Ano II - Ed.

11 - Set/Out/2005 - Circulao Bimestral

INFORMATIVO CEFAR DE MICROBIOLOGIA

ATUALIDADES CIENTFICAS

CONHEA AINDA MELHOR OS STAPHYLOCOCCUS.

DESCRIO DO GNERO

O gnero Staphylococcus composto na atualidade de 35 espcies,

17 das quais podem ser isoladas de amostras biolgicas humanas.
So cocos gram-positivos, com 0,5 a 1,5 m de dimetro. Eles
ocorrem isolados, em pares, em ttradas, em pequenas cadeias ou
em agrupamentos irregulares que lembram cachos de uvas.
Eles so imveis, no formam esporos, so geralmente catalasepositivos, e tipicamente no encapsulados ou com limitada formao de cpsulas.
As espcies so anaerbios facultativos, exceto pelo
Staphylococcus saccharolyticus e S. aureus subsp. anaerobius,
que so anaerbios estritos, catalase-negativos e no formam
gases a partir de carboidratos.
Geralmente confundidos com membros do gnero Micrococcus,
podem ser distinguidos pela sua resistncia a bacitracina e sensibilidade a furazolidona. Outra diferena que os micrococos so
oxidase-positivos enquanto estalococos so oxidase negativos,
com exceo de S. lentus, S. scuiri e S. vitulus.

HABITAT NATURAL

Os estalococos so geralmente encontrados na pele e em mucosas do homem e de outros animais. Os seres humanos podem ser colonizados ou infectados por esses microrganismos,
devido ao contato freqente ou proximidade de animais (p.ex.,
veterinrios, trabalhadores de zoolgicos, fazendeiros). Alguns
estalococos patognicos para o homem e animais produzem
uma enzima denominada coagulase, e a deteco desta enzima
realizada em laboratrio para identicao destes microrganismos. As espcies S. aureus (coagulase-positiva), S. epidermidis e
S. saprophyticus (coagulase-negativas), so freqentemente encontradas em infeces humanas.

PRINCIPAIS AGENTES ETIOLGICOS

As espcies mais comumente associadas infeces humanas

so:
S. aureus um agente patognico oportunista humano bem
referenciado. Como patgeno nosocomial, S. aureus tem sido uma
das causas principais de mortalidade e morbidade. As infeces
causadas por S. aureus so normalmente agudas e piognicas e,
se no tratadas, podem se espalhar para o tecido vizinho ou via
bactermica para reas metastticas (envolvendo outros rgos).
Algumas das infeces causadas por S. aureus envolvem a pele;
estas incluem furnculos, celulite, impetigo e infeces em feridas ps-operatrias. Algumas das infeces mais srias produzidas por este organismo so: bacteremia, pneumonia, osteomielite,
endocardites agudas, miocardites, pericardites, cerebrites, menin-

gites, abscessos musculares e cerebrais.

A presena de S. aureus em alimentos pode representar um potencial perigo sade pblica porque muitas cepas de S. aureus
produzem enterotoxinas. Os sintomas mais comuns de intoxicao alimentar estaloccica incluem vomito e diarria, que ocorre
de 2 a 4 horas aps ingesto do alimento contaminado.
S. aureus Penicilina-resistente No incio da dcada de 40, os
S. aureus, isolados de diferentes processos infecciosos,
apresentavam uma boa resposta clnica diante da penicilina.
Em 1942, a resistncia penicilina comeou a ser descrita em
algumas dessas cepas, decorrente da ao de penicilinases.
Na dcada de 1950, a produo de penicilinases pelo S. aureus
passou a predominar nas cepas isoladas de pacientes hospitalizados. A resistncia bacteriana era, na poca, considerada um
problema novo e comeou a tomar crescentes propores medida que foram descobertas e introduzidas novas classes de antibiticos na prtica clnica.
Em 1960, a meticilina chegou ao mercado como alternativa
teraputica para cepas produtoras de penicilinase, uma vez que
essa droga no sofre ao dessa enzima. Porm, j em 1961,
relatos de cepas tambm resistentes meticilina passaram a ser
descritos e foram denominados S. aureus meticilina-resistente.
S. aureus meticilina-resistente (MRSA). Essas cepas, nos anos
80, se transformaram no principal problema clnico e epidemiolgico em hospitais.
Hoje, no Brasil, os ndices de cepas MRSA so em mdia bem
elevados, onde se observa que 40 a 80% dos pacientes internados
em UTI apresentam este tipo de cepa. Pesquisas apontaram ndices de mortalidade 2,5 vezes maiores nos casos de infeco por
MRSA do que por S. aureus meticilina-sensvel (MSSA).

