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Universidad Nacional
Autnoma de Mxico
F A C U L T A D DE CIENCIAS
T E
para
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D O C T O R
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de
C I E N C I A S
1984
universidad Nacional
Autnoma de Mxico
"
FACULTAD DE CIENCIAS
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Qr.e
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D O C T O R
EN
el
Ttulo
de
C I E N C I A S
1984
A MI PADRE.
A LA MEMORIA DE MI MADRE.
A MIS HIJOS
AURELIO Y MIGUEL ANSEL.
DE Vioiophlla.
DEL
TUTO NACIONAL DE I N V E S T I G A C I O N E S
NUCLEARES,
E IMPRESO CON
N D I C E
PAG.
I
II
III
IV
VI
VII
RESUMEN
INTRODUCCIN
MUTAGENESIS
NO DISYUNCIN
1Q
24
MATERIAL Y MTODOS
47
RESULTADOS
54
DISCUSIN
59
CONCLUSIONES
65
BIBLIOGRAFA
69
R I: S U M V. S
Los metales pesados se encuentran en forma natural en el medio ambiente y algunos de ellos juegan un papel importante en el metabolismo celular. Como es bien sabido, su con
centracin en el medio y en los tejidos de vegetales y anima,
les ha aumentado debido al -desarrollo industrial en todo el
mundo, aumentando el riesgo a que la humanidad est expuesta,
que se expresa como: teratopnesis, carcinognesis y mutagnes is.
La importancia que tiene evaluar el incremento de las tasas de mutacin en los organismos expuestos a los mutge_nos qumicos, ha motivado el implemento de experimentos en numerosos laboratorios, para la determinacin de la actividad
mutagnica de los metales pesados. Las investigaciones reaH
zadas con dicha finalidad, han demostrado gradualmente que en los sistemas biolgicos probados se inducen cambios signi^
ficativos en el material gentico.
Fin el presente trabajo se prob el efecto mutagnico
que algunos metales pesados, a saber el cromo, el cadmio, el
plomo, el zinc y el arsnico, tienen en las clulas germinales de los adultos de Vioicphita mzianogabtan.. Se utiliz un
sistema de cruzamientos que permiti valorar en forma simultnea en los dos sexos los efectos genticos producidos por
las sales de los elementos mencionados, lns que se administraron inyectndolos a las hembras v a machos adultos. Los -
11
I.
I N T R O D U C C I N
aK, 1973).
Debido al desarrollo tecnolgico, la presencia de mutgenos en el medio ambiente se ha incrementado en todo el mun
do considerablemente, por lo que, para cumplir con los principios propuestos para su evaluacin, ha sido necesario desa
rrollar programas de investigacin que permiten determinar la actividad mutagnica de los compuestos qumicos que se
sospeche que puedan interactuar con el material gentico
(De
Serres, 1976), como es el caso de los carcingenos investiga_dos, que en un elevado porcentaje poseen tambin la propie_dad de ser mutagnicos.
de
FIG. 1.
10
en
% a
u
4-
2-
Di
IX.
10
DIAS
estados de desarrollo
espermatozoides
espermtidas
espermatocitos
espermatogenias
II. MUTAGENESIS
Al cambiar la secuencia o el nmero de nucletidos en una molcula de cido nucleico, ocurre una mutacin y la alteracin fenotipica en el individuo portador de la misma pasa a algunos de sus descendientes, de una generacin a otra,
indefinidamente. Las mutaciones se agrupan en dos categoras,
de acuerdo al nmero de genes que involucran; si es a un solo gene, mutaciones puntuales y si es a grupos de genes, abe_
rraciones cromosraicas.
Las mutaciones puntuales, son el resultado de la alter
cin inducida en la secuencia de bases de un gene dentro de
la molcula de ADN, pueden originarse como consecuencia de la sustitucin de bases por transversin o transicin, as como por el corrimiento de la secuencia de nucletidos o
bien, por la eliminacin o adicin de bases. Estos eventos mutagnicos, ocurren tambin durante la replicacin del ADN
y algunos dependen de la recombinacin o de los mecanismos de la reparacin celular (Radman t a\_., 1973)
Las alteraciones cromosmicas como las inversiones y las
translocaciones se deben al rearreglo de grupos de genes en
un mismo cromosoma, o por el cambio de su ubicacin a otros
cromosomas y las duplicaciones a las adiciones de genes.
III. NO DISYUNCIN
VIOO-
10
V. SISTEMA REPRODUCTOR DE
Durante-
el primer estadio larvario son esferoidales y estn coloca_das muy cerca de la pared del cuerpo, dentro del quinto segmento abdominal.
Sistema reproductor femenino
El sistema reproductor del imago femenino, situado en la regin ventral posterior del abdomen, est constituido
11
por un par de ovarios ramificados, un sistema de conductos eferentes; tres rganos reservorios y dos glndiilas acceso_rias. El ovario adulto consta de un racimo e 10 a 20 ovari
las tubulares paralelas, que se mantienen unidas por una va
na peritoneal. Los ovarios conducen, por sus respectivos ovi_
ductos cortos, a un oviducto comn que termina en el tero,
que a su vez comunica con la vagina, que se abre al exterior
atravs de la vulva, situada entre los gonpodos constituyen
do un ovipositor contrctil. En la cmara genital o vaginal
desembocan, adems, un receptculo seminal, un par de espermatecas y dos glndulas accesorias.
En cada una de las ovariolas se distingue un germinarlo
anterior y un vitelario posterior. El primero est envuelto
por una tnica propia y se divide en tres regiones morfolg^
camente distintas. Dentro de la regin anterior se encuentra
un cordn de ovogonias que se dividen sucesivamente por mito_
sis. Cada ovogonia se divide formando dos clulas hijas, una
de las cuales constituye la denominada clula del cordn,
mientras que la otra se diferencia en un citoblasto cuya des_
cendencia en la cuarta generacin, origina un conjunto constituido por un vulo y 15 clulas nodrizas. En la segunda r
gifin del germinario se forma una envoltura folicular alrededor de cada conjunto de 16 clulas. En la tercera regin se
encuentran los folculos totalmente formados.
