracelular, amastigote, en un
extendido de una muestra tomada de una lesin representativa. El aislamiento o
recuperacin de formas repetitivas flageladas, promastigotes, se realiza inoculando
muestras clnicas en medios de cultivo selectivos para tripanosomas.
El cultivo es un mtodo especfico y constituye el estndar de oro de los mtodos de
diagnstico para leishmaniasis y es utilizado en segunda instancia para el diagnstico,

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despus del examen directo. Es til no solo en el diagnstico clnico sino tambin en
investigacin, permitiendo la posterior identificacin de la especie utilizando
electroforesis de isoenzimas, anticuerpos monoclonales o tcnicas moleculares, y la
determinacin in vitro de la sensibilidad del parsito a medicamentos. La evaluacin de
una biopsia histopatolgica de lesin representativa tambin permite la deteccin del
parsito en tejidos, pero es menos sensible que los dos mtodos antes descritos. La
deteccin y aislamiento de los parsitos tambin puede realizarse mediante la
inoculacin de un aspirado de la lesin en el hmster dorado, pero esta prueba es de
ms difcil realizacin, por lo cual es poco utilizada.
Existen herramientas diagnsticas indirectas, basadas en respuesta inmune, tales
como pruebas serolgicas y pruebas intradrmicas, que contribuyen a definir el
diagnstico clnico y el tratamiento, pero que no confirman la presencia del parsito;
son de gran utilidad para el desarrollo de estudios epidemiolgicos.
La malaria o paludismo: es una enfermedad transmitida a travs de la picadura de
mosquitos Anopheles infectados, es considerada un problema de salud pblica en
varios pases del mundo, con elevados casos de mortalidad. Entre los sntomas que se
presentan se destacan fiebre, cefalea y escalofro, que suelen aparecer 10 a 15 das
despus de la picadura del vector. Si no se recibe tratamiento oportuno, la malaria
puede poner en riesgo la vida del paciente en corto tiempo, especialmente por malaria
complicada y malaria cerebral. Entre las medidas de control de la enfermedad se
encuentran el diagnstico y tratamiento rpido y eficaz, el uso de toldillos impregnados
de insecticida y la fumigacin con insecticidas de accin residual que buscan controlar
los vectores.
La malaria es causada por parsitos del gnero Plasmodium. En el humano es
producida principalmente por cuatro especies: P. falciparum, P. vivax, P. malariae y P.
ovale. Recientemente se ha descrito en Asia la infeccin por P. knowlesi, una especie
que infecta monos, y ocasionalmente se informan otras especies zoonticas.
Plasmodium es transmitido de humano a humano a travs de la picadura del mosquito,
de madre a hijo congnitamente, por transplante de rganos o va transfusin
sangunea.
El ciclo de vida del parsito comprende dos fases, la asexual que se desarrolla en el
humano y la sexual en el invertebrado. La infeccin inicia cuando el mosquito infectado
inyecta esporozoitos a travs de la saliva al torrente sanguneo del humano, estos
alcanzan el hgado, donde desarrollan su ciclo extraeritroctico. Los merozoitos
liberados de los esquizontes tisulares alcanzan el torrente sanguneo y dan inicio al
ciclo eritroctico. Dado que no se cuenta con una vacuna que prevenga la infeccin,
gran parte de las medidas de control de la enfermedad estn dirigidas al diagnstico
oportuno y al tratamiento adecuado. El diagnstico es crucial para decidir el
tratamiento antimalrico, para el cual no slo se tiene en cuenta la especie causal sino
tambin el grado de resistencia de los parsitos en la zona.
1.4.1. Diagnstico microscpico de los protozoos tisulares y hemticos
El diagnstico oportuno de malaria es crtico dado que la infeccin se puede complicar
a medida que los parsitos se van multiplicando en el tiempo. La identificacin
microscpica es el principal mtodo diagnstico para malaria y permite establecer la
especie de Plasmodium y el recuento parasitario, criterios importantes para el

