LA ENDOSPORA BACTERIANA Y LA ESPORULACIN

1.1

INTRODUCCIN A LA ESPORULACIN BACTERIANA

Algunas especies de bacterias Gram positivas (principalmente de los

gneros Bacillus, Clostridium, Sporosarcina y Thermoactinomyces), disponen
de una notable estrategia adaptativa cuando se ven sometidas a privacin de
nutrientes en su medio ambiente: si los niveles de fuentes de C, N, o P caen
por debajo de un umbral, esto constituye una seal a la clula de que se
avecina un largo perodo de privacin de nutrientes. Entonces, la clula se
implica en una serie de complejos cambios genticos, metablicos,
estructurales, etc. (proceso de esporulacin o esporognesis), que conducen a
la diferenciacin, en el interior de la clula vegetativa original, de una clula
durmiente (la endospora). La clula-madre (o sea, la clula vegetativa original
que gener la endospora) finalmente se autolisa, liberando la espora, que es
capaz de permanecer en estado criptobitico, durmiente, varios decenios,
-incluso siglos. Las esporas son fcilmente diseminadas por el aire; cuando
caen en medios ricos en nutrientes, se desencadena su germinacin, se reinicia
la actividad metablica, de modo que cada espora genera una nueva clula
vegetativa, capaz de divisn binaria, etc.

O sea, la esporulacin se puede considerar como un proceso de

supervivencia en ltima instancia, la ltima carta que se juegan ciertas
bacterias Gram positivas cuando se enfrentan a condiciones severas de
hambre de nutrientes.

Significado adaptativo: Estas bacterias suelen vivir en medios nutricionalmente

pobres (suelos, hierba seca, etc.). La esporulacin es un proceso muy refinado
que ha aparecido evolutivamente en una lnea filogentica de bacterias Grampositivas, y que les permite sobrevivir largos perodos de carencia nutricional.
(Atencin: NO son estrictamente formas de resistencia).

Las endosporas son formas de reposo (y no formas reproductivas), que

representan una etapa del ciclo de vida de ciertas bacterias, y que se
caracterizan por una estructura peculiar, diferenciada respecto de las clulas
vegetativas, por un estado metablico prcticamente detenido, y por una
elevada resistencia a agentes agresivos ambientales.

La esporulacin bacteriana es un sistema modelo donde se pueden

estudiar, con relativa sencillez, determinados problemas biolgicos ms

generales: qu bases moleculares y genticas tiene la diferenciacin de un

tipo de clula a otro tipo distinto?, cmo se regula el proceso en funcin del
tiempo y del espacio?, cmo se reparten los papeles los tipos celulares
implicados?, etc. Por esta razn, presenta un enorme inters para los bilogos,
interesados en escudriar las bases ntimas de este tipo de importantes
cuestiones, tan frecuentes en los organismos superiores.

1.2

OBSERVACIN DE LAS ESPORAS

Al microscopio ptico, en fresco (sin teir), aparecen como cuerpos

esfricos, ovoides e incluso en algunas especies, cilndricos, muy refringentes,
libres, o an incluidos en la clula vegetativa (clula madre).

Esporangio = clula madre + espora

El tamao relativo de la espora, y su situacin en el esporangio, son criterios

taxonmicos importantes en las bacterias esporulantes.

bullet
Segn que el dimetro de la espora sea o no mayor que el de la clula
vegetativa:
bullet
Esporas deformantes
bullet
Esporas no deformantes
bullet
Segn la localizacin de la espora dentro del esporangio:
bullet
Terminal
bullet
Subterminal
bullet
Central

bullet
Los esporangios deformantes de Clostridium son caractersticos:
bullet
en forma de cerilla o palillo de tambor (plectridios)
bullet
en huso (clostridios)
Tincin:

No se tien por los colorantes normales. Hay que forzar por calor y/o
mordientes (por ejemplo, tras teir reforzadamente con fuchsina, resisten
decoloracin por alcohol-ClH). Otra tincin muy empleada es la reforzada con
verde de malaquita (que es la que el alumno realiza en nuestras prcticas de
laboratorio).

1.3

ESTRUCTURA Y COMPOSICION QUIMICA DE LA ENDOSPORA

Partes que comprende la endospora:

bullet
Protoplasto o ncleo (core, en ingls), con la membrana citoplsmica de la
espora (membrana esporal interna).
bullet
Pared de la espora (= Germen de la pared de la futura clula vegetativa).
bullet
Corteza o crtex, rodeado externamente de la membrana esporal externa.
bullet
Cubiertas
bullet
Exosporio (no universal: las esporas de algunas especies carecen de l).
Micrografa electrnica que muestra las partes principales de una
endospora
1.3.1

PROTOPLASTO O NCLEO

El citoplasma de la espora est muy deshidratado. Sus componentes

estn inmovilizados en una matriz de quelatos de iones Ca++ y cido
dipicolnico.