El vitelario, que constituye la mayor parte de la ovariola, presenta cmaras dispuestas en hilera que contieuen
un vulo cada una.
El desarrollo del folculo ovrico en V. me.ta.noga&te.>i -
12
comprende una serie de 14 estados consecutivos, que se i n i cian en las 16 clulas de la cmara del germinarlo y finalizan en el ovocito primario terminal, totalmente desarrollado
dentro de la ovariola. Para distinguir los 14 estados se toman en cuenta las siguientes caractersticas citolgicas:
1) El tamao y localizacin de las cmaras, 2) el tamao dal
ovocito en relacin al de las clulas nodrizas, 3) la citol
ga del ovocito y de las clulas nodrizas, 4) la relacin en
tre los volmenes del citoplasma y del ncleo en las clulas
nodrizas, 5) los detalles morfolgicos de los ncleos de las
clulas nodrizas en los folculos, 6) la presencia o ausen_cia de las clulas perifricas, 7) la altura del epitelio fo_
licular y 8] el grado de desarrollo de algunas estructuras,
como la pared que separa las clulas nodrizas del ovocito, el corion, el micrpilo y los apndices dorsales.
Las caractersticas de cada estado de la ovognesis son
las siguientes:
Estado 1.- En el pice de la regin germinal las clulas
se dividen en dos clulas hijas, una de estas repite el proceso, mientras que la otra realiza 4 divisiones simultneas
para producir un conjunto de 16 clulas hijas, que forman un
acumulo germinativo en la regin posterior del germinario, donde a veces es imposible distinguir las clulas hijas unas
de otras, pero frecuentemente la ms posterior tiene la cromatina ms condensada y fuertemente teida. Esta es la clula que se transforma en ovocito. Una vez que el acumulo ha -
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sido rodeado por una capa de clulas foliculares es expulsado del germinario y se transforma en el primer folculo.
Estado 2.- Los cromosomas de las 15 clulas nodrizas
se tien ligeramente.
Estado 3. - En este estado los cromosomas que se dispersan en el nucleoplasma, estn ms compactos que en el estado
anterior, por lo que se tien intensamente. El ncleo del
ovocito en el estado 3 es el primero en mostrar un nuclolo
positivo a la tincin de Feulgen.
Estado 4.- El contenido nuclear de las clulas nodrizas
presenta regiones positivas al colorante Feulgen, de las que
algunas estn unidas entre s por bandas finas de citoplasma.
Estado 5.- Los folculos estn caracterizadas por un
grupo de las clulas nodrizas, algunas de las cuales son muy
semejantes a las clulas del estado 4 y otras se asemejan a
las clulas del estado 6.
Estado 6.- La cromatina del ncleo de las clulas nodri
zas pertenecientes a esta etapa se tie intensamente y tiene
una consistencia esponjosa y amorfa. El folculo es esfrico.
Estado 7.- El folculo del estado 7 es el primero que se presenta en forma elipsoidal. Las clulas nodrizas y el
ovocito son de tamao semejante.
Estado 8.- Se caracteriza por un ovocito cuyas dimensi
nes son significativamente mayores que el promedio de tamao
de las clulas nodrizas.
Estado 9.- El ovocito ocupa de un cuarto a un medio del
volumen total del folculo, inicindose el desarrollo de las
14
clulas perifricas.
Estado 10.- En este estado las clulas perifricas son
ms notables, y el ovocito alcanza un tamao equivalente a
ms de un medio, pero menos de tres cuartos del volumen del
folculo.
Estado TI.- El ovocito alcanza cerca de tres cuartos
del volumen total del folculo y una pared epitelial separa
por completo a las clulas nodrizas del ovocito.
Estado 12.- El ovocito est prximo a alcanzar su mximo desarrollo, observndose los ncleos de las clulas nodri
zas densamente teidos, lo mismo que en la etapa anterior.
Estado 13.- Los ncleos de las clulas nodrizas tienden
a degenerar en este estado. El micr6pilo se completa, mien_tras los apndices dorsales alcanzan cierta longitud.
Estado 14.- El ovario completa su crecimiento mientras
el ovocito primario presenta los apndices dorsales comple_tos.
Sensibilidad especifica de los diferentes estados de la ovog
nesis.
Los dos estados ms estudiados son el 7 y si T4; el estado 7 es el ms avanzado en las hembras recin emergidas
del pupario, mientras que el estado 14 corresponde al ovocito corionado presente en las hembras despus del segundo da
de vida del imago.
Mediante el control de las condiciones en que ocurre la
oviposicin y limitando el nmero de huevecillos colectados
15
el
16
17
la
18
19
gar a partir de las espermatogenias que dan finalmente ori_gen a los espermatozoides, a travs de los cambios citogenticos que caracterizan a las etapas premeiticas, a las divi^
siones meiticas y a la espermiognesis.
El estudio de la gametognesis en los estados que prec
den a las espermatogenias presenta muchos problemas; para
1)KQ&oph.la. el ms crtico es la escasez de datos citomorfol^
gicos. Se tienen datos citolgicos sobre la existencia de 10
a 14 clulas primordiales, que est de acuerdo con la eviden
cia gentica en favor de 13 clulas tronco-progenitoras de los espermatozoides (Mulleret aK, 1954; Puro, 196*). Asimismo,
se tienen datos sobre la produccin progresiva en el nmero
de clulas tronco en relacin con la edad del macho maduro,
proceso que no se ha complementado con datos citolgicos
(Abrahamson y Friedman, 1964; Harris, t929; Kishin, 1955; Luers, 1956; (Muller etaj.., 195*; Puro, 1964).