S. EPIDERMIDIS

Quando os achados clnicos esto correlacionados com o isolamento de estalococos coagulase-negativos, S. epidermidis ,
consideravelmente, o microrganismo recuperado com maior
freqncia, representando 50% a mais de 80% dos isolados. As
infeces produzidas por S. epidermidis incluem endocardite
de vlvulas cardacas naturais e proticas, infeces produzidas
por cateteres endovenosos, infeces de derivaes para LCR
(lquido cfalo-raquidiano), peritonite associada a cateteres para
dilise peritoneal, bacteremia, osteomielite, infeces de feridas,
infeces de enxertos vasculares, infeces de prteses articulares, mediastinite e infeces das vias urinrias.

S. SAPROPHYTICUS

A espcie coagulase-negativa S.saprophyticus merece meno

especial por ser um patgeno bem-documentado, causador de infeces urinrias agudas, sobretudo em mulheres jovens, saudveis
e sexualmente ativas. Nessa populao, S.saprophyticus a segunda causa mais freqente de cistite, sendo precedida por E. coli.
Em amostras de urina proveniente desses pacientes, o microrganis-

mo est freqentemente presente em quantidades menores do que

100.000 UFC/mL, mas detectado em amostras seqenciais de
pacientes infectadas. Pacientes com essa infeco em geral apresentam disria, piria e hematria. Podem ocorrer infeces das
vias urinrias superiores em 41% a 86 % das pacientes e, em algumas ocasies, possvel observar bacteremia por S. saprophyticus
como complicao de infeco das vias urinrias superiores.

DIFERENCIAO DOS MEMBROS DA FAMLIA

MICROCOCCACEAE
MORFOLOGIA DAS COLNIAS

As espcies de Micrococcus e de Staphylococcus produzem colnias caractersticas em gar sangue de carneiro. Os micrococos em
geral crescem mais lentamente e com freqncia so necessrias
48 horas de incubao antes que a morfologia tpica das colnias
possa ser diferenciada. Aps esse perodo, as colnias de micrococos medem de 1 a 2 mm de dimetro, so opacas, marcadamente convexas com borda contnua. Algumas cepas produzem
pigmentos e podem aparecer amareladas, rosadas, alaranjadas ou
bronzeadas, enquanto outras apresentam cor esbranquiada ou
osso-branco. J a maioria das espcies de estalococos apresenta
colnias de crescimento mais rpido, com 1 a 2 mm de dimetro
aps 24 horas de incubao, embora algumas espcies (p.ex.,S.
warneri, S. simulans) possam formar colnias menores durante
esse perodo. As colnias so usualmente lisas, butirosas, e algo
convexas com borda contnua. As colnias de algumas cepas de
S. aureus podem ter pigmento amarelo ou amarelo-alaranjado,
enquanto outras podem produzir colnias esbranquiadas ou
cinzas. Estas ultimas cepas podem ser similares a estreptococos
do grupo D e enterococos (catalase-negativos). A produo de
pigmento por S. aureus e estalococos coagulase-negativos pode
ser evidenciadas ou mais pronunciada aps incubao temperatura ambiente. Com freqncia, as cepas de algumas espcies de
estalococos mostram uma considervel variao de tamanho das
colnias na mesma placa de cultivo, aparentando cultivo misto.
Algumas cepas de S. aureus e algumas espcies coagulase-negativas podem apresentar uma ntida ou difusa zona de -hemlise ao
redor das colnias em gar sangue; esta propriedade hemoltica
evidenciada somente aps incubao prolongada.

PROVA DE CATALASE

Os membros da famlia Micrococcaceae so diferenciados dos

da famlia Streptococcaceae pela prova de catalase. O teste
realizado com perxido de hidrognio (H2O2) a 3% sobre uma
lmina. A imediata produo de efervescncia indica a converso
do H2O2 em gua e oxignio gasoso. Existem raras cepas de
Estalococos catalase negativas, e algum enterococos (i.e.
estreptococos fecais) produzem uma pseudocatalase e so
fracamente reativos com H2O2.

