Ao de la Diversificacin

Productiva y del
Fortalecimiento de la
Educacin

La
I) Introduccin
cromatografa

INGENIERO:

FLOR DE MARA VSQUEZ

NEZ

CURSO: Laboratorio de anlisis

SECCIN:

ESCUELA: INGENIERA
AGROINDUSTRIAL
ALUMNO:

CHICO MORALES, JEAN

CARLOS.
BORDA BERNAL, MISHELLE.
CELENI MERINO , RUTH
ARQQE MALDONADO. RENZO,

CICLO:
AO:2015

VI

La cromatografa es una herramienta fundamental para separar las

sustancias qumicas a travs de cada una de sus fases que en este
estudio se determinaran. Cuyo objetivo es la

cromatografa

de

los cidos, pero para alcanzar lo antes mencionado es necesario

pasar por unas etapas y procesos de clasificacin como lo son: la
cromatografa plana, voltil y de gases que se profundizaran en
este trabajo de investigacin.
Las fases para obtener una cromatografa correcta son mviles y no
mviles cuyo estado nos llevaran a una separacin correcta de las
sustancias acidas. Cuyo estudio Eficaz y con el conocimiento de cada
uno de los enunciados tericos se podrn llegar a determinar la
cromatografa de los cidos siguiendo cada uno de los procesos
fundamentales que se estudiaran a continuacin.

II) Objetivos:
Conocer la cromatografa como tcnica de separacin de
mezclas de sustancias, sus caractersticas y los factores que en
ella intervienen.
Estudiar la incidencia del coeficiente de reparto entre la fase
mvil y la fase estacionaria.
Analizar la influencia del

solvente

en

la

separacin

cromatografa.
Observar las diferentes caractersticas de la placa en la
cromatografa.

III) Marco terico:

Antecedentes/histrico
La cromatografa es un mtodo fsico de separacin en el cual los
componentes a ser separados son distribuidos entre dos fases, una de
las cuales es estacionaria mientras la otra se mueve en una direccin
definida. Los componentes son separados por sus diferentes tazas de
migracin (IUPAC). La cromatografa puede ser clasificada por su
utilidad y en base al material que se utilice como eluyente para
separar los solutos. De acuerdo a su utilidad la cromatografa se
clasifica

en:

analtica,

utilizada

para

determinar

los

qumicos

presentes en una mezcla y en que concentracin; y preparativa,

utilizada para purificar grandes cantidades de qumicos. La primera
tcnica cromatogrfica fue ideada por el botnico ruso Mikhail Tswett
en 1906, quien utiliz almina para separar los pigmentos coloreados
de las hojas de las plantas. Tswett en su experimento original, meti
dentro de un tubo de vidrio un fino polvo (sacarosa) para producir una
columna

de

una

altura

deseada.

Posteriormente,

extrajo

los

pigmentos de hojas y los coloc en un solvente (ter de petrleo) y

agreg un poco de la solucin dentro de la columna. Cuando toda la
solucin haba pasado a travs de la columna se form una estrecha
zona inicial bajo la capa inicial del adsorbente. Despus agreg ms
solvente y aplic presin en la parte de arriba de la columna. Mientras

el solvente iba pasando a travs de la columna, los pigmentos se iban

separando individualmente (Fig. 1). La clave del xito de la columna
de Tswett, fue la aplicacin de la mezcla dentro de la columna en una
zona inicial estrecha y la posterior aplicacin del solvente fresco.

Cromatografa
La cromatografa es una tcnica de anlisis que se basa en hacer que
un fluido (puede ser gas o liquido) denominado fase mvil, circule a
travs de una fase estacionaria (puede ser liquido).
Cuando se introduce en este sistema una mezcla de sustancias se
produce una seie de equilibrios de distribucin entre las dos fases, de
distinta magnitud para cada componente de la mezcla. De esta
forma, cada uno se desplaza a distinta velocidad obtenindose la
separacin de las diferentes sustancias.
La cromatografa puede ser:
cromatografa de gases (la fase mvil es un gas).
Cromatografa de lquidos (la fase mvil es un lquido).

