Antioksidan dan Vitamin E dalam Barley: Pengaruh Genotip Dan

Penyimpanan
Abstrak
Antioksidan, termasuk vitamin E, mungkin memiliki efek positif pada kesehatan
manusia dan dapat memperpanjang penyimpanan makanan. Kandungan vitamin E dan
antioksidan diukur dalam 25 genotipe barley sebelum dan setelah penyimpanan 4 bulan pada
10 C menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) dan kemampuan mengikat
radikal DPPH, masing-masing. Seperti yang diharapkan, -tocotrienol ( -T3) dan tokoferol
(T) merupakan isomer tocol dominan. Kandungan vitamin E dan antioksidan bervariasi
secara signifikan antar genotipe. Vitamin E berkisar 8,5-31,5 lg / g berat kering (DW)
sementara asam askorbat setara dengan kapasitas antioksidan (AEAC) bervariasi 57,2-158,1
mg / 100 g berat basah AEAC (FW). Umumnya, kandungan vitamin E atau kapasitas antioksi
yang rendah diamati di hulless atau genotipe berwarna. Hasil penelitian menunjukkan bahwa
beberapa genotipe memiliki potensal untuk pembibitan kultivar barley dengan kandungan
vitamin E yang tinggi ataukapasitas antioksidan pada saat panen, bahkan setelah
penyimpanan.
1. Pendahuluan
Barley (Hordeumvulgare L.) secara historis telah digunakan untuk malt dan
pakanternak. Baru-baru ini, penggunaan barley semakin meningkat dalam makanan manusia,
hal ini disebabkan karena kandungan serat, b-glukan dan antioksidan (Ehrenbergerova,
Belcrediova, Havlova, et al., 2006).Barley kemungkinan menjadi sumber makanan yang baik
antioksidan tidak hanya karena sifatnya kapasitas antioksidan seratnya yang tinggi tetapi juga
karena dapat dikonsumsi dalam jumlah yang besar ketika diet dibandingkan dengan buahbuahan dan sayuran(Kim et al., 2007). Antioksidan sangat penting dalam menjaga kesehatan
jaringan dan organ karena kemampuan mereka untuk memperlambat jaringan kerusakan
dengan mencegah pembentukan radikal bebas, atau dengan mempromosikan dekomposisi
mereka (Young &Woodside, 2001). Kapasitas antioksi dan lebih

tinggi dibahan yang

berwarna butirputih, termasuk beras (Htwe et al.,2010) dan barley plasma nutfah (Kim et al.,
2007).

Antioksidan umumnya diterima dalam bentuk vitamin E (tocotrienoldantokoferol),

asam askorbat (vitamin C), enzim (katalase, glutation peroksidase dan superoksida
dismutase), fenolik senyawa, dan karotenoid (Goupy, Hugues, Boivin, &Amiot,
1999).Vitamin E adalah fase lipid rantai antioksidan yang muncul efektif dalam
meningkatkan hasil kesehatan dalam