El nico evento establecido en el testculo del macho maduro, consiste en la ocurrencia de cuatro divisiones sin .crnicas y dicotmicas en las espermatogonias que originan un quiste de 16 espermatocitos primarios (Pontecorvo, 1941) ,
que posteriormente dan origen a un conjunto de 64 espermatozoides. Con respecto a la secuencia de los eventos anterio_res a las divisiones definitivas que ocurren en el testculo,
dada la ausencia de informacin bien fundamentada, se asume
que algunas clulas provenientes de la reserva de espermatogonias se separan ms o menos al azar, iniciando las divisi
nes definitivas, quedando an sin respuesta el problema de la renovacin de las espermatogonias.
20
21
Luning (1952a, b, c.) y de Auerbach (1945). Los cambios en la frecuencia e mutacin registrada en perodos sucesivos despus de la irradiacin, la reduccin de la fecundidad en
el macho irradiado (Hoenigsberg ert K , 1961), que se manifiesta
al mismo tiempo que los primeros entrecruzamientos (Auerbach,
1945), as como la mayor incidencia de mutacin (Ivs, i960 y
Sobis y Tates, I961) y los resultados obtenidos en el mtodo diseado por Kishin (1955), para obtener muestras en las que
predominan clulas en algunas de las etapas especficas de la espermatognesis, mediante el tratamiento por irradiacin
de algunos de los estados del desarrollo larvario o pupal, permite agrupar las clulas en orden de radiosensibilidad d
creciente, medida segn la frecuencia de mutaciones, para e^
tablecer la siguiente clasificacin (Muller, 1959); espermtidas y espermatocitos primarios, 2) espermatozoides en la hem
bra inseminada, 3) espermatocitos secundarios, 4) espermatoz^i
des maduros del primer da, 5) espermatozoides del segundo da 6) espermatogenias.
Las causas determinantes de esta diversidad tan notable
en la radiosensibilidad de los estados sucesivos de la espeja
raatognesis est dada por varios factores, ya que el grado de dao potencial que se puede inducir est en funcin de - las condiciones prevalentes durante la irradiacin. La tra_duccin del dao potencial en alteraciones genticas que se
puedan detectar, corresponde a la poreiln de dao que no fue
22
23
ser comparados. La forma de exposicin puede hacerse por diferentes vas, de acuerdo a las necesidades que se presenten:
las moscas adultas o las larvas pueden ser alimentadas con los mutgenos adicionndolos a la comida o a una solucin de
glucosa que puede sustituir al alimenta normal durante varias
horas. Alternativamente pueden ser expuestas a los qumicos
voltiles para que los inhalen o bien pueden ser inyectadas
con relativa facilidad.
La capacidad de los mutgenos para provocar mutaciones
a nivel cromosmico puede tambin determinarse experimentalmente utilizando diversos sistemas de cruzamiento entre indi_
viduos portadores de marcadores especficos que permiten la
identificacin en la descendencia de los individuos proponientes de procesos no disyuncionales, rupturas cromos Snicas,
prdidas de cromosomas, translocaciones e inversiones.
germinal, se considera como un sistema de prueba muy completo. Sin embargo, los resultados negativos que se obtienen
con algunos compuestos no los exoneran de poseer actividad mutagnica si no existen datos provenientes de otros sistemas
de prueba tanto de procariontes como de eucariontes. Por el
contrario, cada respuesta positiva en V. mzanoga.Atz.fi puede
ser considerada como un dato de alto valor de prediccin.
24
impuls su desarrollo y aplicacin industrial. El descubrimiento de la energa nuclear marc dramticamente el principio de una era, la Era Atmica, en la que sus complicaciones
estn an en la etapa inicial de desarrollo en favor de la -
25
humanidad. El incremento en el uso de la energa nuclear para fines pacficos ha creado un gran inters con respecto a
los metales, entre los que se encuentran en primer trmino los metales pesados, debido a que poseen propiedades especficas que los convierten en elementos importantes de transfe_
rencia de calor, resistentes a la corrosin y de baja absorcin de neutrones, lo que hace su uso indispensable en la
construccin de los reactores experimentales y de potencia.
En los seres vivos existen varios procesos fundamenta_les en los que intervienen los iones metlicos, facilitando
o contraanlo los procesos bioqumicos especficos al nivel
celular. Por ejemplo, un proceso relativamente sencillo es aquel en el que los iones metlicos cargados positivamente atraen a las partes negativas de otras molculas tales como
las protenas, actuando as los metales como uniones que man
tienen asociadas a una o dos molculas diferentes, o bien a
dos o ms partes de una macromolcula.
Estas uniones pueden mantener juntas a las subunidades
que forman una riqueza multimolecular en los tejidos, como 'en el hueso o en las fibras musculares, o tambin pueden
afectar la estructura tridimensional de una larga molcula lineal.
Si los iones metlicos se encuentran firmemente unidos
a las protenas, pueden entonces participar activamente en el metabolismo. En las metaloenzimas el metal est sostenido
estrechamente por varios grupos de aminocidos del
26
ra de las clulas, que tienden a excretar el sodio y el calcio y a acumular potasio y magnesio y otros metales, pero ge_
neralmente en cantidades menores (trazas). Los metales traza
encontrados dentro de las clulas siempre estn asociados
con funciones catalticas y son requeridos por las metaloenzimas y las protenas reductoras, para la formacin de su
centro activo o como cofactores que forman un puente de
unin entre la enzima y el sustrato.
Algunos de los metales pesados que se encuentran en ia
naturaleza son esenciales para el metabolismo celular, pero
si estn en concentraciones superiores a las requeridas fi
27
28
rimentacin (Hueper, 1961; Maltoni, 197^; Leonard y Lawerys, I98O). Fradkin et_ aj_. , (1975) y Biancl e_^ al. (1983), reportaron la
induccin de transformacin celular"-tu vtn.o con la administracin de cromo. En diferentes sistemas biolgicos se han observado diversos efectos citognicos tales como, las mutaciones puntuales en bacterias
1975).
(Herman y Speck,
L.B., 1954). HufF et_ aj_. , (1964), demostraron la interaccin del cromo con el ARN del virus del mosaico del tabaco.
