CRESCIMENTO MICROBIANO

em suspenso em meio lquido

Fases da diviso celular fisso binria (p.ex. E.coli)

Microscopia de
contraste de fase
Microscopia de fluorescncia
(colorao do nucleide
com DAPI)
Deteco das protenas que
formam o anel FtsZ)

(combinao de coloraes
nucleide e anel FtsZ)

- Anel proteico (~10000 molculas FtsZ) no centro da clula, quando comea a

segregao dos dois nucleides (DNA).
Fts Filamentous temperature sensitive
- Proteinas Fts do anel proteico divisoma (no centro da clula em diviso; orquestra sntese da
membrana plasmtica e da parede celular durante enlongamento da clula, seguindo-se constrio
para formar o septo e separao das clulas).

Ciclo celular
(ex. Eschericia coli)

Fase C

Fase D

E. coli
Tempo de gerao mdio, em condies ptimas
~ 25 minutos

EXPERINCIA DE CRESCIMENTO DE UMA

POPULAO MICROBIANA EM SUSPENSO EM MEIO LIQUIDO
1. INOCULAO

A
B

2. INCUBAO COM AGITAO

ORBITAL CONSTANTE E
TEMPERATURA CONTROLADA

3. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE CLULAS, AO LONGO DO TEMPO

CRESCIMENTO EXPONENCIAL
Imagine que arranja uma forma de manter uma populao de clulas de E. coli em
crescimento exponencial durante 24 horas. Se partir de uma nica clula, estime
quantas clulas obteria aps esse perodo de 24 horas.

Escherichia coli tempo de duplicao ~ 25 minutos

24 horas 57 duplicaes
1 clula
(10-12 gramas)

= 140.737.488.400.000.000 clulas
(~1,4 x 1017)
~ 144 Kg de biomassa

Evoluo da concentrao de clulas da populao microbiana

CRESCIMENTO
EXPONENCIAL

[clulas]

(http://www.e-escola.utl.pt)

21

[clulas]

N0. 21

N0

Concentrao de clulas no incio da

fase de crescimento exponencial

Nt = N0.2n

n =

log Nt - log N0
log 2

g=t/n

2n

22
N0.22

(aps n geraes)

N0.2n (aps n geraes)

Concentrao de clulas aps

um periodo de tempo t de
crescimento exponencial - Nt.
n - n de geraes ocorridas durante o
perodo t de crescimento exponencial

g o tempo de duplicao (ou, de gerao) (min ou h)

Representao grfica do crescimento exponencial

Cintica do crescimento exponencial

Escala logaritmica

Representao matemtica (fase exponencial)

Fase
exponencial

dNt
dt

-taxa especfica
= .Nt

de crescimento da
populao microbiana

Equivalente a
Ou Nt = N0 e

N,

lnNt = lnN0 + (t-t0) (1)

N0

g
t0
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, th edition,Mc GrawHill, 2002

Crescimento exponencial equilibrado

clulas completamente adaptadas s
condies de crescimento
N pode representar:
- Concentrao de clulas, N;
- Densidade ptica da cultura, DO;
- concentrao de biomassa, X,
- concentrao de qualquer componente celular
(p.ex. proteinas)

(t-t0)


Estimativa da taxa especfica de crescimento da populao,

A equao que representa o crescimento exponencial de uma populao microbiana
corresponde equao de uma recta ( onde y = lnNt , x = (t-t0))

ln Nt = lnN0 + (t-t0) (1)

y = b + ax

a - declive (= )
b ordenada na origem (= ln N0)

- taxa especfica de crescimento da populao

microbiana (o valor de corresponde ao declive
da recta lnNt vs. (t-t0))

Unidades :
tempo-1
(h-1; min-1)

Estimativa do tempo de duplicao da populao, g

Substituindo na equao (1)
(t-t0) = g quando Nt = 2.N0

g=

ln 2

(h; min)

OBTENO DA CURVA DE CRESCIMENTO DA POPULAO MICROBIANA

MTODOS PARA AVALIAR A
CONCENTRAO DE CLULAS NUMA POPULAO MICROBIANA

Contagem de clulas viveis (N)