Cromatografa de gases
La cromatografa de gases utiliza un gas como fase mvil, pudiendo
ser gas-liquido o gas-solido, dependiendo de la fase estacionaria. La
cromatografa gas-liquido realiza separacin mediante el reparto de
componentes de la mezcla entre la fase gaseosa y la fase liquida que
permanece estacionaria sobre un soporte slido. La cromatografa
gas-solido utiliza un absorbente slido como fase estacionaria.

Tipos de cromatografa de gases

Existen dos tipos de cromatografa de gases:

1. Cromatografa gas-slido (GSC)

En la GSC la fase estacionaria es slida y la retencin de los
analitos en ella se produce mediante el proceso de adsorcin.
Precisamente este proceso de adsorcin, que no es lineal, es el
que ha provocado que este tipo de cromatografa tenga
aplicacin limitada, ya que la retencin del analizo sobre la
superficie es semipermanente y se obtienen picos de elucin
con colas. Su nica aplicacin es la separacin de especies
gaseosas de bajo peso molecular.

2. Cromatografa gas-lquido (GLC)

La GLC utiliza como fase estacionaria molculas de lquido
inmovilizadas sobre la superficie de un slido inerte.

PRINCIPIOS DE LA TCNICA
En cromatografa de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la
cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se produce por el
flujo de una fase mvil que es un gas inerte, y a diferencia de la
mayora de los tipos de cromatografa, la fase mvil no interacciona
con las molculas del analizo; su nica funcin es la de transportar el
analizo a travs de la columna.
Respecto a la cromatografa lquida, la cromatografa de gases tiene
la ventaja de disponer de detectores mucho ms universales (por
ejemplo, el de ionizacin de llama). Adems, para numerosas
aplicaciones, los mtodos son ms simples, ms rpidos y ms
sensibles que los correspondientes a la cromatografa lquida de alta
resolucin. La instrumentacin requerida para cromatografa de
gases tambin es mucho ms sencilla y econmica que la empleada
en HPLC. Sin embargo, en cromatografa de gases, la influencia de la

temperatura sobre la distribucin del equilibrio es considerable, a

diferencia de la cromatografa lquida. Por ello, la cromatografa de
gases presenta limitaciones en tres casos:

Compuestos poco voltiles, generalmente los de peso molecular

superior a 300 u.m.a.
Compuestos sensibles a una elevacin de la temperatura incluso
moderada (determinados compuestos de inters biolgico)
Compuestos que se encuentran en forma inica (puesto que son
e n general poco voltiles).
Por esta razn, la cromatografa de gases se emplea cuando los
componentes de la mezcla problema son voltiles o semivoltiles y
trmicamente estables a temperaturas de hasta 350-400C. En cambio,
cuando los compuestos a analizar son poco voltiles y/o termolbiles, la
tcnica separativa adecuada suele ser la cromatografa lquida de alta
resolucin (HPLC).

A menudo la cromatografa de gases se emplea para confirmar de la

presencia o ausencia de un compuesto en una muestra determinada.

tr
N=16 ( )
w

N= nmero de placas tericas, adimensional

tr= tiempo de retencin de un compuesto, minutos
w= ancho del pico a media altura, minutos
La teora cintica considera el comportamiento en un proceso
cromatogrfico en funcin de los factores cinticos que intervienen:
Variaciones en las velocidades de flujo, debido a las diferentes rutas
que puede tomar el analito durante su migracin a travs del
empaque. Difusin axial o longitudinal del soluto en la fase mvil.
Resistencia a la transferencia de masas entre la fase mvil y la fase
estacionaria. La ecuacin de Van Deemter

HETP o H=A+B/u+Cu

HETP o h= altura equivalente a una placa terica, milmetros.