Hn VLcLa fiaba, Gla'ss (1956) observ la produccin de
aberraciones cromosmicas debidas a la asministracin de sales del metal, lin clulas embrionarias de hamster la adminis^
tracin de dicromato de potasio provoca la formacin de aberraciones cromosmicas del tipo de "gaps", rompimientos e in_
tercambios (Tsuda y Kioto. 1977).
29
30
sultados para la prueba de intercambio de cromtidas herma_nas fueron positivos, pero no significativos.
Cadmio.
El cadmio es un metal raro en la naturaleza que se ob_tiene principalmente como producto secundario en la refina_cin de otros metales como el zinc y el plomo. Su presencia
en el ambiente se debe principalmente a su empleo en la in_
dustria, encontrndosele por esta razn en concentraciones elevadas, en las aguas de desecho industrial, en los polvos
y en los aerosoles que se producen en las minas y en las fun
diciones, as como en la obtencin y el reprocesamiento de metales galvanizados, pigmentos, bateras, plsticos y aleaciones. Este elemente se encuentra presente en forma natu_ral en casi todos los alimentos. Sus niveles de concentracin
normal pueden aumentar por el uso de fungicidas de frtil^
zantes, contribuyendo asimismo a la elevacin de su concentracin natural su disolucin en los contenedores y utensilios p?ra la elaboracin de alimentos. El tabaco puede conte_
ner tambin concentraciones altas del metal debido al uso de
pesticidas que lo contienen.
Los primeros reportes sobre los efectos txicos del cad
mi datan de 1858
xicolgicos se han estudiado ampliamente (Friberg et^ K , 197^) Los resultados obtenidos con animales de experimentacin
muestran que el cadmio es teratognico en el ratn (Schrceder
31
de
32
la prstata (Kpl ing y Waterhouse, 1967) producidos por este me_t a l . La produccin de carcinomas se ha relacionado con las elevadas concentraciones de cadmio en el hgado, rion y san
gre que se encontraron en los pacientes estudiados (Morgan, 1970).
El cadmio puede modificar el metabolismo de los cidos
nucleicos por la propiedad que t i e n e de incorporarse a ellos
(Goodgame et_ a\_., 1975),
errores durante su s n t e s i s
(Friedman y
mento de la actividad ribosmica en clulas de rion, como consecuencia de l a administracin de cadmio. En Vio&ophila. mzta.no gattzi
Sorsa y Pfeifer (1973) , utilizando la prueba de l e t a l e s recesivos ligados al sexo obtuvieron resultados negativos en
el laboratorio, al administrar el metal a VfioAophtta. mzla.no-
por va o r a l , adicionndolo al medio de c u l t i v o . La frecuencia de no disyuncin de los cromosomas X no se increment al t r a t a r larvas del mismo organismo con clururo de
cadmio
s i se aumento experimentalmente la
frecuencia de no disyuncin.
En clulas de hamster chino
1976).
Al analizar los linfocitos de los trabajadores expues_tos a la inhalacin de cadmio (Bauchinger et^ aJL , 1976), se obser
varn aberraciones de tipo cromatdico.
Andersen ejt al^. , (1983) y Andersen y Rtynne (1983), ob_servaron una reduccin significativa de la longitud cromosmica coma consecuencia de la administracin de cadmio a linfocitos humanos n VJLKO, lo que indica que el metal acta como un potente inhibidor del huso acromtico.
34
Plomo.
El plomo es uno de los metales que el hombre conoce des_
de la antigedad ms remota. Se encuentra en la naturaleza en forma de once compuestos.
En la corteza terrestre est en una proporcin de 15 gramos por tonelada. Fue el primer metal que se reconoci C
mo elemento txico para los trabajadores expuestos a l, con
siderndosele un contaminante importante, tanto en las zonas
industriales como en las urbanas
nes tratados con acetato de plomo (vanna et_ a_K , 197^) - Por
otra parte, Ferm y Carpenter (1967) reportaron que la administracin de sales de plomo a ratas, incrementa la produccin de malformaciones congnitas.
Tambin ha sido demostrada la actividad carcinognica -
35
M.
Schwanitz et_ al_. , (1970) reportaron un incremento de cuatro veces en la frecuencia de aberraciones cromosmicas en linfocitos de trabajadores masculinos expuestos al plomo.
Por otro lado, Bauchinger y Schmid (1972), no encontraron dji
ferencias significativas en la produccin de aberraciones
cromosmicas entre las clulas de hamster chino tratadas con
respecto a las de su control. En linfocitos humanos, Bauchin
ger et_ ajL , (1972) tampoco pudieron demostrar un incremento
en la produccin de aberraciones cromosmicas.
Las aberraciones reportadas en linfocitos de sangre perifrica humana corresponden a rompimientos cromosmicos
(Schwarftz et_ ak, 1970), cuando la administracin de plomo se hi^
zo -in V.\IO. Se ha observado que -en vJXio se incrementa la
frecuencia de intercambio de cromtidas hermanas (Douglas et_
a k , 1980).
Lower e_t al^. , (1973) al realizar monitoreos con Vioo_phZZa m&an.OQ<ute.ti para determinar el grado de contaminacin
de la atmsfera en zonas industriales, encontraron cambias en los marcadores enzimticos que utilizaron. Ramel (1976),-
36
que induce errores durante la s n t e s i s del ADN. Ulner y Va_l l e [1968), reportaron que el plomo interacciona con el ARN
del hgado de caballos ponies envenenados con dicho metal.
El nivel del plomo, tanto en la sangre perifrica como
en la orina de los trabajadores expuestos, vara de acuerdo
al grado de exposicin y disminuye notablemente cuando las dosis de exposicin bajan o cesan (Taylor et_ a\_., 197M P o s i blemente sta es la causa por la que las observaciones hechas
en las muestras de sangre perifrica de los trabajadores expuestos muestran a veces resultados contradictorios (O'Riordan
y Evans, 197*0
Zinc.