- Mtodo das diluies sucessivas e espalhamento
em meio slido

Mtodo espectrofotomtrico (DO)
Determinao da massa celular (biomassa, X)

Contagem directa de clulas
Cmaras de contagem (microscpio ptico)
Contadores electrnicos

CONTAGEM DE CLULAS VIVEIS

[expresso em UFC (Unidades Formadoras de Colnias) por ml de suspenso]
Mtodo das diluies sucessivas e
espalhamento em meio slido

As placas devem ter entre

~ 20 e 300 colnias

N = 1.59 x 105 UFC / ml

DETERMINAO ESPECTROFOTOMTRICA DA DENSIDADE CELULAR

(Densidade Optica DO - medida a um comprimento de onda, , particular)

I0 intensidade de luz incidente

( particular)

I0

I intensidade de luz transmitida

atravs da suspenso de clulas

Transmitncia (T) = (I/Io) x 100 (%)

I0

DO = Abs
= - log T/100
= log (I0/I)
Prescott, Harley & Klein, Microbiology,
th edition,Mc GrawHill, 2002

Medido

DO640nm

Terico

Medies no
espectrofotmetro

0

Concentrao de clulas

BIOMASSA -

representado normalmente por X

Estimativa da biomassa seca (peso seco)

- Pesagem da massa de clulas presentes na cultura microbiana.
- Peso seco ou hmido
- usado em circunstncias especficas, como, por exemplo
quando se pretende obter o rendimento em biomassa do crescimento.

Em certas condies, o aumento da massa

pode no reflectir crescimento da populao, mas
aumento de compostos de reserva

Cmara de contagem

Lmina de vidro especial, onde

est marcado um reticulado com
dimenses conhecidas; tambm
conhecida a distncia da lmina
lamela, sendo possvel estimar o
volume de suspenso de clulas
sobre o reticulado.

Fcil, barato e rpido.

til para contar clulas de

eucariotas e procariotas.

No distingue clulas viveis de

mortas.

Observao no
Microscpio
ptico

Figure 6.5
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, th edition,Mc GrawHill, 2002

CURVA DE CRESCIMENTO DUMA POPULAO MICROBIANA

EM DESCONTNUO (BATCH)
Cultura batch sistema fechado (excepto troca de gases)

Log Optical Density (OD. ---)

Fase estacionria

Fase de morte
Fase de latncia
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, th edition,Mc GrawHill, 2002

Fase exponencial

Variao da concentrao de clulas duma populao bacteriana

(incubao em meio de cultura lquido, a 37C)
Tempo (h)

N (clulas / mL)
1.0 x 104
1.0 x 104
1.5 x 104
3.0 x 104
3.6 x 104
4.9 x 104
5.0 x 104

0
0.5
1
2
2.5
3
4

Latencia
Exponencial

x 104 N
(Escala logaritmica)

Exemplo clculo da taxa especfica de crescimento

5
4
3


1

Estacionria

Populao duplica
em 1h

ln N2 ln N1
=

Estimativa do tempo de duplicao, g

Declive: 0,7

Tempo (h)

= 0.7 h-1 )

= ln (3.0 x 104) - ln (1.5 x 104) = 0.7 h-1

(2-1)

g = ln2 / = ln2 / 0.7 = 1 h

declive = 0.7



Estimativa da taxa especfica de crescimento da populao,

(Anlise de regresso linear: ln Nt vs. t

Valores de g e de dependem de:

- potencial gentico da estirpe microbiana.

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, th edition,Mc GrawHill, 2002

- composio do meio de cultura;

- condies ambientais (Temperatura, pH,
disponibilidade de gua, nvel de oxignio, etc.)

