Laboratorio de Microbiologa, 2016

Laboratorio de Microbiologa
Sebastin Meneses Alcayaga
E-mail: smenesesalyaga@gmail.com
Universidad Santo Tomas sede La Serena, Chile

RESUMEN

MATERIALES Y REACTIVOS

Esta experiencia de laboratorio tiene como

objetivo reconocer el material de laboratorio,
la preparacin de este y su debida
esterilizacin, tambin como aprender sobre
los medios de cultivos, las tcnicas de
siembra e inoculacin de microorganismos, su
enriquecimiento y como aislarlos.

Palabras claves: esterilizacin, medio de

cultivo, inoculacin, microorganismos.

INTRODUCCION
La microbiologa es el estudio de los
microorganismos, seres vivos pequeos que
no sean visibles a simple vista. Estn
presentes en todas las superficies exteriores
de los utensilios, en el aire, en el agua, en los
alimentos y en las cavidades internas del
cuerpo que tienen conexin con el exterior
(tracto respiratorio y tracto digestivo). Los
microorganismos no se encuentran aislados,
sino que su nmero suele ser muy elevado
por unidad de volumen o por unidad de
superficie, por consiguiente, son muy
abundantes,
Adems
suelen
formar
agrupaciones de varios microorganismos que
interaccionan entre s: unos pueden usar
como alimento los productos residuales de
otros, o pueden ser atacados por los vecinos
que compiten por el mismo alimento. Estas
interacciones dan lugar a sucesiones de
microorganismos: la microflora de una
superficie, de un alimento o del interior de una
cavidad abierta del cuerpo puede variar con el
tiempo.

Alcohol 70% v/v.

Agua destilada.
Papel absorvente.
Matraces erlenmeyer.
Balanza analtica.
Placa de petri.
Agua estancada.
Asa de loop.
Mechero bunsen.
Incubadora.
Estufa.
Autoclave.
Tubos de ensayo.
Agitador vrtex.
Tapones de algodn.
Glucosa, peptona y
levadura.
Agar
Agar McConkey.

extracto

de

PROCEDIMIENTO
Limpieza de rea de trabajo:

Esparcir el alcohol 70%v/v por el

mesn y con papel ir secando.

Esterilizacin de material:

Introducir agua en la autoclave, luego

introducir las muestras y encender.

Laboratorio de Microbiologa, 2016

Medio de cultivo Saccharomyces c.,

siembra e inoculacin:

Calcular gramos de glucosa, peptona y

extracto de levadura que se utilizar
en 230mL para luego disolverlos en
dicho volumen.
Adicionar 20mL en dos tubos de
ensayo, 10mL y 10mL, 140mL en un
matraz.
Por separado pesar los gramos
calculados de agar y disolverlos en
50mL, hervir para luego adicionarlos a
la capsula Petri, esterilizar con el
autoclave y almacenar.
Luego de un tiempo de espera, se
debe tomar una pequea porcin de
una cepa que creci en el agar no
esterilizado y traspasarlo al matraz y al
tubo mediante tcnica asptica por
distintos tipos de siembra con la ayuda
de un asa de loop.

Enriquecimiento
microorganismos.

Para el Medio de cultivo Saccharomyces c.

compuesto de 7g/L de glucosa, 3,5g/L e
peptona y 1,5g/L e extracto de levadura.

aislamiento

g Glucosa : 7g x 230mL / 100mL = 1,61g

g Peptona: 3,5g x 230mL/ 100mL= 0,805g
g Extracto de levadura: 1,5g x 230mL/
100mL = 0,345g
g de Agar: Agar 1.5% p/v: 0,75 g
g de Agar McConkey: 50g x 100mL /
1000mL =5g
Tomamos una colonia de un agar con
microorganismos y se traspas a un tubo de
ensayo, tambin se repiti el procedimiento
con otro tubo de ensayo, un matraz y en el
agar que tenan el medio de cultivo. Pasado el
tiempo se observaron los microorganismos de
la misma cepa de la que se traspas en cada
tipo de siembra.
Se prepar el medio de cultivo selectivo con
agar McConkey y se realiz una siembra
estra.

de

Para el enriquecimiento de un
microorganismo en especfico se debe
crear el medio de cultivo selectivo
hecho de agar McConkey. Calcular los
gramos de agar y disolverlos en 50mL,
hervir para luego adicionarlos a la
capsula Petri, esterilizar con el
autoclave y almacenar.
Luego tomar un inoculo de agua
estancada con la ayuda de un asa de
loop y aplicando la tcnica asptica
traspasarlo a la placa petri mediante el
mtodo de siembra por estras por
agotamiento.

CONCLUSIONES:
Es vital mantener la limpieza en la zona de
trabajo y la esterilizacin del material para que
las siembras realizadas de una determinada
cepa sean exitosas. Los microorganismos
crecieron en los medios de cultivo ya que
cumplan con ciertas caractersticas, como ser
fuente de carbono, nitrgeno, elementos
trazas y vitaminas. Utilizando la tcnica de
asepsia se logr eliminar los microorganismos
externos y permiti en algunos casos lograr
aislar una cepa.

RESULTADOS
Con el uso del alcohol al 70% se logra
disminuir la carga bacteriana de la zona del
trabajo y con el uso del autoclave se logr la
eliminacin total de los microorganismos en el
material, dejndolo listo para trabajar.

REFERENCIAS

Brock, Biologia de los microrganismos,

decima edicion, 2009.
Manual de laboratorio microbiologa.