El zinc se encuentra en la corteza terrestre, aproximadamente en un porcentaje de 0.02'. Ha sido empleado por el hombre desde la antigedad. Actualmente tiene gran importancia econmica, ya que se le utiliza en diferentes industrias.
Es un elemento importante en el laminado de fierro, en la produccin de aleaciones, en la proteccin de otros metales
a los efectos de la corrosin; en la fabricacin de aparatos
37
elctricos y de utensilios domsticos, en el equipo automo_t r z y ferroviario; se le usa tambin en el proceso para la
extraccin del oro y en la purificacin de las grasas para la elaboracin de jabones.
El zinc es un elemento esencial para el desarrollo de los organismos, pero como ocurre con los otros metales en es_
tudio, las concentraciones mayores a las fisiolgicamente n
cesarlas causan toxicidad. En los vegetales, la deficiencia
de zinc altera su metabolismo, produciendo malformaciones es_
tructurales, deficiencia en el crecimiento vegetativo y alte
raciones en la formacin de semillas. En animales, la falta
de zinc puede causar retardo en el crecimiento corporal (Gordon y Q'dell, 1980) y un desarrollo anormal del cerebro
(Sandstead
et_jij_., 1972). En pollos con deficiencia de zinc son observa_bles lesiones severas en la piel
(Bettger
En los animales, la regulacin homeostsica puede modificarse al variar la concentracin de zinc en el organismo.Gordon y O'dell, en 1980, observaron que en los ratones una
dieta con bajo contenido de zinc induce una tendencia a sangrar en forma anormal.
Durante la divisin celular, el zinc tiene un papel muy
importante, ya que participa en la formacin del huso acrom|_
tica (Falchuk e aj_., 1975).
resultados negativos al probar la actividad inhibidora del zinc en la s n t e s i s de ADN, mientras que Tennical e_t^ al_. ,
(T980), encontraron una fuerte accin antiviral al aplicar -
38
cos en V*o(ifjhZa. me.ta.noga&t&n. (Lower et_a}_., 1973) El zinc contribuye en forma sinrgica a la produccin de aberraciones cromosmicas observadas en los linfocitos de
trabajadores expuestos a la inhalacin de zinc, plomo y cadmio (Bauchinger et_ aj_. , 1976).
Arsnico.
El arsnico constituye dos p a r t e s por milln de la corteza t e r r e s t r e , se encuentra contenido en rocas y suelos,
donde se presenta en concentraciones que pueden v a r i a r desde
una o hasta cientos de partes por milln (Wells y Elliott, 1971;
Uullstein y Snyder, 1971). En los depsitos de sulfuros, el ars_
nico se encuentra en concentraciones elevadas junto con otros
metales como el plomo, cobre, p l a t a , fierro y o t r o s .
En diferentes regiones del mundo como en Chile, Argenti^
na, Taiwan, Estados Unidos y el Reino Unido, se ha reportado
l a presencia de concentraciones de arsnico de ms de 110
yg/1 en agua potable y de 2 a 5 ug/1 en aguas marinas
son, 1972; Johnson y Prison, T972.
(John-
elevadas concentraciones de arsnico (hasta 0.5 ppm) en el agua que u t i l i z a n diferentes poblaciones de l a Comarca Lagunera, situada en los estados de Durango y Coahuila (Albores et_
ai-, 1979).
39
Los seres vivos, incluyendo al hombre pueden estar ex_puestos al arsnico que proviene de diferentes fuentes, por
lo que actualmente existe un gran inters aceTca de los efe
tos mdicos y biolgicos que el metal como contaminante am_biental produce en los organismos expuestos (Com. on Med. and Biol. Effects on Environ. Pol I utants, 1977).
El arsnico ha sido introducido en el ambiente por me_dio de los procesos industriales
las zonas no industriales la concentracin atmosfrica del arsnico generalmente es menor a 0.2 pg/m3.
En la agricultura los compuestos arsenicales son utilizados como pesticidas y como herbicidas (Miles, 1968; Wagner y Weswig, 1974).
El uso de insecticidas que contienen arsnico en los cultivos de tabaco, incrementa el contenido del metal en los
productos de esa planta a niveles mayores de 40 mg. de arsnico por kilo (Holland y Acevedo, 1959). El nivel de arsnico en
los alimentos, con excepcin del pescado, generalmente es
ms bajo de 1 mg/Kg., pero algunos mariscos lo contienen en
concentraciones mayores de 100 mg/Kg. (AS, 1977).
El hombre est expuesto en forma general por la inges_ti8n de embutidos, los cuales contienen compuestos arsenicales inorgnicos y orgnicos. La inhalacin del arsnico a t mosfrico es muy baja (menor a 1 yg/da) (N.A.S., 1977).
El incremento en la incorporacin en las poblaciones de
zonas no contaminadas es de 0.5 a 4.2 mg/da, dependiendo de
40
41
tos es mayor que entre los no expuestos (Hill y Faning, 19^+8). En trabajadores de la industria de produccin de pesticidas,
se obtuvieron valores de mortalidad de casi el doble; Ott et^
al. , en 1974, observaron una proporcin similar de muertes del mismo tipo entre trabajadores de la produccin de arsena_
to de plomo y de arsenato de calcio, Osburn en 1969 observ
un incremento de seis veces en la incidencia del mismo tipo
de cncer entre los trabajadores de una mina de oro en Rhode_
sia, los cuales haban sido expuestos a grandes cantidades de arsnico que estaba presente en el medio ambiente de su lugar de trabajo. Pinto et^ auK
una sobremortalidad
cer respiratorio entre los trabajadores del cobre que estu_vieron expuestos durante ms de veinticinco aPos al arsnico
contenido en la atmsfera en su lugar de trabajo.
Por otro lado, Pinto y Benet (Pinto e_t_ aj_., 1977), as como Snegireff y Lombard (1951) no encontraron cncer pulmonar
causado por la exposicin crnica al trixido de arsnico en
los trabajadores de la industria metalrgica.
