Anlise citolgica do lquido cefalorraquidiano

TTULO
Citological analysis of cerebroespinal fluid
Samuel Ricardo Comar[a] Nicolle de Arajo Machado[b],
Ticiana Grando Dozza[c], Patrcia Haas[d]
Mestre em Cincias Farmacuticas (rea de concentrao: Anlises Clnicas) pela Universidade Federal do Paran (UFPR),
farmacutico bioqumico da seo de hematologia da Unidade de Apoio Diagnstico do Hospital de Clnicas da Universidade
Federal do Paran (UFPR), Curitiba, PR - Brasil.
[b]
Farmacutica bioqumica, especializada em Citologia Crvico-Vaginal e Lquidos Corporais, pela Universidade Federal de Santa
Catarina (UFSC), Florianpolis, SC - Brasil, e-mail: ni_machado@hotmail.com
[c]
Farmacutica bioqumica, especializada em Citologia Crvico-Vaginal e Lquidos Corporais, pela Universidade Federal de Santa
Catarina (UFSC), Florianpolis, SC - Brasil.
[d]
Doutora em Cincia dos Alimentos pela Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC), professora-adjunta III da
Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC), Florianpolis, SC - Brasil, e-mail: patricia.haas@ufsc.br
[a]

Resumo
O lquido cefalorraquidiano um humor com composio semelhante a um ultrafiltrado de plasma,
encontrado nos plexos ventriculares, no canal central da medula e no espao subaracnoide. Sua homeostasia
pode ser danificada na presena de tumores, isquemias, hidrocefalias e infeces, o que pode provocar
mudanas na produo e/ou na composio desse fluido. A anlise laboratorial do lquor permite a
obteno de informaes importantes, para definio de diagnstico e de conduta teraputica, e consiste
em uma avaliao microbiolgica, bioqumica e citolgica, a qual engloba desde aspectos fsicos da
amostra at contagens globais e diferenciais das clulas presentes. necessrio que todos os profissionais
envolvidos tenham conhecimento das tcnicas e as executem de forma correta, tanto na coleta como
no transporte, no armazenamento e no preparo da amostra e nas anlises propriamente ditas, para que
possam ser obtidos resultados corretos e confiveis.
Palavras-chave: Lquido cefalorraquidiano. Anlise laboratorial. Citologia.
[B
Abstract
The cerebrospinal fluid is an aqueous fluid with similar composition to the ultrafiltered plasma and it is found in
ventricular plexus, central marrow and subarachnoid space. Its balance can be damaged by the presence of tumors,

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ischemia, hydrocephalus and infections, wich can make changes on production or composition of this fluid. The
laboratorial analysis allow the attainment of important information to define diagnostic and therapeutic conduct,
and it consists in microbiological, biochemical and citological evaluation, wich includes physical aspects and global
and differential counting from the present cells. It is necessary that all the evolved professionals know and execute
the techniques on the right way, including collection, transport, storage, sample preparation and the analysis itself.
Keywords: Cerebrospinal fluid. Laboratorial analysis. Cytology.