u= L/ tr aire promedio de la velocidad lineal, cm/seg
A= 2dp difusin aparente
B= 2Dm coeficiente del trmino debido a la difusin molecular
C= (8/)(k/[1+ k] 2 )(df/Ds) coeficiente del trmino debido a la
resistencia a la transferencia de masas.
En la teora para las columnas capilares se considera que la difusin
aparente no contribuye de manera apreciable al ensanchamiento de
los picos en este tipo de columnas. El coeficiente relacionado con la
difusin molecular tiene un valor de uno debido a que la distancia
que recorre la partcula es igual a la longitud de la columna. El
trmino relacionado con la transferencia de masas viene dado en
funcin del dimetro de la columna, pues en este tipo de columna es
ms importante que el tamao de partcula de relleno. La ecuacin
de esta teora es un caso particular de la ecuacin de la teora
cintica, en este caso se omite el trmino A pues su valor es
despreciable; se relacionan las magnitudes que caracterizan la
geometra del soporte y el trmino C se presenta de manera distinta
pues en este tipo de columna es ms importante la fase mvil que el
tamao de partcula.

Mtodos cromatogrficos
Los mtodos que se utilizan en anlisis qumico presentan una
selectividad ms o menos alta, si bien, existen muy pocos que sean
verdaderamente especficos. Por ello, en muchas ocasiones, la
separacin del analito de las posibles sustancias interferentes suele
ser una etapa fundamental en los procedimientos analticos. Sin
duda, la Cromatografa es uno de los mtodos de separacin ms
poderosos que se hayan descubierto. Fue desarrollada originalmente
por el botnico ruso M. S. Tswett como tcnica para la separacin de
pigmentos vegetales coloreados, y la I.U.P.A.C.* la define como: "Un
mtodo utilizado inicialmente para la separacin de los componentes
de una muestra en la cual los componentes se distribuyen en dos
fases, una de las cuales es estacionaria, mientras que la otra se
mueve. La fase estac onar a puede ser un slido, un lquido sobre un
soporte slido, o un gel. La fase estacionaria puede estar contenida
en una columna, extendida en forma de capa o dispuesta en forma
de pelcula . La fase mvil puede ser gaseosa o lquida".

Clasificacin de los mtodos cromatograficos

Los mtodos cromatogrficos pueden clasificarse atendiendo a
distintos factores: estado fsico de las fases mvil y estacionaria (gaslquido, lquido-lquido, etc), soporte utilizado (columna, papel, etc),
mecanismo de la separacin (adsorcin, reparto), e incluso el tipo de
soluto (cromatografa inica, cromatografa de protenas, etc). En el
cuadro de la figura 10.3. se muestra una clasificacin en funcin de
algunos parmetros mencionados anteriormente.

1. Cuando se utiliza como fase mvil un fluido a presin y

temperatura superior a la crtica se tiene un tipo de cromatografa
denominada de fluido supercrtico.
2.

Adems de los mecanismos mencionados existen otros tales

como: fase enlazada, interaccin inica, afinidad, quelacin.

3. El mecanismo es de adsorcin cuando la fase mvil en un lquido

polar.
4.

El mecanismo puede ser de reparto cuando la fase mvil es un

lquido no polar

Segn la naturaleza de la fase mvil, los mtodos cromatogrficos se

clasifican en dos grupos: cromatografa lquida y cromatografa de
gases (adems de la mencionada en el pie de la figura 1 de fluidos
supercrticos), segn que la fase mvil sea un lquido o un gas
respectivamente.