El citoplasma de la espora contiene altas concentraciones de ion Ca++

(1-3% del peso seco de la espora), y de cido dipicolnico (DPA) (10% en peso);
ambos estn formando un quelato, llamado dipicolinato clcico (DPC), una
sustancia exclusiva de las esporas bacterianas.

Papel del DPC: Como veremos, es una reserva de Ca2+, que durante
la esporulacin secuestra este in, lo que tendr un papel importante en la
deshidratacin del protoplasto; durante la germinacin, la liberacin del Ca2+
ser fundamental en este proceso.

El protoplasto contiene un cromosoma completo, condensado, y todos

los componentes indispensables para reiniciar el crecimiento vegetativo
cuando la espora germine, pero carece de muchos componentes tpicos de la
clula vegetativa:

bullet
posee una pequea dotacin de ribosomas, junto con componentes estables de
la maquinaria de sntesis de protenas (ARNt, cofactores, etc.)
bullet
ARN polimerasa.
bullet
nuclesidos mono- y difosfatados, pero no NTP (no hay ATP)
bullet
carece de componentes inestables: no hay ARNm, ni enzimas biosintticas, ni
aminocidos ni bases nitrogenadas libres, ni cofactores reducidos (NADH; CoA)
bullet
pero en cambio, existe una gran cantidad de una serie de pequeas protenas
especiales (llamadas SASP, del ingls small acid-soluble proteins). Cuando se
produzca la germinacin, estas protenas sern hidrolizadas rpidamente, y los
aminocidos resultantes sern empleados en la sntesis de nuevas protenas
necesarias en la germinacin y crecimiento ulterior. Adems, las SASPs estn

acomplejando al ADN (induciendo en l un cambio conformacional hacia la rara

forma A, en vez de la B habitual), protegindolo del dao por luz UV.
bullet
la moneda energtica de la espora es el 3-fosfoglicerato, otra molcula
estable del protoplasto, que ser convertido rpidamente a 2-fosfoglicerato, y
de l a PEP (fosfo-enol-pirvico) al germinar la espora (el PEP es donador de P
para generar ATP).
Rodeando al protoplasto est la membrana citoplsmica (membrana interna de
la espora), una bicapa lipdica carente de fluidez, posiblemente como resultado
de su estructura policristalina.

1.3.2

PARED DE LA ESPORA

Situacin: inmediatamente por encima de la membrana interna de la espora

(ver micrografa a microscopio electrnico, o el esquema de la ultraestructura).

Composicin: a base de un peptidoglucano (PG) similar al de la clula

vegetativa, con sus caractersticos enlaces entre los tetrapptidos.

Funciones: al germinar la espora, dar lugar a la pared celular de la nueva

clula vegetativa, confirindole, mientras tanto, resistencia osmtica.

Origen: se sintetiza a partir de la prespora, atravesando los precursores la

membrana interior que hemos citado arriba.

1.3.3

CORTEZA O CRTEX

(Obsrvese su aspecto a microscopio electrnico: transparente a los

electrones, relativamente gruesa, a base de lminas concntricas).

Composicin: un peptidoglucano (PG) especial, diferente en composicin al PG

de la clula vegetativa:

bullet

30% del NAM tiene tetrapptidos normales, pero el grado de entrecruzamiento

es muy bajo (6%).
bullet
15% del NAM tiene solo la L-ala inicial, en lugar de tetraptido.
bullet
55% de una modificacin del cido murmico (lactama del cido murmico),
producida por condensacin del -COOH lactilo con el -NH2, para formar la
lactama correspondiente).
Origen: Se sintetiza a partir de la clula madre, con sus intermediarios
ensamblados a nivel de la membrana externa que rodea a la corteza.

Propiedades de la corteza:

1)
Tiene un bajo grado de puentes entre tetrapptidos (slo un 6%). Ello
condiciona:

a)
una estructura ms laxa, floja y flexible que el peptidoglucano normal,
capaz de expandirse en ausencia de cationes que neutralicen sus grupos
negativos (sobre todo del mDAP y del glutmico de los tetrapptidos). Esto es
la base de su apariencia de gel.

b)

su rpida autolisis, durante la germinacin de la espora.

2)

la lactama del murmico condiciona una gran resistencia a la lisozima.

La corteza est limitada por la membrana esporal externa, procedente de

invaginacin de la membrana citoplsmica de la clula vegetativa madre.
Posee una polaridad opuesta a la de la membrana esporal interna.