Introduo
O lquido cefalorraquidiano (LCR) um
fluido aquoso que circula pelo espao intracraniano,
preenchendo o sistema ventricular, o canal central da
medula e os espaos subaracnoides craniano e raquiano, representando a maior parte do fluido extracelular
do sistema nervoso central (SNC) (1). Esse lquido
apresenta diversas funes, entre elas, o fornecimento
de nutrientes essenciais ao crebro, a remoo de produtos da atividade neuronal do SNC e a proteo mecnica das clulas cerebrais (2). Estudos demonstram
que um mecanismo homeosttico eficiente do LCR
essencial para a atividade neuronal (3-5).
O plexo coroide responsvel por dois
teros da produo total de LCR. Essa produo
ocorre nos ventrculos laterais e no 3 e no 4 ventrculo, por uma combinao de processos de difuso, pinocitose e transporte ativo (3). A formao
do lquor ocorre em duas etapas. A primeira consta
de uma filtrao passiva do sangue pelo endotlio
capilar coroidal, a qual proporcional ao gradiente
da presso hidrosttica entre o sangue e o fluido
intersticial coroide; a segunda consta de uma secreo ativa pelo epitlio monoestratificado, envolvendo bombas, cotransportadores e antiportadores, canais inicos e aquaporinas (6), sendo esse um
processo submetido modulao neuroendcrina
e hormonal (7). Outra pequena parcela de LCR
produzida por clulas ependimais, as quais se localizam na regio ventricular (3, 8).
O fluxo do LCR pulstil e essa pulsao depende da hemodinmica arterial no plexo (9,
10). Esse fluxo ocorre dos ventrculos laterais para
o 3 e o 4 ventrculo, segue at as cisternas basais
e, posteriormente, aos espaos subaracnoides espinhal e cortical (3). Alm da macrocirculao atravs
do espao ventricular subaracnoide, h uma limitada microcirculao, que segue do espao subaracnoide at o espao subpial de Virchow-Robin, que,
por sua vez, permite a eliminao de parte do LCR
presente no crebro por vias de drenagem (11, 12).

A eliminao ou reabsoro liqurica do SNC

ocorre por desvios existentes no espao subaracnoide, chamados de vilosidades aracnoides, que cercam
nervos cranianos (8), pela placa cribriforme, pelos
vasos linfticos da regio cervical (13, 14) e ao longo dos nervos espinhais (15). O lquido retorna,
assim, circulao venosa. Todo esse trajeto exige
aproximadamente 1 hora para ser completado, e o
fluxo mais rpido no sentido da gravidade (8).
A presso normal de abertura do LCR varia de 10 a 100mm H2O em crianas jovens, de 60
a 200mm H2O aps os 8 anos de idade e fica acima de 250mm H2O em pacientes obesos. Valores
abaixo de 60mm H2O e acima de 250mm H2O
definem hipotenso e hipertenso intracranial, respectivamente (16).
A presso intracranial mantida quando
existe um equilbrio entre a formao e a reabsoro do LCR (3). A composio do lquor semelhante a um ultrafiltrado de plasma, porm, contm
99% de gua e apresenta maior concentrao de
magnsio e ons clordricos e menor concentrao
de glicose, protenas, aminocidos, cido rico, clcio, fosfato e ons de magnsio, quando comparado
a um ultrafiltrado de plasma (3, 17). Pople (18) relata que o volume ventricular normal de 20ml e o
volume lqurico total, em um adulto, de 120ml a
150ml. A renovao do lquor diria e sua constante produo atinge em torno de 500ml/dia (19, 20).
A taxa de renovao diretamente proporcional
taxa de formao e inversamente proporcional ao
volume do LCR (5).
Tanto a produo quanto a composio
do LCR podem ser afetadas pela presena de tumores, infeces, traumas, isquemias e hidrocefalias (21, 3, 7). Alteraes severas no fluxo liqurico
podem causar distrbios cognitivos e de funo
motora. A anlise laboratorial do LCR permite a
obteno de informaes fundamentais para uma
conduta clnica eficiente (3).
A meningite uma das patologias que provoca alteraes liquricas e consiste em um processo

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infeccioso ou no das meninges, a qual pode ter

evoluo aguda ou crnica (22, 23) e considerada um grave problema de sade pblica (24). Essa
patologia est relacionada a diversas complicaes
imediatas e/ou tardias, que podem culminar com
danos irreversveis no SNC ou levar o paciente
ao bito (25). O exame do LCR vem sendo usado como diagnstico desde o final do sculo XIX,
contribuindo significativamente para a confirmao da patologia (24).