En

cromatografa

lquida,

cuando

la

fase

estacionaria es polar y la fase mvil no polar, se denominan sistemas

normales, o de fase normal. En estos sistemas, la retencin del
soluto se incrementa generalmente con su polaridad. Por otra parte,
si la fase estacionaria es menos polar que la fase mvil, el sistema se
designa como de fase inversa, y en stos, las especies polares tienen
poca afinidad por la fase estacionaria, siendo eludidos ms
fcilmente. En cuanto al soporte, o la tcnica utilizada para
desarrollar el cromatograma, pueden distinguirse dos categoras:
plana y en columna. En cromatografa plana, la fase estacionaria
puede estar constituida por una hoja de papel (cromatografa en
papel) o por una capa de un slido distribuido uniformemente sobre
una lmina de vidrio, plstico o aluminio (cromatografa de capa
fina). Por otra parte, la fase estacionaria puede estar contenida en
una columna, en cuyo caso la tcnica se denomina cromatografa en
columna. Cuando la fase estacionaria es un lquido, ste debe
inmovilizarse sobre un soporte slido inerte, o sobre la propia
columna. Evidentemente, la cromatografa plana est limitada al uso
de fase mvil lquida, debido a las dificultades inherentes para
confinar un gas o un fluido supercrtico en una superficie plana. Sin
embargo, la cromatografa en columna puede utilizarse en las
modalidades de lquidos, gases y fluidos supercrticos. En el caso de
la cromatografa lquida en columna existen dos modalidades, que
pueden denominarse en funcin de su desarrollo cronolgico como
cromatografa clsica en columna y cromatografa de alta resolucin
(CLAR o HPLC).

Aplicaciones de la cromatografa

Medioambientales: Anlisis de pesticidas y herbicidas, anlisis de

hidrocarburos, semivoltiles y voltiles, anlisis del aire...
Alimentos y aromas: fragancias y aromas, aceites, bebidas, cidos
orgnicos, azcares, FAMES, steres metlicos, triglicridos,
alcoholes...
Qumica Industrial: alcoholes, cidos orgnicos, aminas, aldehdos
y cetonas, steres y glicoles, hidrocarburos, disolventes, anilinas,
gases inorgnicos...
Biociencia: drogas, frmacos, alcoholes y contaminantes en sangre,
disolventes residuales...
Derivadas del petrleo: gas natural, gases permanentes, gas
derefinera, gasolinas, gasleos, parafinas...

Avances en la cromatografa de gases aplicada al anlisis de

compuestos voltiles en el vino
El aroma del vino es uno de los ms complejos que existen en la
naturaleza por diversas razones. En primer lugar, por el gran nmero
de sustancias voltiles que se encuentran en la composicin del vino;
en segundo, por la naturaleza cambiante de la composicin debida a
la propia evolucin del vino; en tercer lugar, por la gran variedad de
vinos que podemos encontrar y, por ltimo, porque, en la mayora de
los vinos, su aroma caracterstico no es debido a un compuesto
impacto, sino a la accin de varios componentes qumicos actuando
conjuntamente (Ferreira et al. 2009).
Adems se debe tener en cuenta que este grupo de componentes
qumicos no es homogneo, ni desde el punto de vista de su
naturaleza qumica, ni desde el de su contenido en el vino. Las
familias implicadas en el aroma del vino van desde los conocidos
alcoholes o steres, a los fenoles, enolonas o tioles poli funcionales
entre otros. Ms pronunciada es incluso la diferencia en las
concentraciones, con variaciones de hasta once rdenes de
magnitud: desde el etanol que se encuentra en gramos por litro hasta
los pocos nanogramos por litro de la 4-mercapto-4-metil-2-pentanona.
El objetivo de este artculo es mostrar cmo esta complejidad, que se
traduce en una gran dificultad en el anlisis del aroma del vino, exige