El empleo en la agricultura de aerosoles que contienen
arsnico, tambin ha sido reportado como causa de la produccin de cncer bronquial (Roth, 1958; Blejer y Wagner, 1976) Los cnceres de la piel, la hiperpigmentacin y la queratcsis son endmicas de las zonas donde existe arsenisismo
crnico, ya que el agua potable lo contiene en concentraciones elevadas
42
embargo, la fraccin de arsnico inorgnico que se absorbe,se acumula en el organismo distribuyndose ampliamente en la
mayora de los t e j i d o s .
La intoxicacin con arsnico presenta sntomas caractersticos
las
43
jas que so alimentaron con arsenato de sodio durante el pe_riodo de la gestacin. El arsenato de sodio inyectado a po_llos (Ancel, 19^6) y a hamster preados
(Roth, 1958).
cepa. (Nygren, 1949), el tratamiento con compuestos arsenica_les produce inhibicin mittica. Walker y Bradley (1969) y -
44
Sweins ( 1 9 8 3 ) , d e m o s t r que l a f r e c u e n c i a
de " g a p s " y -
45
rompimientos cromosmicos producidos por la presencia de arsnico en el cultivo de linfocitos humanos puede ser reducida mediante la administracin de selenio.
Debido a la habilidad que tiene el arsnico para inhi_bir los mecanismos de reparacin del dao gentico
(Leonard y
46
las germinales y poder identificarlas posteriormente en la descendencia proveniente de ellas, los resultados obtenidos
muestran el tipo de alteracin que ^ada uno de los elemen_tos induce en las clulas germinales de los organismos eucariontes.
Ya que ha sido demostrada la especificidad de interaccin de los metales con los componentes celulares, se consider importante que las pruebas aqu realizadas se llevaran
a cabo tanto en las clulas de la lnea germinal femenina, como en las de la masculina. As mismo, utilizando un sistema de cruzas adecuado, se asegur la posibilidad de identifi
car en los individuos de la descendencia de las dos primeras
generaciones de los individuos tratados, el aumento de las frecuencias de mutacin, que los elementos probados inducen
en las clulas germinales tratadas. De esta manera, fue posi^
ble cuantificar el incremento de las frecuencias de la pro_duccidn de letales dominantes, de la no disyuncin, de la p_r
dida de los cromosomas X y los del par nmero IV, as como la de los letales recesivos ligados al sexo.
47
MATERIAL Y MTODOS
48
6.9
Harina de maz.
38 .2
Sacarosa
21 .2
Dextrosa
15.1
Levadura de cerveza
en escamas
18.2
(Flix, 1969) -
49
50
tracin 10
-^
M.
51
y B/sc8Y, permi-
52
matozoides sin cromosoma X dan origen a machos, cuyo fenotipo es igual al de las hembras progenituras (y 2 w a ).
La determinacin de la frecuencia de los letales reces^
vos ligados al sexo se hizo cruzando a los individuos de la
progenie normal de la Fi entre s, "sembrando" una hembra por un macho en cultivos "individuales". La ausencia de uno
de los dos tipos de los machos de la F2 en un cultivo "individual", indica la presencia de un gene letal recesivo inducido dos generaciones antes (P), en el cromosoma X que lo
porta (Fig. 4 ) .
Los resultados obtenidos fueron tratados estadisticamen
te empleando la prueba de X2.
13
I!
PL
53
V*;
P.
orXC2yB/scBY
e/e
Progenie normal:
Fenotipo
y2B/n
o*y 2 w a /sc 6 Y
Progenie excepcional:
fenotipo
yB
no-disyuncin en *: 2y z w a /
prdida del X en *: dy 2 w a
y 2 w a /sc 8 Y
Fenotipo
s2 a .
w /y z2w a
2
9 XCC2
yB/y2wa
y 2 w a /sc a Y
XCZyB/sc8Y
y2wa
54
R E S U L T A D O S
Las resultados obtenidos al realizar las pruebas de toxicidad en las hembras se presentan en la tabla I. Las sales
de cadmio, cromo, plomo y zinc tienen un efecto txico no significativo cuando se administran a las hembras en la concentracin de 10 3 M, mientras que en el caso del arsnico
esto se present solo al bajar la concentracin a 10
M.
chos.
55
56
lidad de la Fi, como se muestra en esta tabla aumenta significativamente con todos los tratamientos. Sin embargo, la
frecuencia de la prdida del cromosoma X en el grupo de zinc
no se debe a la presencia del metal, ya que la comparacin entre los grupos tratados con cido actico y zinc no mostr
una diferencia significativa entre ambos.
Las tablas VI y VII contienen los resultados obtenidos
en la primera generacin de los machos tratados con las sa_les metlicas, con el suero y el grupo testigo sin tratamien
to.
En la tabla VI se presentan los datos obtenidos con los
diferentes tratamientos segn el efecto que mostraron sobre
la fertilidad y sobre la frecuencia de la induccin de prdi^
da de los cromosomas sexuales, as como de la no disyuncin.
El anlisis estadstico mostr un incremento significativo de la fertilidad por la administracin de suero, mientras
que con las sales metlicas se obtuvo una disminucin significativa de la misma. El nmero de descendientes excepcionales indica que el dao gentico total registrado en la prim_
ra generacin disminuy con el suero, pero aument signifies!
tivamente debido al tratamiento de los machos con las sales
metlicas a excepcin del arsnico.
La tabla VII presenta el registro e la descendencia de
la. primera generacin de los machos tratados. El tratamiento
estadstico indica que la prdida de cromosomas X se incre_mentfi significativamente en los machos con la administracin
57
de cromo, cadmio, plomo y arsnico, as como con la del cido actico. La induccin de la prdida del cromosoma X obse_r
vada en el grupo tratado con plomo, se debi a la administra
cin del metal, la comparacin entre este grupo y el de cido actico, mostr que en el primero hay un incremento de
tal evento mayor que el observado en el segundo, 1; diferencia que existe entre ambos es significativa.