Anlise laboratorial do LCR

1. Coleta da amostra: Como o procedimento diagnstico invasivo, o exame de LCR
s pode ser realizado aps assinatura do Termo de
Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE), pelo
paciente ou por seu representante legal, de acordo
com a Resoluo n. 196 do Conselho Nacional de
Sade (CNS), de 10 de outubro de 1996 (26).
A coleta da amostra de lquor de responsabilidade do mdico requisitante e das trs vias
clssicas para coleta, sendo a lombar a mais utilizada
na rotina (27), seguida pela suboccipital ou cisternal
e, por ltimo, a via ventricular. A via suboccipital
apresenta algumas vantagens em relao lombar,
pois no descrita a ocorrncia de cefaleia ps-puno. Eventuais alteraes osteoarticulares de coluna
cervical interferem muito pouco no ato da puno,
mesmo em pessoas obesas e/ou idosas, alm de haver menor risco de herniao de estruturas do sistema nervoso central, em casos de hipertenso intracraniana no comunicante (26). Entretanto, essa
via tem algumas restries de indicao, atualmente
tendo como indicao absoluta somente os casos
de hipertenso intracraniana ou de infeco drmica ou epidrmica na regio lombar (22, 28).
Um manmero colocado antes da remoo do LCR, para indicar a presso de abertura. A presso de abertura normal, em adultos, de
90mm H2O a 180 mm H2O, na posio decbito
lateral, sendo ligeiramente mais elevada em pacientes sentados ou obesos, e essa presso pode variar
entre 4 e 10mm H2O, com a respirao, e entre 2
e 5mm H2O, com o pulso do paciente (16). Em
casos de presso de abertura normal, podem ser
removidos, normalmente, at 20ml de LCR (29).
A boa qualidade de qualquer amostra destinada anlise laboratorial garante a confiabilidade dos resultados. O LCR deve ser coletado sem

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anticoagulante, em trs tubos ou frascos seguramente estreis e devidamente identificados com os nmeros 1, 2 e 3, na ordem em que so obtidos (29).
A identificao do material deve, tambm, conter o
nome, o nmero de registro do paciente e a data da
coleta (30). A amostra do primeiro tubo dever ser
usada para a realizao das anlises bioqumicas e
sorolgicas. O segundo ser utilizado para os exames microbiolgicos, e o terceiro destina-se s contagens celulares, em virtude da menor probabilidade
de conter material, particularmente clulas sanguneas, introduzidas acidentalmente no momento da
puno (29, 31). Caso a amostra tenha sido coletada
apenas em um nico frasco, ele deve ser enviado,
primeiramente, seo de bacteriologia; em seguida,
seo de hematologia e, posteriormente, seo
de imunoqumica (29, 30, 32). Amostras coletadas
com qualquer tipo de anticoagulante e sem identificao ou envelhecidas devem ser rejeitadas (33).
de extrema importncia que o local da
amostragem esteja registrado nos tubos, uma vez
que os parmetros citolgicos e bioqumicos variam de acordo com o local da puno (29).
2. Transporte e armazenamento: A amos
tra coletada deve chegar ao laboratrio o mais rpido possvel, no mximo em 2 horas, pois, aps esse
tempo, podem ocorrer degradao e/ou alteraes
morfolgicas de hemcias, leuccitos e outros tipos
celulares, diminuio da glicose, aumento de concentrao das protenas e de bactrias (29, 30). Se
isso no for possvel, pode-se realizar a fixao da
amostra com formalina (1:1); entretanto, esse mtodo no deve ser rotineiramente executado. A temperatura de armazenamento do lquor nativo deve
estar entre 5 C e 12 C, para minimizar danos s
clulas. Temperaturas muito baixas podem conduzir
a lise pelo frio, e temperaturas mais altas aceleram
mecanismos catablicos, degenerando as clulas (8).
Aps realizadas as anlises, uma pequena
poro do LCR centrifugado deve ser devidamente
identificada e armazenada na geladeira, durante 30
dias, para eventual necessidade de se realizar outras
dosagens (33).
3. Preparo da amostra: No setor de citologia/hematologia, a amostra de LCR deve ser fresca e centrifugada, para a anlise visual, e fresca, no
centrifugada e devidamente homogeneizada, para
a contagem de leuccitos e hemcias em cmaras.
Para a confeco da lmina, deve ser utilizada a
amostra total ou o sedimento obtido por centrifugao em baixa rotao (33, 34).