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tratamiento y control del paciente. Cada una de las especies que infectan al humano
tiene caractersticas morfolgicas que permiten el diagnstico diferencial.
Las pruebas de diagnstico rpido para malaria (PDRs), surgen como una alternativa
a la gota gruesa, en situaciones en que el uso de la microscopa es limitado o poco
factible. Las PDRs diagnostican malaria al reconocer antgenos especficos del
parsito presentes en la sangre del paciente y algunas de ellas permiten la
diferenciacin entre especies de manera clara (pruebas de cuatro bandas), pero tienen
limitaciones para establecer la carga parasitaria y siguen siendo positivas varias
semanas post-tratamiento, lo que dificulta el seguimiento al paciente. Por ello, se
recomienda usarlas simultneamente con la GG.
Para el diagnstico de la leishmaniasis se emplea como estrategia inicial el examen
microscpico de frotis realizados con material tomado del borde activo de la lesin,
posterior a su tincin con Giemsa. Esta tcnica tiene como inconvenientes que puede
ser poco sensible, requiere buen entrenamiento para su anlisis y no permite
identificar la especie de Leishmania. Existen tcnicas moleculares y pruebas
inmunocromatogrficas, con mayor sensibilidad.
1.4.1.1. La gota gruesa y el extendido
El examen de Gota Gruesa (GG) sigue siendo considerado el estndar de oro y la
mejor tcnica para el diagnstico de la malaria en las zonas endmicas (Figuras 3 y 4).
Las tcnicas moleculares presentan una mayor sensibilidad y especificidad, pero el
acceso a ellas es limitado en las zonas rurales, no solo por su no disponibilidad sino
tambin por sus costos. La GG se considera una tcnica de concentracin, en la cual
se puede apreciar una cantidad de sangre representativa para establecer la presencia
de formas de los parsitos causantes de malaria (Plasmodium sp), tripanosomiasis
americana y africana (Trypanosoma sp), filariasis linfticas y apatgenas (Wuchereria
bancrofti, Brugia sp y Mansonella), babesiosis (Babesia sp) y, excepcionalmente,
leishmaniasis visceral (Leishmania sp) en pacientes inmunocomprometidos. Esta
tcnica se realiza generalmente en conjunto con un Extendido en capa fina (Ext.), este
permite ver la morfologa tpica de las diferentes especies de Plasmodium y relacin
entre el parsito y la clula hospedera, con lo cual es muy til para la determinacin de
la especie; mientras que la GG es til para la determinacin especfica y permite
detectar pacientes con bajas cargas parasitarias. Cuando no es posible establecer la
especie en la GG, bien porque el paciente ha tomado medicamentos que alteran la
morfologa del parsito o por la sospecha de malarias mixtas, se recurre al Ext. para
definir la especie.
Figura 3: Para elaborar la gota gruesa debe tenerse en cuenta que es la lmina portaobjetos la que se lleva
hacia la gota de sangre para ser tomada del dedo.
(Tomado de:http://emergenmedhb.blogspot.com.co/2015/06/malaria-o-paludismo-enfermedad-delos.html)

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Figura 4: En algunas reas del mundo se hacen la GG y el Ext. en la misma lmina. En nuestro
medio lo usual es emplear lminas independientes, realizando dos GG en una misma lmina.
(Tomado de: https://practicasdehematologiaycitologia.wordpress.com/2014/11/12/practicano10-preparacion-de-gota-gruesa/)
1.4.1.2. Evaluacin de los frotis para el diagntico de la leishmaniasis.

Se debe realizar la toma de la muestra a partir del borde de la lesin ms reciente
(Figura 5) que le haya aparecido al paciente. Es deseable que esta lesin est libre de
coinfeccin por bacterias. Se deben realizar tres frotis con el material recuperado en
una misma lmina portaobjetos (Figura 6) y al menos tres lminas por paciente. El
material puede ser obtenido con un bistur o una jeringa de insulina (Figuras 5 y 7).
Este material tambin puede ser usado para cultivo, inoculacin de animales o
pruebas moleculares
Figura 5. Foto de una lesin de leishmaniasis cutnea. Para el examen directo, la incisin se realiza
con la hoja de bistur en el borde de la lesin
Figura 6. Frotis extendidos de forma circular en la lmina portaobjeto

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Figura 7. Toma de aspirado a partir de la lesin con jeringa de tuberculina
1.4.2. Morfologa microscpica de protozoos tisulares y hemticos

