PRCTICA 12: Determinacin de

glucosa en suero (Mtodo

Enzimtica)
INTRODUCCIN
La glicemia se define como el valor de los niveles de azcar presentes en la sangre
(se mide en miligramos por decilitro (mg/dl)); estos azcares son los que ingerimos
en los alimentos y los que son absorbidos por el organismo. Teniendo un valor
normal de sta que flucta entre los 76 110mg/dl. Alteraciones de este rango
puede llevar a predecir indicios de diabetes mellitus. Con los distintos componentes
que tendremos en nuestros tubos observaremos la glicemia en suero normal y
patolgico despus de cierto tiempo junto con la tcnica de espectrofotometra
pudiendo explicar y determinar lo ocurrido en cada tubo.
Cmo determinar la concentracin de glucosa en la sangre (glicemia)? Pregunta
que se nos plante al comenzar nuestro informe, para esto realizaremos la tcnica
de espectrofotometra la cual consiste en una determinacin de las concentraciones
de un compuesto en solucin, que en este caso sera la concentracin de glicemia
en la sangre, para esto utilizamos 4 tubos a los cuales se les agregar distintos
soluciones, las cuales abordaremos con mayor profundidad al desarrollar nuestro
informe. Para comenzar es importante saber qu es la glicemia? y qu funcin
cumple en nuestro organismo?

MTODO A UTILIZAR
Primero adquirimos los tres tubos de ensayo que utilizaramos y los rotulamos con
distintos denominaciones (Blanco, Standar, Desconocido) para poder as evitar
cualquier tipo de confusiones; se procedi a extraer la muestra de sangre venosa la
cual se utilizara colocndola en un tubo de ensayo estando lista para el
centrifugado.
Entonces al primer tubo le agregamos 10l de agua (HO); al segundo tubo 10 l de
solucin estndar; al tercer tubo 10l de suero normal. Adems a cada uno de estos
tubos luego se les incorpor 1ml de reactivo. Vale recordar que dicho reactivo es el
denominado complejo enzimtico (GOD-PAP). Dicho mtodo permite la
cuantificacin de la glucosa srica mediante las siguientes reacciones enzimticas:

Previamente incubamos los tubos 10 minutos a temperatura ambiente.

Las muestras que poseamos a temperatura ambiente se procedieron a cargar en
cubetas de plstico de 1,5ml para llevarlas al espectrofotmetro previamente
ajustado a 510 nm.
Una vez entregado el % de absorbancia analizaremos y discutiremos los
resultados obtenidos.