1.3.4

CUBIERTAS

Composicin y estructura: la composicin depende de las especies, pero en

general, a base de una o varias protenas de tipo queratina, todas muy ricas en
cistena y en aminocidos hidrfobos, y que llegan a constituir el 60% en peso
seco de la espora. Buena parte de la cistena se aade post-traduccionalmente,

por modificacin de la protena inmadura. A microscopio electrnico se puede

comprobar el gran grosor (volumen) de las cubiertas, y su aspecto relativmante
denso a los electrones.

Propiedades: son muy insolubles e impermeables, e impiden la entrada de

numerosos agentes qumicos, incluyendo sustancias txicas. La abundancia de
puentes S-S las hace muy compactas y muy estables qumicamente.

1.3.5

EXOSPORIO

En B. cereus es una estructura membranosa transparente, a modo de

saco cerrado, delgado y flojo, envolviendo al resto de la espora de una forma
suelta, despegado en principio respecto de las cubiertas (tras la liberacin de
la espora, al perderse el contenido acuoso que haba entre exosporio y
cubiertas, aquel se pega a stas).

En B. subtilis y B. megaterium, el exosporio est envolviendo a la

espora de una forma ms estrecha, estableciendo algunos contactos fsicos con
la superfie de las cubiertas.

Composicin qumica: mezcla de protenas, polisacridos complejos, y lpidos.

Propiedades: muy resistente a enzimas proteolticas, lo que sugiere (pero no

prueba directamente) que el exosporio puede representar algn papel como
barrera de defensa externa de la espora.

1.4

DESENCADENAMIENTO DE LA ESPORULACIN

Para que se produzca la esporulacin, se necesitan dos condiciones previas:

1)

los cultivos bacterianos han de estar en buenas condiciones;

2)
cuando cesa el crecimiento exponencial, la mayora de las clulas entran
en esporulacin, aunque el proceso no es sincrnico (hay desfases entre unas
clulas y otras), de modo que en un lapso de tiempo relativamente breve (5,5-

8 horas en Bacillus subtilis) casi todo el cultivo aparece en forma de esporas,

habiendo desaparecido las clulas vegetativas. La divisin celular tpica de la
fase de crecimiento exponencial y la esporulacin son procesos mutuamente
excluyentes.

Qu estmulo es el responsable de desencadenar la esporulacin? Lo que

detiene el crecimiento de estas bacterias y dispara la esporulacin es un
estado de inanicin, de carencia de nutrientes. El nutriente limitante que puede
desencadenar la esporulacin puede ser: la fuente de carbono, la fuente de
nitrgeno o incluso la carencia de fosfatos.

1.5

FASES DE LA ESPORULACIN

Vamos a estudiar la esporulacin en Bacillus subtilis o en B.

megaterium, dos de las bacterias esporuladas mejor investigadas, y que
completan la esporulacin al cabo de unas 7-8 horas de su inicio, a 37C. Se
pueden distinguir siete fases consecutivas (adems de la fase 0 anterior a la
esporulacin). Cada fase se denota con un nmero romano, y su duracin en
horas se expresa como subndice de t, p. ej., t2. Como veremos enseguida,
cada fase se distingue por un(os) evento(s) citolgico(s) peculiar(es) y por una
serie de cambios bioqumicos propios:

Fase 0 (clula vegetativa):

Al final del periodo de crecimiento exponencial, la clula vegetativa contiene

dos cromosomas.

Fase I (t0-t1):

bullet
El material gentico (los dos cromosomas) se condensa constituyendo un
filamento axial ancho, que ocupa el centro de la clula, segn su eje
longitudinal. Cada nucleoide est unido a uno de los extremos de la clula.
bullet

En vez de iniciarse una divisin celular simtrica (con septo central), se forman
dos espculas de la pared celular cerca de los polos hacia el interior, rodeadas
de la correspondiente invaginacin de la membrana citoplsmica. Cada
espcula est sealando una zona donde se est formando el anillo de FtsZ
(protena contrctil de tipo tubulina: vase el tema 5)
bullet
Se sintetizan y se liberan al medio antibiticos y varias exoenzimas. Una serie
de proteasas se encargan del turnover de protenas intracelulares, cuyos
aminocidos constituyentes sern empleados para sintetizar nuevas protenas
especficas de la esporulacin.
Fase II (t1-t2):

bullet
Se termina por formar un septo transversal acntrico, cerca de un polo de la
clula, por invaginacin de la membrana citoplsmica, y deposicin de nuevo
peptidoglucano entre las dos membranas adyacentes.
bullet
Cada nucleoide queda segregado en uno de los dos compartimentos que se
han formado:
bullet
un cromosoma va al compartimento pequeo (compartimento de la preespora);
bullet
la otra copia del cromosoma va al compartimento grande (clula madre).
bullet
En esta fase contina la sntesis de los antibiticos y de las exoenzimas (serinaproteasas, metalo-proteasas, ribonucleasas, a-amilasa, etc).
Fase III (t2-t3):

bullet
Independizacin del protoplasto de la preespora respecto de la clula madre.
Para ello, lo primero que ocurre es la degradacin selectiva del peptidoglucano
del septo que se haba depositado en la fase II (esta degradacin comienza por
el centro, es decir, por donde se haba cerrrado, y sigue hacia la periferia, y en
ella intervienen los productos de varios genes). Entonces, la membrana
citoplsmica de la clula madre va creciendo unidireccionalmente alrededor de
la preespora, hasta que sta queda libre en el citoplasma del esporangio.