PROTOZOOS TISULARES
Nombre: Microsporidios
Estadio?:
Tcnica:
Nombre: Leishmania sp
Estadio?:
Tcnica:

14
Nombre: Trichomonas sp
Estadio?:
Tcnica:
Nombre: Toxoplasma gondii

Estadio?:
Tcnica:
PROTOZOOS HEMTICOS
Nombre: Babesia sp
Estadio?:
Tcnica:
Nombre: Trypanosoma cruzi

Estadio?:
Tcnica:

15
Nombre: Plasmodium falciparum

Estadio?:
Tcnica:
Nombre: Plasmodium falciparum

Estadio?:
Tcnica:
Nombre: Plasmodium vivax

Estadio?:
Tcnica:
Nombre: Plasmodium vivax

Estadio?:
Tcnica:

16
2. Laboratorio 2: Diagnstico de Helmintos: Cstodos, Digneos y Nematodos.

2.1. Helmintos
El hombre es hospedero de varias especies de helmintos, tanto gusanos planos
(Platelmintos) como redondos (Nematodos). Entre los primeros pueden infectar al
hombre Cestodos y Digeneos. En muchos casos el hombre acta como hospedero
definitivo y en otros lo hace como hospedero intermediario. Algunos de estos gusanos
son de transmisin fecal oral y son adquiridos a travs de manos, alimentos y aguas
contaminados, otros pueden penetrar activamente por piel y tambin los hay de
transmisin vectorial. El hombre puede actuar como nico hospedero para algunos de
ellos mientras otros son zoonticos. Aunque las infecciones con nmeros pequeos de
estos organismos generalmente cursan asintomticas, cuando su nmero aumenta
pueden causar cuadros clnicos con patologas variables e incluso fatales. En otros
casos, el estadio larvario es el que causa la patologa, no el adulto, y la respuesta
inmune puede participar en la patologa.
Algunos de estos helmintos presentan ciclos de vida sencillos, mientras que para otros
son complejos, con migracin visceral antes de llegar a su localizacin definitiva o
usando varios hospederos intermediarios antes de alcanzar al humano. Al igual que
con los protozoarios, la localizacin de los helmintos en el cuerpo del individuo
infectado y el cuadro clnico que este presenta son determinantes para decidir cul es
la muestra ptima a utilizar para diagnosticar las infecciones helmnticas. Algunas
veces el diagnstico se puede hacer por mtodos directos, pero en otros casos se
requiere, no solo de mtodos indirectos, sino que tambin es necesario hacer una
correlacin de los resultados de laboratorio con la historia epidemiolgica y clnica del
paciente y de los resultados de otros exmenes complementarios como pueden ser
ciertas pruebas imaginolgicas. Hay diferentes tipos de pruebas que el laboratorio
debe aplicar para determinar la presencia del patgeno, bien sea de manera directa o
indirecta; sin embargo, como con la mayora de los protozoos, el diagnstico de estas
infecciones tiene como base la determinacin de la presencia del agente y su correcta
identificacin con base en sus caractersticas morfolgicas; por lo tanto, una gran parte
del diagnstico es directo.
Entre los helmintos que afectan al hombre encontramos algunos de localizacin
intestinal, bien en intestino delgado o grueso, mientras otros son hemticos o tisulares.
Entre estos ltimos algunos se localizan en piel, otros en diferentes rganos y unos
ms pueden incluso ser multi-sistmicos. Entre los parsitos intestinales se
encuentran Ascaris lumbricoides y Trichuris trichiura, los cuales por su prevalencia,
generan alta morbilidad, principalmente en poblacin infantil y en edad escolar. De otro
lado, Strongyloides stercoralis est asociado a cuadros complicados en pacientes
transplantados, inmunosuprimidos y HTLV-1+. De los parsitos tisulares son de gran
importancia Onchocerca volvulus que se localiza en tejido subcutneo y otras filarias
de localizacin linftica, el primero ocasiona cuadros de ceguera en un gran nmero
de personas, especialmente en frica, mientras las otras ocasionan un cuadro
incapacitante conocido como elefantiasis.
2.2. Generalidades del diagnstico de las infecciones por helmintos
Las parasitosis intestinales por helmintos se cuentan entre las principales causas de
morbilidad en poblacin infantil. Entre los nematodos ms frecuentemente informados
como causantes de infeccin intestinal en humanos se encuentran Ascaris