la aplicacin de las ltimas tcnicas cromatogrficas de las que

dispone el qumico analtico.
La cromatografa de gases ha sido durante las ltimas dcadas la
tcnica que mayor capacidad de separacin ha proporcionado en el
campo del anlisis orgnico. El empleo generalizado de las columnas
capilares a principios de los aos ochenta trajo consigo una revolucin
en el poder de separacin de mezclas complejas. Esto posicion la
cromatografa de gases como la tcnica a elegir siempre que se
analizaran sustancias voltiles. Sin embargo, pronto qued claro que
en algunos campos la capacidad de separacin ofrecida por una nica
columna cromatogrfica no era suficiente.
Es el caso, entre otras, de la industria petrolfera, aplicaciones
medioambientales o relacionadas con el aroma cuyos cromatogramas
son altamente complejos, con multitud de coeluciones que interfieren
en la determinacin de las sustancias de inters. Por esta razn, los
avances ms relevantes en la cromatografa de gases en la ltima
dcada han estado dirigidos a la obtencin de una mayor capacidad
de separacin. En opinin de los autores, estos avances pueden
dividirse en dos campos: la cromatografa de gases multidimensional
convencional (GC-GC) y la cromatografa de gases multidimensional
comprensiva (GCxGC). La otra gran fuerza, en parte relacionada con
lo anterior, ha sido la necesidad de una mayor rapidez de los anlisis
cromatogrficos y en este campo la evolucin ha conducido hacia el
desarrollo de la cromatografa de gases ultrarrpida (Fast-GC). A
continuacin se resumen los fundamentos de cada una y sus
aplicaciones ms relevantes en el campo del anlisis del vino.

Cromatografa de gases ultrarrpida

Desde los comienzos de la cromatografa de gases ha habido un gran
inters en aumentar la rapidez de separacin de esta tcnica. Las
ventajas de aumentar la rapidez son claras, el nmero de muestras
analizadas puede aumentar significativamente, con un menor coste
por muestra asociado. Una mayor rapidez facilita la aplicacin de la
cromatografa de gases al control de calidad, y permite mejorar la
precisin de los anlisis mediante el anlisis de rplicas en el tiempo
que costara un solo anlisis en cromatografa de gases convencional.
Cuando se enfrenta el problema de reducir el tiempo de una
separacin cromatogrfica existen diversas opciones, que van desde
lo obvio a lo ms complejo (Korytar et al. 2002). En la primera
categora se puede incluir reducir la resolucin a un valor que sea

justo el suficiente para obtener la separacin. Este debera ser a

priori el objetivo de todo cromatografista y las opciones comprenden
reducir la longitud de la columna, trabajar por encima de la velocidad
ptima del gas portador o utilizar algn tipo de deteccin selectiva,
entre otras.
Sin embargo, es la segunda categora, implementar un mtodo que
reduzca el tiempo de anlisis pero con una resolucin constante, la
que puede ser ms novedosa en el contexto actual. Dentro de este
grupo la opcin ms lgica para conseguir una cromatografa de
gases ms rpida es la utilizacin de columnas con un dimetro
interno (d.i.) reducido. La ganancia en velocidad es proporcional a la
reduccin en el d.i. de la columna pero desafortunadamente su
aplicacin no est libre de problemas. La inyeccin en columnas de
d.i. reducido (<150 ?m) es crtica y los volmenes muertos debe ser
mnimos. Incuso el ms pequeo volumen muerto puede traducirse
en picos con colas debido al bajo flujo con el que se trabaja. Adems
las bajas capacidades de carga de estas columnas conllevan que para
inyectar en bandas estrechas el volumen de inyeccin se reduzca, lo
que hace empeorar los lmites de deteccin. En cuanto a los
requerimientos instrumentales, la utilizacin de estas columnas
supone una gran cada de presin por lo que se requieren
cromatgrafos que puedan alcanzar presiones de cabeza elevadas.
Otro requerimiento importante es disponer de un detector
suficientemente rpido para poder obtener suficientes puntos de los
picos cromatogrficos.
Hoy en da, columnas con d.i. en el rango de 100 a 200 m estn
disponibles comercialmente en una gran variedad de fases
estacionarias, aunque tambin existen columnas con d.i. de 50 m
con una disponibilidad de fases ms limitada. Las columnas de 100
m suponen un buen compromiso entre tiempo de anlisis y
compatibilidad instrumental. A modo de ejemplo, en nuestro
laboratorio hemos aplicado esta tcnica a la mejora del mtodo de
anlisis de compuestos mayoritarios del aroma del vino (Ortega et al.
2001). Originalmente el mtodo de anlisis se realizaba en una
columna de 50 m x 0,32 mm d.i. y la duracin del cromatograma era
de 60 min. Actualmente empleamos una columna de 10 m x 0,1 mm
d.i. con la misma fase estacionaria y la duracin del cromatograma es
de 9 min sin prdida de resolucin entre los picos. En nuestro
conocimiento hay pocos ejemplos de la aplicacin de la cromatografa
de gases rpida al vino. Uno de ellos, en el que la velocidad de