bullet
Obsrvese que el citoplasma de la preespora queda rodeado por dos
membranas de polaridad opuesta: la interior tiene la polaridad normal, pero la
exterior, derivada del crecimiento de la membrana de la clula madre, tiene
polaridad invertida
bullet
A partir de esta fase el turnover (renovacin) de protenas slo tendr lugar en
la clula madre, detenindose en el compartimento de la preespora.
Fase IV (t3-t4):

bullet
Se forma casi por completo la corteza de la espora, por deposicin de
peptidoglucano entre las dos membranas. Sin embargo este PG an no est
maduro (no tiene todava las caractersticas que estudiamos en el apartado
1.3.3).
bullet
Tambin se deposita el peptidoglucano de la pared celular (que constituye el
germen de la pared celular de la futura clula vegetativa).
bullet
Coincidiendo con esto, la preespora adquiere su aspecto refrctil al microscopio
ptico en fresco.
bullet
Comienza la sntesis del cido dipicolnico (DPA), as como la acumulacin de
Ca2+.
bullet
En las bacterias que lo poseen, en esta fase comienza la sntesis del exosporio.
Fase V (t4-t5,5):

bullet
Los materiales de las cubiertas (que se haban ido sintetizando durante las
fases II y III en el compartimento de la clula madre), comienzan a depositarse
por fuera de la membrana esporal externa.
bullet
Al final de esta fase se adquiere la resistencia al octanol.

bullet
Contina la acumulacin de DPA, que sigue secuestrando iones Ca2+
(formacin del quelato de dipicolinato clcico, DPC).
Fase VI (t5,5-t7):

bullet
La preespora madura hasta espora.
bullet
Madura la corteza (para generar el caracterstico PG cortical, ms laxo, con su
bajo porcentaje de entrecruzamientos -por actuacin de endopeptidasas- y la
lactama del NAM).
bullet
Maduran las cubiertas.
bullet
El citoplasma de la espora se hace ms homogneo y ms denso a los
electrones.
bullet
Por una serie de razones an no totalmente aclaradas, la espora se hace
resistente al calor y al cloroformo.
bullet
Se adquiere resistencia a las radiaciones ultravioleta (UV).
bullet
Se adquiere resistencia a la lisozima.
Fase VII (t7-t8):

bullet
Liberacin de la espora madura por autolisis de la clula madre.
bullet
las bacterias que han producido exosporio, cuando la espora sale al exterior,
este exosporio pierde su contenido de citoplasma (procedente de la clula
madre), quedando como un saco vaco y plegado, unido a las cubiertas.
bullet

La parte superior de la figura muestra un grfico de los principales cambios

que acabamos de comentar, expresados en funcin del tiempo transcurrido
desde el inicio de la esporulacin.
1.6

GENTICA MOLECULAR DE LA ESPORULACIN

Las clulas pueden detener el proceso de la esporulacin si durante las

4 primeras fases se les suministra el nutriente que estaba limitando y que fue
responsable del desencadenamiento (efecto de desbloqueo metablico). Pero a
partir de la fase V el aporte de nutrientes no tiene ya ese efecto inhibidor: el
proceso de la esporulacin ya es irreversible, y se dice que la clula est
comprometida (= obligada) a esporular.

El proceso de la esporulacin es muy ordenado en el tiempo y en el

espacio. En su base gentica existe un conjunto de varios operones especficos
de la esporulacin (operones spo), sometidos a un finsimo control gentico
espacial y temporal. El conjunto de estos operones (que se encuentran en
cuatro zonas distintas del cromosoma), se denomina esporuln, y comprende
ms de 125 genes. Las principales caractersticas de los operones del
esporuln son:

bullet
Los operones estn inactivos durante el crecimiento vegetativo;
bullet
se van activando de modo ordenado y secuencial, para luego ser reprimidos
(una vez han actuado);
bullet
estn sometidos a interacciones pleiotrpicas unidireccionales;
bullet
existe una comunicacin regulatoria entre el compartimento de la espora y
de la clula madre (interacciones espaciales);
bullet
dentro de los mecanismos genticos implicados en la expresin y regulacin de
los distintos operones correspondientes a fases distintas de la esporulacin, un
papel muy importante es el jugado por las subunidades sigma (s) alternativas
de la ARN-polimerasa.
1.7

CUERPOS PARASPORALES

Algunas bacterias esporuladas, como Bacillus thuringiensis, B. popiliae

y algunas especies de Clostridium, forman cristales proteicos en el esporangio
simultneamente a la formacin de la endospora: son los llamados cuerpos
parasporales.