17
lumbricoides, Trichuris trichiura, Enterobious vermicularis y Strongyloides stercoralis,

este ltimo, dependiendo de las condiciones del hospedero puede ocasionar cuadros
de diseminacin e hiperinfeccin que llegan a ser fatales. Otros nematodos son de
localizacin en tejido subcutneo (Onchocerca volvulus) o linftico (Wuchereria
bancrofti, Brugia sp) asocindose el primero a cuadros de dermatitis y ceguera y los
segundos a elefantiasis. De las tenias o cestodos intestinales, los ms frecuentes son
Hymenolepis nana, H. diminuta, Taenia saginata, T. solium y T. asiatica. Fasciola
hepatica, Paragonimus sp, Clonorchis sinensis, Schistosoma mansoni, S.
haematobium y S. japonicum son los digneos ms frecuentemente asociados a
infeccin en humanos, siendo de localizacin tisular. Para otros helmintos, el hombre
sirve de hospedero intermediario y los cuadros clnicos pueden ser incapacitantes e
incluso fatales, entre estos parsitos se encuentran varias especies de Echinococcus,
de las cuales en Colombia se encuentran E. vogeli y E. oligarthrus, y el estadio larvario
de T. solium, que ocasiona cuadros de cisticercosis con diferentes localizaciones,
siendo de gran importancia su ubicacin en sistema nervioso central
(neurocisticercosis).
2.2.1. Helmintos intestinales
Las infecciones por helmintos, al igual que las infecciones por protozoarios, dependen
de la localizacin del parsito para definir el tipo y nmero de muestras y el tipo de
prueba que se pueda emplear. Para aquellos de localizacin intestinal, la muestra
ideal es materia fecal en examen seriado. El nmero de muestras vara entre 3
(Ascaris, Trichuris) y 10 (Strongyloides,Taenia) dependiendo del parsito involucrado.
Para las infecciones por oxiuros (Enterobius vermicularis) y Taenia sp se puede tomar
una impresin de la regin perianal con cinta pegante transparente (Mtodo de
Graham).
2.2.2. Helmintos tisulares
Para los helmintos de localizacin pulmonar (Paragonimus) as como para los que
hacen migracin por este rgano en su ciclo de vida (uncinarias, Ascaris y
Strongyloides) puede ser til tomar muestras seriadas de esputo. Tanto Paragonimus
como los de localizacin en vas hepticas y biliares (Fasciola y Clonorchis) tambin
pueden diagnosticarse por medio de examen coprolgico. En algunos casos pueden
ser usadas muestras como aspirados duodenales, de bilis o lavados broncoalveolares
para el diagnstico de estos helmintos.
Los helmintos de localizacin linftica (filarias como Wuchereria y Brugia) se
diagnostican por medio de muestras de sangre en las cuales se deben buscar las
microfilarias. Para Onchocerca volvulus la muestra de eleccin es una bopsia de piel
tomada en las zonas correspondientes a los huevos planos (escpula y cresta ilaca o
cerca de los ndulos subcutneos). Otras helmintiasis son ms difciles de
diagnosticar y se requiere emplear tcnicas indirectas, que permitan detectar
anticuerpos en los pacientes infectados. Sin embargo, en algunos casos es necesario
tener en cuenta no solo los resultados de los exmenes de laboratorio si no tambin
los resultados de pruebas imaginolgicas (RMN y TAC), los antecedentes
epidemiolgicos y los signos y sntomas que presenta el paciente para poder realizar
un diagnstico certero. Entre estas infecciones se encuentran la neurocisticercosis, la
equinococosis y la fascioliasis. Entre las pruebas para deteccin de anticuerpos se
encuentran ELISA, IB o WB (inmunoblot o western blot), dot-ELISA, hemoaglutinacin,

18
entre otras. En algunos casos se emplean antgenos crudos para las pruebas
indirectas, pero se presentan con frecuencia problemas de reaccin cruzada y falsos
positivos con otras infecciones; para minimizar estas reacciones cruzadas se han
estandarizado tcnicas que emplean antgenos purificados en columnas de sefarosa
con lectina de lenteja (cisticercosis) o antgenos recombinantes (Toxocara,
Onchocerca, Echinococcus), lo cual ha asegurado una mayor especificidad de las
pruebas diagnsticas.
2.2.3. Informe de laboratorio de los helmintos