anlisis era clave, fue la monitorizacin de los voltiles del vino

durante el proceso de fermentacin (Vas et al. 1999).

Cromatografa de gases multidimensional convencional (GCGC)

El desarrollo y utilizacin de la cromatografa de gases
multidimensional (MDGC) corresponde a la necesidad, ya
mencionada, de incrementar el poder de separacin de la
cromatografa de gases. La propiedad que define la cromatografa de
gases multidimensional es el requerimiento de que todos los analitos
de inters sean sometidos a dos etapas de separacin independientes
y que los analitos permanezcan separados hasta que se complete
todo el anlisis. Esencialmente, lo que esto significa es que el
efluente de la primera columna cromatogrfica es reanalizado por
una segunda columna con una fase estacionaria de diferente
selectividad. En el caso de la cromatografa de gas multidimensional
convencional o heart-cut (GC-GC) solo parte del efluente de la
primera columna es cromatografiado en la segunda, mientras que en
la cromatografa de gases multidimensional comprensiva o completa
(GCxGC) todo el efluente de la primera columna es cromatografiado
en la segunda. En el presente apartado se tratar la instrumentacin
necesaria y las aplicaciones al vino de la GC-GC, y en el siguiente
apartado se tratar la GCxGC.
La configuracin bsica instrumental para llevar a cabo la GC-GC
consiste en un sistema cromatogrfico compuesto de dos hornos
independientes, cada uno con una de las columnas analticas, y varios
detectores. Generalmente con un detector FID en el primer horno y
un espectrmetro de masas en el segundo cromatgrafo. La pieza
clave en el sistema es el dispositivo que permite la conexin de las
dos columnas En el caso ms habitual se trata de una vlvula tipo
Deans (Deans 1968), que mediante el control de los flujos y presiones
del sistema permite el envo selectivo de fracciones de efluente desde
la primera hacia la segunda columna.
Tambin puede ser necesario, segn las configuraciones, un punto de
criofocalizacin al inicio de la segunda columna para favorecer el
estrechamiento de las bandas cromatogrficas en el segundo horno.
La tcnica de GC-GC est bien asentada en el anlisis del aroma del
vino. Ha sido aplicada al vino en repetidas ocasiones por diversos
autores. Nitz y colaboradores para caracterizar la presencia de

aromas artificiales en vinos de frutas (Nitz et al. 1989). En 1990,

Herraiz et al. Estudiaron la aplicabilidad de la cromatografa
multidimensional para evaluar la calidad del Pisco chileno (Herraiz et
al. 1990). Martin y Etievant desarrollaron un mtodo GC-GC para la
determinacin cuantitativa del sotoln (Martin et al. 1991), y ms
recientemente Culler y colaboradores validaron un mtodo
cuantitativo para la determinacin de alquilmetoxipirazinas (Culler et
al. 2009). La GC-GC con una segunda columna enantioselectiva se ha
utilizado en otros trabajos con el propsito de establecer controles de
autenticidad (Mosandl et al. 1990; Hollnagel et al. 1991; Lehmann et
al. 1993; Full et al. 1995; Masson et al. 1995; Barba et al. 2010), pero
tambin con el objetivo de entender las rutas bioqumicas
(Bouchilloux et al. 2000; Fernandes et al. 2003; Pons et al. 2010).
Otros ejemplos de su gran utilidad pueden encontrarse en el campo
de la identificacin de nuevos odorantes en el vino: los compuestos
impacto responsables del olor de las uvas infectadas por Oidio
(Darriet et al. 2002), los steres minoritarios con alto impacto
sensorial en vinos blancos especiales (Campo et al. 2006; Campo et
al. 2006; Campo et al. 2007), los compuestos responsables del olor a
ciruelas maduras en vinos prematuramente envejecidos (Pons et al.
2008), o el 2-metil-3-(metilditio)furano en vinos monovarietales
canarios (Culler et al. 2008). En la mayor parte de estas ltimas
referencias el sistema multidimensional se combin con deteccin
olfatomtrica
simultnea
para
una
mayor
capacidad
de
discriminacin de los odorantes importantes.