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A preparao da lmina deve ser rpida, j

que as clulas se deterioram rapidamente, em virtude de o LCR ser um meio inapropriado para a manuteno da viabilidade das clulas. O pH elevado
e a baixa presso onctica fazem com que algumas
clulas inchem, algumas lisem e, outras, tornem-se
irreconhecveis. Se a amostra apresentar uma elevada celularidade, ela deve ser diluda em soluo
salina (NaCl 0,9%), de modo que as clulas da
amostra tenham espao adequado para se espalharem em uma monocamada, na superfcie da cmara, com sobreposio mnima. Em funo da metodologia de preparao das lminas (centrifugao),
a adeso artificial entre as clulas um fenmeno
comum e no deve ser erroneamente interpretado
como grupamentos de clulas tumorais ou, no caso
de um moncito cercado por diversos eritrcitos,
como o estgio inicial da eritrofagocitose (8).
4. Exame fsico: A observao visual da
colorao e do aspecto do LCR a etapa inicial da
anlise e pode fornecer importantes informaes
diagnsticas. O lquor, em condies normais, incolor (como gua de rocha), porm, em condies
patolgicas, pode apresentar alterao na colorao.
A colorao deve ser registrada antes e depois do
processo de centrifugao (30). A amostra considerada xantocrmica quando, aps centrifugao,
tem tonalidade que varia entre rosa, amarelo ou laranja, o que ocorre pela presena de hemoglobina
(hemlise) ou pelas concentraes elevadas de protenas ou bilirrubina. A possibilidade de existncia
de outras substncias, como iodo, caroteno ou melanina, deve ser considerada. Em recm-nascidos,
principalmente os prematuros, comum observar
xantocromia, em virtude da imaturidade da funo
heptica. A intensidade da xantocromia pode ser
obtida por mtodos espectrofotomtricos, porm,
na rotina, utiliza-se o mtodo visual, cuja sensibilidade de 47,3%, o qual feito pela comparao da
cor da amostra com padres de colorao de bicromato de potssio, em soluo de diversas concentraes (35, 36).
No momento da puno, podem ocorrer
traumas que provocam sangramento, que, se no
for analisado cuidadosamente, pode provocar um
erro de diagnstico, pois a amostra torna-se semelhante a uma amostra com hemorragia subaracnoide. Entre os procedimentos utilizados para distinguir um acidente de puno de uma hemorragia
subaracnoide, esto o mtodo dos trs tubos, o da
presso inicial e a inspeo visual da amostra aps

centrifugao, que, nesse caso, torna-se lmpida

(37-39, 31).
O aspecto da amostra deve ser observado
em local com boa iluminao e pode ser definido
como lmpido, em casos de LCR normal ou com
celularidade de at 200 leuccitos/l ou 400 hemcias/l, ou como levemente turvo, turvo ou turvo-leitoso, em virtude da presena de clulas sanguneas, microrganismos ou taxas elevadas de protenas
ou lipdeos (38, 34, 31). A formao de cogulo
tambm deve ser registrada e observada em amostras de pacientes com acidente de puno, bloqueio
espinhal completo (sndrome de Froin) e meningite tuberculosa e supurativa. Esse cogulo formado
pode interferir na exatido das contagens de clulas,
por capturarem clulas inflamatrias (29).
5. Contagem global de clulas: A contagem global de leuccitos e hemcias da amostra pode ser realizada em qualquer tipo de cmara
de contagem, porm, rotineiramente, utiliza-se a
cmara de Fuchs-Rosenthal, a qual tem altura de
0,2mm, rea total de 16,0mm, volume total de
3,2mm e dividida em 16 quadrados, que so subdividos em 16 quadrados menores cada um (34),
sendo que o procedimento para contagem global
de clulas varia de acordo com a celularidade da
amostra (Tabela 1) (33).
Para a diferenciao de hemcias, leuccitos e clulas teciduais durante a contagem na cmara
de Fuchs-Rosenthal, deve-se conhecer as caractersticas de cada uma dessas clulas. Os eritrcitos se
apresentam com um contorno regular, com halos e
centro da clula limpo. Projees finas e pontudas
podem aparecer nos casos de eritrcitos crenados.
Os leuccitos, por sua vez, apresentam um aspecto
granular e so levemente refringentes. Pode, tambm, ocorrer a presena de clulas teciduais, que so
geralmente grandes e granulares e com contorno
irregular, as quais no devem ser includas na contagem, assim como as clulas lisadas (33, 38).
Caso tenha ocorrido acidente de puno
no momento da coleta, deve ser realizada a correo da contagem celular, a qual realizada por
clculos. Primeiramente, calcula-se a quantidade
de leuccitos introduzidos na amostra em virtude
do acidente puncional, multiplicando-se o nmero
de leuccitos do sangue (obtido em hemograma)
pelo nmero de hemcias presente no LCR, dividido pelo nmero de hemcias presentes no sangue (tambm obtido em hemograma). O resultado
subtrado do nmero de leuccitos obtidos na