CLCULO DE LOS RESULTADOS

Glucosa(mg/dl)=Dxf
f=100(mg/dl)/S

Glicemia (mg/dL) = (0,253) x 100= 88,2

0,287

mg/dL

DISCUSIN
La glicemia se determin por el mtodo de GOD-PAP (prueba enzimtica
colorimtrica por glucosa) a muestras de suero normal del que se pudo obtener
88,2mg/dL , un valor que se encuentra dentro de los valores de referencia. Mediante
el mtodo de qumica seca un alumno integrante del grupo procedi a realizarse el
examen que determinara su glicemia capilar obteniendo este valor.
Glicemia es la medida de la cantidad de glucosa (azcar) presente en la sangre en
mg/dL. Los valores normales para los mtodos descritos en el presente prctico
oscilan entre 70-110 mg/dL.
Entre las patologas relacionadas con la glicemia se encuentran, la hiperglicemia, la
cual se define como un alza de glucosa en la sangre en ms de 180 mg/dL. La causa
principal de hiperglicemia es la Diabetes mellitus, la cual es un desorden metablico
crnico caracterizado por niveles elevados de glucosa en la sangre, como
consecuencia de una alteracin y/o accin de la insulina.
Durante el mtodo de anlisis utilizado en esta prctica fue el colorimtrico
enzimtico, porque no estamos agregando exteriormente cualquier molcula o
parte de una molcula responsable por el color del material, es decir, un cromforo,
el cual le da dicha propiedad. Ms bien, mediante reacciones enzimticas,
molculas que no poseen la propiedad de absorber luz, logran cumplir la funcin.
La diferencia entre el mtodo colorimtrico enzimtico realizado en la prctica y
mtodo de Biuret es realmente clara , durante el primero le aadimos sulfato
cprico -CuSO4- (un cromforo) que le da la propiedad de absorber luz, y en
consecuencia, en este prctico mediante reacciones enzimticas, se obtiene una
propiedad de absorbancia en la muestra obtenida dando como resultado un color
rosa.
En la concentracin de la glucosa (sustrato), en relacin al Km de la enzima es
directamente proporcional al producto final detectado (compuesto coloreado
quinoneimina). As es posible determinar la concentracin del sustrato, mediante la
presencia de absorbancia.
En cuanto a la relacin a la velocidad de reacciones enzimticas, descrita por la
cintica de Michaelis-Menten, nos dice concretamente que a mayor Concentracin
de sustrato, se trabaja en la parte superior de la curva, y a menor concentracin de
sustrato, se trabaja en la parte inferior.
Por otro lado, y si la concentracin de sustrato es infinita se trabaja a una Vmx. Por
lo tanto, los sitios activos de la enzima estn saturados con sustrato a causa de que
se est trabajando a un nivel mximo.
El producto que absorbe a la longitud de onda y que presenta una mxima
absorbancia de 505nm, como el que se us durante la prctica , es el compuesto
coloreado quinoneimina.

El uso de enzimas como herramientas para la determinacin de sustratos, es con el

fin de dar la propiedad de absorber luz a molculas que se deseen medir, y una de
esas formas es mediante reacciones enzimticas que producen cambios
bioqumicos de gran importancia en las molculas para que presenten una
absorbancia debidamente realizada.
La base de un clculo en la concentracin de un sustrato (glicemia), mediante una
reaccin colorimtrica enzimtica, utilizando un estndar de concentracin
previamente vista se realiza con el fin de obtener los valores de la concentracin de
glucosa de la muestra (glicemia (mg/dl)).Con lo cual mediante una relacin de
proporcionalidad se debe obtener primero la absorbancia de la muestra (de cada
tubo) y la absorbancia del tubo estndar de concentracin conocida

DISCUSIN
Para concluir es importante recordar que la glicemia se defina como el valor de los
niveles de azcares presentes en la sangre, estos azcares provienen de los
alimentos que ingerimos, particularmente carbohidratos. Estas concentraciones
pueden ser niveladas por diversos factores como las hormonas. Los hidratos de
carbono tambin sern utilizados por el organismo como una de las principales
fuentes de energa, demostrando la reaccin enzimtica a las cuales fue expuesta
nuestra muestra de sangre, para observar la glicemia tanto en suero patolgico
como normal.
Como resultado de la tcnica de espectrofotometra, la solucin de suero normal
presentaba una concentracin de absorbancia mayor que las otras soluciones;
adems conocemos el mtodo de qumica seca que permite mediante el mismo
proceso de reaccin enzimtica obtener valores de glicemia. El dficit de glucosa en
el organismo puede causar distintas patologas como es el caso de la Diabetes
mellitus, enfermedad crnica que afecta a gran parte de la poblacin, la cual,
consiste en una incapacidad del pncreas para producir una hormona llamada
insulina. Otra patologa es la hiperglucemia que es el aumento de glucosa en la
sangre, encontrndose por sobre de los valores normales 70-110mg/dL y llegando
en ayunas a 126 mg/dL.
Entre las causas tenemos, enfermedades cardacas, trastornos de nutricin y
digestivos, medicacin, etc; siendo su contrario la hipoglucemia, que es la
disminucin de este azcar en la sangre. El mtodo comnmente realizado que
permite conocer inmediatamente los posibles valores de glicemia, es la tcnica de
qumica seca.