Cromatografa
(GCxGC)

de

gases

multidimensional

comprensiva

Como se coment en el apartado anterior la GCxGC implica que todo

el efluente de la primera columna sea cromatografiado en la segunda.
Sin embargo, unir simplemente las dos columnas no es suficiente
para conseguir la separacin deseada, ya que en realidad equivaldra
a mezclar las fases estacionarias. Para que el acoplamiento suponga
realmente un incremento en la capacidad de separacin se debe
incorporar un sistema modulador entre las dos columnas que permita
el aislamiento de zonas del efluente de la columna 1 y el paso
posterior a la columna 2. Este modulador es la pieza clave de un
sistema GCxGC y con el paso del tiempo ha ido evolucionando a
sistemas ms robustos como los disponibles comercialmente a da de

hoy, que en su mayor parte se basan en sistemas de criofocalizacin

doble (Marriott 2002).
La separacin puede realizarse en nico horno cromatogrfico, ya que
la segunda columna es una columna de tipo ultrarrpido como las
descritas en el apartado
Otro punto de vital importancia para realizar una separacin GCxGC
con xito es que las fases estacionarias de las dos columnas sean lo
ms diferentes posible para conseguir la mxima separacin posible.
Si estos requisitos se cumplen, en teora, la capacidad de separacin
del sistema se multiplica y pasamos a obtener un cromatograma
tridimensional (o incluso cuadrimensional si se emplea un
espectrmetro de masas como detector).
Los trabajos cientficos de aplicacin de la GCxGC al vino son
bastante recientes y en su mayora estn dirigidos a analitos muy
concretos. Son los casos de la determinacin de alquilmetoxipirazinas
en vino (Ryan et al. 2005; Ryona et al. 2008; Schmarr et al. 2010) o
en uvas (Ryona et al. 2009; Ryona et al. 2010) y tambin se ha
aplicado a la cuantificacin de etil carbamato (Perestrelo et al. 2010).
Solo se han publicado por el momento tres trabajos que hayan
utilizado el potencial de la tcnica para identificar nuevos compuestos
y perfilar los voltiles del vino. Rocha y colaboradores utilizaron la
GCxGC para analizar monoterpenos en uvas de la variedad fernaoPires, identificando 56 monoterpenos, de los cuales 20 se describan
por primera vez en las uvas (Rocha et al. 2007). En este trabajo se
destaca una de las ventajas de la GCxGC, que la separacin de
compuestos se hace por familias, facilitando la identificacin de los
mismos. Otra aplicacin interesante de la GCxGC es la llevada a cabo
recientemente por Schmarr y colaboradores para seguir de forma
rpida los cambios producidos por la microoxigenacin en el vino, en
este caso combinando la ingente cantidad de informacin producida
con tcnicas de anlisis multivariante (Schmarr et al. 2010). Por
ltimo, y en la misma lnea de anlisis del mayor nmero de voltiles
posibles, Robinson y colaboradores han empleado la tcnica para
analizar de manera simultnea ms de 350 voltiles del vino
(Robinson et al. 2010).
CONCLUSIN: La necesidad de entender y controlar las diferencias
sensoriales en el aroma del vino demanda de los mtodos de anlisis,
y en particular de la cromatografa, una mayor rendimiento. Tanto en
lo referente a la capacidad de analizar un mayor nmero de voltiles,

como en hacerlo en menor tiempo y en ms bajas concentraciones.