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Tabela 1 - Procedimento de contagem global de clulas
em cmara de Fuchs-Rosenthal, de acordo
com a celularidade presente na amostra
Celularidade

Procedimento de contagem

Baixa

Contar os 16 quadrados maiores e

dividir por 3,2.

Intermediria

Contar 4 quadrados maiores,

multiplicar por 4 e dividir por 3,2.

Alta

Contar um quadrado maior,

multiplicar por 16 e dividir por 3,2.

Altssima
(sobreposio de
clulas)

Fazer diluio com salina ou

lquido de Trk (para leuccitos)
e multiplicar o resultado final pelo
fator da diluio.

Alta quantidade
de hemcias

Contar um quadrado menor,

multiplicar por 256 e dividir por 3,2.

Fonte: COMAR, 2009 (33).

contagem, obtendo-se, assim, o valor corrigido de

leuccitos da amostra (30).
O sangue perifrico introduzido no LCR
aps uma puno traumtica resulta em um aumento artificial da contagem global de leuccitos,
na proporo de um leuccito para cada 500 a 1000
eritrcitos no LCR. Esse fator de correo acurado, contanto que a contagem de leuccitos oriundos do sangue perifrico no seja extremamente
baixa ou alta (16).
6. Controle de qualidade das contagens:
de extrema importncia a realizao de um controle de qualidade das contagens em cmara, haja
vista que elas podem sofrer muitas interferncias,
que comprometem os resultados. Contagens esprias podem ser observadas quando ocorrem
erros na diluio da amostra, na montagem e no
preenchimento da cmara e na observao e identificao das clulas no microscpio tico. O controle de qualidade da contagem global de clulas,
em cmara de Fuchs-Rosenthal no LCR, pode ser
feito diluindo-se uma amostra de sangue total pr-selecionada e comparando-se os resultados obtidos manualmente na cmara com os obtidos em
analisadores hematolgicos automatizados.
Para o controle da contagem de leuccitos, deve-se escolher uma amostra com menos de
1.000 leuccitos/l, valor obtido em contagem automatizada, e fazer a contagem manual em cmara

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de Fuchs-Rosenthal, de preferncia diluindo-se

