CUANTIFICACION DE MICROALGAS EN CAMARA DE RECUENTO NEUBAUER IMPROVED

QUANTITATION OF MICROALGAE IN NEUBAUER IMPROVED COUNTING CHAMBER

A DETERMINAO QUANTITATIVA DE MICROALGAS EM NEUBAUER MELHORADA CMARA DE
CONTAGEM
JORGE ARMANDO CIFUENTES GUZMAN1, CARLOS ALFREDO GALINDEZ MUOZ1

RESUMEN
Las microalgas son microorganismos que dependen de varios factores para acelerar su crecimiento entre
ellas se encuentran la aireacin, exposicin a la luz, nutrientes. Dependiendo de estos factores el crecimiento
puede ser rpido o lento, para este trabajo se utilizaron muestras de cuatro medios de cultivos (diferentes
cantidades de nutrientes) tomadas el da sexto despus de realizado el cultivo, se realiz el recuento de las
muestras en la cmara de neubauer y se determina la concentracin en cada medio, los resultados
determinan que no hubo una diferencia significativa para la concentracin entre los medios
Palabras Claves: Cmara Neubauer, microalgas, Clulas.
ABSTRACT
Microalgae are microorganisms that depend on several factors to accelerate growth among them are aeration,
exposure to light, nutrients. Depending on these growth factors can be fast or slow, for this work samples of
four culture media (different amounts of nutrients) taken the sixth day after the crop is used made the count
samples was conducted in camera neubauer and concentration in each medium is determined, the results
determined that there was no significant difference between mean concentration
Keywords: Neubauer chamber, microalgae, cells.
RESUMO
As microalgas so microrganismos que dependem de vrios factores, para acelerar o crescimento entre eles
so de aerao, a exposio luz, nutrientes. Dependendo desses fatores de crescimento pode ser rpido ou
lento, por isso amostras de trabalho de quatro meios de cultura (diferentes quantidades de nutrientes)
tomadas ao sexto dia aps a colheita usada feitas as amostras de contagem foi realizada em cmara
Neubauer e concentrao em cada meio determinada, os resultados indicam que no existe nenhuma
diferena significativa entre a concentrao mdia
Palavras-chave Cmara de Neubauer, clulas de microalgas.
INTRODUCCIN
La cmara de Neubauer es una herramienta
diseada para el uso en medicina y biotecnologa,

1[] Estudiantes de Ingeniera de Procesos. Facultad de Ingeniera. Universidad Mariana San Juan de Pasto. Colombia.
1

para realizar recuento de clulas en un medio

liquido [2], se debe tener la habilidad para enfocar
la cmara de tal manera que las clulas se
puedan identificar claramente y poder realizar el
recuento con mayor eficiencia.

Preparacin de la Cmara: Se desinfecta la

cmara con alcohol, se limpia y seca con papel de
arroz.
Preparacin de la Muestra: Se toma una gota
del muestra con la ayuda de un gotero
previamente lavado con agua destilada, y se deja
caer en la cmara de Neubauer, seguidamente se
cubre con el cubre objetos y se coloca en el
microscopio.

El recuento no solamente sirve para establecer la

concentracin celular o densidad poblacional, sino
que tambin ayuda a dar un seguimiento de la
cintica de crecimiento de los microorganismos,
Los resultados permiten estimar en cierto modo la
situacin de un cultivo y relacionarlo con la curva
de crecimiento de esa poblacin algar.

Preparacin del microscopio: La cuadrcula de

recuento est formada por 9 cuadrados grandes
los cuales son visibles con el objetivos 4X, luego
con el objetivo 10X se ubica un recuadro central
compuesto por 25 cuadrados medianos, despues
de ubicado el cuadro central se aumenta el
objetivo a 40X y se ubica un recuadro pequeo
compuesto por 16 cuadrados.

Dentro del conteo de microalgas cultivadas en

recipientes artificiales el mtodo de la camara de
neubauer es de los mas utilizados, ya que permite
contar directamente los microorganismos, el
problema es que este mtodo muchas veces por
esta expuesto al error humano, esto implica que el
mtodo llegue a tener errores comunes entre un
20 y 30% [3]

Recuento: Se cuentan aquellas clulas que estn

dentro del recuadro pequeo, como las partculas
verdes de la imagen 1 y se toma apuntes.

Mtodos.
Muestra: Es otorgada por el proyecto de
investigacin Modelamiento y Simulacin de un
fotobiorreactor para la produccin de biomasa
proteica a partir de microalgas Se toman 3
muestras por cada medio de cultivo, 2 mL por
cada uno, los medios de cultivo son cuatro, la
muestra se toma en el da 6 despus de realizado
el cultivo y el microorganismo cultivado es la
microalga Chlorella Vulgaris.
Durante los seis das de crecimiento los cultivos
han sido monitoreados y controlados por el grupo
de investigacin perteneciente a la Universidad
Mariana

Imagen 1. Cmara de Neubauer.