Arthrobacter agilis, so positivas nessa prova de oxidase modicada, mas algumas cepas de Kytococcus sedentarius, K. rsea
e K. varians so negativas com essa prova. Todas as espcies
de Staphylococcus so negativas para oxidase modicada, exceto
algumas cepas de Staphylococcus caseolyticus, S. sciuri, S. lentus
e S. vitulis.

SENSIBILIDADE A FURAZOLIDONA E A
BACITRACINA

As provas de furazolidona e de bacitracina so realizadas com

os discos de furazolidona 100 mcg e de bacitracina 0,04 UI (Genoteste CEFAR). O procedimento para essa prova consiste de
inocular o organismo sob teste, usando um swab umedecido
com uma suspenso ajustada a 1/2 escala de Macfarland em um
meio de cultivo (normalmente TSA). Depositam-se os discos e
a placa incubada por 16-18 horas a 35-37C em aerobiose e
proceda a leitura para determinar sensibilidade (halos 15mm) ou
resistncia (halos de 6 a 9 mm)

PROVA DE DESOXIRRIBUNOCLEASE

S. aureus produz DNase e endonuclease, enzimas estas que hidrolizam o cido nuclico. A DNase pode ser detectada semeando-se
a suspenso ajustada a 1/2 escala de Macfarland em meio para
DNase, contendo o corante azul de toluidina. Este meio tem cor
verde azulada, mas aps incubao, em resultados positivos, h
formao de um halo de cor rsea ao redor do trao bacteriano.

PROVA DE CRESCIMENTO EM MEIO DE NACL

6,5%

Usando-se a mesma suspenso ajustada, semear o meio de NaCl

6,5% e vericar se o organismo cresce (+) ou no (-) neste meio.
Principais testes para Diferenciao dos Gneros Citados:

PROVA DA OXIDASE

So utilizados discos de papel de ltro impregnados com dicloridrato de tetrametil-p-fenilenodiamina (reagente para oxidase) em
dimetil sulfxido (DMSO). O DMSO torna as clulas permeveis
ao reagente. Com o auxlio de uma ala de repique estril retirar
uma pequena poro de um crescimento bacteriano contido no
meio de crescimento e friccionado sobre a ta. O aparecimento
de cor azul-prpura em 30 segundos constitui uma prova positiva e a ausncia de cor, dentro desse perodo de tempo, representa prova negativa. As espcies de Micrococcus, assim como
Nesterenkonia halobia, Dermacoccus nishinomiyaensis e

d = Positivos para 11% a 89% das espcies ou cepas.

0 = No determinado
+ = positivo para 90% das espcies ou cepas.
- = negativo para 90% das espcies ou cepas.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS:

1. Konemann, Diagnstico Microbiolgico 5 Ed. 2001.

2. Manual of Clinical Microbiology (2000), Eighth Edition. 2003.
3. Resistncia Bacteriana

LANAMENTO
GENOSTESTE
INTRODUO:

Existe em bacteriologia um bom nmero de testes destinados

diferenciao de organismos dos gneros Estalococos, Micrococos, Estreptococos e Enterococos, contudo, com um pequeno
nmero deles possvel diferenci-los entre si, incluindo ainda
trs outros gneros de interesse clnico e que so os Planococos,
Aerococos e Macrococos.
Com relao aos Planococos, sua patogenicidade no bem
conhecida. Quanto aos Aerococos, eles tm sido encontrados em
infeces urinrias, vaginais e como agente da endocardite. E por
ltimo, os Macrococos que tambm no tem sua patogenicidade
ainda denida, uma vez que eles tm sido encontrados em um
restrito grupo de animais marinhos aquticos, como as baleias e
animais ungulados (mamferos com cascos).

FINALIDADE:

O Kit tem por nalidade, atravs de um grupo de seis testes,

diferenciar presuntivamente organismos dos gneros: Estalococos, Micrococos, Estreptococos, Enterococos, Planococos, Aerococos e Macrococos.

COMPOSIO:

O Kit composto de placas tripartidas, contendo em cada compartimento um meio especco para realizao dos testes de NaCl
6,5%, sensibilidade ao disco de Furazolidona de 100 mcg e Bacitracina 0,04 UI e DNase, alm de tas para teste da oxidase e
soluo de H2O2 3% para o teste da catalase.