Exemplo:

Crescimento
diuxico

Crescimento de populao de Escherichia coli

em meio de cultura com duas fontes de C e energia,
glucose e lactose.

ln [ Clulas viveis]

lactose

Consumo de lactose
Glucose
esgotada

Consumo de glucose

Tempo
Glucose rapidamente metabolizada;
Represso da expresso do opero da lactose
(Fenmeno: Represso Catablica)

-galactosidade

glucose + galactose

INFLUNCIA DA CONCENTRAO DE
NUTRIENTE LIMITANTE
NO CRESCIMENTO MICROBIANO

30




15

2
1

[Nutriente], S (---)

[Biomassa] X (mg/L)

5
4
3


0

Tempo (h)

A cheio (vermelho) - Curva de crescimento expressa em termos de evoluo da concentrao total

de biomassa formada (escala logaritmica) em funo do tempo.
A tracejado (azul) Evoluo da concentrao do nutriente S ao longo do tempo de crescimento.

The relationship between concentration of limiting nutrient,

growth rate (green curve) and growth yield (red curve)
in a batch culture (closed system).

At low nutrient concentrations both growth rate and growth yield are affected.

A taxa especfica de crescimento, , depende da

concentrao de nutriente limitante (S) fornecida no meio de cultura

max
EQUAO DE MONOD
S
= max
Ks + S

max
2

Ks

,S
Concentrao
saturante de S

Situao raramente encontrada nos

ambientes naturais, onde um ou mais nutrientes
esto normalmente presentes em concentraes
limitantes ( < max )

max

- Taxa especfica mxima de crescimento

- quando concentrao de S saturante;
sistemas de transporte transmembranar
para o nutriente S esto saturados

KS

Constante de semi-saturao
- numericamente igual concentrao de substrato
que permite uma taxa de crescimento igual a
metade da max;
reflecte a afinidade dos sistemas de transporte
transmembranar para a molcula do nutriente
limitante (maior Ks menor afinidade menor )
Os valores das constantes max e KS dependem:
- das caracteristicas intrnsecas do microrganismo;
- do substrato limitante;
- das condies ambientais (ex. Temperatura, pH, etc.)
Microrganismo

Temperatura

Escherichia coli
Escherichia coli
Escherichia coli
Saccharomyces cerevisiae
Candida tropicalis

37C
37C
37C
30C
30C

Nutriente limitante
Glucose
Glicerol
Lactose
Glucose
Glucose

max (h-1)
0.8-1.4
0.9
0.8
0.5
0.5-0.6

Ks (mg/L)
2-4
2
20
25
50-75

- Competio entre diferentes microorganismos (p.ex. S. cerevisiae e C. tropicalis)

Inibio pelo substrato

,S

Rendimento
do crescimento, Y =

Biomassa total formada (fase estacionria)

=
Massa de nutriente usada

X
S

- Y reflecte a eficincia do crescimento microbiano relativamente ao nutriente (substrato) limitante

usado para crescimento
(fins comerciais / custos de produo)

Biomassa produzida (g)

FACTOR DE RENDIMENTO EM ATP (YATP) =

ATP produzido (moles)

Medida da eficincia com que a clula utiliza para crescimento (i.e. biossntese de novo
de biomassa) a energia que produz.

Conceito de ENERGIA DE MANUTENO

Exemplo:
S fonte de C e energia, fermentiscvel (p.ex. glucose)

verifica-se que YATP real

BIOSSNTESE DE MATERIAL CELULAR (CRESCIMENTO)

< YATP terico

(i.e., admitindo que
todo o ATP sintetizado
usado para
biossntese)

S
ENERGIA ( ATP)

Energia de MANUTENO (desvio)

(Ex. Gastos em renovao de macromolculas (protenas, RNA),
expulso activa de metabolitos txicos, manuteno de gradientes
electroqumicos de ies e do pH intracelular em nveis ptimos, etc.
Para uma dada estirpe microbiana, o valor YATP depende das condies ambientais.
Quanto mais afastadas das condies ptimas, maiores so os gastos de energia para manuteno:
YATP

Esquema de bioreactor (ou fermentador)

industrial para microrganismo aerbio
(Note os sistemas para medio e controlo de
temperatura, pH, nivel de oxignio e
para anlise de metabolitos biosensor unit)

Prescott, Harley & Klein, Microbiology,

th edition,Mc GrawHill, 2002

Scale-up na produo industrial de microrganismos

(exemplo- produo de clulas da levedura Saccharomyces cerevisiae)