a amostra em lquido de Trk, para hemolisar os
eritrcitos, os quais so muito numerosos em uma
amostra de sangue total. Para aferir a contagem de
eritrcitos em cmara, deve-se preparar uma mistura de 50l de sangue total e 4,95ml de soluo salina (1:100). Na sequncia, coloca-se essa soluo
no contador automtico, para se obter a contagem
de hemcias. Faz-se, ento, a contagem manual
da soluo e, depois, comparam-se os resultados
obtidos. Tais resultados devem ser concordantes
em cerca de 25% com os obtidos na contagem
automatizada. Quinzenalmente, deve-se verificar
se houve contaminao dos diluentes (lquido de
Trk e soluo salina), examinando-os em cmara
de contagem com aumento de 40x. Os diluentes
contaminados com partculas ou fungos devem ser
descartados e novas solues devem ser preparadas. Semestralmente, deve-se verificar a velocidade
e o tempo de citocentrifugao, e, para isso, preciso chamar o pessoal da manuteno (33).
Conforme for a celularidade da amostra
de LCR, ela ainda pode ser analisada em um analisador hematolgico e comparada com a contagem
manual. Aulesa, Mainar, Prieto, Cobos e Galimany
(40) mostraram que contagens de LCR com celularidade igual ou superior a 150/l, em analisador
hematolgico Bayer Advia 120, obtiveram boa correlao (r = 0,958) com a contagem manual em cmara. Nesse mesmo trabalho, os autores tambm
demonstraram que a contagem diferencial de neutrfilos manual e automatizada se correlaciona e
pode ser intercambivel. A fim de aumentar a qualidade das anlises de LCR, os laboratrios devem se
filiar a programas de controle de qualidade externos, que incluam mtodos de anlise de amostras
de lquido cefalorraquidiano.
A confeco da lmina deve ser repetida, caso no seja encontrado um nmero razovel
de leuccitos na lmina. Para verificar a qualidade das lminas confeccionadas, principalmente
em amostras com contagens baixas de leuccitos,
deve-se correlacionar o nmero total de leuccitos encontrados na lmina com a contagem global
(Tabela 2).
7. Contagem diferencial de leuccitos: A contagem diferencial de leuccitos uma
etapa fundamental da anlise laboratorial, pois,
conforme a linhagem celular predominante nessa contagem, estabelece-se uma conduta teraputica adequada, de acordo com o significado clnico

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Tabela 2 - Correlao entre o nmero de clulas

encontradas na lmina e a contagem global
de leuccitos
Nmero de leuccitos/l
contados na cmara

Nmero de clulas que

devem estar presentes
na lmina aps a
citocentrifugao

0 - 40

1-5

20 - 100

6 - 10

60 - 150

11 - 20

150 - 250

20

250

Fonte: COMAR, 2009 (33).

desse resultado (Tabela 3). Porm, para uma melhor conduta mdica, a contagem global e diferencial de leuccitos no LCR no deve ser usada isoladamente, na tentativa de distinguir entre meningite
viral, bacteriana, fngica ou tuberculosa. A condio clnica do paciente, assim como outros parmetros do LCR, deve ser levada em considerao
na formulao do diagnstico e do tratamento (41).
A confeco da lmina para leitura pode
ser feita de diferentes formas: por centrifugao em
tubo, em cmara de Suta ou por citocentrifugao.
Quando o mtodo de escolha a citocentrfuga,
utiliza-se o lquor puro ou o sedimento obtido aps
centrifugao. Para melhorar a adeso das clulas
lmina e reduzir sua distoro, pode ser adicionado
ao sedimento 50l de albumina bovina a 22% ou

Tabela 3 - Significado clnico de acordo com o predomnio celular obtido em contagem diferencial de leuccitos da
amostra de LCR
Predomnio celular
Linfcitos
Neutrfilos
Reao celular mista (linfcitos, neutrfilos e
moncitos)

Significado clnico
Meningite viral, tuberculosa e fngica. Ocasionalmente, em
meningite bacteriana. Esclerose mltipla.
Meningite bacteriana, fase inicial de meningite viral, tuberculosa
e fngica. Hemorragia subaracnidea, injees intratecais,
tumores meningeais.
Meningite bacteriana parcialmente tratada, meningite bacteriana
crnica, abscesso cerebral, meningite tuberculosa, meningite
fngica e meningite amebiana.

Eosinfilos

Infeces parasitrias, reaes alrgicas, derivao ventricular.

Macrfagos

Meningite crnica, meningite bacteriana tratada, injees

intratecais e hemorragia subaracnidea.