AGUABAC
INTRODUO:

O AGUABAC CEFAR um teste presuntivo para deteco de

coliformes em gua de diversas origens.
Este teste uma modicao simplicada da Tcnica de Tubos
Mltiplos, porque utiliza um volume maior de amostra (100 ml)
em apenas um frasco de cultura para obter informao sobre a
presena de coliformes. O mtodo se baseia na inoculao de
volumes de 100 ml da amostra em frascos adequados,
contendo 50 ml de meio presuntivo caldo PA em concentrao
tripla, obtendo qualitativamente a informao de ausncia ou
presena de coliformes baseado na fermentao da lactose.
O meio de LSS (Lauril Sulfato de Sdio) descrito como mtodo
padro para testes em gua e pela American Public Heath Association ( Washington D.C 1995 ) e Federal Register 1989 .

BACTRIAS DO GRUPO COLIFORME:

Denio : Os organismos coliformes so denidos como; bacilos

gram negativos, aerbios ou anaerbios facultativos, no formadores de esporos, oxidase negativo, capazes de se desenvolver na
presena de sais biliares ou agentes tensoativos que fermentam a
lactose com produo de aldedo, cido e gs a 35 +/- 0,5 C em
24 48 horas e podem apresentar atividade da enzima -galactosidase. A maioria das bactrias do grupo coliforme pertence aos
gneros Escherichia , Citrobacter , Klebsiella e Enterobacter.

Uma porcentagem elevadssima , cerca de 95% dos coliformes

existentes de Escherichia coli, sendo esta considerada o mais
especco indicador de contaminao fecal recente e de eventual
presena de organismos patognicos.

FINALIDADE:

O produto se destina deteco de microrganismos do grupo coliformes (totais e fecais) em amostras de gua.

BREVE LANAMENTO
HISTIDINASE

A CEFAR estar em breve lanando mais um produto, trat-se

da Histidinase que utilizada na diferenciao do Enterobacter
aerogenes dos demais gneros enquadrados no grupo das
enterobactericeas. O processo se d pela descarboxilizao da
histidina com produo da histamina.
O Enterobacter aerogenes e Enterobacter cloacae so as espcies
mais comumente isoladas em materiais biolgicos. Contudo,
encontram-se distribudos amplamente na gua, vegetais, solo e
esgoto. Muitas vezes estes so encontrados como organismos
oportunistas em infeces urinrias, trato respiratrio, feridas
cutneas e, em certas ocasies, causa septicemia e meningite.
O gnero Enterobacter contm na atualidade 14 espcies das 16

existentes anteriormente, isto porque o Enterobacter agglomerans

foi transferido para o gnero Pantoea e o Enterobacter intermedius
foi transferido para o gnero Kluyvera cando ambos, portanto,
com a seguinte denominao Pantoea agglomerans e Kluyvera
intermedius respectivamente.
Suas precisas identicaes, dentro das enterobactericeas, se
tornam um quesito muito importante para o microbiologista.
Neste teste os resultados positivos so obtidos pela inalterao
da cor do meio, ou seja, o meio permanece na sua cor prpura
original. J nos resultados negativos o meio de cultivo torn-se
amarelo.

INFORMAO TIL A TCNICOS E MICROBIOLOGISTAS

ENTEREX (Rugai Modicado)
Reaes bioqumicas numericamente codicadas
O meio de Rugai, nestas trs ultimas dcadas, foi
submetido duas alteraes em sua composio feitas no
intuito de melhorar sua performance, o que foi conseguido. Uma nova modicao introduzida recentemente pela
CEFAR tornou o meio de Rugai, por ns agora denominado de
ENTEREX, ainda mais eciente. Isto porque a reao de
H2S (+), produzindo uma cor negra intensa e difundindo
muito no meio, mascarava as reaes da Uria, Glicose e Gs.
Agora isto no acontece, uma vez que esta reao ca, no
ENTEREX, delimitada a uma pequena faixa acima do
vaspar (camada branca), facilitando a leitura daquelas reaes
antes dissimuladas.
Outra vantagem no uso do ENTEREX que agora as
reaes bioqumicas esto numericamente codicadas. Estas,
transformadas em um nmero de 4 dgitos, levar facilmente a
identicao de um organismo e quadrado nas 24 principais espcies de interesses clnico.
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Dr. Vladimir Netto

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