La tabla VIII contiene los resultados obtenidos en la segunda generacin de los machos tratados dos generaciones antes. La frecuencia de genes letales ligados al sexo se increment significativamente en los grupos tratados con plomo
y zinc con respecto al grupo testigo. La esterilidad se redu
jo con la administracin de suero y se increment en los gru
pos tratados con todas las sales metlicas, excepto con el cromo, con respecto al tratamiento de suero. La comparacin
entre los grupos tratados con plomo y zinc con respecto al de cido actico, no mostr un incremento significativo, lo
que indica que el aumento en la produccin de la esterilidad
en los dos primeros grupos no se debi a la administracin de los metales, sino a la del cido actico.
T A I L A
COMPUESTO
CONCENTRACIN (M)
Control
99
40
90
60
10
i:a3
10
38
89*
62
11
10
32
85*
68
15
10
45
90*
55
10
1::
10
-
10
30
85*
90
70
15
90*
10
1::
10
Cd
Pb
Zn
As
Acido Actico
MORTALIDAD (%)
100
Suero
Cr
SOBREVIVENCIA (4)
10 por cada
3 gotas
10 mi. de sol.
* Valor de x z no significativo
T A B L A
TOXICIDAD
II
COMPUESTOS
CONCENTRACIN (M)
Control
Suero
SOBREVIVENCIA (4)
MORTALIDAD {%)
100
09
Cr
10' 2
10" 3
30
85*
70
15
Cd
10" 2
10" 3
10"''
25
37
88*
75
63
12
Pb
10" 2
10" 3
10"
10
30
85
90
70
15
Zn
lo"2
10' 3
40
90*
60
10
As
10" 2
10" 3
10"*
8
28
80*
92
72
20
90*
10
Acido Actico
* Valor de x
significativo.
T A B L A
III
GRUPO
REPETICIN
NUMERO TOTAL DE
DESCENDIENTES
NO. DE DESCENDIENTES
EXCEPCIONALES
Testigo
1
2
1557
1183
12.97
9.85
Suero
1
2
1658,,.
1864
13.81
15.53
Cromo
1
2
1146
1516 *
9.95
12.63
Cadmio
1
2
1573
1406
13.10
11.71
Plomo
1
2
1579 ,
2284
13.15
19,03
,!
Ac.Actico
1
2
1016
1917
8.46
15.97
2
3
Zinc
1
2
5.01
6.12
Arsnico
1
2
21.29
27.94
5
5
602
735 *
2255
3353
* Valor de x 2 significativo
10
2
3
5
4
11
TABLA
IV
NUMERO DE DESCENDIENTES NORMALES Y EXCEPCIONALES DE LA F1 DE LAS HEMBRAS TRATADAS (N.D.- NO DISYUNCIN, P.X.- PERDIDA DEL CROMOSOMA X, P.C.- PERDIDA DE CROMO
SOMA).
DescendienRepeticin tes normales
Testigo
1
2
1 ,547
1 ,181
N.D. en
55 w (
1 (0. 06)
1 (0. 08)
Suero
1
2
1 ,658
1 ,864
2 ( 0 . 10)
1
2
1
2
1
2
1
2
1
2
1
1 ,142
1 ,505
1 ,567
1 ,400
1 ,573
2 ,273
1 ,014
1,917
598
735
2 ,555
3 ,353
Grupo
Cromo
Cadmio
Plomo
Ac.Actico
Zinc
Arsnico
* Valor de x 2 significativo
1 (0. 08)
3 (0. 19)
1 ( 0 . 06)
2 ( 0 . 08)
P.X. en op
db-yB ( l "
N. D. en oo
99 B+ (.%)
P.X. en oo
db*y w a (l)
1 (0.06)
8
2
3
2 (0.17)
1
8
5
6
3
6
2
3
(0.51)
(0.08)
(0.18)
(0.08)T*
(0.52)'
(0.31)7*
(0.42?
(0.18>*
(0.26)
(0.19)
(0.15)
1 ( 0 . 16)
3 ( 0 . 13)
2
2
P . C EN EL
par IV (%)
(o.ns)
(0.14)
3
3
(0.18)
(0.13)
TABLA
V
SEGUNDA GENERACIN DE LAS HEMBRAS TRATADAS. NUMERO DE CROMOSOMAS PORTADORES
DE GENES LETALES. NUMERO DE HEMBRAS F1 ESTRILES
GRUPO
Testigo
Suero
Cromo
Cadmio
Plomo
Ac. actico
Zinc
Arsnico
REPETICIN
TOTAL DE CROMO
SOMAS PROBADOS
NO. DE CROMOSO
MAS NORMALES
1
2
1
2
1
2
1
2
1
2
1
2
230
213
202
232
221
218
210
201
218
255
201
214
205
207
186
175
207
240
186
195
1
2
1
2
158
308
206
176
152
280
185 '
143
* Valor de x 2 significativo
213
200
199
220
No. DE CROMOSO
MAS PORTADORES
DE LETALES ( ? )
NO. DE HEMBRAS F1
e s t r i l e s (%)
1
1
(0.43)
(0.46)
2
4*
16
12
8
10
(1.80)
(0.47)
(1.17)
12
11*
23*
26
11*
15
(5.42)
(5.04)
(10.95)
(12.93)
(5.04)
(5.88)
15*
19
5
27
(7.46)
(8.87)
(3.16)
(8.76)
21*
23
(10.19)
(19.75)
1
1
(0.63)
(0.32)
(6.95)
(5.63)
(3.96)
(4.31)
T A B L A
VI
1
2
1
2
1
2
Testigo
Suero
Cromo
Cadmio
Plomo
Ac. actico
Zinc
Arsnico
REPETICIN
1
2
1
2
1
2
1
2
1
2
NUMERO DE DESCEN
DIENTES
1,547
1,181
12.89
9.84
14.97
16.05
10.57
12.58
1.797*
1,926
1,269*
1,510
1,538*
2,047
1,296*
1,574
2,504*
2,362
1,650*
1,772
12.81
17.05
10.80
13. 11
20.86
19.68
13.75
14.76
1,598*
1,625
13.31
13.54
* Valor de x2 significativo.