uji klinis dengan mengurangi resiko kanker dan

penyakit kardiovaskular, terutama pada perokok (Reboul et al., 2006), meskipun manfaat
yang dimiliki tidak dilaporkan dalam semua studi (Bjelakovic, Nikolova, Gluud,Simonetti,
&Gluud, 2007). Vitamin E memiliki delapan isomer: a-,b-,c,d-tokoferol (T) dan a-, b-, c, dtocotrienol (T3). Tokoferol dan tocotrienol juga disebut tocols. Bola (2006) melaporkan
adanya penurunan urutan kapasitas antioksidan mereka untuk menjadi a-, b, c dan dtocols.Sheppard, Pennington, danWeihrauch (1993) namun menemukan bahwa antara T dan
T3, memiliki urutan turun dari aktivitas antioksidan:aT, bT, a-T3, cT, b-T3, dan dT (c-T3 dan
d-T3 tidak memiliki fungsi). Namun, beberapa penelitian melaporkan bahwa-T3 adalah lebih
efekti fantioksidandari-T (Packer, 1995).SerealAmongdifferent, vitamin E telah dilaporkan
lebih tinggi di barley dibandingkan dengan biji-bijian lainnya (Panfili, Fratianni, &Irano,
2003)
barley memiliki kemampuan fungsional sebagai bahan penyedia vitamin E. Namun,
dilaporkan vitamin E dalam barley berbeda-beda dalam berbagai studi, misalnya 51,6 lg /
gDW di Ehrenbergerova, Belcrediova, Havlova, dkk. (2006), 59,0 lg /g DW di Bhatty (1999)
dan 69,1 lg/ g DW di Panfili, Fratianni,Criscio, Marconi (2008). Kandungan vitamin E pada
delapan isomer dalam studi ini juga berbeda. Perbedaan antar studi bisa disebabkan oleh
adanya fakta bahwa genotipe yang berbeda telah dipelajari, pada genotipe yang berbeda
mungkin mengandung jumlah yang vitamin E berbeda. Penelitian-penelitian ini juga berbeda
dalam metode ekstraksi yang digunakan, yaitu, apakah saponifikasi digunakan dan apa
pelarut pelarut yang digunakan. Metode saponifikasi dan pelarut heksana dianggap
sebagaimetode yang paling bagusataussesuai untuk ekstraksitocol karena mampu mencegah
esterifikasi dan pemulihan (Panfili et al., 2003).
Hal lain yang harus dipertimbangkan adalah penyimpanan. Antioksidan dan vitaminE,
khususnya, dapat dengan mudah rusak oleh cahaya, air danpanas (Wang, Xue, Newman, &
Newman, 1993). Pada barley akan lebih lama disimpan hingga 4 sampai 18 bulan sebelum
pengolahan (Idaho Barley Komisi, 2011). Meskipun barley biasanya disimpan dalam silo
dengan sistem pendingin aerasi kurang dari15C dan idealnya untuk 10C(Viljoen, 2001);
Penyimpanan mungkin memiliki pengaruh pada kandungan vitamin E dan kapasitas

antioksidan. Penyimpanan pada 25, 27 atau 35C menyebabkan kerusakan yang signifikan
pada kandungan vitamin E (Liu & Moreau, 2008;. Wang et al, 1993). Namun, untuk pengaruh
penyimpanan pada kedua antioksidankapasitas dankandungan vitamin E di barley pada suhu
biasayang digunakan oleh industri belum diteliti. Penelitian ini difokuskan tidak hanya pada
kapasitas antioksidan genotipe tetapi juga pada kandungan vitamin E, yang sering diklaim
sebagai senyawa antioksidan penting. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi
komponen ini dalam berbagai genotipe dan dampak dari penyimpanan pada kondisi yang
mirip dengan yang digunakan dalam industri. Genotipe Barley dipilih berdasarkan warna
gandum, dan penggunaannya dalam makanan, gandum atau pakan ternak.

2. Bahan dan Cara Kerja

2.1. Bahan
Bahan dalam penelitian ini disediakan oleh University of Adelaide Program
Pembibitan Barley, 25jenis (yang dapat dikategorikan oleh genotipe sebagai Food, Coloured,
Hulless: Jet, Sumire mochi; Makanan, Putih, Hulless: Finniss, Macumba; Makanan,
berwarna, Covered: Tadmor; Makanan, Putih, Covered: Adagio, Er / Apm; Malting, Putih,
Covered:

Flagship,

WI2585,

Vlamingh,AmajiNijo,Harrington,ND24260-1,

Komandan, Alexis, Dhow, Sloop, Buloke; Pakan, berwarna, Covered: ICARDA 16, ICARDA
19, ICARDA 26, ICARDA 35, ICARDA 39; Pakan, Putih, Covered: Armada, Chebec)
(Informasi tambahan, Tabel S1). Semua 25 genotipe yang berkembang dari Juni 2011 hingga
Desember 2011 sebagai plot tunggal dalam rancangan acak lengkap di Charlick Stasiun
Penelitian Eksperimental, Strathalbyn, Selatan Australia (35? 19046.2600S, 138?
52042.3900E). Setelah panen, butir disaring menggunakan 2,5 mm ditempatkan pada
saringan ISO5223. Butir yang disimpan di suhu 20C untuk mengurangi kadar air, dan tidak
mempengaruhi antioksidan kapasitas dan kandungan vitamin E.
2.2. Penyimpanan
Setelah panen, 1 kg biji-bijian gandum dari semua genotipe kecuali Jet, ICARDA 26
dan Buloke, dibersihkan dan ditempatkan pada kotak plastik berukuran 300, 200, 100 mm
yang bertutup. Gelas silika gel (50 mL) ditempatkan dalam wadah untuk mempertahankan
kelembaban, seperti yang terdeteksi oleh alat ukur kelembaban. Kotak butir yang disimpan
di 10C dalam gelap untuk 4 bulan, seperti yang umum digunakan di industri (Idaho Barley
Komisi, 2011). Kadar air, kandungan vitamin E dan kapasitas antioksidan dianalisis untuk