Cada clula madre exhibe una sola inclusin, que se puede presentar
libre en el citoplasma, o bien englobada en el exosporio de la espora. Los
cuerpos parasporales pueden ser amorfos, pero los ms tpicos son
pseudocristales octadricos (bipiramidales). Estn compuestos de la
agregacin regular de subunidades de una glucoprotena de unos 120 kDa,
sintetizada durante la fase IV.

La funcin de estos cuerpos parasporales en la esporulacin es

desconocida (e incluso puede que de hecho, no tenga tal tipo de funcin). Bajo
condiciones alcalinas, se disuelven y la protena se convierte en una poderosa
toxina para larvas de lepidpteros y otros insectos, cuando las ingieren va oral
(pero no por va parenteral). Veamos cmo se produce el proceso de la
toxicidad:

1.
La oruga come materia vegetal que lleva bacterias esporuladas. El cuerpo
parasporal se libera junto con la espora, cuando la clula madre se autolisa.

2.
Los cuerpos parasporales se disuelven en el tracto digestivo de la oruga
(que es alcalino), la protena sufre proteolisis, lo que la transforma en una
toxina.

3.
Esta toxina altera la permeabilidad del epitelio intestinal de la oruga, de
modo que los lquidos alcalinos del intestino pasan a la hemolinfa, que
incrementa su pH por encima de 8, lo cual termina provocando la parlisis
rpida del insecto, y finalmente su muerte.

El significado biolgico ms probable de este fenmeno es que la

produccin de cuerpos parasporales sea una variante de la esporulacin que
evolucion durante la adaptacin de estas bacterias a sus nichos ecolgicos,
como una manera de asegurar la germinacin de las endosporas: la oruga
ingiere los cristales junto con las esporas. Los cristales parasporales matan a la
oruga, que se pudre. La oruga muerta y en putrefaccin asegurara un entorno

adecuado en nutrientes para que se alimentaran y multiplicaran las clulas

vegetativas que surgieran de la germinacin de esas esporas.

Desde hace tiempo ciertos grupos de agricultores vienen usando

inculos de bacterias esporuladas de las especies productoras de cuerpos
parasporales para rociar sus plantas y protegerlas de insectos: estamos ante
un autntico insecticida biolgico, biodegradable, selectivo hacia las plagas e
inofensivo para los seres superiores.

La moderna Ingeniera Gentica ha logrado insertar y expresar genes

codificadores de las toxinas parasporales de Bacillus thuringiensis en plantas
de cultivo. Hoy da existen millones de hectreas de cultivo de plantas
transgnicas "Bt" (sobre todo algodn, maz, y patata) que dependen menos de
los insecticidas qumicos merced a estos genes bacterianos (aunque ello no ha
evitado las crticas de ciertos grupos ecologistas opuestos por sistema a todo lo
que suene a manipulacin gentica por tcnicas de ADN recombinante).

1.8

PROPIEDADES BIOLGICAS DE LAS ESPORAS: SU FUNDAMENTO

Las endosporas son clulas en estado de dormancia, con una bajsima

tasa metablica (hipometabolia, la menor que existe en el mundo vivo), y
capaces de conservar su vitalidad durante largusimos perodos. Son muy
resistentes a la accin de diversos agentes qumicos (octanol, cloroformo) y
fsicos (altas temperaturas, congelacin, desecacin, radiaciones).

1)
Hipometabolia: Poseen la ms baja tasa respiratoria de todos los seres
vivos. Por ello son capaces de sobrevivir en ausencia de nutrientes durante
largos perodos de tiempo.

2)
Dormancia: Esta propiedad se refiere al hecho de que la espora tiene una
gran inercia a los sustratos exgenos. Como veremos, la espora slo perder la
dormancia cuando se haya activado para la germinacin.

3)
Resistencia al calor: Las esporas de ciertas especies resisten el calor
hmedo de 120oC durante 10 min, lo cual condiciona los parmetros para
esterilizar materiales (vase el captulo 13 titulado Accin de agentes fsicos
sobre las bacterias). Esta elevada resistencia a las altas temperaturas es un
subproducto de los cambios evolutivos que condujeron a la deshidratacin
como medio para lograr la hipometabolia y la dormancia. Por lo tanto, la

deshidratacin es la clave de las anteriores propiedades. (En cambio, como

dijimos antes, al menos parte de la resistencia al calor seco, es decir, en
ausencia de vapor de agua, se debe a las protenas SASP, que protegen al ADN
de los daos oxidativos de este tipo de calor).