Macrfago eritrfago (contendo hemcias)

Hemorragia subaracnidea (12 horas a 1 semana).

Macrfago siderfago (contendo hemossiderina)

Hemorragia subaracnidea (2 dias a 2 meses).

Macrfago hematoidinfago (contendo cristais de

hematoidina)

Hemorragia subaracnidea (2 a 4 semanas).

Macrfago lipfago (contendo gordura)

Necrose cerebral, infarto, anoxia e traumatismo craniano.

Plasmcitos

Clulas linfides malignas.

Clulas linfoides malignas

Linfoma, leucemia.

Blastos

Linfoma, leucemia.

Outras clulas malignas

Tumor cerebral primrio, tumor metasttico.

Clulas ependimais e do plexo coroide

Trauma, cirurgia, derivao ventricular, recm-nascidos e

injees intratecais.

Condrcitos

Puno traumtica

Clulas da medula ssea

Agrupamentos de clulas imaturas, semelhantes a
blastos

Puno traumtica.
Hemorragia subaracnidea em prematuros e recm-nascidos,
possivelmente originadas da matriz germinal.

Fonte: KJELDSBERG; KNIGHT, 1992 (38).

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mesmo de plasma de uma amostra normal. Coloca-se 100l da amostra no tubo cnico, de acordo
com o manual de instruo da citocentrfuga que
ser utilizada. O lquido sobrenadante absorvido
pelo papel-filtro, concentrando as clulas presentes na amostra. Aps a citocentrifugao, deve-se
aguardar a secagem completa da lmina e, ento,
realizar a colorao com qualquer corante hematolgico, sendo o mais utilizado o corante May
Grnwald-Giemsa (33).
A confeco da lmina em cmara de Suta
um processo mais trabalhoso, porm, fornece uma
lmina de boa qualidade. Essa cmara de sedimentao possui um sistema de filtros de papel que absorve a parte lquida do LCR, concentrando as clulas.
A quantidade de lquido a ser colocado na cmara
para a confeco da lmina depende da quantidade
de leuccitos presentes na amostra (Tabela 4). A lmina introduzida na cmara e, sobre ela, coloca-se
um papel absorvente, o qual deve conter um halo
de dimetro discretamente menor do que o dimetro do tubo conector da cmara. O tubo conector
deve ser rosqueado na base at tocar a lmina. Em
seguida, coloca-se na cmara o volume de LCR necessrio e espera-se a lmina secar. Somente aps
a secagem, retira-se o tubo conector e o papel absorvente de cima da lmina e realiza-se a colorao
com corante hematolgico, usualmente a colorao
de May Grnwald-Giemsa (33).
Aps a confeco e a colorao da lmina,
deve-se proceder contagem diferencial das clulas em objetiva de imerso (100x). Caso a lmina
contenha muita sobreposio de clulas, deve-se
Tabela 4 - Correlao entre o nmero de clulas
encontradas na lmina e a contagem global
de leuccitos
Contagem global (/l)

Volume a ser utilizado na

cmara (ml)

10 - 50

1,5 - 2,0

50 - 100

1,2 - 1,8

100 - 200

1 - 1,5

200 - 500

0,8 - 1,0

500 - 1000

0,5 - 0,8

> 2000

0,2 - 0,3

Fonte: KJELDSBERG; KNIGHT, 1992 (38).