setidaknya tiga sampel ulangan untuk setiap genotipe sebelum dan setelah 4 bulan
penyimpanan.
2.3. Penggilingan
Butir barley (10 g) untuk setiap genotipe itu dihaluskan hingga menjadi bubuk halus
menggunakan IKA Mill (Jerman) dengan air untuk menghindari panas meningkat selama
penggilingan.
2.4. Kadar air
Kadar air tepung barley ditentukan oleh hasil yang metodenya diulang hingga tiga kali
menurut prosedur yang diuraikan di Amerika Asosiasi Cereal Kimiawan-AACC (2000)
Metode No 44-15A. Dua gram sampel ditimbang, pra-penimbangan dilakukan pengeringan
dengan oven pada suhu 105 5C hingga tercapai berat konstan.
2.5. Penentuan vitamin E konten
2.5.1. Ekstraksi vitamin E
Untuk mengekstrak tocol dari tepung barley dan menghindari degradasi isomer,
metode yang digunakan adalah metode saponifikasi adaptasi panas oleh Lampi, Ryynanen,
Salo-Vaananen, Ollilainen, dan Piironen (2004). Tepung (0,1 g) ditambahkan ke solusi dari 1
mL 100% (v / v) etanol, 0,4 ml air dan 20 mg askorbat Asam dalam 15 mL Pyrex tabung
gelas dengan Teflon sekrup topi. Setelah Selain dari 100 lL 10,7 M larutan kalium hidroksida
dicampurkan, tabung dipindahkan ke dalam air mendidihselama 25 menit. Selama
saponifikasi, sampel ditambahkan setiap 10 menit untuk meningkatkan hidrolisis.
Tabung didinginkan dalam rendaman air es selama 10 menit dan 0,5 mL 50% (v / v)
setelah penambahan etanol. Untuk mengekstrak tocols dan lipid yang tidak tersaponifikasi,
tiga bagian (masing-masing 2 mL) dari n-heksana: etil asetat (8: 2, v / v) yang bekas. Setelah
sampel dan pelarut sentrifugasi selama 10 menit dan terjadi pemisahan menjadi dua fase,
lapisan organik pada bagian atas dikumpulkan dengan kaca pipet sekali pakai dan
ditempatkan ke dalam tabung reaksi kaca. Proses ini diulang tiga kali dengan n-heksana: etil
asetat (8: 2, v / v), dan ekstrak kemudian dikeringkan menggunakan aliran nitrogen. Residu
dilarutkan dalam 1 mL n-heksana dan disaring dengan jarum suntik 0,45 lm sebelum transfer
ke dalam GRACE kaca HPLC (kromatografi cair kinerja tinggi).
2.5.2. Analisis HPLC

Pengukuran dilakukan menurut metode yang dilaporkan oleh Lampi dkk. (2004)
dengan beberapa modifikasi. Tocols dipisahkan oleh HPLC fase normal menggunakan Silica
GRACE Altima HP 150? 3 mm, 3 kolom mikron dan diukur dengan fluoresensi sebuah
detektor (NP-HPLC-FLD) dengan panjang gelombang eksitasi 290 nm dan panjang
gelombang emisi 325 nm.
Fase gerak adalah 1,4-dioksan / n-heksana (2:98, v / v) pada laju alir 1 mL / menit.
Pemisahan tocols didasarkan pada elusi isokratik (Lampi et al., 2004) jumlah isomer vitamin
E dalam sampel dihtung dengan menggunakan kurva kalibrasi dari hasil analisa isomer
standart. Tokoferol (T) standar (a-, b-, c, dT) dan tokotrienol (T3) standar (a-, b-, c, d-T3)
yang dibeli dari Cayman Kimia, Amerika Serikat, sementara n-heksana, etil asetat, asam
askorbat dan DPPH (2,2-difenil 1-pikrilhidrazil) berasal dari Chem-Supply Pty. Ltd,