4)
Deshidratacin: El muy bajo contenido en agua de la espora (0.3 g de
agua/g de peso seco frente a los 3-4 g de agua/g de peso seco de la clula
vegetativa) hace que la espora sea muy refrctil al microscopio ptico en
fresco. Ello condiciona las propiedades 1, 2 y 3. Cul es el mecanismo de la
deshidratacin, base a su vez de tantas propiedades biolgicas de las
endosporas? El tema es an objeto de debate. Vamos a exponer brevemente
una hiptesis (1989), segn la cual habra 3 etapas en la consecucin de la
espora deshidratada y resistente al calor:

a)
En las fases III y IV el cido dipicolnico va entrando al protoplasto de la
prespora. Simultneamente el Ca2+ entra desde el exterior a la clula madre
por transporte activo, y de ella al protoplasto de la prespora por difusin
facilitada. Se forma el correspondiente quelato de dipicolinato clcico (DPC).
Este es un proceso con retroalimentacin positiva, ya que conforme el Ca2+
queda secuestrado en forma de quelato (lo que significa que no hay de
hecho iones Ca2+ libres en el interior de la prespora), se facilita ms la entrada
de mayores cantidades de Ca2+. Parte del Ca2+ y de otros cationes se
acomplejan tambin con macromolculas del protoplasto. Todo ello redunda en
que la corteza se queda sin cationes; por lo tanto, no hay posibilidad de
neutralizar las cargas negativas del peptidoglucano cortical las cargas
negativas de la corteza se repelen se produce la expansin del
peptidoglucano cortical en su expansin, la corteza se topa con las
cubiertas rgidas, por lo que presiona sobre el protoplasto sale ms agua del
protoplasto.

b)
Resultado final: termoestabilizacin (= termorresistencia) del protoplasto.
La gran prdida de agua hace que los diversos compuestos del protoplasto se
compacten entre s, lo que facilita sus interacciones con los cationes. El
resultado es la formacin de un gel a base de una matriz constituida por
complejos supramoleculares, macromolculas y pequeas molculas
densamente empaquetados, unidos entre s e inmovilizados. Parece ser que
esta es la base principal de la enorme resistencia al calor hmedo por parte de
la endospora.

5)

Resistencia a los rayos UV: Parece que depende de varios componentes:

a)

absorcin de luz UV por las cubiertas;

b)

por el DPC;

c)
pero cada vez est ms claro que las protenas SASP tienen un papel
central en esta resistencia a los UV. Como ya dijimos, las SAPS de tipo /
acomplejan al ADN y favorecen su configuracin de tipo A, lo cual a su vez
provoca un cambio en su fotoqumica (ver apartado siguiente);

d)
cambio en la fotoqumica del ADN de la espora: se puede explicar
parcialmente por la misma deshidratacin del protoplasto, que impide que se
formen dmeros de pirimidina entre pirimidinas adyacentes de una misma
cadena del ADN. Como veremos en el captulo 13, estos dmeros de pirimidina
constituyen el principal tipo de fotoproductos generados por rayos UV en el
ADN de la clula vegetativa, base de la mayor parte de los efectos deletreos
de estas radiaciones. Por otro lado, las SASP de tipo / que acomplejan el
ADN hacen que en la espora la luz UV provoque otro tipo de alteracin, llamada
fotoproducto de la espora (que consiste en 5-timinil-5,6-dihidrotimina) que se
produce en menor cantidad. Aunque la acumulacin de fotoproductos de la
espora puede ser igual de letal que la de los dmeros de pirimidina, cuando
germina la espora se pone inmediatamente en marcha un eficiente sistema de
reparacin especfico de ese fotoproducto.

6)
resistencia a agentes qumicos: La resistencia de la endospora a agentes
como octanol, cloroformo, etc. se debe a la impermeabilidad de las cubiertas,
gracias a su gran grosor y su peculiar composicin a base de protenas ricas en
aminocidos hidrfobos y con abundantes puentes disulfuro (cistinas). La
resistencia a la lisozima se debe por un lado a la propia impermeabilidad de las
cubiertas, y a la resistencia de la corteza.

