MICROBIOLOGIA

COLORACIONES
Coloracin de GRAM
Componentes de la pared celular de la bacteria forman compuesto qumico estable con el
violeta de genciana. Resisten la decoloracin con la mezcla alcohol-acetona y se
denominan GRAM POSITIVAS. Las que se decoloran, se tien de color violeta por la
Fucsina y se denominan GRAM NEGATIVAS.
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Fijar por calor

Cubrir con violeta de genciana 2 minutos
Lavar con agua
Cubrir con lugol 1 minuto
Lavar con agua
Decolorar con alcohol-acetona 10 segundos, lavar rpidamente bajo canilla
Cubrir con fucsina 1:10 30 segundos
Lavar con agua y dejar secar para observacin microscpica

Coloracin de Ziehl-Neelsen
Examen que sirve para detectar la presencia de bacilos cido alcohol resistentes (BAAR),
que se observan de color rojo intenso con un fondo azul plido.
1. Realizar extendido sobre partes de un portaobjetos. Dejar secar y fijar a la llama.
2. Cubrir la preparacin con la solucin de fucsina. Flamear suavemente el portaobjetos
con hisopo embebido en alcohol hasta desprendimiento de vapores blancos. Efectuar
3 veces durante 10 minutos.
3. Evitar ebullicin
4. Lavar con agua
5. Decolorar con alcohol-cido durante 5 minutos
6. Lavar con agua
7. Cubrir con azul de metileno durante 30 segundos
8. Lavar con agua y secar a temperatura ambiente

MEDIOS DE CULTIVO
Agar sangre
Abundante base nutritiva ofrece condiciones ptimas de crecimiento a todos los
microorganismos exigentes.
1. -hemlisis: hemlisis total, halo traslcido alrededor de la colonia.
2. -hemlisis: hemlisis parcial, halo verdoso o pardo alrededor de la colonia. S.
pneumoniae
3. -hemlisis: ausencia de halos.
Caldo Todd-Hewitt
Medio de cultivo lquido que permite el desarrollo de los estreptococos. Contiene buffer
que contrarresta la acidez que generan durante la fermentacin de la glucosa.

Chapman (Agar-manitol-NaCl)
Medio con alta concentracin de sal que permite nicamente el crecimiento de
microorganismos tolerantes a la misma (genero staphylococcus), y se evala la capacidad
de las especies de staphylococcus de utilizar manitol con formacin de cido.
Levine (agar eosina azul de metileno EMB)
Medio selectivo y diferencial de aislamiento para bacilos Gram negativos de la familia
enterobacteriaceae. Permite distinguir bacterias fermentadoras, no fermentadoras y
fermentadoras tardas de lactosa. La eosina y el azul de metileno inhiben el desarrollo de
algunas Gram positivas y adems precipitan a pH cido cuando las bacterias utilizan la
lactosa produciendo ennegrecimiento de las colonias.
Bacterias que fermentan rpidamente la lactosa:
1. Colonias negras con o sin brillo metlico: Escherichia coli
2. Colonias mucosas (con centro negro): Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae o
aerogenes, Escherichia coli
Bacterias que fermentan tardamente la lactosa:
1. Colonias del color del medio: Escherichia coli, Proteus, Morganella, Providencia,
Serratia, Salmonella spp, Shigella spp, Citrobacter, Edwardsiella, Yersinia.
Medio Salmonella-Shigella Agar
Medio selectivo y diferencial usado para el aislamiento de enterobacterias de cultivos
mixtos, que inhibe el crecimiento de Gram-positivos y numerosos Gram-negativos.
1. Bacterias que no fermentan lactosa y generan colonias incoloras: Shigella
2. Colonias incoloras con centro negro: Salmonella (sulfito de hidrgeno atrapado por
hierro)
Caldo tioglicolato
Medio de cultivo semifluido que permite el desarrollo de pequeos inculos de bacterias
aerobias, anaerobias facultativas y algunas anaerobias estrictas. El tioglicolato y la cistena
proporcionan la anaerobiosis. La pequea cantidad de agar impide la penetracin rpida del
oxgeno.

PRUEBAS DE IDENTIFICACION BIOQUIMICA

Catalasa
Enzima que descompone el perxido de hidrgeno en oxgeno y agua. Colocar una o dos
gotas de H2O2 y aadir con ansa una colonia aislada de la bacteria en estudio. La prueba es
positiva si aparecen burbujas.
Coagulasa
Enzima con actividad semejante a la protrombina, capaz de transformar el fibringeno en
fibrina, provocando la formacin de un cogulo visible. Si se forma el cogulo, es S.
aureus.

Medio agar hierro tres azcares (TSI)

Determina la capacidad de un microorganismo de fermentar los hidratos de carbono
presentes en el medio de crecimiento bsico con produccin o no de gas. Tambin permite
visualizar la produccin o no de cido sulfhdrico. El medio es fraccionado en forma de pico
de flauta para obtener 2 cmaras de reaccin (anaerobiosis en el fondo y aerobiosis en el
pico). Inocular la superficie del pico de flauta con estra y el fondo por puncin.
Resultados:
1. Pico alcalino/ Fondo alcalino: No hay fermentacin de azcares
2. Pico alcalino/ Fondo cido: Glucosa fermentada. Lactosa y sacarosa no fermentadas
3. Pico cido/ Fondo cido: Glucosa fermentada. Lactosa y/o sacarosa fermentadas.
La produccin de gas se evidencia por la aparicin de burbujas o fragmentacin del
medio.
La formacin de cido sulfhdrico se detecta por ennegrecimiento del medio debido a la
produccin de sulfuro ferroso.
E. coli: cido o alcalino/cido gas
Salmonella: alcalino fondo negro gas
Shigella: alcalino cido sin gas
Lisina Hierro Agar (LIA)
Mtodo donde se detecta la produccin de lisina-decarboxilasa y cido sulfhdrico
simultneamente. La lisina puede ser decabroxilada por los microorganismos que poseen la
enzima, lo que produce un viraje al violeta del indicador de pH prpura de bromocresol.
Como la decarboxilacin se produce nicamente en medio cido, es necesario que se
produzca previamente la acidificacin del medio de cultivo por fermentacin de glucosa.
Los microorganismos que no producen lisina-decarboxilasa pero que son fermentadores de
glucosa producen un viraje al amarillo de la totalidad del medio. La incubacin de 24 hs
produce una alcalinizacin de la superficie del medio y el viraje del pico al color violeta.
La produccin de sulfuro de hidrgeno se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido
a la formacin de sulfuro de hierro.
Citrato
Determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como nica fuente de carbono para
el metabolismo, produciendo alcalinidad. Estos organismos utilizan tambin las sales de
amonio como nica fuente de nitrgeno, las que se desdoblan en amonaco con la
consiguiente alcalinidad. El medio toma un color azul de Prusia, indicando una prueba
positiva.
E. coli: Citrato negativo