Es importante recordar que las infecciones por nematodos (Ascaris, Trichuris y
uncinarias) deben informarse con recuento de los huevos, bien sea por preparacin o
por gramo de materia fecal y que la tcnica recomendada por la OMS como la de
eleccin para cuantificar los huevos de helmintos es la de Kato-Katz. En el caso de las
infecciones por cestodos o digeneos no se hace recuento, excepto para los casos de
esquistosomiasis.
2.3. Morfologa de helmintos que infectan humanos.
(Las caractersticas detalladas que identifican los diferentes helmintos parsitos de
humanos deben ser estudiadas en los textos complementarios sugeridos en clase).
2.3.1. Morfologa de los estadios diagnsticos de nematodos
Cabe recordar que los helmintos intestinales pueden diagnosticarse por medio de la
indentificacin de huevos, larvas, fragmentos o adultos que se encuentran presentes
en la materia fecal, sangre, esputo u otras muestras. En el caso de los helmintos
intestinales, el diagnstico se basa principalmente en la identificacin de los huevos,
cuya morfologa vara segn la especie involucrada. Una excepcin es Strongyloides
stercoralis, que se diagnostica generalmente por la identificacin de las larvas.
Los huevos de Ascaris poseen una estructura caracterizada por la presencia de unas
proyecciones globosas llamadas mamelones en su cubierta externa (algunos huevos
pueden carecer de ella y se les llama decorticados) y una sola masa central o
blastmero, a partir de la cual se formar la larva. En el caso de Trichuris, los huevos
tienen forma de barril y en los extremos poseen abultamientos traslcidos que se
conocen como tapones polares. Los huevos de uncinarias (Ancylostoma y Necator)
son indiferenciables entre los dos gneros y presentan una cubierta externa delgada y
la masa de clulas sale con su proceso de divisin ya adelantado en estado de
mrula, por lo que se aprecian varios blastmeros. Los huevos de oxiuros tienen forma
de letra D o grano de arroz y se encuentran con la larva ya casi totalmente formada en
su interior.
Las filarias linfticas se diagnostican por la presencia de microfilarias en sangre
perifrica y la diferenciacin de especie se basa en la morfologa que incluye
presencia o no de vaina y la distribucin de los ncleos a lo largo del cuerpo,
principalmente. El diagnstico de Toxocara canis se basa en la presencia de
anticuerpos, bien en suero o humores vtreo y acuoso, y en otros exmenes
complementarios. Las infecciones por Strongyloides se detectan por coprolgico
seriado de al menos siete muestras, pero son ms sensibles las tcnicas de embudo
de Baerman y cultivo en agar. En algunos casos de diseminacin se puede detectar en
esputo, orina o en biopsias de tejido. En esta infeccin se pueden apreciar tanto las
larvas filariformes como las rabditiformes y se debe hacer el diferencial con larvas de
19
uncinarias. Ocasionalmente se pueden apreciar hembras parasticas y huevos en