TIPOS E EXEMPLOS DE
PRODUTOS DE ORIGEM
MICROBIANA

Metabolitos primrios vs. secundrios

Metabolito primrio
associado ao metabolismo
essencial do microrganismo

Concentrao
de produto formado

Concentrao de clulas ou
massa celular

Formao de
metabolito primrio

(Ex. etanol, produzido em resultado

da fermentao alcolica)

Crescimento

Crescimento

Formao de
metabolito secundrio

Tempo

Metabolito secundrio
aps a fase de produo das
clulas (aps o crescimento exponencial),
normalmente a partir de um metabolito
primrio ou de substrato usado para
crescimento que esteja em excesso
Ex. antibiticos produzidos
por fungos miceliais ou por
bactrias)

CULTURA CONTNUA DE
MICRORGANISMOS NO QUIMIOSTATO

S0, F

Esquema de
funcionamento
de um bioreactor para a
cultura contnua de
microrganismos
(exemplo - quimiostato)

X, S, F

QUIMIOSTATO opera por fornecimento do nutriente limitante do crescimento a uma taxa constante
(relacionada com o caudal de entrada do meio de cultura fresco), de modo que a densidade celular
(biomassa) e a taxa especfica de crescimento do microrganismo se ajustam a este fornecimento.

TAXA DE DILUIO
Caudal de alimentao do meio fresco = caudal de sada da cultura = F (Litros/hora)
Volume da cultura no quimiostato = V = constante (L)

F
D taxa de diluio =
V

(h-1) (inverso do tempo de reteno mdio da clula

no interior do quimiostato)

ESTADO ESTACIONRIO
O quimiostato permite manter a populao microbiana em crescimento
equilibrado, isto , na fase de crescimento exponencial, durante
perodos de tempo longos i.e. em ESTADO ESTACIONRIO.

Equao do estado estacionrio no quimiostato

Balano de massas massa celular, X
(no h morte celular;
no h entrada de clulas do exterior, X0=0))
Variao da
massa celular
no quimiostato

dX
dt

Massa celular
produzida

.X

Massa celular
que sai no
efluente
V = volume de cultura
no quimiostato (L)

.X

Estado
dX
=0

estacionrio
dt

.X =

F
V

.X

S0, F

X, S, F
X massa celular (g/L)

F
V

F caudal (L/h)

=D

S concentrao de nutriente
Limitante (g/L)
T tempo (h)

=D

taxa especfica de crescimento (h-1)

D taxa de diluio (h-1)

Estado estacionrio (steady state) no quimiostato

Dependncia da concentrao de biomassa (X), da concentrao de nutriente limitante (S)
e do tempo de duplicao da populao microbiana no estado estacionrio, em funo da
taxa de diluio a que o quimiostato opera (D).
(X)

(S0)

(S)
(D)
Exemplo: Volume cultura = 5000 mL; Caudal atravs do
quimiostato, F = 2500 mL/hora --- D = 0,5 h-1
Nota: alterao de F alterao da taxa de diluio, D

WASHOUT
(quando D Dc

Dc taxa de diluio crtica)

 Desvio ao modelo estabelecido para o quimiostato (X em funo de D):

Caso - limitao do crescimento pela fonte de C
Microrganismos quimiorganotrficos hetrotrficos (p.ex., nutriente limitante S fonte de Carbono e
de energia) uma parte significativa da energia produzida a partir de S desviada para gastos
energticos de manuteno (Energia de Manuteno).
Mensurvel quando a taxa de diluio a que o quimiostato opera muito baixa

(X)

(S0)

(S)
(D)

Vantagens/aplicaes do crescimento microbiano em contnuo no quimiostato

(versus crescimento descontnuo ou batch):

Populao microbiana na fase exponencial do crescimento durante perodos
longos (semanas, meses)

Culturas em crescimento exponencial com taxas especficas de crescimento diferentes
(atravs da (simples) modificao da taxa de diluio til para estudos fisiolgicos)