99

confeccionar nova lmina, utilizando uma diluio

apropriada. Pode ocorrer, aps citocentrifugao,
distoro nas clulas, as quais podem apresentar
formao de vacolos e projees citoplasmticas,
fendas nucleares, nuclolos proeminentes e agrupamentos celulares semelhantes neoplasia (33).
fundamental que todos os profissionais envolvidos no processo tenham conhecimento tcnico,
responsabilidade e compromisso com a adoo de
procedimentos que identifiquem precocemente a
existncia de quaisquer no conformidades, para
que elas sejam imediatamente corrigidas, no sentido de se evitar o erro laboratorial e o consequente
erro de conduta teraputica, que pode causar danos
severos ao paciente (30). A Tabela 5 descreve os valores de referncia da anlise laboratorial do lquido
cefalorraquidiano.
8. Deteco de clulas malignas no
LCR: A deteco de clulas malignas por meio da
anlise citolgica do LCR uma ferramenta muito
importante no diagnstico de tumores cerebrais.
Nos ltimos 10 anos, tem-se verificado uma elevao na incidncia de carcinomas leptomeningeais
e, por conseguinte, um aumento na importncia
clnica do seu correto diagnstico. Avanos cientficos como a imagem de ressonncia magntica,
os ensaios para marcadores tumorais, a amplificao do DNA, a citometria de fluxo e as tcnicas
imunohistoqumicas esto, agora, disponveis para
facilitar o diagnstico. Apesar desses avanos, o
mtodo de referncia para a deteco desses carcinomas ainda a identificao citolgica de clulas
malignas no LCR (41).
Acredita-se que a taxa de deteco de clulas malignas por anlise citolgica influenciada por
alguns fatores, incluindo o volume de LCR obtido, o
local da amostragem, a frequncia da retirada do LCR
e a rapidez com que as amostras chegam ao laboratrio. O volume insuficiente uma possvel explicao para anlises citolgicas falso-negativas. Glantz,
Col e Glantz (42) sugeriram que as taxas de resultados falso-negativos diminuram de 32% para valores
prximos de 3%, enquanto o volume de amostra aumentou de 2,5 ml para 10,5 ml, respectivamente.
Como ocorre a perda de clulas em
funo do tempo aps a coleta, a refrigerao da
amostra recomendada se um atraso na anlise citolgica esperado. Porm, deve-se evitar realizar
coletas em fins de semana e em feriados. Sugere-se
que a obteno da amostra ocorra durante tempos
de processamento usuais (41).

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Tabela 5 - Valores de referncia do LCR

Parmetro

Valor de referncia

Cor

Incolor

Aspecto

Lmpido

Protenas totais

Adultos: 15 - 45 mg/dl
Adultos > 60 anos: 15 - 60 mg/dl
Neonatos: 15 - 100 mg/dl

Albumina

10 - 30 mg/dl

Glicose

50 - 80 mg/dl

cido ltico

9,0 - 26,0 mg/dl; 1,13 - 3,23 mmol/l

Cloretos

115 - 130 mmol/l

LDH

0 - 25 U/l
LDH 1 > LDH 2 > LDH 3 >
LDH 4> LDH 5

Glutamina

15 - 20 mg/dl

Leuccitos

< 1 ano: 0 - 30 /l
1 a 4 anos: < 20 /l
5 anos at puberdade: < 10 /l
Adultos: 0 - 5 /l

Citologia diferencial

Adultos
Linfcitos: 60% 20%
Moncitos: 30% 15%
Neutrfilos: 2% 4%
Neonatos
Linfcitos: 20% 15%
Moncitos: 70% 20%
Neutrfilos: 4% 4%

Fonte: KJELDSBERG; KNIGHT, 1992 (38).

As clulas malignas so vertidas no LCR periodicamente. Consequentemente, uma nica amostragem pode no detectar a malignidade. Na literatura, h muita discusso a respeito do nmero ideal de
amostras de LCR que devem ser analisadas (41).
9. Biossegurana: Em virtude de o LCR
se tratar de um material altamente contaminante,
torna-se necessria a utilizao dos equipamentos
de proteo individual (EPIs), como avental ou jaleco longo de mangas compridas e punho retrtil,
luvas descartveis, culos de proteo, pipetadores
manuais ou automticos e, quando for o caso, protetor facial. O ideal seria que todos os laboratrios
possussem uma cmara de fluxo laminar vertical,
para maior proteo do operador.

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Recebido: 04/09/2009
Received: 09/04/2009
Aprovado: 15/12/2009
Approved: 12/15/2009