materia fecal.
2.3.2. Morfologa de los estadios diagnsticos de platelmintos
La infeccin por Taenia, Hymenolepis o Dipylidium se diagnostica por presencia de
huevos en materia fecal, pero para Taenia tambin es til la cinta de Graham ya que
los progltidos al salir activamente por el ano dejan un rastro de huevos en la regin
perianal. Los huevos de Taenia se caracterizan por la presencia de una cubierta
gruesa radiada (embrioforo) que en su interior contiene la oncosfera, con sus tpicos
ganchos. Los huevos de Hymenolepis nana se caracterizan por presentar una forma
ligeramente ovalada, una pared delgada y filamentos polares mientras que los de H.
diminuta son algo ms grandes y redondos y carecen de filamentos polares. Los
huevos de Dipylidium se aprecian en paquetes conocidos como cpsulas ovgeras, las
cuales continenen entre 12 y 26 huevos. En todos los casos se aprecia la oncosfera
en el interior de los huevos.
Los huevos de Fasciola son ovalados, operculados y de color mbar, mientras que los
de Paragonimus son mucho ms pequeos, cafs, operculados y presentan un
engrosamiento de su pared en el extremo contrario al oprculo. Los huevos de las
diferentes especies de Schistosoma son carctersticos. En S. mansoni son ovalados
con un extremo ms aguzado que el otro y tienen una espina lateral subterminal
grande; en el caso de S. haematobium con ahusados en ambos extremos y tienen una
espina terminal, y los de S. japonicum son ms pequeos, redondeados y tienen una
pequea espina subterminal lateral, a veces inconspicua.
2.3.3. Morfologa de los adultos de nematodos
Los gusanos adultos de Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura y Enterobius
vermicularis presentan dimorfismo sexual, siendo las hembras ms grandes que los
machos. Ascaris se caracteriza por su gran tamao (hembras hasta 32 cm y machos
hasta 27 cm), su color entre crema y rosado y los machos por su extremo posterior
curvo y la presencia de espculas. Los adultos de Trichuris presentan el extremo
anterior mucho ms delgado que el posterior y los machos un gran curvamiento de su
extremo caudal. Los adultos de Enterobius presentan aletas ceflicas y el macho su
extremo caudal curvo y espculas. En el caso de los adultos de uncinarias hay que
identificar la presencia de placas cortantes (Necator) o dientes (Ancylostoma) en la
cavidad oral, tanto en machos como en hembras; los machos adems presentan la
bursa copulatoria o copulatriz en el extremo caudal, la cual es caracterstica de cada
especie, y espculas. Los adultos de Toxocara se encuentran en el intestino de perros
y gatos. Sus huevos al salir al ambiente se encuentran no embrionados y cuando
embrionan se vuelven infectivos tanto para su hospedero definitivo como para muchos
otros vertebrados que sirven de hospederos paratnicos. Los gusanos se caracterizan
por la presencia de aletas ceflicas y labios en la regin anterior y dimorfismo sexual,
siendo las hembras ms grandes que los machos (15 cm vs 8 cm).
2.3.4. Morfologa de los adultos de platelmintos
Los progltidos de Taenia en estado grvido presentan un tero con ramificaciones
conspicuas, cuyo nmero vara entre T. solium (hasta 12 ramificaciones) y T. saginata
(ms de 12 ramificaciones). Los adultos de los digeneos presentan las ventosas oral y
20
ventral (llamada tambin acetbulo), el intestino en Fasciola hepatica se presenta

como ciegos ramificados mientras que en Clonorchis sinensis son sencillos. La
morfologa y disposicin de los ovarios, testculos y glndulas vitelgenas vara segn
la especie de digeneo. F. hepatica presenta un adelgazamiento en la zona anterior
llamado cono ceflico, el cual muestra espinas en esa porcin del tegumento.
2.3.5. Morfologa microscpica de Digeneos
HELMINTOS INTESTINALES Y TISULARES
Nombre: Paragonimus mexicanus

Estadio?:
Tcnica:
Nombre: Schistosoma mansoni

Estadio?:
Tcnica:
Nombre: Clonorchis sinensis

Estadio?:
Tcnica:

21
Nombre: Fasciola hepatica

Estadio?:
Tcnica:
2.3.6. Morfologa microscpica de Cstodos
Nombre: Echinococcus sp
Estadio?:
Tcnica:
Nombre: Taenia
Estadio?:
Tcnica:

22
Nombre: Diphyllobotrium latum

Estadio?:
Tcnica:
Nombre: Taenia
Estadio?:
Tcnica:
2.3.7. Morfologa microscpica de Nematodos
Nombre: Strongyloides stercoralis

Estadio?:
Tcnica:
Nombre: Toxocara canis

Estadio?:
Tcnica:

23
Nombre: Uncinarias
Estadio?:
Tcnica:
Nombre:
Estadio?:
Tcnica:

24

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Nombre: Plasmodium falciparum

Nombre: Plasmodium falciparum

Nombre: Plasmodium vivax

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2. Laboratorio 2: Diagnstico de Helmintos: Cstodos, Digneos y Nematodos.

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ventral (llamada tambin acetbulo), el intestino en Fasciola hepatica se presenta

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Nombre: Fasciola hepatica

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Nombre: Diphyllobotrium latum

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