Produto com caractersticas constantes durante perodos de tempo longos

Maiores produtividades, e eliminao de tempos mortos

Vantagens na seleco de microrganismos que sejam mais competitivos
na utilizao do nutriente limitante

Vantagens no estabelecimento de culturas de enriquecimento para isolamento de

populaes microbianas especficas a partir de populaes mistas (por ex., amostras
ambientais)

A afirmao (ou no) de um dado microrganismo face a outro (p.ex., se a populao for mista), depende da
relao entre os coeficientes de Monod para os microrganismos em causa (depende em particular da constante de
semi-saturao para o substrato S, KS, que inversamente proporcional eficincia com que o microrganismo
utiliza o nutriente limitante).

EXEMPLO
Quimiostato a
operar com D = A

Microrganismo A

Microrganismo B

D = A = max A

maxA ~ maxB

KsA + S

S
B = max B

KsB + S

Se KSB > KSA B < A B < D

S o microrganismo A permanece no quimiostato

B no permanece no quimiostato (i.e. sofre washout)

Se KSB < KSA B > A B > D

B permanece no quimiostato, juntamente com A

Em cultura contnua, um microrganismo invasor (p.ex. contaminante ou mutante vivel)

pode acumular no quimiostato, se for competitivo, isto , se utilizar o nutriente limitante
eficientemente face estirpe microbiana original contaminao da cultura original.
Mas, se no for competitivo, expulso do quimiostato.

NOTAS sobre crescimento microbiano

CRESCIMENTO MICROBIANO

O crescimento microbiano definido como o aumento coordenado de todos os constituintes celulares

(por exemplo, cidos nucleicos, protenas, lpidos ). Este aumento est normalmente associado ao aumento
do nmero de clulas em consequncia da multiplicao celular.
definido como o crescimento duma populao de clulas dum microrganismo, ou seja,
o aumento do nmero de clulas do microrganismo ao longo do tempo.
normalmente quantificado em termos do aumento no tempo de:
(i) n de clulas; (ii) densidade ptica da cultura; ou, (iii) massa celular (biomassa).
Em certas condies, o aumento da massa pode no reflectir crescimento da populao, mas
aumento de compostos de reserva (p.ex. glicognio, poli--hidroxibutirato, etc.)
Grande parte dos microrganismos multiplica-se por fisso binria (p.ex. maior parte das bactrias) ou
por gemulao (p.ex. maior parte das leveduras). Em consequncia do processo de multiplicao
celular, uma clula dar origem a duas ao fim de um certo perodo de tempo que designado por
tempo de gerao ou duplicao.

O tempo de duplicao (ou gerao) pode repetir-se vrias vezes, enquanto estiverem disponveis no
meio de cultura nutrientes em quantidade suficiente para assegurarem os metabolismos
catablico (bioenergtico) e anablico (biossntese) das clulas e enquanto as condies ambientais
forem favorveis.

A durao do crescimento exponencial de bactrias em meio de cultura laboratorial

depende da bactria em causa e pode ficar limitada por falta de nutrientes, privao de
oxignio, acumulao de produtos txicos, ou outros factores.

O conhecimento dos valores de (taxa especifica de crescimento) e de g (tempo de duplicao)

para um dado microrganismo permite:
- prever como evoluir a concentrao de clulas ao longo do tempo de incubao num determinado
meio de cultura e/ou em determinadas condies ambientais;
- testar o efeito de uma determinada alterao das condies ambientais sobre o
crescimento do microrganismo (p.ex. modificao do meio de cultura, da Temperatura, etc.)
OBJECTIVOS ESSENCIAIS:

seleccionar as condies de cultura ptimas para um dado microrganismo.

estabelecer mtodos que permitam controlar o crescimento de microrganismos.

Contadores electrnicos
(ex. Contador coulter, citmetro de fluxo)

So instrumentos usados para contar partculas em suspenso.