1.9

GERMINACIN DE LA ENDOSPORA

La germinacin es el proceso por el cual una espora se convierte al

estado vegetativo. Es mucho ms rpida que la esporulacin (dura unos 90
minutos). Podemos considerar en ella cuatro etapas, segn el modelo de Foster
y Johnstone (1990):

1.

preactivacin

2.

activacin

3.

iniciacin (o germinacin en sentido estricto)

4.

crecimiento ulterior (entrada en fase vegetativa)

1.9.1

PREACTIVACIN

Antes de que la espora est en condiciones de germinar se requiere

que sus cubiertas se alteren. En la naturaleza esto ocurre por erosin por
envejecimiento progresivo. Artificialmente, en laboratorio, se puede recurrir a
algn procedimiento para alterar esas cubiertas:

bullet
tratando las esporas a altas temperaturas, pero inferiores a su inactivacin
(100oC durante unos minutos);
bullet
por radiaciones ionizantes;
bullet
por pH bajos;
bullet
por tratamiento con sustancias que posean grupos -SH libres (p. ej.,
mercaptoetanol).
1.9.2

ACTIVACIN

La activacin es una etapa an reversible, desencadenada por un

agente qumico externo (germinante) presente en el medio. Este agente es
variable segn las especies:

bullet
iones inorgnicos (Mn2+, Mg2+);

bullet
L-alanina en B. subtilis;
bullet
glucosa u otros azcares;
bullet
adenina u otras bases nitrogenadas.
El germinante es detectado por un receptor alostrico a nivel de la
membrana esporal interna. Una vez que dicho receptor se activa, adquiere una
capacidad proteoltica especfica que le permite romper una proenzima que
hasta ese momento se encontraba unida covalentemente al peptidoglucano de
la corteza. La enzima resultante reconoce la lactama del NAM y comienza a
hidrolizar el peptidoglucano cortical. La consecuencia es que comienza a entrar
agua al protoplasto de la espora, por lo que la espora pierde su caracterstica
refringencia, y se comienza a perder la resistencia al calor.

Durante toda esta etapa el metabolismo est an latente.

1.9.3

INICIACIN O GERMINACIN EN SENTIDO ESTRICTO

En esta etapa la germinacin se hace ya irreversible, y se rompe

definitivamente el estado de dormancia, si bien el metabolismo es endgeno
(no depende todava de sustancias externas). Los principales acontecimientos
bioqumicos son:

bullet
se pierde DPA, lo que supone prdida de Ca++;
bullet
este Ca++ pasa al crtex, donde neutraliza las cargas negativas se favorece
la rehidratacin del protoplasto y su hinchamiento, favorecido por la
concomitante contraccin del crtex, mientras contina y se completa
rpidamente la hidrlisis del PG cortical;
bullet
el 3-fosfoglicrico (3-PG) se convierte en 2-PG, y ste en PEP, que a su vez
dona su fosfato de alta energa para producir ATP;
bullet

las pequeas protenas SASPs se hidrolizan por una proteasa especfica que
hasta ese momento estaba inactiva. De este modo los aminocidos
constituyentes de las SASPs se reutilizan para la sntesis de nuevas protenas
por parte de la pequea dotacin de ribosomas y dems molculas accesorias;
bullet
La ARN polimerasa comienza a sintetizar ARN (comienza la transcripcin de
genes vegetativos).
1.9.4

TERMINACIN Y CRECIMIENTO ULTERIOR

Aparece ya el metabolismo exgeno, de modo que la espora puede

tomar nutrientes del exterior y metabolizarlos. Los eventos bioqumicos y
estructurales ms notorios son:

bullet
se sintetiza ADN;
bullet
el protoplasto crece an ms;
bullet
la pared de la espora sirve como cebador (germen) para la produccin de la
pared de la clula vegetativa naciente;
bullet
la clula vegetativa sale por rotura de las cubiertas, que puede ser de tipo
polar o ecuatorial. Hay que aclarar que al salir, esta clula vegetativa se tie
como Gram-negativa, y slo adquirir su tpica grampositividad despus de la
primera divisin.
Salida de la nueva clula vegetativa al final de la germinacin. Observa
la rotura de las cubiertas
2

EXOSPORAS

Determinadas bacterias (Methylosinum, Rhodomicrobium) forman

esporas reproductivas por gemaciones sucesivas al final de sus prostecas.
Estas exosporas poseen una envuelta a base de pared rodeada de una cpsula
o cubierta gruesa.

DIFERENCIACIONES EN ACTINOMICETOS

Los actinomicetos constituyen un grupo amplio y complejo de bacterias

Gram positivas con tendencia a un tipo de crecimiento micelial y un estilo de
vida similar a los hongos. Muchos de los taxones de Actinomicetos y bacterias
relacionadas poseen clulas diferenciadas de tipo reproductivo, genricamente
conocidas como esporas. Estudiaremos brevemente la diferenciacin en dos
gneros tpicos.