2.6. Penentuan kapasitas antioksidan

2.6.1. Ekstraksi etanol antioksidan dalam gandum
Tepung barley (1 g) diekstraksi dengan 20 mL etanol 80% pada 45C dalam suatu
tabung ditempatkan di 200 rpm gemetar mandi air selama 4 jam di bawah gelap kondisi.
Vakum filtrasi kemudian digunakan untuk memisahkan supernatan, yang disimpan dalam
gelap pada 20C dan dianalisis dalam 24 jam dengan menggunakan metode radikal bebas
DPPH (Omwamba & Hu, 2009).
2.6.2. Metode radikal bebas DPPH
Ekstrak tepung barley (0,1 ml) ditambahkan ke 2,9 mL DPPH (112 Lm). Setelah
pencampuran, sampel dikondisikan dalam gelap selama 20 menit. Pengurangan absorbansi
diukur pada 517 nm setelah 20 menit menggunakan spektrofotometer (UV / VIS SP 8001,
Metertech, Taiwan). Kapasitas antioksidan kemudian ditentukan menggunakan kurva standar
untuk asam askorbat dan prediksi model yang tersedia oleh GENSTAT 14 dan dinyatakan
sebagai asam askorbat setara dengan kapasitas antioksidan per 100 g berat basah gabah
(mgAEAC/100gFW).
2.6.3. Penentuan kapasitas antioksidan vitamin E
Vitamin E diekstraksi seperti yang dijelaskan sebelumnya (Bagian 2.6.1). Setelah
ekstraksi dan pengeringan menggunakan aliran nitrogen,1 mL n-heksana digantikan oleh 1
mL 100% (v / v) etanol untuk melarutkan residu. Kapasitas antioksidan dari vitamin E
ekstrak kemudian ditentukan dengan menggunakan metode radikal bebas DPPH (Bagian

2.6.2).
2.7. Mid-inframerah (MIR) pengukuran
Untuk menentukan apakah ada biokimia yang dapat diidentifikasi perbedaannya
antara sampel yang berbeda kandungan vitamin E atau antioksidannya setelah penyimpanan,
MIR diterapkan. Tepung barley, dari sampel segar dan disimpan, di-scan dengan
menggunakan berlian platinum ATR sel modul refleksi sampel tunggal dipasang di Bruker
Alpha instrumen (Bruker Optik GmbH, Ettlingen, Jerman) dan spektrum direkam pada
software OPUS versi 7.0 yang disediakan oleh Bruker Optik (rata-rata 64 scan pada resolusi
8 cm, antara 4000 dan 375 cm) (Cozzolino, Roumeliotis, & Eglinton, 2013). Sampel
perlakukan dengan kristal ATR menggunakan aplikator tekanan atau mekanisme penjepit
sampel yang disediakan oleh produsen alat untuk memastikan bahwa yang sama dan konstan
Tekanan diterapkan untuk semua ulangan dan air digunakan sebagai blangko.
Perlakuan spektrum.
2.8. Analisis statistik
Variasi analisis satu arah dan dua arah (ANOVA) dilakukan menggunakan GENSTAT
14 untuk menentukan perbedaan antara menggunakan LSD pada P <0,05. Spectra diekspor
dari software OPUS ke Software Unscrambler X (versi X, CAMO ASA, Oslo, Norwegia)
untuk analisis kemometric, kemudian data diolah menggunakan turunan kedua dari SavitzkyGolay dan kemudian ditafsirkan dengan Principal Component Analysis (PCA) untuk
menafsirkan perubahan MIR spektrum sampel terkait dengan penyimpanan, sesuai Cozzolino
dkk. (2013).

3. Hasil
3.1. Tepung gandum utama dari 25 genotip yang terdeteksi,
Menurun

di

antaranya

-T3, -T, (-T3 dan -T3), (-T dan -

T), sigma-T3 dan sigma-T. -T3 ini homolog utama, akuntansi untuk
sekitar

58%

dari total tepung

tokotrienol. Semua
T (16% dari total

gandum

dan

73%

dari

total

genotipe juga memiliki sejumlah besar tepung

gandum), diikuti oleh -T3 (12%) dan -

T3 (10%). Lebih kecil jumlah -T dan -T daripada isomer lain yang

ditemukan di semua sampel. Presentase total tocotrienol (80% dari total

tepung gandum ) adalah jauh lebih tinggi daripada total tokoferol (19%).
Konten

isomer

individu

vitamin

signifikan antara genotipe

dikategorikan

menjadi

dan tinggi

Genotip

enam

berbeda

secara

dengan genotipe 25 yang menjadi mudah

tiga

kelompok

dengan

konten:

rendah,

kandungan

menengah

vitamin

tertinggi adalah Harringto dengan 31.5lg / g DW, yang lebih dari tiga kali
terendah, Jet dengan 8.5lg / g DW. genotipe berwarna terdiri dari Jet,
Macumba, Finiss, Sumire mochi, ICARDA group dan Tadmor memiliki
kandungan

vitamin

lebih

rendah.