Las tcnicas cromatogrficas tratadas en este artculo buscan
satisfacer estas necesidades, ya sea aumentando la velocidad de los
anlisis (GC ultrarrpida), o aumentando la capacidad de separacin y
deteccin (GC-GC y GCxGC). Cabe esperar en un futuro cercano, que
en particular la GCxGC proporcione avances significativos en este
campo. Por una parte, en la identificacin de nuevos compuestos que
hasta el momento han quedado sin resolver utilizando la
cromatografa tradicional, y por otra, en la reduccin de los tiempos
de anlisis mediante la disminucin del tratamiento de muestra
necesario gracias a su gran capacidad de separacin.
METODOLOGA
Preparacin de la muestra
Filtrar el agua con papel de filtro 135 Albet sobre embudo de
rama corta.
Extraccin
Aadir 500 mL de agua filtrada a un embudo de
decantacin de 1000 mL apoyado sobre un soporte de
varilla.
Se aaden al embudo de decantacin 50 g de cloruro
sdico y se agita hasta su disolucin.
Se aaden 50 mL de diclorometano y se agita durante un
minuto, transcurrido el cual se deja reposar.
La fase orgnica se coge en un matraz de fondo redondo
50 mL, empleando un embudo de rama corta con lana de
vidrio y sulfato sdico anhidro.
Repetir el punto anterior dos veces ms con 25 mL de
diclorometano.
Lavar el sulfato sdico del embudo con un volumen de
diclorometano para arrastrar.
Concentrar la fase orgnica en un bao-rotavapor a 40C
hasta sequedad.
Determinacin cromatogrfica
Se disuelve el residuo con 1 mL de ciclohexano:acetato de
etilo (9:1) en bao ultrasonidos durante 10 minutos, y se
pasa mediante pipeta a un vial de tapn de rosca de 2 mL
para su anlisis por cromatografa.

Determinacin y cuantificacin
Inyectar el extracto y un multipatrn de 0,1 ppm (mg/L) en el CGMS/MS empleando el Mtodo Practicas.
Una vez identificado un compuesto se cuantifica mediante integracin
del rea de ste, comparndola con la de su patrn correspondiente o
curvas de integracin del mtodo.
Los resultados se expresan en g/L (ppb), que expresan los
microgramos del plaguicida contenidos en cada litro de agua.
La ecuacin a utilizar durante la cuantificacin es:

Am Vip Cp Vf
C=
Ap Vim P

Dnde:

= Concentracin del plaguicida en la muestra (ppm)

Am = rea del pico del plaguicida en la muestra

Ap = rea del pico del plaguicida en el patrn
Vip = Volumen de inyeccin del patrn (L)
Vim = Volumen de inyeccin de la muestra (L)
Cp = Concentracin del plaguicida en la disolucin patrn
(ppm)
Vf

= Volumen de aforo final (mL)

= Volumen de la muestra (mL)

RECOMENDACIN:

ANEXOS:

BIBLIOGRAFIA:
Dabrio, M.V. 1971. Cromatografa de gases. Vol. I. Ed. Alahambra,
S.A. Espaa. 182pp.
Vctor, L & Gonzlez, C & Sierra,R. (agosto 11, 2006).
Identificacin por Cromatografa de Gases - revestidas. diciembre
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Sitio
web:
http://www.redalyc.org/pdf/1816/181621661001.pdf
Olgun, L & Rodrguez, H. (junio 08,2004). CROMATOGRAFA DE
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INSTITUTO
DE
BIOTECNOLOGA
METODOS
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BIOTECNOLOGIA
Sitio
web:
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/cromatografia_de_gase
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(26-Oct-2012). La cromatografa de gases en la industria. de
QuimiNet
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http://www.quiminet.com/articulos/lacromatografia-de-gases-en-la-industria-2876007.htm