Possuem um pequeno orifcio onde estabelecida uma corrente elctrica
por recurso a 2 elctrodos.
Suspenso de clulas forada a passar pelo orifcio.
A passagem de cada partcula (clula, esporo, etc.) causa uma diminuio
momentnea da condutividade elctrica entre os elctrodos.
Os perodos de interrupo da corrente elctrica so contados,
sendo essa contagem uma medida do nmero de partculas presentes na
suspenso.

Fcil e rpido
No permite distinguir clulas viveis de mortas
til para microrganismos grandes, mas no para a maior parte das
bactrias

FASES DO CRESCIMENTO MICROBIANO EM DESCONTNUO

Cultura batch sistema fechado (excepto troca de gases)
Fase de latencia
No ocorre aumento mensurvel do nmero de clulas. Fase de adaptao ao novo meio
(p.ex. sntese de novas enzimas) e a condies ambientais novas.
Durao da fase de latncia pode ser longa (vrias horas), quando esto presentes
compostos txicos, substratos dificeis de metabolizar ou o inculo insuficiente (n de
clulas viveis ou vitalidade das clulas insuficientes).

Fase exponencial
Crescimento da populao com taxa (velocidade) constante. Durante esta fase, em que
todos os nutrientes esto presentes em excesso, os microrganismo dividem-se e a
populao cresce com uma taxa especfica de crescimento mxima. O valor desta taxa
de crescimento depende do potencial gentico do microrganismo, da composio do
meio de cultura e das condies de crescimento (temperatura, pH, disponibilidade de
gua, etc.).
Fase estacionria
O crescimento da populao pra, devido a esgotamento de nutriente essencial
ou acumulao de metabolito txico. Parte das clulas podem permanecer viveis durante
algumas horas custa do consumo de materiais de reserva endgenos.
Algumas espcies bacterianas exibem, nesta fase de crescimento, a produo de endsporos.

Fase de morte
Perda irreversvel da capacidade de diviso celular; ocorre o decrscimo progressivo
no n de clulas viveis da populao.

NOTAS SOBRE CULTURA CONTNUA

QUIMIOSTATO opera por fornecimento do nutriente limitante do crescimento a uma taxa constante
(relacionada com o caudal de entrada do meio de cultura fresco), de modo que a densidade celular
(biomassa) e a taxa especfica de crescimento do microrganismo se ajustam a este fornecimento.
Meio de cultura fresco (esterilizado) fornecido contnuamente (caudal F), o qual contm, entre outros
nutrientes, o nutriente limitante (concentrao S0). Simultneamente, parte da cultura removida, com
o mesmo caudal F a que meio de cultura fresco entra. O efluente removido contm clulas do
microrganismo (biomassa, X), assim como produto(s) sintetizado(s) pelas clulas. A concentrao de
nutriente limitante sada (S) , em condies operacionais adequadas, muito baixa ou
aproximadamente nula.

No estado estacionrio (no quimiostato):

a taxa especfica de crescimento do microrganismo () controlada pela taxa
de diluio a que o quimiostato opera (D) (i.e. vlida a equao = D)
e, consequentemente, pela razo entre o caudal (F) e o volume de cultura no
recipiente (V)

possvel obter populaes microbianas em crescimento com taxas especficas

de crescimento diferentes atravs da alterao da taxa de diluio aplicada no
quimiostato

a densidade celular (biomassa, X) obtida no quimiostato controlada pela

concentrao do nutriente limitante, sendo vlida a equao

X = Y (S0-S)
onde Y o rendimento do crescimento para o substrato limitante e S representa a
concentrao residual do nutriente limitante no quimiostato.

Modelo para o crescimento no quimiostato equao de Monod
i.e., o valor da taxa de diluio, D, relaciona-se com a concentrao de nutriente
limitante do crescimento com base na equao de Monod

S
D=

D = max
Ks + S

S=

D. KS
max - D

Notas sobre as representaes grficas da concentrao de biomassa (X), da

concentrao de nutriente limitante (S) e do tempo de duplicao da populao
microbiana no estado estacionrio, em funo da taxa de diluio a que o
quimiostato opera (D).
 A densidade celular (biomassa, X) igual, para uma gama larga de taxas de diluio a que o
quimiostato pode operar (consequentemente, a concentrao residual de nutriente limitante, S, no
quimiostato mantida com um valor baixo, uma vez que este nutriente est a ser consumido pelas
clulas da cultura em crescimento) ;

 Apesar da concentrao de biomassa permanecer constante, a taxa especfica de crescimento pode

variar com a variao da taxa de diluio que aplicada no quimiostato (porque = D); quanto maior
a taxa de diluio, maior a taxa de crescimento da populao (e, inversamente, menor o
tempo de duplicao ou gerao).