Dalam kelompok makanan, Adagio adalah yang terbaik sumber vitamin E

dengan

27lg/g

DW.

Kapasitas antioksidan rata-rata di genotipe tepung

gandum 109 mg AEAC/100 g FW dan kapasitas berkisar luas, dari 57 mg

AEAC/100

FW

di

ICARDA

39

untuk

158

mg

AEAC/100

FW di WI2585 (Fig. 1b). WI2585 dan Harrington memiliki kapasitas

tertinggi

antioksidan

dan

juga

tertinggi vitamin e, sedangkan

garis ICARDA yang rendah di keduanya. Total analisis antioksidan dan

vitamin E jauh lebih rendah daripada kapasitas total antioksidan (0.06
7 mg AEAC/100 g FW dibandingkan dengan 57 158 mg AEAC /100 g FW),
menunjukkan bahwa vitamin E lebih

rendah

dari

kapasitas antioksidan dalam tepung gandum.

3.2. efek penyimpanan pada vitamin E dan antioksidan.
Semua enam besar isomer (-T,-T3,-T,-T3,-T dan

T3) terdeteksi di genotipe tepung gandum setelah 4 bulan Penyimpanan

tetapi jumlah sigma-T dan sigma-T3.

Urutan

konsentrasi

isomer

mirip

dengan sampel adalah >>. Sebagai hasil dari perubahan keseluruhan

isi vitamin E

diubah antara 6% dan 30% setelah 4 bulan.

Kapasitas

antioksidan pada biji-bijian yang disimpan lebih rendah daripada butiran

pada

panen.

Peningkatan

yang

signifikan

dalam kapasitas antioksidan diamati pada genotip ICARDA 26 dan ICARDA

39. Hasil analisis ATR-MIR mengungkapkan bahwa biji-bijian pada panen
dapat

dibedakan

dari

sampel

biji-bijian

yang disimpan

selama 4 bulan yang menggunakan dua komponen utama, PC1 dan PC2.

4. diskusi
Ada beberapa peneliti yang telah meneliti kandungan antioksidan
dan

vitamin

pada

tepung

gandum.

Penelitian

kami menunjukkan bahwa kandungan vitamin E dan kapasitas antioksidan

bergantung pada genotipe. Selain itu, penurunan kapasitas antioksidan
dan peningkatan kandungan vitamin E yang diamati pada kebanyakan
genotip setelah 4 bulan disimpan pada suhu yang relevan. Tidak ada
korelasi antara kapasitas antioksidan dan lima isomer individu vitamin E.
Kapasitas

urutan

vitamin

pada

genotip

adalah

ICARDA > Jet > Sumire>Mochi > Tadmor). Studi terbaru menunjukkan bah
wa antioksi

dan

tinggi

dalam biji-

bijian sereal berwarna karena kontribusi pigmen

proanthocyanin

dan

senyawa

anthocyanin,

seperti
dengan

bentuk utama yang menjadi cyanidin-3-glukosa dan delphinidin-3-glukosa.

Non-berpigmen senyawa
berkontribusi
gandum

mungkin

akan

lebih

kapasitas antioksidan dalam tepung

sebelumnya

telah

cenderung
gandum.

untuk
Tepung

dilaporkan mengandung flavonol,

asam fenolik dan flavan-3-ols. Selain itu, enzim antioksidan dan senyawa
apolar yang menggabungkan lutein dan zeaxanthin) pada kapasitas
antioksidan dalam tepung gandum. Dalam biji-bijian yang disimpan, reaksi
seperti esterifikasi esterifikasi juga dapat mencegah hilangnya vitamin E
karena

pengurangan

vitamin

Perbedaan suhu, cahaya dan kelembaban sangat

E
penting

oksidasi.
selama

penyimpanan. Antioksidan juga bisa sebagai pengawet dalam bahan

makanan.

5. kesimpulan
Identifikasi

perbedaan genotip

dengan antioksidan dan

vitamin E konten dipilih untuk

perkembangbiakan tujuan. Genotipe yang mempertahankan kapasitas ant

ioksidan dan vitamin E konten setelah penyimpanan memiliki potensi

terbesar untuk produk pangan fungsional.