NO. DE DESCEND EN
TES EXCEPCIONALES.
9
2
2*
3
1*
9
10*
18
3*
5*
7
3*
3
5
TABLA
VII
NUMERO DE DESCENDIENTES NORMALES Y EXCEPCIONALES EN LA F1 DE LOS MACHOS TRATADOS (N.D.
NO DISYUNCIN, P.X. - PERDIDA DEL CROMOSOMA X ) .
GRUPO
REPET
CION
Testigo
1
2
Suero
1
2
Cromo
1
2
1
2
1
2
1
2
1
2
1
2
Cadmio
Plomo
Ac.Actico
Zinc
Arsnico
DESCENDIENTES
NORMALES
1 ,547
1 ,181
1 ,795
1 ,926
1 ,268
1 ,504
1 ,528
2 ,029
1 ,288
1 ,571
2 ,499
2 ,355
1 ,645
1 ,767
1 ,595
i ,620
* Valor de x 2 significativo
N. D. eri qq
1
1
(0. 06)
(0. 08)
P.X. en go
d&"yB (4J
N. D. en oo
9? B+ (t)
1
i
( 0 . 06)
( 0 . 04)
1
2
1
1
( 0 . 06)
(0. 07)
(0. 04)
( 0 . 06)
(0 . 0 5 )
(0 . 0 5 )
P.X. e
P.L . en el
par IV (%)
db*y
8 (0.51)
1 (0.08)
1 (o.es)*
2 (0.10)
6
3
8
8
2
3
6
4
1
i
1
(0 . 0 6 )
(0 . 0 6 )
2
4
(0.39)*
(0.19)*
(0.39)
(0.61)
(0.12)
(0.1D*
(0.25)
(0.24)
(0.25)
(0.12),
(0.24)
1
2
7
9
(0.07)
(0.13)
(0.45)
(0.43)
4
4
(0.24)
(0.22)
T A B L A
VIII
GRUPO
REPET
CION
TOTAL DE CROMO
SOMAS PROBADOS
No. DE CROMOSO
MAS NORMALES
No. DE CROMOSOMAS
PORTADORES DE LETALES
C % )
Testigo
1
2
230
213
213
211
Suero
1
2
220
198
219
197
Cromo
1
2
231
222
231
221
Cadmio
1
2
203
193
189
180
Plomo
1
2
191
208
178
180
3*
6
Ac. actico
1
2
220
213
197
200
Zinc
1
2
296
268
200
120
2*
3
209
177
2
1
Arsnico
220
211
I
* Valor de x 2
significativo.
(0 .43)
GENES
No. DE HEMBRAS
ESTRILES
16
12
1*
(6. 95)
(S. 63)
C0. 45)
CO. 50)
1
1
CO.45)
d 55)
14*
10
C6. 89)
CS. 18)
(1 57)
(2. 88)
10*
22
(5. 23)
(10. 57)
23*
13
(10. 45)
(6. 10)
(0. 97)
(2. 17)
4*
15
(1. 94)
(10. 86)
C0. 90)
CO. 47)
9*
33
(4. 09)
(15. 63)
58
DISCUSIN
Durante las ltimas dcadas se ha incrementado la evi_dencia en favor de que los compuestos qumicamente i n e r t e s pueden ser convertidos dentro del cuerpo de los organismos en metabolitos qumicamente reactivos que pueden combinarse
con las macromolculas celulares y por lo tanto inducir va_rios procesos biolgicos adversos, incluyendo a las a l t e r a _ ciones genticas aberrantes
(Miller, 1970).
caractersticos
diferencias
59
Tanto el cromo como el zinc y el arsnico mostraron tener el mismo efecto txico para las hembras y para los machos
cuando se administraron en la concentracin de 10
M. Los dos
_ i
primeros y 10
60
(Weller, 1915) ,
:
i
61
por una amplia gama de compuestos qumicos, la mayora de los que dan lugar a tales disturbios en concentraciones muy
bajas, las que estn correlacionadas con su solubilidad en el agua; ciertos compuestos qumicos tales como la colchicina y los compuestos metlicos no se ajustan a esta correla_cin, ya que actan en concentraciones considerablemente ms
bajas que las que se pueden anticipar en funcin de su solubilidad
(Ramel, 1976).
62
Los espermatozoides son sensibles a la produccin de rompimientos cromosmicos por el cadmio, el plomo y el ars-
63
nico, como se puede observar en la tabla VII, en la que se muestra la frecuencia de individuos excepcionales provenientes de la prdida del cromosoma X que fue significativa al nivel de 0.05 cuando se administraron los metales a los ma_chos.
Los agentes ambientales que daan el ADN producen mutaciones y dan origen a malignidad en el hombre y en los aninui
l?s de experimentacin. Se sabe que, en general, las clulas
de mamferos pueden reparar los daos inducidos en su propio
ADN. Debido a que los espermatozoides maduros del ratn, de
la rata, de los conejos y de los humanos son deficientes en
su reparacin por excisin, el perodo posterior a la entrada del espermatozoide al citoplasma del vulo, constituye el
nico estadio en que el ADN del espermatozide podra ser reparado antes de que t'i genoma del cigoto inicie su intensa actividad replicativa y tenga lugar la divisin celular.
Existe evidencia de que los genomas femeninos y masculinos puedan ser reparados cuando son daados despus de la fertizacin Ln. vvo. Existen datos que muestran que el genoma reprimido de los ratones machos se hace accesible para la repa_
racin por escisin de los dmeros de pirimidina en el pero_
do comprendido entre ia entrada del espermatozoide al citoplasma del vulo y el inicio de la fase S.
Brandriff (1981) report datos que dan evidencia directa en favor de que en ltima instancia, el dao del ADN en los espermatozoides maduros de los mamferos, es reparable -
64
ViLOioph-tla.
65
C O N C L U S I O N E S
66
67
68
69
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