 A gama de valores de taxa de diluio, D, a que o quimiostato pode operar limitada. O valor limite
a taxa de diluio crtica (Dc). Para valores muito altos da taxa de diluio (D Dc), o crescimento
celular no consegue compensar a diluio da cultura, e a populao de clulas sai do quimiostato
(Wash-out lavagem do quimiostato) ; consequentemente, nessas condies, a concentrao de
nutriente limitante aumenta, porque no consumido ; quando D Dc S=S0)
 A taxa de diluio torna-se crtica e ocorre o Wash-out quando a taxa de diluio a que o
quimiostato opera ultrapassa a taxa especfica mxima de crescimento da populao microbiana (mx)


Cultura contnua permite estabelecer condies selectivas para o enriquecimento de

amostras ambientais (populaes mistas) em microrganismos especficos
Por exemplo:
 microganismos capazes de metabolizar eficientemente nutrientes txicos ou
dificilmente metabolizveis (comparativamente a outros microrganismos presentes
numa amostra ambiental, p.ex. solo, gua, esgoto, etc.)
P.ex. til para o isolamento de microrganismos capazes de biodegradar
hidrocarbonetos do petrleo, benzeno, fenol, cido benzico, pesticidas ou
outros compostos orgnicos, a partir de solo (populao mista).
(nestes casos, o quimiostato inoculado com a amostra ambiental; o meio de cultura fresco contm o composto em causa
como substrato limitante para crescimento e fornecido contnuamente com taxa de diluio adequada; nestas condies,
prolifera(m) preferencialmente o(s) microrganismo(s) que seja(m) capaz(es) de metabolizar eficientemente o composto em
causa; outros microrganismos que no tenham essa capacidade (p.ex, com < D) eventualmente presentes na amostra
ambiental, sofrero washout, sendo expulsos do quimiostato)

Em cultura contnua, mediante a seleco de taxa(s) de diluio adequada(s), possvel

seleccionar uma populao de clulas dum microrganismo nico, que seja muito competitivo
e metabolize muito eficientemente um composto orgnico face a outros microrganismos
menos competitivos eventualmente presentes numa populao mista inicial.
Pelo contrrio, em cultura descontnua/batch, todos os microrganismos, mais ou menos competitivos
na utilizao do composto orgnico, permanecem no meio de cultura
cultura batch menos eficiente quando se pretende seleccionar microrganismos muito eficientes
na utilizao do composto em causa como substrato para crescimento.

Se ocorrer:
1  Contaminao da cultura
Em cultura contnua, necessrio manter condies de esterilidade durante perodos longos.
A adio contnua de meio fresco e o arejamento aumentam a probabilidade de ocorrer contaminao
da cultura. Contudo, condies especiais, tais como temperaturas elevadas, valores de pH extremos
e substratos pouco usuais podem reduzir a probabilidade de ocorrer contaminao da cultura.

2  Degenerescncia da cultura
Durante a multiplicao celular dum certo microrganismo pode ocorrer uma mutao expontnea, e
surgir um mutante vivel na cultura.

Consequncias
Em cultura contnua, um microrganismo invasor (contaminante ou mutante vivel) acumula
no quimiostato se for competitivo, isto , se utilizar o nutriente limitante eficientemente face
estirpe microbiana original contaminao da cultura original.
Mas, se no for competitivo, expulso do quimiostato.
Na cultura bacth, todo o contaminante (ou, mutante vivel) capaz de utilizar o
nutriente limitante acumula no meio de cultura, juntamente com o microrganismo
que se pretende cultivar contaminao da cultura original.