Gnero Actinoplanes

Las especies de este gnero producen micelios vegetativos de sustrato

(subterrneos). Algunos de estos micelios generan hifas verticales que
sobresalen a la superficie. El extremo de cada una de estas hifas se diferencia
para constituir un saco llamado esporangio, que se fragmenta en un conjunto
de esporas mviles (flageladas) llamadas zigosporas o esporangiosporas.

Gnero Streptomyces

Forma un micelio de sustrato ramificado, interrumpido de vez en

cuando por pared transversal (son por lo tanto organismos cenocticos, es
decir, el segmento de micelio limitado por dos tabiques sucesivos contienen
varios cuerpos nucleares). Cuando hay limitacin de nutrientes se comienza a
formar un micelio areo a partir de ramificaciones de las hifas subterrneas. En
los extremos de algunas de estas hifas areas las clulas se diferencian en
cadenas de esporas. Durante la formacin de estos micelios areos y de las
esporas la poblacin de micelios subterrneos sufre una lisis masiva.

Propiedades de las esporas de los estreptomicetos:

bullet
la pared celular de la espora es ms gruesa que la de la clula vegetativa;
bullet
no hay cambio cualitativo en el peptidoglucano;
bullet
no hay crtex ni cubiertas;
bullet

son muy hidrofbicas: se resisten a ser suspendidas en agua. Esto parece que
se debe a una vaina que rodea a la pared celular, compuesta a base de tbulos
auto-ensamblables.
bullet
resisten ms al calor y a la desecacin en comparacin a las clulas
vegetativas, pero menos que las endosporas.
bullet
son metablicamente durmientes (clulas en reposo).
4

QUISTES BACTERIANOS

Son clulas que se producen en algunas especies por engrosamiento de

la pared celular de la clula vegetativa, por deposicin de nuevos materiales
externamente a la membrana citoplsmica, al mismo tiempo que se acumulan
materiales de reserva en el citoplasma. Poseen metabolismo endgeno, y
resisten al calor, a la desecacin y a agentes qumicos ms que la
correspondiente clula vegetativa (pero menos que las endosporas).

Ejemplos:

bullet
Quistes de Azotobacter y Bdellovibrio.
bullet
Microquistes de Mixobacterias, llamados mixosporas: sus envueltas constan de
una corteza, rodeada de cubiertas (interna y externa). Estas cubiertas se
componen de una glucoprotena muy rica en polisacridos.
5

DIFERENCIACIONES EN CIANOBACTERIAS

En las cianobacterias filamentosas (que forman tricomas) se pueden

observar dos tipos principales de clulas diferenciadas a partir de las
vegetativas: heteroquistes y acinetos.

Heteroquistes (= heterocistes)

Son clulas de trmino, sin funcin reproductiva, especializadas en la

fijacin de nitrgeno molecular (N2), de mayor tamao que las clulas
vegetativas.

La conexin entre clulas vegetativas y heteroquistes se establece a

travs de un estrangulamiento de los polos de stas. La unin est atravesada
por una serie de finos canales llamados microplasmodesmos, que reducen al
mnimo el intercambio de sustancias entre ambas clulas.

Por fuera de la pared celular (que es de tipo Gram-negativo), existen tres

cubiertas:

bullet
una capa laminada interna a base de glucolpidos exclusivos de cianobacterias;
bullet
una capa homognea central a base de polisacridos;
bullet
una capa fibrosa externa, tambin polisacardica, pero menos compactada.
Estas tres capas evitan la difusin del O2 al interior del heteroquiste, lo que
representa uno de los mecanismos para la proteccin de la nitrogenasa
(complejo enzimtico que reduce el N2 a NH4+, y que es muy sensible al
oxgeno).

Pero el heteroquiste dispone de ms estrategias para la proteccin de la

nitrogenasa:

bullet
aparte de los microplasmodesmos, en las uniones con las clulas vegetativas
adyacentes se forman sendos tapones de cianoficina;
bullet
los tilacoides se disponen como un retculo polar y perifrico, y carecen de
ficobilisomas, por lo que no pueden realizar la fase II de la fotosntesis. Por lo
tanto, los heteroquistes no generan oxgeno, ya que slo realizan la
fotofosforilacin cclica.
Acinetos (=aquinetos)

Son formas de reposo que se originan a partir de clulas vegetativas,

por acumulacin de nuevas capas de materiales polisacardicos por fuera de la
pared celular, y por formacin de acmulos de reserva en el citoplasma.

Resisten ms que las clulas vegetativas los perodos de desecacin y

de congelacin, pero no al calor.

Cuando las condiciones ambientales mejoran, se producen sucesivas

divisiones transversales en el acineto, que finalmente se convierte en un
filamento ms corto y menos grueso que los tricomas, llamado hormogonio.