2[] ALFARO, Victor, Practica camara

de neubauer.

Fuente:
En
lnea
http://insilico.ehu.es/camara_contaje/neubauer_improv
ed.php

3[]Bastidas, Oscar Neubauer

Chamber Cell Counting

Determinacin de la concentracin:
Volumen del contenido de la cmara: Se
determin el volumen de un recuadro
2

mediano teniendo en cuenta sus

dimensiones y el espacio formado entre la
cmara y el cubre objetos.
Nmero de clulas: Se multiplica la
cantidad de clulas contadas en un recuadro
pequeo y se multiplica por 25 que son el
nmero de cuadros de un recuadro mediano.
Concentracin de clulas: El nmero de
clulas es divido entre el volumen del
contenido de la cmara, el resultado se
expresa
como
nmero
de
clulas/Litro(mililitro).

Determinacin
resultados.

del

cultivo

con

Recuento y clculo de concentracin

Despus de realizar el conteo en cada muestra,
se procede hacer el clculo de la concentracin,
para esto se tiene en cuenta que un recuadro
mediano en la camara de neubauer, tiene unas
dimensiones de 0.1cm x 0.1cm y el especio
generado entre la camara y el cubreobjetos es de
0.1mm [3] por lo que el volumen contenido en un
recuadro mediano es de.
4

Volumen=0.10.10.01=1 x 10 c m =1 x 10 ml

mejores

La concentracin para el caso de la imagen 2

seria.

( 325 ) cel
=750000 cel/mL
1 x 1 04 c m3

Las concentraciones obtenidas en los cuatro

medios de cultivo, se ingresan mediante una
matriz al software STATGRAPHICS CENTURION
y se analizan los grficos obtenidos.

Los resultados del recuento y la concentracion

para cada medio se exponen en la tabla 1.

RESULTADOS Y DISCUSIN

Tabla 1. Resultados del

concentraciones
Tratami Replica Nmero
ento
de
clulas
NPK1
5
NPK2
3
NPK
NPK3
3
BBM1
5
BBM2
9
BBM
BBM3
4
BG111
5
3
BG11 BG112
BG113
5
ART1
5
ART2
4
ART
ART3
10

Para el recuento en la cmara un hubo necesidad

de realizar diluciones ya que las muestran no
estaban saturadas de microorganismos como se
puede observar en la imagen 2.
Imagen 2. Muestra objetivo 40X

Fuente: Esta investigacin

En este caso se observan tres clulas dentro del

recuadro pequeo, se apunta el dato
correspondiente para su posterior anlisis.

recuento

CONCENTR
ACION
Cel/mL
1250000
750000
750000
1250000
2250000
1000000
1250000
750000
1250000
1250000
1000000
2500000

Fuente: Esta investigacin.

En la matriz no se puede detallar con claridad cul

ha sido el tratamiento con mayor concentracion,
3

para analizar mejor estos resultados se ingresa la

matriz de resultados del recuento y
concentraciones al software STATGRAPHICS
CENTURION.

Tabla 2. Multiples rangos para concentraciones.

Mtodo: 95,0 porcentaje Tukey HSD
Tratamien Casos Media
Grupos
to
Homogneos
X
NPK
3
916667,
BG11
3
1,08333E6 X
X
BBM
3
1,5E6
ART
3
1,58333E6 X

Grafica de la media
En el anlisis de la varianza mediante un ANOVA
simple donde la variable dependiente es la
concentracin y la independiente son los
tratamientos o medios de cultivos, se obtiene que
no ay diferencia entre tratamientos como se puede
indicar en la grafica 1.

BIBLIOGRAFIA

Grafica 1. Media con IC 95% prueba Tukey HSD.

[1] ALFARO, Victor, Practica camara de neubauer.

[2] Bastidas, Oscar Neubauer Chamber Cell
Counting recuperado el 31 de 05 de 2015 de
http://www.celeromics.com/es/resources/docs/Artic
les/Conteo-Camara-Neubauer.pdf
[3] CHERLYS, Infante, Propagacin de la
microalga Chlorella sp. En cultivo por lote:
Cintica de crecimiento celular.
[4]SERRANO, L. (2012). Universidad Nacional de
Colombia. Recuperado el 30 de 05 de 2015, de
Estudio de cuatro cepas nativas de microalgas
para evaluar su potencial uso en la produccin de
biodiesel:
http://www.bdigital.unal.edu.co/7825/1/299883.201
2.pdf

En el da sexto el cultivo aun no reporta ningn

tratamiento como el mejor ni como el peor, estos
tienen la misma variacin.
La tabla 2. Afirma mas claramente como los
resultados no presentan una diferencia
significativa entre tratamientos con un nivel de
confianza del 95%.